检索结果-内蒙古大学图书馆

化工学报 2011年第6期62卷 1574-1580页

作者：童红飞林东强姚善泾化学工程联合国家重点实验室浙江大学化学工程与生物工程学系浙江杭州310027

利用疏水性电荷诱导层析(HCIC)从鸡血中分离免疫球蛋白IgY。采用经辛酸预处理后的血浆上清液作为原料,直接用HCIC分离纯化IgY。考察了两种HCIC介质,市售介质MEP HyperCel和实验室自制介质Bestarose-DVS-MMI,优化了上样pH、洗脱pH和上样... 详细信息

利用疏水性电荷诱导层析(HCIC)从鸡血中分离免疫球蛋白IgY。采用经辛酸预处理后的血浆上清液作为原料,直接用HCIC分离纯化IgY。考察了两种HCIC介质,市售介质MEP HyperCel和实验室自制介质Bestarose-DVS-MMI,优化了上样pH、洗脱pH和上样量等条件。研究发现,以2-巯基-1-甲基咪唑为配基的Bestarose-DVS-MMI介质优于MEP HyperCel介质,前者分离IgY的纯度和收率较高,HPLC分析IgY纯度可达92%以上,收率约95%。通过配基结构比较和表面电势分析,探讨了HCIC分离IgY的机制。结果表明,采用HCIC可以实现IgY的高效分离,为从血液中分离免疫球蛋白提供了新方法。

关键词：疏水性电荷诱导层析免疫球蛋白 IgY 鸡血浆

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

疏水性电荷诱导层析——原理、性能及其应用

引用

化工进展 2010年第10期29卷 1951-1956页

作者：夏海锋林东强姚善泾江南大学工业生物技术教育部重点实验室江苏无锡214122 浙江大学化学工程与生物工程学系浙江杭州310027

介绍了疏水性电荷诱导层析(hydrophobic charge induction chromatography,HCIC)的原理及特点:其功能基团结合了疏水作用和静电相互作用,是一种混合型的双模式层析方法。由于HCIC在蛋白质(特别是抗体)的分离纯化中表现出操作简便、选择... 详细信息

介绍了疏水性电荷诱导层析(hydrophobic charge induction chromatography,HCIC)的原理及特点:其功能基团结合了疏水作用和静电相互作用,是一种混合型的双模式层析方法。由于HCIC在蛋白质(特别是抗体)的分离纯化中表现出操作简便、选择性较好等优点,受到了学术界和工业界的关注。对HCIC的技术原理、发展历程、层析行为以及应用现状等进行综述,以期对HCIC的深入研究和应用开发提供指导。

关键词：生物分离疏水性电荷诱导层析混合模式吸附功能配基

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

疏水性电荷诱导层析介质的吸附性能和作用机制研究

疏水性电荷诱导层析介质的吸附性能和作用机制研究

引用

作者：袁晓明浙江大学

学位级别：博士

抗体是重要的生物药物和免疫诊断试剂,具有巨大的市场需求。基于蛋白A亲和层析的传统抗体分离方法存在成本高昂、配基泄露、洗脱条件苛刻等局限,制约了抗体产业的发展。疏水性电荷诱导层析（Hydrophobic charge induction chromatograph... 详细信息

