检索结果-内蒙古大学图书馆

电子显微学报 2006年第2期25卷 182-184页

作者：梁社坚伦璇吴鸿华南农业大学药用植物研究中心广东广州510642 华南农业大学测试中心广东广州510642

近年来,X射线能谱分析和电镜酶细胞化学在许多领域中得到了广泛的应用。两者的结合把超微分析和超微观察密切结合起来,为超微结构的研究提供了可靠的分析手段。本文对X射线能谱分析的原理作简单地介绍,同时对X射线能谱分析在电镜酶细胞... 详细信息

近年来,X射线能谱分析和电镜酶细胞化学在许多领域中得到了广泛的应用。两者的结合把超微分析和超微观察密切结合起来,为超微结构的研究提供了可靠的分析手段。本文对X射线能谱分析的原理作简单地介绍,同时对X射线能谱分析在电镜酶细胞化学中的应用和实验方法进行了分析和讨论。

关键词： X射线能谱电镜酶细胞化学超微结构

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大鼠脉络丛上皮碱性磷酸酶的超微定位

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脑与神经疾病杂志 2009年第1期17卷 9-12页

作者：王维平刘建华郭艳苏李虹吴东霞吴淑玉杨程河北医科大学第二医院神经内科石家庄050000

目的研究大鼠脉络丛上皮碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,AKPase)的超微分布特征。方法应用电镜酶细胞化学方法。结果显示AKPase活性见于各脑室脉络丛上皮细胞表面微绒毛、侧缘及基底褶的质膜、毛细血管内皮细胞、血液、红细胞膜和间... 详细信息

目的研究大鼠脉络丛上皮碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,AKPase)的超微分布特征。方法应用电镜酶细胞化学方法。结果显示AKPase活性见于各脑室脉络丛上皮细胞表面微绒毛、侧缘及基底褶的质膜、毛细血管内皮细胞、血液、红细胞膜和间质纤维细胞上。AKPase活性还出现在胞质、高尔基体、内质网、线粒体、溶酶体等细胞器的质膜上。各脑室间未见明显差异。结论推测脉络丛上皮AKPase可能阻止磷酸酯类入脑和/或参与转磷酸过程,进而参与某些物质的跨膜转运,并可能构成酶屏障。

关键词：碱性磷酸酶脉络丛上皮大鼠电镜酶细胞化学

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X射线能谱(EDS)分析方法及其在电镜酶细胞化学中的应用

X射线能谱(EDS)分析方法及其在电镜酶细胞化学中的应用

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第七届全国农林系统电子显微镜学术交流会

作者：梁社坚伦璇吴鸿华南农业大学药用植物研究中心华南农业大学测试中心广东广州510642

X射线能量色散谱分析方法(EDS)通常称为X射线能谱分析方法,是分析电子显微镜的基本方法.电镜酶细胞化学是运用电子显微镜超薄切片技术研究酶细胞化学的一门崭新技术,其任务是研究细胞中各种酶在超微结构水平上的分布及其在细胞生理和病... 详细信息

X射线能量色散谱分析方法(EDS)通常称为X射线能谱分析方法,是分析电子显微镜的基本方法.电镜酶细胞化学是运用电子显微镜超薄切片技术研究酶细胞化学的一门崭新技术,其任务是研究细胞中各种酶在超微结构水平上的分布及其在细胞生理和病理过程中的变化,以及这些变化与细胞功能的关系.X射线能谱分析方法和电镜酶细胞化学把"超微观察和超微分析"密切结合起来,为人们在超微结构水平进行研究提供了可靠的分析手段.

