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中国生物制品学杂志 2014年第4期27卷 472-475页

作者：罗婷李虹娟王霄段志青李萍王海漩胡凝珠胡云章中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118 昆明医科大学生物所云南昆明650500

目的探讨甲磺酸去铁胺（deferoxamine，DFO）佐剂对甲型肝炎病毒（hepatitis A virus antigen，HAV）抗原诱导小鼠体液免疫应答的影响。方法将不同剂量的DFO（0.6、1、4、8mg）佐剂分别与HAV抗原18EU混合，免疫ICR小鼠，并设生理盐水对... 详细信息

目的探讨甲磺酸去铁胺（deferoxamine，DFO）佐剂对甲型肝炎病毒（hepatitis A virus antigen，HAV）抗原诱导小鼠体液免疫应答的影响。方法将不同剂量的DFO（0.6、1、4、8mg）佐剂分别与HAV抗原18EU混合，免疫ICR小鼠，并设生理盐水对照组（生理盐水200 μl）、HAV抗原对照组（HAV 18 EU）、铝佐剂对照组（铝佐剂300μg＋HAY抗原18EU）和复合佐剂组（HAY抗原18EU＋DFO1mg＋铝佐剂150 μg），均经腹部皮下多点注射，0.2ml／只，共免疫1次。分别于免疫后第4、8、12、16周，采用间接ELISA法检测小鼠血清中抗-HAV IgG水平，并进行安全性试验。结果除生理盐水对照组外，其他各组小鼠血清在各时间点均能检测到抗.HAVIgG；除DFO 0.6mg组外，抗体滴度均在第8周达峰值；不同剂量DFO组的抗体水平均明显高于HAV抗原对照组，其中DFO4mg和8mg组在8～16周时抗体水平显著高于HAV抗原对照组，且差异有统计学意义（P〈0.05），但与铝佐剂对照组比较，差异无统计学意义（P〉0.05）；在8～16周时，同一时间DFO4mg、DFO8mg和复合佐剂组的抗体水平较高，并能维持较长时间，至第16周时仍能达到与铝佐剂对照组相当的水平。结论DFO佐剂能显著增强HAV抗原诱导小鼠的体液免疫应答，有望开发为一种可替代铝佐剂的新型佐剂。

关键词：甲磺酸去铁胺佐剂甲型肝炎病毒抗原体液免疫

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两种佐剂甘草酸二铵和苦参素对甲型肝炎病毒抗原诱导小鼠体液免疫应答的影响

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中国生物制品学杂志 2014年第4期27卷 463-466页

作者：王霄罗婷李虹娟段志青王陈芸王海漩胡云章胡凝珠中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所疫苗研究室云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南省重大传染病疫苗工程技术研究中心云南昆明650118 昆明医科大学生物所云南昆明650500

目的探讨两种佐剂甘草酸二铵和苦参素对甲型肝炎病毒(hepatitis A virus,HAV)抗原诱导小鼠体液免疫应答的影响。方法将两种佐剂均按低(100μg)、中(500μg)、高(1 mg)3个剂量,分别与18 EU HAV抗原混合,免疫ICR小鼠,并设生理盐水对照组(... 详细信息

目的探讨两种佐剂甘草酸二铵和苦参素对甲型肝炎病毒(hepatitis A virus,HAV)抗原诱导小鼠体液免疫应答的影响。方法将两种佐剂均按低(100μg)、中(500μg)、高(1 mg)3个剂量,分别与18 EU HAV抗原混合,免疫ICR小鼠,并设生理盐水对照组(生理盐水200μl)、HAV抗原对照组(HAV抗原18 EU)和铝佐剂对照组(HAV抗原18 EU+铝佐剂300μg),共9组,均经腹部皮下多点注射,共免疫1次。分别于免疫后第4、8、12、16周采血,分离血清,采用ELISA法检测抗-HAV IgG抗体水平。免疫后第16周处死小鼠,分别取甘草酸二铵和苦参素最佳剂量组及生理盐水对照组小鼠的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏组织,进行病理观察。结果免疫后第4、8、12、16周,除生理盐水对照组外,其他各组小鼠血清中均可检测到抗-HAV IgG抗体,且抗体水平除甘草酸二铵中剂量组和苦参素低剂量组外,均在第8周达峰值;甘草酸二铵各剂量组小鼠的血清抗体水平均明显高于HAV抗原对照组(P<0.05),其中甘草酸二铵低剂量组的抗体水平最高,且在第8周时超过铝佐剂对照组;苦参素各剂量组小鼠免疫后各周血清抗-HAV IgG抗体水平均显著高于HAV抗原对照组(P<0.05),其中苦参素低剂量组抗体水平最高,其抗体水平在第12周达峰值。实验期间,各组小鼠均未出现异常表现,各组织均未发现病理改变。结论甘草酸二铵和苦参素均能明显增强HAV抗原诱导小鼠体液免疫应答的水平,具有成为新型疫苗佐剂的研发价值。