抗体是重要的生物药物和免疫诊断试剂,具有巨大的市场需求。基于蛋白A亲和层析的传统抗体分离方法存在成本高昂、配基泄露、洗脱条件苛刻等局限,制约了抗体产业的发展。疏水性电荷诱导层析（Hydrophobic charge induction chromatography,HCIC）作为一种新型抗体分离方法,具有吸附容量大、选择性较高、分离条件温和、成本较低等优点,具有良好的抗体分离应用潜力,但相关机理认识需要进一步加强。本文以商业化HCIC介质MEPHyperCel和三种新型HCIC介质（MMI、ABI和W-ABI介质）为主要研究对象,以静态吸附和等温滴定量热法（Isothermal titration calorimetry,ITC）为主要研究手段,考察了四种HCIC介质的蛋白吸附性能,并从热力学角度揭示HCIC介质的作用机理,为分离过程优化和新型配基设计提供重要依据。首先,考察了 MEPHyperCel介质的蛋白吸附性能研究。MEPHyperCel介质对三种抗体（hIgG、bIgG和mAb）的吸附容量均远大于两种血清白蛋白（HSA和BSA）,体现出抗体分离的应用潜力。MEPHyperCel吸附具有较强的pH依赖性和一定的耐盐吸附特性。添加辛酸钠能够明显降低MEPHyperCel对BSA的吸附量,提高对IgG的选择性。实验发现,同时加入辛酸钠和一定浓度的NaCl,能够显著减少MEPHyperCel介质对BSA的吸附。温度升高也会一定程度减少BSA的吸附。在吸附实验基础上,利用ITC对辛酸钠、MEP配基和MEP介质与蛋白相互作用进行了研究。发现辛酸钠-BSA间的相互作用大于辛酸钠-IgG,且辛酸钠-BSA相互作用以疏水作用为主。加入辛酸钠同时加入一定浓度NaCl,或者升高温度,会使辛酸钠与BSA间的疏水作用增强。同时,ITC结果表明,IgG与MEP配基之间的亲和力远高于白蛋白,且MEP-IgG间同时存在疏水作用、静电作用、氢键、范德华力等多种作用力。pH变化显著影响MEP与IgG之间的静电作用和疏水作用,导致MEP HyperCel介质对hIgG的吸附容量有较大的变化。此外,ITC结果揭示了 MEPHyperCel介质耐盐吸附特性的热力学机制,即MEP配基与hIgG相互作用的过程中存在熵焓补偿现象,使得反应自由能的变化不大。其次,考察了三种新型HCIC介质（MMI、ABI和W-ABI介质）的吸附性能研究。中性pH条件下,三种新型HCIC介质对hIgG均有较高的吸附容量,其中含有双功能配基的W-ABI介质对hIgG的吸附力最强,ABI介质次之,MMI介质最弱。三种介质同样体现出较明显的pH依赖性吸附特性和较好的耐盐吸附性能。相对而言,W-ABI介质的pH敏感性比另外两种介质弱。50%体积浓度的乙二醇可以较明显地降低MEP HyperCel、MMI和ABI介质的饱和吸附容量,但对W-ABI介质的吸附性能影响不大。1 M精氨酸浓度下,四种HCIC介质的吸附容量均有所减小,但整体变化幅度不大,说明精氨酸对这四种介质的蛋白解吸促进作用并不明显。最后,对新型HCIC介质-蛋白相互作用进行了 ITC研究。考察了不同pH、NaCl浓度、乙二醇浓度和精氨酸浓度下,MMI、ABI和W-ABI与hIgG之间的相互作用,并与MEP HyperCel介质进行对比。发现pH对介质-蛋白相互作用的影响显著,不同介质的NaCl影响略有不同,加入乙二醇会屏蔽介质-蛋白间的疏水作用,而精氨酸的加入则会屏蔽静电作用。中性pH条件下,MMI、ABI和W-ABI介质均通过混合作用模式实现抗体的结合。其中,MMI介质的亲硫作用和疏水作用较强,静电作用较弱;ABI介质与MEP HyperCel介质的作用机理相近,但疏水作用的贡献要大于MEP HyperCel介质;W-ABI介质与hIgG间的作用力比较强,导致W-ABI介质具有很好的耐盐吸附性能,但对pH的依赖性没有其它三种介质高。本文以了解HCIC介质的蛋白吸附性能和作用机理为出发点,探讨了 pH、盐和特殊添加剂对吸附性能的影响,通过ITC实验探讨了 HCIC介质与抗体之间的相互作用,揭示了 HCIC介质的作用机理,为层析分离的过程优化和新型配基的设计提供重要的依据。

关键词：疏水性电荷诱导层析等温滴定量热法免疫球蛋白G 白蛋白吸附性能分子相互作用层析介质

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

疏水性电荷诱导层析分离抗HER2和抗IL-12/23单克隆抗体研究

疏水性电荷诱导层析分离抗HER2和抗IL-12/23单克隆抗体研究

引用

作者：李菁浙江大学

学位级别：硕士

单克隆抗体(单抗)作为重要的生物技术药物,具有巨大的市场需求和开发潜力,传统的蛋白A亲和层析分离存在一些不足,因此开发经济高效的单抗分离新方法和新介质具有十分重要的意义。疏水性电荷诱导层析(HCIC)作为近年来发展迅速的抗体分离... 详细信息