关键词： X射线能谱分析电镜酶细胞化学超微结构

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大鼠远位触液神经元标记方法学改进及其P物质与炎性痛的关系

大鼠远位触液神经元标记方法学改进及其P物质与炎性痛的关系

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作者：鲁显福徐州医科大学

学位级别：硕士

目的: 为标记远位触液神经元(the distal cerebrospinal fluid contacting neuron，dCSF-CN)提供新的技术方法学;证实P物质(Substance P，SP)在dCSF-CN的表达;探讨dCSF-CN的SP表达与炎性痛的关系。方法: 实验分两部分。第一部... 详细信息

目的: 为标记远位触液神经元(the distal cerebrospinal fluid contacting neuron，dCSF-CN)提供新的技术方法学;证实P物质(Substance P，SP)在dCSF-CN的表达;探讨dCSF-CN的SP表达与炎性痛的关系。方法: 实验分两部分。第一部分：大鼠远位触液神经元标记方法学改进。SPF级SD雄性大鼠，体重290～310g，1％戊巴比妥钠(***-1)腹腔注射麻醉成功后立体定位(Brega：-1.2±0.4 mm，Deep：3.2±0.4 mm，Right to median sagittal plane：1.4±0.2 mm)，左侧侧脑室注射CB-HRP 3μl(0.3mg/ml)逆行示踪标记dCSF-CN;保持动物存活，48h后灌注取材后固定，分别用四甲基联苯胺-钨酸钠(TMB-ST)的呈色反应及二甲基联苯铵-氯化钴(DAB-Co)稳定(TMB-ST-DAB-Co法)、CB-HRP免疫荧光及免疫电镜法进行比较标记远位触液神经元;用普通光镜、激光共聚焦显微镜及透射电镜镜检，观察标记结果。第二部分：大鼠远位触液神经元P物质与炎性痛的关系。此部分分为两个实验：实验1.颌面部福尔马林致痛大鼠远位触液神经元和三叉神经脊束核P物质的表达：SD雄性大鼠(SPF级，290～310g)12只随机分成两组，每组6只。1％戊巴比妥钠(40 ***-1)腹腔注射麻醉，侧脑室注射30％CB-HRP 3μl逆行示踪标记dCSF-CN：动物存活48h后在右上唇鼻侧中线旁开1.5cm注射2.5％甲醛50μl(实验组)或生理盐水50μl(对照组)进行颌面部福尔马林致痛模型行为学实验，观察抓擦注射部位的时程;2h后灌注取材后固定，免疫组织化学光镜镜检及免疫电镜镜检P物质在三叉神经脊束核(spinal trigerninalnucleus，STN)和dCSF-CN的表达。实验2.鞘内注射左旋布比卡因对甲醛炎性痛大鼠SP在脊髓背角及远位触液神经元表达的影响。采用CB-HRP大鼠侧脑室注射示踪标记dCSF-CN：48h后先鞘内注射0.5％左旋布比卡因10μl(levobupivacaine，LB;批号0611010132，江苏恒瑞，人工脑脊液稀释;对照组鞘内注射10μl人工脑脊液)，大鼠左后掌足跖部皮下注射2.5％甲醛建立炎性痛模型，记录大鼠舔足时间，1h后测定机械缩足阈值(Mechanical withdrawal threshold，MWT)，评估机械痛敏;免疫组织化学光镜镜检及免疫电镜镜检P物质在脊髓背角(L4-5)及dCSF-CN的表达。用专业图像分析软件(Image-Pro Plus Version 6.0，Media Cybernetics，Inc.)定量分析免疫组化切片，并用SPSS v.13.0(SPSS，Chicago，IL)统计结果。结果: dCSF-CN是脑干内的一类特别的神经元，其胞体位于室管膜内的脑实质、突起伸入脑室腔的脑脊液。实验结果如下： 1.1 用TMB-ST-DAB-Co法普通光镜镜检，CB-HRP标记阳性神经元的胞体和突起呈黑色颗粒状，主要相对集中地对称分布于中脑导水管的腹侧至脑桥上段第四脑室底的脑实质内，分为三个神经细胞簇;1.2 采用FITC间接免疫荧光标记CB-HRP阳性神经元在上述脑区见到绿色荧光标记的dCSF-CN的胞体和突起，但细胞核不显色，提示CB-HRP免疫反应阳性产物位于胞浆和突起;1.3 CB-HRP/SP胶体金双标记免疫电镜程序观察dCSF-CN超微结构，电镜1μl半薄切片制片光镜镜捡dCSF-CN呈赤褐色;电镜视野下CB-HRP免疫反应产物呈现特征性的聚集性杆棒状结晶样结构，出现在dCSF-CN的突起和核周胞浆膜性结构如溶酶体样结构、内质网及高尔基复合体，但核内未见分布;室管膜上皮的免疫反应产物仅出现于室管膜的表面，不能透过室管膜上皮。胶体金标记SP呈高密度颗粒状电子致密物，在酶标dCSF-CN规律性分布，主要集中于突起和胞浆内的膜性细胞器如内质网、高尔基复合体、溶酶体，但线粒体内缺如，核内未见金标颗粒。 2.1 正常状态下大鼠远位触液神经元有SP的表达，在疼痛刺激下表达明显增多;颌面部注射福尔马林诱导的急性炎性痛显著上调SP在dCSF-CN和STN的表达，并与其行为学表现相一致(P<0.01)。 2.2 鞘内注射左旋布比卡因减少大鼠福尔马林试验的舔足时间(P<0.01)，实验组MWT值无变化(与基础值对比，P>0.05)，但对照组MWT值明显减小(与基础值及实验组对比，P<0.01);SP在脊髓背角及dCSF-CN的表达弱于对照组(P

