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甲基化dna免疫沉淀-荧光实时定量pcr检测人精浆游离dna睾丸和附睾特异性甲基化启动子

中华男科学杂志 2013年第11期19卷 977-983页

作者：官黄涛吕金明吴春林李红钢朱长虹熊承良华中科技大学同济医学院计划生育研究所/生殖医学中心湖北武汉430030 武汉同济生殖医学专科医院湖北武汉430030 蕲春县计划生育服务站湖北黄冈435300 武汉市第一医院生殖医学中心湖北武汉430022

目的:建立检测精浆游离dna(cfsdna)启动子甲基化水平的甲基化dna免疫沉淀-荧光实时定量pcr(MeDIP-qpcr)方法。方法:提取精液参数正常(6例)和输精管结扎(6例)男性的cfsdna,将两组不同个体的cfsdna分别进行混合,超声处理后形成dna片段,通... 详细信息

目的:建立检测精浆游离dna(cfsdna)启动子甲基化水平的甲基化dna免疫沉淀-荧光实时定量pcr(MeDIP-qpcr)方法。方法:提取精液参数正常(6例)和输精管结扎(6例)男性的cfsdna,将两组不同个体的cfsdna分别进行混合,超声处理后形成dna片段,通过MeDIP分离甲基化dna片段,然后用qpcr方法检测启动子甲基化水平。结果:精液参数正常组的PRAME、PEG10、MORC1、GML、HOXA5、DNMT3L、SNURF、MSH4、DAZ1和CLPB启动子甲基化水平分别为14.93%、2.64%、0.69%、2.66%、17.50%、21.10%、5.98%、2.28%、13.50%和3.86%,明显低于输精管结扎组的121.25%、73.62%、16.25%、42.90%、76.74%、112.40%、59.79%、25.85%、91.90%和64.53%。其中,PRAME、MORC1、GML、HOXA5、DNMT3L、SNURF、MSH4和DAZ1等8个启动子MeDIP-qpcr的检测结果与启动子甲基化芯片结果一致。结论:通过MeDIP-qpcr方法可以定量检测到cfsdna中的特异性启动子甲基化,为确定cfsdna中睾丸和附睾特异性甲基化启动子提供了有效途径。

关键词：精浆游离dna 甲基化dna免疫沉淀-荧光实时定量pcr 输精管结扎睾丸附睾启动子

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