关键词：甘草酸二铵苦参素佐剂甲型肝炎病毒抗原体液免疫

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两种佐剂甘草酸二铵和苦参素对甲型肝炎病毒抗原诱导小鼠体液免疫应答的影响

两种佐剂甘草酸二铵和苦参素对甲型肝炎病毒抗原诱导小鼠体液免疫...

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作者：王霄北京协和医学院中国医学科学院

学位级别：硕士

多种中药具有免疫调节功能，使用中药的天然活性物质作为疫苗佐剂具有可行性和广阔的应用前景。甘草酸二铵是中药甘草有效成分的第三代提取物，具有较强的抗炎、保护肝细胞膜及改善肝功能的作用，适用于伴有丙氨酸氨基转移酶升高的急、... 详细信息

多种中药具有免疫调节功能，使用中药的天然活性物质作为疫苗佐剂具有可行性和广阔的应用前景。甘草酸二铵是中药甘草有效成分的第三代提取物，具有较强的抗炎、保护肝细胞膜及改善肝功能的作用，适用于伴有丙氨酸氨基转移酶升高的急、慢性病毒性肝炎。苦参素是一种生物碱，主要提纯来自豆科植物苦豆草的种子和苦参的根。苦参素具有许多生物学活性和广泛的药理学作用，例如，抗炎、抗心率不齐、抗病毒、抗过敏、止痛等。这些药理学作用，使得苦参素在癌症、病毒性肝炎、肝纤维化、皮肤病、自身免疫性疾病、心律不齐等疾病的临床治疗上有广泛的应用。\n 本文的主要目的是研究两种佐剂甘草酸二铵和苦参素对甲型肝炎病毒(hepatitisA virus，HAV)抗原诱导小鼠体液免疫应答的影响，并评估这两种佐剂的安全性。\n 两种佐剂甘草酸二铵和苦参素均取用低、中、高三个剂量，即100μg、500μg、1 mg，分别与HAV抗原18 EU混合，并设置甘草酸二铵+铝佐剂复合佐剂组（HAV抗原18 EU+甘草酸二铵500μg+铝佐剂300μg）、苦参素+铝佐剂复合佐剂组(HAV抗原18 EU+苦参素500μg+铝佐剂300μg)、生理盐水对照组（生理盐水200μL）、HAV抗原对照组（HAV抗原18 EU）、铝佐剂对照组(HAV抗原18 EU+铝佐剂300μg)，共11组。通过腹部皮下多点注射，免疫ICR小鼠。分别于免疫后第4、8、12、16周采血，分离血清，采用ELISA法检测小鼠血清中anti-HAV IgG抗体水平。免疫后的第16周处死小鼠，分别取甘草酸二铵和苦参素的最佳剂量组和生理盐水对照组小鼠的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏组织进行病理观察。\n 在各个时间点上，生理盐水对照组小鼠血清中未检测到anti-HAV IgG抗体，其他各组中均可检测到抗体，且抗体水平除甘草酸二铵中剂量组和苦参素低剂量组外，均在第8周达峰值，之后逐渐下降。甘草酸二铵各剂量组小鼠的血清抗体水平明显高于HAV抗原对照组，且差异均有统计学意义(P＜0.05)，其中低剂量组的效果最为显著，第8周时的抗体水平超过铝佐剂对照组。苦参素各剂量组小鼠的血清抗体水平显著高于HAV抗原对照组，且差异均有统计学意义(P＜0.05)，效果也以低剂量组最为显著。实验期间，各组小鼠均未出现异常表现，各器官也均未发现病变。\n 实验结果表明，甘草酸二铵和苦参素都能明显增强HAV抗原诱导小鼠体液免疫应答的水平，具有成为新型疫苗佐剂的研发价值。

关键词：甘草酸二铵苦参素甲型肝炎病毒抗原体液免疫安全性动物模型

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甲型肝炎病毒抗原检测方法

甲型肝炎病毒抗原检测方法

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作者：龙润乡谢忠平李华宋霞陈洪波洪超白惠珠杨蓉黄铠 650000 云南省昆明市五华区茭菱路379号