关键词：远位触液神经元炎性痛 CB-HRP P物质免疫组织化学免疫荧光电镜酶细胞化学免疫电镜检查福尔马林试验左旋布比卡因鞘内注射

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凡纳对虾体内ACP、AKP酶的细胞化学定位

凡纳对虾体内ACP、AKP酶的细胞化学定位

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上海市动物学会2008年学术年会

作者：孙静秋许燕张慧绮叶军强上海师范大学生命与环境科学学院上海200234 上海奉贤区水产技术推广站 201400

运用电镜酶细胞化学技术对凡纳对虾体内肝脏(L)、肌肉(M)、心脏(H)和复眼(E)等四种组织的酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)进行了细胞化学定位,并与感染病毒的凡纳对虾四种组织中ACP、AKP的细胞化学定位进行比较.结果显示,在健康的对... 详细信息

运用电镜酶细胞化学技术对凡纳对虾体内肝脏(L)、肌肉(M)、心脏(H)和复眼(E)等四种组织的酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)进行了细胞化学定位,并与感染病毒的凡纳对虾四种组织中ACP、AKP的细胞化学定位进行比较.结果显示,在健康的对虾体内,ACP依次出现在各组织中的溶酶体、细胞核、细胞内膜、线粒体、内质网以及肝脏组织中的部分脂滴周围及微绒毛中AKP依次出现在各组织中的细胞膜、细胞核、溶酶体、内质网以及肝脏组织中的脂滴周围及微绒毛中.感染病毒后,对虾体内组织细胞出现了明显的病理变化,各组织细胞内均出现大量的髓样小体;各组织中ACP,AKP的超微细胞化学定位也发生了明显的规律性变化,表现为相应细胞器内ACP,AKP酶活性均减弱或消失,并在多数组织的细胞质中检测到ACP,AKP酶活性的高电子密度颗粒,且大量出现的髓样小体均呈阳性反应.

关键词：凡纳对虾病毒感染酸性磷酸酶碱性磷酸酶细胞化学定位电镜酶细胞化学病理变化

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大鼠脉络丛上皮细胞四种酶的超微定位研究

大鼠脉络丛上皮细胞四种酶的超微定位研究

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作者：刘建华河北医科大学

学位级别：硕士

目的:位于脑室的脉络丛可以看作是由紧密连接上皮包绕的血管丛,进而形成了血液和脑脊液间的界面。脑脊液分泌是脉络丛上皮的主要特点,是由许多无机离子跨过脉络丛上皮交换的结果,其主要驱动力来自上皮细胞脑脊液面的钠钾泵和碳酸酐酶。... 详细信息