单克隆抗体(单抗)作为重要的生物技术药物,具有巨大的市场需求和开发潜力,传统的蛋白A亲和层析分离存在一些不足,因此开发经济高效的单抗分离新方法和新介质具有十分重要的意义。疏水性电荷诱导层析(HCIC)作为近年来发展迅速的抗体分离新方法,具有一定优势,但分离工艺和配基结构有待进一步优化。本论文选择两种典型的单抗药物,抗HER2单抗和抗IL-12.23单抗,探讨HCIC从CHO细胞培养上清液中分离单抗,考察吸附性能,优化分离条件,比较分析商业化介质和本课题组开发的新型HCIC介质,为单抗规模化分离纯化提供了新思路。首先,将典型的HCIC介质MEP HyperCel应用于CHO细胞培养上清液中抗HER2单抗的分离。考察了细胞培养液上清液的特性,发现温度和pH对单抗稳定性有一定影响。考察了MEP HyperCel介质对抗HER2单抗的吸附性能,发现中性pH时吸附容量较高,酸性pH时吸附容量显著下降。考察了抗HER2单抗的动态载量,优化了分离工艺,确定了合适的上样和洗脱条件,实现了细胞培养液中抗HER2单抗的高效分离,纯度达到94.6%,得率约0.1mg/(ml料液)。其次,采用本课题组设计和制备的HCIC介质ABI,以氨基苯并咪唑为功能配基,从CHO细胞培养上清液中分离抗白介素12.23单抗(抗IL-12.23单抗),并与MEP HyperCel介质比较。结果表明,ABI介质对单抗的吸附性能良好,静态吸附容量略低于MEP HyperCel介质,但动态载量较高,受流速影响小,适合于高流速操作。优化了单抗分离工艺,包括上样和洗脱过程,确定了合适的分离条件,实现了细胞培养液中高效分离单抗,pH3.6条件下洗脱单抗纯度达到98.6%,收率为93.0%,明显优于MEP HyperCel介质。最后,采用本课题组设计、具有双功能配基色氨酸-氨基苯并咪唑的新型HCIC介质W-ABI,从CHO细胞培养上清液中分离抗IL-12.23单抗。结果表明,pn对W-ABI介质吸附单抗影响显著,中性pH范围内吸附容量较高,酸性pH条件下可以通过静电排斥作用实现解吸。W-ABI介质的动态载量受流速影响较小,高流速条件下仍保持较高的载量,性能优于MEP HyperCel介质。优化洗脱pH后,单抗纯度达97.2%,收率达93.3%,收率高于蛋白A亲和层析,洗脱组分中宿主细胞残留量(HCP)明显低于MEP HyperCel分离,显示出良好的应用前景。本论文围绕哺乳动物细胞培养液中高效分离单抗,从提高HCIC分离抗体的效率出发,对分离工艺进行了优化,探讨了两种新型HCIC介质的分离性能,分析了不同介质的分离效果,显示了新介质的应用潜力,证实了HCIC分离单抗的可行性,为单抗分离新方法和新介质的进一步开发和应用打下了基础。

关键词：生物分离单克隆抗体疏水性电荷诱导层析过程优化

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

疏水性电荷诱导层析磁性微球分离鸡蛋卵清白蛋白

引用

湖州师范学院学报 2019年第10期41卷 48-51页

作者：吴立群沈超怡姚晓丹张慧敏顾佳黎湖州师范学院生命科学学院

利用疏水性电荷诱导层析磁性微球从鸡蛋中分离卵清白蛋白,优化卵清白蛋白的分离工艺.辛酸预处理pH为5.8,辛酸加入量为50μL/mL蛋清处理液,磁性微球吸附pH为5.8,洗脱pH为3.8,洗脱时加入NaCl,其浓度为1 mol/L,卵清白蛋白的回收率约为78%,... 详细信息

利用疏水性电荷诱导层析磁性微球从鸡蛋中分离卵清白蛋白,优化卵清白蛋白的分离工艺.辛酸预处理pH为5.8,辛酸加入量为50μL/mL蛋清处理液,磁性微球吸附pH为5.8,洗脱pH为3.8,洗脱时加入NaCl,其浓度为1 mol/L,卵清白蛋白的回收率约为78%,表明疏水性电荷诱导层析磁性微球可以有效分离卵清白蛋白.

关键词：疏水性电荷诱导层析卵清白蛋白鸡蛋

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

聚合物接枝型疏水性电荷诱导层析介质设计及蛋白质吸附机理研究

聚合物接枝型疏水性电荷诱导层析介质设计及蛋白质吸附机理研究

引用

作者：刘韬浙江大学

学位级别：博士

疏水性电荷诱导层析(Hydrophobic charge-induction chromatography,HCIC)是一种新型抗体分离技术,其配基兼有疏水、静电、氢键等多种相互作用,具有选择性好、耐盐性高、洗脱条件温和以及价格相对低廉等特点,已有一些成功应用实例。由... 详细信息