本发明提供一种甲型肝炎病毒抗原检测方法。即采用长臂生物素标记HAV-IgG，以辣根过氧化物酶标记链霉亲和素作放大系统，对甲型肝炎病毒抗原进行检测时，由于长臂生物素比一般生物素有更长的间臂，能减少空间位阻，使几个生物素化分子... 详细信息

标准号: CN101556284B

本发明提供一种甲型肝炎病毒抗原检测方法。即采用长臂生物素标记HAV-IgG，以辣根过氧化物酶标记链霉亲和素作放大系统，对甲型肝炎病毒抗原进行检测时，由于长臂生物素比一般生物素有更长的间臂，能减少空间位阻，使几个生物素化分子能同时与一个亲和素复合物结合，加之长臂生物素为水溶性生物素，直接标记抗甲型肝炎病毒抗体可减少免疫检测中的步骤，缩短检测时间，即由通常的2天缩短为全程检测只需3.5小时，并可通过降低交叉反应而降低背景，提高检测灵敏度；另外，由于辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素与亲和素不同，其分子量大约为60000，不含碳水化合物，非特异性结合较亲和素低，所以具有提高灵敏度及特异性的效果。

关键词：亲和素长臂生物素检测甲型肝炎病毒抗原辣根过氧化物酶灵敏度碳水化合物甲型肝炎病毒抗体生物素化分子水溶性生物特异性结合放大系统交叉反应免疫检测复合物全程

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甲型肝炎病毒抗原唾液快速检测试纸条

甲型肝炎病毒抗原唾液快速检测试纸条

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作者：郑隆泗李洪江 311305 浙江省临安市经济开发区景观大道88号

本发明公开了一种甲型肝炎病毒抗原唾液快速检测试纸条，包括底板，底板上依次粘贴有样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜以及吸样垫，所述的胶体金垫上附着有胶体金标记的抗甲型肝炎病毒抗原的多克隆抗体或第一单克隆抗体；所述的硝酸纤维... 详细信息

标准号: CN101614740B

本发明公开了一种甲型肝炎病毒抗原唾液快速检测试纸条，包括底板，底板上依次粘贴有样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜以及吸样垫，所述的胶体金垫上附着有胶体金标记的抗甲型肝炎病毒抗原的多克隆抗体或第一单克隆抗体；所述的硝酸纤维素膜上包被有由抗甲型肝炎病毒抗原的第二单克隆抗体构成的检测线以及由抗所述的多克隆抗体或第一单克隆抗体的二抗抗体构成的质控线，所述的多克隆抗体或第一单克隆抗体与所述的第二单克隆抗体相配对。本发明试纸条采用胶体金标记技术，检测唾液中的甲型肝炎病毒抗原成分，从而判断是否感染甲肝病毒，具有操作简单、反应快速、敏感性高、特异性强、适合现场检测和自检、经济实用等优点。

关键词：单克隆抗体甲型肝炎病毒抗原多克隆抗体底板硝酸纤维素膜胶体金垫胶体金标记技术快速检测试纸条胶体金标记甲肝病毒检测唾液现场检测试纸条唾液抗体相配自检粘贴感染检测

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一种新型甲型肝炎病毒抗原制备方法

一种新型甲型肝炎病毒抗原制备方法

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作者：岳立广徐艳玲刘令九夏青娟王艺博张宏丽任琦付艳杰李丽莉王春雨 130000 吉林省长春市高新区创新路1616号

本发明公开了一种新型甲型肝炎病毒抗原制备方法，包括如下步骤：步骤一、将保藏编号为CCTCC No.V92004的甲型肝炎病毒毒种L‑A‑1减毒株培养上清中含有的HAV经克隆纯化筛选的得到L‑A‑1M株；步骤二、将所述L‑A‑1M株接种于人胚肺二倍体细... 详细信息

标准号: CN110669739A

本发明公开了一种新型甲型肝炎病毒抗原制备方法，包括如下步骤：步骤一、将保藏编号为CCTCC No.V92004的甲型肝炎病毒毒种L‑A‑1减毒株培养上清中含有的HAV经克隆纯化筛选的得到L‑A‑1M株；步骤二、将所述L‑A‑1M株接种于人胚肺二倍体细胞，置培养液中培养，10～17天换维持液一次，收集上清液、换维持液、留取样品，共收集培养上清液5次；步骤三、第5次上清液收集后，用胰蛋白酶消化后，用1/5维持液量的Hank’s液收集含有甲型肝炎病毒的病毒收获物；步骤四、将所述病毒收获物经处理后得到所述甲型肝炎病毒抗原。