目的:位于脑室的脉络丛可以看作是由紧密连接上皮包绕的血管丛,进而形成了血液和脑脊液间的界面。脑脊液分泌是脉络丛上皮的主要特点,是由许多无机离子跨过脉络丛上皮交换的结果,其主要驱动力来自上皮细胞脑脊液面的钠钾泵和碳酸酐酶。本研究将应用4种与细胞功能密切相关的酶(三磷酸腺苷酶—提供能量;酸性磷酸酶—溶酶体的标志酶;)的电镜细胞化学超微定位技术对脉络丛上皮细胞进行研究,以期进一步全面了解脉络丛上皮细胞内的酶定位,并探讨其在脑脊液生成、吸收和循环中的意义,为人类进一步认识脑的解剖和生理提供形态学依据。同时,对于深入研究脑积水、脑膜炎,神经系统变性疾病等疾病的发病机理,具有广阔的应用前景。方法:选取正常成年雄性SD大鼠80只,体重200-350g,常规饲养,自然光照,随机分为4个组每组20只,用于四种酶的电镜酶组织化学观察。水合氯醛腹腔麻醉后,迅速切取侧脑室、三脑室、四脑室脉络丛。采用柠檬酸铅法做AKPase酶,硝酸铅法做ACPase,Uusitalo-Karnovsky法做5’-NTase,Wachstein-Meisel法做Mg2+-ATPase的组织化学染色。取材后放入相应固定液中短时固定后,放入同种的缓冲液中4℃下过夜,在37℃温箱中孵育,用冷的缓冲液充分洗涤后,再用冷1%四氧化饿后固定1小时,梯度丙酮脱水,包埋剂浸透、包埋和聚合,超薄切片,醋酸双氧铀轻染,JEM-1230透射电镜观察照相。酶细胞化学对照实验:(1)作用液不加专一性物;(2)作用前用60℃处理30 min;(3)加特异性抑制剂(AKPase用左旋咪唑抑制)。结果:(1)形态学观察:透射电镜下脉络丛的结构有三种成分,以毛细血管网为中心,周围为结缔组织,表面为脉络丛上皮细胞.上皮细胞呈单层立方形,核位于细胞基底部,呈圆形或椭圆形,胞质内线粒体和小泡状滑面内质网较多,高尔基氏体丰富,它们分布于细胞顶部,游离核糖体丰富,多分散于胞质内,细胞的游离面有密集的微绒毛,上皮细胞基底部质膜有折叠形成许多质膜内褶,胞外有基膜。细胞间有特殊连接构成复合体,毛细血管为有孔型,基质结缔组织由伸长的成纤维细胞分泌的胶原纤维网组成。偶见丛上细胞,这些细胞与脉络丛上皮紧密相关,形态多样。他们位于上皮细胞顶部微绒毛,显示出典型激活巨噬细胞的超微结构特点如小泡和溶酶体。(2)脉络丛上皮酸性磷酸酶(ACPase)的超微分布:当用2%多聚甲醛和2%戊二醛混合固定时,透射电镜下可见ACPase活性出现在上皮细胞的溶酶体;当用2%多聚甲醛和0.5%戊二醛混合固定时,ACPase活性不仅出现在上皮细胞的溶酶体内,还出现在靠近高尔基体成熟面的滑面内质网上。对照组的溶酶体、高尔基体及内质网等细胞器均未显示ACPase活性。各脑室脉络丛上皮酸性磷酸酶的分布未见明显差异。各脑室脉络丛上皮酸性磷酸酶的分布未见明显差异。(3)脉络丛上皮碱性磷酸酶(AKPase)的超微分布: AKPase活性出现在各脑室脉络丛上皮细胞的微绒毛和基底褶的质膜上,上皮连接处、毛细血管内皮细胞、血液、红细胞膜和间质纤维细胞上。AKPase活性还出现在胞质,高尔基体、内质网、线粒体、溶酶体等细胞器的质膜上。三种对照标本均未见阳性反应。各脑室间未见明显差异。(4)镁三磷酸腺苷酶(Mg2+-ATPase)在脉络丛上皮的超微分布:透射电镜下可见Mg2+-ATPase活性出现在脉络丛上皮细胞的微绒毛表面、基底皱褶处、细胞连接处;酶活性还出现在脉络丛的间质和毛细血管内皮细胞上。对照实验未见酶反应产物的沉积。各脑室间未见明显差异。(5) 5’-核苷酸酶(5’-NT ase)在脉络丛上皮的超微分布:透射电镜下可见5’-NTase活性出现在上皮细胞的细胞连接和基底皱褶处,在上皮细胞微绒毛、间质内未见反应产物的沉积。上皮细胞内各种细胞器的质膜亦未见反应产物沉积。各脑室间未见明显差异。结论:ACPase通过对脑脊液中物质的摄取和细胞代谢产物的储存,在参与脑脊液中物质的清除和维护大脑内环境的平衡中起着重要作用。我们推测脉络丛上皮上AKPase的作用是阻止磷酸酯类入脑和/或参与转磷酸过程,进而参与某些物质的跨膜转运,并可能构成酶屏障。脉络丛上皮缘的ATPase活性可能提供了在细胞质形成的脑脊液进入脑室中所需的能量。位于上皮细胞侧面的细胞连接处5’-NTase,可能有助于细胞连接的形成,构成血脑液屏障的一部分,并可能通过产生腺苷参与细胞间的信息的传导。而位于上皮基底皱褶处的5’-NTase可能与核酸降解代谢和物质运输有密切关系,以维持脑内核酸物质的稳定。