疏水性电荷诱导层析(Hydrophobic charge-induction chromatography,HCIC)是一种新型抗体分离技术,其配基兼有疏水、静电、氢键等多种相互作用,具有选择性好、耐盐性高、洗脱条件温和以及价格相对低廉等特点,已有一些成功应用实例。由于配基与抗体结合力较弱,使得HCIC介质在高流速下对抗体的动态结合载量较低,而聚合物接枝的离子交换层析介质可以显著提高蛋白的吸附容量、传质速率和动态结合载量。因此本文以高效抗体分离为目标,设计并制备了两种聚合物接枝型HCIC介质,比较蛋白吸附和传质性能,分析层析过程的固相条件(聚合物接枝、配基密度、接枝密度)和液相条件(pH和添加盐)的影响,并借助逆体积排阻层析(Inverse size exclusion chromatography,ISEC)、等温滴定量热仪(Isothermal titration calorimetry,ITC)和共聚焦激光扫描显微镜(Confocal laser scanning microscopy,CLSM)进行了微观分析,以指导新型介质设计。主要结果如下:首先以葡聚糖接枝的琼脂糖凝胶为基质,以2-巯甲基咪唑(MMI)为配基,优化了配基偶联条件,制备了不同配基密度的葡聚糖接枝MMI介质。相比非接枝MMI介质,配基密度提高了 50%左右,达到2000μmol/g。以hIgG为模型蛋白,考察了系列葡聚糖接枝MMI介质的静态吸附、吸附动力学和层析柱动态吸附性能。结果表明,在近中性pH下,葡聚糖接枝介质对蛋白的吸附容量、结合力、传质速率和动态结合载量随着配基密度增加而持续增加,葡聚糖接枝MMI介质相比非接枝MMI介质具有更高的蛋白吸附容量、传质速率和动态结合载量。在pH 7.0～8.9时,饱和吸附容量保持在107.5～110.0 mg/g,受pH影响较小;在100 cm/h线性流速下hIgG动态结合载量达到38.3mg/g;在弱酸性条件下,葡聚糖接枝MMI介质的蛋白吸附容量和传质速率下降更显著,有利于蛋白解吸。此外,葡聚糖接枝MMI介质吸附能力受盐浓度的影响较小,但传质速率受盐浓度的影响较大。其次,针对葡聚糖接枝介质中HCIC配基同时存在于接枝层和基质孔道表面上的局限,利用表面引发的电子转移再生活化剂的原子转移自由基聚合反应,制备了不同接枝密度和配基密度的聚甲基丙烯酸缩水甘油酯(GMA)接枝MMI介质。结果表明,高接枝密度和中等配基密度的聚GMA接枝MMI介质对hIgG具有更高的饱和吸附容量和传质速率。相比葡聚糖接枝MMI介质以及商业化HCIC介质MEP HyperCel,聚GMA接枝介质对hIgG具有更高动态结合载量。hIgG动态结合载量受流速影响较小,线性流速300 cm/h下可达34.6 mg/g,且具有明显的pH依赖吸附和耐盐吸附特性。此外,考察了从混合蛋白体系(hIgG/HSA=1:4)中分离hIgG和从CHO细胞培养液中分离单克隆抗体,聚GMA接枝HCIC介质均表现出良好的抗体分离和重复使用性能,50个周期循环使用的抗体纯度和收率分别稳定在98.5～99.8%和 90.2～96.9%。最后,为了从微观尺度揭示聚合物接枝MMI介质的吸附及传质机制,利用ISEC考察了介质孔结构的影响,利用ITC研究了不同蛋白(hIgG和BSA)的吸附热,利用CLSM实时观测了单个介质颗粒内蛋白的吸附、传质及洗脱过程。ISEC结果表明,不加盐时葡聚糖接枝链和聚GMA接枝链在基质表面形成三维空间分布,有助于提高蛋白吸附容量;高盐浓度下,接枝链出现塌缩,且葡聚糖链的塌缩程度更明显,削弱了链传递效应,降低了蛋白传质速率。ITC结果表明,对于hIgG,在pH 8时,配基密度和盐浓度的增加会显著增加葡聚糖接枝MMI介质吸附hIgG的焓变和熵变,说明疏水相互作用增强;弱酸条件下,焓变和熵变急剧下降为负值,说明静电排斥作用主导了蛋白的解吸;对于BSA,吸附容量随着盐浓度的增加而显著下降,且焓变和熵变值为负,表明主要通过静电吸引力吸附BSA。CLSM结果表明,hIgG和BSA在葡聚糖接枝、聚GMA接枝和非接枝MMI介质内,均体现出均质扩散控制的传质机理;hIgG在高配基密度葡聚糖接枝和中等配基密度聚GMA接枝MMI介质内体现了更高的荧光强度;相比hIgG,BSA达到MMI介质内核所需时间更短;pH4.0时,中等配基密度聚GMA接枝MMI介质内的荧光强度下降最为明显;以上结果与宏观吸附、传质及分离性能相匹配。本文从提高HCIC介质的蛋白载量出发,制备了两种新型聚合物接枝HCIC介质,探讨了聚合物接枝、配基密度、接枝密度、pH、添加盐和蛋白性质对聚合物接枝HCIC介质吸附和传质性能的影响,并利用ISEC、ITC、CLSM等手段从微观角度揭示了蛋白吸附和传质机理,结果显示