关键词：维持液甲型肝炎病毒抗原甲型肝炎病毒病毒收获培养液人胚肺二倍体细胞胰蛋白酶消化培养上清液上清液收集保藏减毒株上清液毒种制备接种克隆筛选

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用生物素-亲和素ELISA法检测人胚肺二倍体细胞培养的甲型肝炎病毒抗原

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病毒学报 1986年第3期 244-247页

作者：张麟华焦永真卫生部上海生物制品研究所

利用生物素-亲和素生物放大系统的原理,建立了新的检测细胞培养的甲型肝炎病毒抗原的方法。用生物素标记的抗甲肝IgG,与免疫偶联于固相的甲肝抗原作用,然后用亲和素-生物素辣根酶复合物(ABPC)与生物素化的IgG偶合,邻苯二胺(OPD)显色。... 详细信息

利用生物素-亲和素生物放大系统的原理,建立了新的检测细胞培养的甲型肝炎病毒抗原的方法。用生物素标记的抗甲肝IgG,与免疫偶联于固相的甲肝抗原作用,然后用亲和素-生物素辣根酶复合物(ABPC)与生物素化的IgG偶合,邻苯二胺(OPD)显色。该法在检测甲肝抗原中获得满意结果,灵敏度比普通ELISA法提高约10倍,非特异性显著降低。该法可进一步发展成为一种高特异性的,灵敏的甲肝临床诊断和流行病学调查的技术。

关键词：甲型肝炎病毒抗原酶联免疫吸附分析生物素亲和素

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铝盐佐剂对甲型肝炎病毒抗原和乙型肝炎病毒表面抗原细胞免疫反应的研究

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中国预防医学杂志 2003年第1期4卷 26-29页

作者：毛群颖张华远廖雪雁中国药品生物制品检定所北京100050

目的　评价铝盐佐剂对甲型肝炎病毒抗原 (HAAg)和乙型肝炎病毒表面抗原 (HBsAg)细胞免疫反应的影响。方法　以甲型肝炎病毒灭活抗原和乙型肝炎病毒基因工程表达抗原为对象 ,采用小鼠迟发型超敏反应 (DTH)、脾脏淋巴细胞增殖实验和淋巴... 详细信息

目的　评价铝盐佐剂对甲型肝炎病毒抗原 (HAAg)和乙型肝炎病毒表面抗原 (HBsAg)细胞免疫反应的影响。方法　以甲型肝炎病毒灭活抗原和乙型肝炎病毒基因工程表达抗原为对象 ,采用小鼠迟发型超敏反应 (DTH)、脾脏淋巴细胞增殖实验和淋巴细胞亚型分群实验 ,检测铝盐佐剂吸附前后的细胞免疫反应变化 ,并进行统计学分析。结果　甲型肝炎病毒抗原佐剂吸附后 ,DTH反应强度和特异性T淋巴细胞增殖强度有所降低 ,但无统计学意义 (P >0 0 5 ) ;乙型肝炎病毒表面抗原吸附佐剂后 ,特异性T淋巴细胞增殖显著降低 (P <0 0 5 ) ,CD4+ /CD8+ 比值明显升高(P <0 0 5 )。结论　铝盐佐剂可减弱杀伤型T细胞的分化和增殖 ,优势调节T淋巴细胞向辅助型T细胞 (TH)分化。

关键词：铝盐佐剂甲型肝炎病毒抗原乙型肝炎病毒表面抗原细胞免疫

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新型疫苗佐剂壳寡糖和磷酸肌酸钠效应研究

新型疫苗佐剂壳寡糖和磷酸肌酸钠效应研究

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作者：李萍北京协和医学院

学位级别：硕士

佐剂能够非特异性的提高机体的免疫应答水平,新型疫苗的开发使得佐剂的应用变得更加广泛,但是大部分疫苗还是以铝佐剂辅助为主,新的佐剂亟待被开发。本论文基于壳寡糖广泛的生物学活性和“危险信号”模式理论的研究,选用壳寡糖和磷酸肌... 详细信息