关键词：碱性磷酸酶酸性磷酸酶 5’-核苷酸酶镁三磷酸腺苷酶脉络丛上皮大鼠电镜酶细胞化学

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贻贝棘尾虫休眠包囊胞质的电镜酶细胞化学

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华东师范大学学报（自然科学版） 2002年第2期 87-91页

作者：顾福康杜宝剑倪兵季玲妹华东师范大学生命科学学院上海200062

该文应用电镜酶细胞化学方法显示 ,贻贝棘尾虫休眠包囊中 ,在胞质嗜锇粒和拟糖原粒区 ,酸性磷酸酶反应颗粒聚集于具有消化泡作用的泡状体上 ,葡萄糖 6 磷酸酶反应也定位在自噬泡膜位置。作者据所得结果推测 ,嗜锇粒可能是棘尾虫休眠... 详细信息

该文应用电镜酶细胞化学方法显示 ,贻贝棘尾虫休眠包囊中 ,在胞质嗜锇粒和拟糖原粒区 ,酸性磷酸酶反应颗粒聚集于具有消化泡作用的泡状体上 ,葡萄糖 6 磷酸酶反应也定位在自噬泡膜位置。作者据所得结果推测 ,嗜锇粒可能是棘尾虫休眠包囊中用于自噬作用的主要结构成分 ,休眠细胞代谢过程中胞质膜结构也具有补充形成消化泡膜的作用。

关键词：贻贝棘尾虫休眠包囊电镜酶细胞化学

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心肌缺血再灌注损伤肌浆网钙泵活性变化电镜酶细胞化学研究

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中国医科大学学报 2001年第5期30卷 344-346页

作者：谷天祥师恩袆石玉秀姜桂娥张玉霞王天骄李厚文中国医科大学第一临床学院心脏外科沈阳110001 中国医科大学基础医学院组织胚胎学教研室沈阳110001 中国医科大学基础医学院生物化学教研室沈阳110001

目的 :研究心肌缺血再灌注损伤肌浆网、肌膜钙泵 (Ca2 + ATPase)功能变化。方法 :采用大鼠离体心脏模型应用电镜酶细胞化学及生化技术 ,研究缺血再灌注心肌肌浆网、细胞膜原位钙泵分布及活性变化。结果 :心肌细胞钙泵以高电子密度颗粒... 详细信息