佐剂能够非特异性的提高机体的免疫应答水平,新型疫苗的开发使得佐剂的应用变得更加广泛,但是大部分疫苗还是以铝佐剂辅助为主,新的佐剂亟待被开发。本论文基于壳寡糖广泛的生物学活性和“危险信号”模式理论的研究,选用壳寡糖和磷酸肌酸钠作为佐剂,分别探讨其对HAV抗原诱导小鼠体液免疫应答的影响。结果显示：(1)2.5mg,5mg, 10mg壳寡糖佐剂组小鼠血清中抗HAV-IgG抗体水平在整个试验期内均显著高于抗原对照组。其中2.5mg,5mg壳寡糖佐剂组在第4,8,12周抗体水平均显著高于铝佐剂对照组,10mg壳寡糖佐剂组在第8,12周的抗体水平显著高于铝佐剂对照组,差异有统计学意义(P<0.05),至第16周,2.5mg,5mg,10mg壳寡糖佐剂组抗体水平仍与铝佐剂相当,但差异没有统计学意义(P>0.05);且结果显示壳寡糖最佳剂量为5mg/只。(2)磷酸肌酸钠各剂量组在第4,8,12周抗HAV-IgG抗体水平均显著高于抗原对照组;磷酸肌酸钠5mg剂量组在第8周抗体水平显著高于铝佐剂对照组,差异有统计学意义(P<0.05);表明磷酸肌酸钠最佳剂量为5mg/只。安全性检测结果显示壳寡糖和磷酸肌酸钠作为佐剂均无毒副作用。结论：壳寡糖和磷酸肌酸钠均能提高HAV诱导的小鼠体液免疫应答水平,高剂量组壳寡糖诱导产生的抗体水平甚至优于铝佐剂,表明壳寡糖和磷酸肌酸钠有望开发为新型疫苗佐剂。

关键词：壳寡糖磷酸肌酸钠佐剂甲型肝炎病毒抗原体液免疫

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新型疫苗佐剂硫酸软骨素B及L-瓜氨酸佐剂效应研究

新型疫苗佐剂硫酸软骨素B及L-瓜氨酸佐剂效应研究

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作者：王陈芸北京协和医学院

学位级别：硕士

本研究旨在探讨硫酸软骨素B和L-瓜氨酸两种新型佐剂对甲型肝炎病毒(HAV)疫苗诱导小鼠体液免疫应答的影响。实验中分别将不同剂量的硫酸软骨素B和L-瓜氨酸与HAV疫苗HepA-1(滴度=18 EU)混合作为剂量梯度实验组,并设置阴性对照组Blank(生... 详细信息

本研究旨在探讨硫酸软骨素B和L-瓜氨酸两种新型佐剂对甲型肝炎病毒(HAV)疫苗诱导小鼠体液免疫应答的影响。实验中分别将不同剂量的硫酸软骨素B和L-瓜氨酸与HAV疫苗HepA-1(滴度=18 EU)混合作为剂量梯度实验组,并设置阴性对照组Blank(生理盐水组)、阳性对照组(HepA-118EU组)和铝佐剂对照组(HepA-118EU+Al (OH)3300μg),经皮下注射ICR小鼠,共免疫一次,采血4次,采血后分离血清,用ELISA法检测小鼠血清中抗HAV抗原特异性IgG抗体水平。在实验期间,对小鼠的健康状况进行观察,并于实验结束后,分别取硫酸软骨素B 65μg组、L-瓜氨酸12mg组及生理盐水组小鼠肾脏、脾脏、肝脏、肺脏、心脏各主要器官制作病理切片进行对比观察。结果显示：①各组小鼠免疫后第4、8、12、16周,均产生抗-HAV IgG,硫酸软骨素B 65μg组可长时间维持较高抗体滴度,至免疫16周后均高于阳性对照组,12、16周的差异具有统计学意义(t值分别为6.857和3.354;P均<0.05);且与铝佐剂组作用相当。表明硫酸软骨素B可增强HAV抗原特异性体液免疫应答,具有佐剂效应,最佳浓度为65μg/只。实验期间,各组小鼠均未出现异常。硫酸软骨素B 65μg组小鼠肾、脾、肝、肺、心组织均未观察到病变。②各组小鼠免疫后第4、8、12、20周,均产生抗-HAV IgG,L-瓜氨酸12mg组抗体水平相对较高,第8、12周时高于阳性对照组,差异具有统计学意义(t值分别为4.811和4.072,P均<0.05),且8、12周时抗体滴度与铝佐剂对照组相当,20周时抗体水平迅速降低。表明L-瓜氨酸可以增强HAV抗原特异性体液免疫应答,具有佐剂效应,最佳浓度为12mg/只。但作用时间不如铝佐剂长。实验期间,各组小鼠均未出现异常。L-瓜氨酸组小鼠肾、脾、肝、肺、心组织均未观察到病变。实验显示硫酸软骨素B和L-瓜氨酸均可增强HAV抗原诱导小鼠的体液免疫应答,都具有成为新型疫苗佐剂的潜质。

关键词：硫酸软骨素B L-瓜氨酸佐剂甲型肝炎病毒抗原体液免疫

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