目的 :研究心肌缺血再灌注损伤肌浆网、肌膜钙泵 (Ca2 + ATPase)功能变化。方法 :采用大鼠离体心脏模型应用电镜酶细胞化学及生化技术 ,研究缺血再灌注心肌肌浆网、细胞膜原位钙泵分布及活性变化。结果 :心肌细胞钙泵以高电子密度颗粒主要分布于肌浆网、肌膜等膜结构 ,缺血 30min钙泵反应产物显著减少 ,再灌注 30min及 6 0min酶进一步减少或缺失。生化钙泵活性测定显示心肌缺血 30min时为 (0 .0 48± 0 .0 10 ) μmol/mg·h-1,再灌注 6 0min为 (0 .0 6 9± 0 .0 18) μmol/mg·h-1,酶活性较对照组显著降低 (P <0 .0 1,P <0 .0 5 )。结论 :本研究揭示钙泵活性降低发生在心肌缺血期 ,钙泵功能抑制是心肌缺血再灌注损伤的重要环节 ,是亚细胞Ca2 +

关键词：心肌缺血钙泵电镜酶细胞化学再灌注损伤

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光培养和暗培养绿草履虫电镜酶细胞化学的比较研究

光培养和暗培养绿草履虫电镜酶细胞化学的比较研究

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中国原生动物学学会第十一次学术讨论会

作者：倪兵陈灵杜宝剑顾福康华东师范大学生命科学学院上海交通大学生命科学技术学院华东师范大学生命科学学院华东师范大学生命科学学院

本文应用透电镜和酶细胞化学方法观察到,光培养下,绿草履虫细胞质内的小球藻共生体呈正常生长状态,仅少数小球藻被消化。在草履虫细胞内质网、部分表膜和刺丝泡膜、少数小球藻细胞壁位置显示酸性磷酸酶反应活性,ATP酶反应颗粒定位在小... 详细信息

本文应用透电镜和酶细胞化学方法观察到,光培养下,绿草履虫细胞质内的小球藻共生体呈正常生长状态,仅少数小球藻被消化。在草履虫细胞内质网、部分表膜和刺丝泡膜、少数小球藻细胞壁位置显示酸性磷酸酶反应活性,ATP酶反应颗粒定位在小球藻共生体外周的围藻泡上,琥珀酸脱氢酶反应颗粒定位在线粒体内周的内膜上,在内质网、刺丝泡膜及少数被消化的小球藻细胞外层发生葡萄糖-6-磷酸酶反应;暗培

关键词：绿草履虫细胞质内共生体暗培养酸性磷酸酶小球藻比较研究电镜酶细胞化学

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魏氏拟尾柱虫休眠包囊细胞器的电镜酶细胞化学研究

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Zoological Research 2000年第3期21卷 199-203页

作者：陈灵倪兵顾福康华东师范大学生物系上海200062

为研究纤毛虫在休眠状态下细胞生命活动的特征及细胞器的功能 ,应用电镜酶细胞化学方法显示 ,魏氏拟尾柱虫 (Paraurostylaweissei)休眠包囊中 ,在自噬泡位置 ,酸性磷酸酶反应颗粒形成多种形态的泡状体 ,ATP酶反应颗粒聚集形成泡状体或... 详细信息

为研究纤毛虫在休眠状态下细胞生命活动的特征及细胞器的功能 ,应用电镜酶细胞化学方法显示 ,魏氏拟尾柱虫 (Paraurostylaweissei)休眠包囊中 ,在自噬泡位置 ,酸性磷酸酶反应颗粒形成多种形态的泡状体 ,ATP酶反应颗粒聚集形成泡状体或球状体 ,在分散分布的线粒体中于内膜位置形成少数琥珀酸脱氢酶反应颗粒。由所得结果推测 ,纤毛虫休眠包囊中的自噬泡消化现象是细胞在特殊生理条件下的重要生命活动 ,是休眠细胞中物质利用和能量获得的主要途径 ;自噬泡消化中也进行着对能量的利用过程 ;分散分布的线粒体是功能细胞器 ,它们与提供细胞生命活动能量有关。

关键词：魏氏拟尾柱虫休眠包囊电镜酶细胞化学细胞器

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