关键词：疏水性电荷诱导层析聚合物接枝配基密度抗体蛋白质吸附葡聚糖聚甲基丙烯酸缩水甘油酯

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

基于氨基苯并咪唑配基的疏水性电荷诱导层析介质制备和蛋白吸附研究

基于氨基苯并咪唑配基的疏水性电荷诱导层析介质制备和蛋白吸附研...

引用

作者：王存响浙江大学

学位级别：硕士

疏水性电荷诱导层析(hydrophobic charge-induction chromatography, HCIC)是一种新型抗体分离方法,其功能配基兼有疏水和静电相互作用,中性条件下利用疏水作用吸附目标蛋白,调节pH改变配基的荷电特性,依靠静电排斥作用协助蛋白洗脱。目... 详细信息

疏水性电荷诱导层析(hydrophobic charge-induction chromatography, HCIC)是一种新型抗体分离方法,其功能配基兼有疏水和静电相互作用,中性条件下利用疏水作用吸附目标蛋白,调节pH改变配基的荷电特性,依靠静电排斥作用协助蛋白洗脱。目前,HCIC介质的蛋白吸附性能有待提高。本论文以抗体分离为目标,以5-氨基苯并咪唑(5-aminobenzimidazole,ABI)为功能配基,比较三种配基偶联方式,制备不同配基密度的系列介质,考察配基密度和偶联方式对蛋白吸附的影响,以指导新型介质设计。主要结果如下：首先,以琼脂糖凝胶为基质,优化ABI配基偶联,制备了不同配基密度的ABI-B-6FF介质。以人免疫球蛋白(hIgG)和牛血清白蛋白(BSA)为模型蛋白,考察了静态吸附、吸附动力学和蛋白穿透行为,发现随着配基密度的增大,蛋白饱和吸附容量和有效扩散系数逐步增大,并趋于饱和;高配基密度介质具有更高的动态载量,且随流速影响小;hIgG吸附量高于BSA,随着配基密度增大,hIgG的吸附选择性有所提高;引入孔表面配基密度,发现与饱和吸附容量、有效扩散系数和动态载量呈线性相关。其次,以葡聚糖接枝的琼脂糖凝胶为基质,制备了不同配基密度的ABI-B-XL介质。以hIgG为模型蛋白,考察了pH、添加盐和配基密度对蛋白吸附的影响。发现pH影响显著,7.0～8.5之间吸附容量较高;添加盐对蛋白吸附影响不大,体现出较好的耐盐吸附特性;随配基密度增大,蛋白吸附容量、有效扩散系数和动态载量均呈现先增大后降低的趋势,最优配基密度为220 μmol/g,100cm/h线性流速下hIgG的动态载量达66.70 mg/g。结果表明,葡聚糖接枝ABI-B-XL介质比未接枝的ABI-B-6FF介质,抗体吸附性能显著提高。最后,以琼脂糖凝胶为基质,以甲基丙烯酸缩水甘油酯(GMA)为接枝单体,采用原位聚合方法,通过控制GMA和配基添加量,制备了系列G-ABI-4FF介质,配基密度显著高于葡聚糖接枝介质。考察了配基密度对介质吸附hIgG的影响,发现随配基密度增大,蛋白吸附容量、有效扩散系数和动态载量均呈现先增大后降低的趋势,最优配基密度为330 μmol/g,100 cm/h线性流速下hIgG的动态载量高达82.10 mg/g,且随流速变化小。相比葡聚糖接枝介质,GMA接枝介质的抗体吸附性能进一步得到改善。本文围绕新型HCIC介质制备,系统考察了配基偶联方式和配基密度对抗体吸附的影响,发现孔内接枝可以有效提高吸附容量、促进孔内传质、改善动态载量,特别是原位聚合的GMA接枝介质,配基密度显著提高,配基分布更加均匀,有效改善了HCIC介质的动态结合性能,显示出良好的抗体分离应用前景。

关键词：疏水性电荷诱导层析接枝型层析介质配基密度蛋白吸附人免疫球蛋白牛血清白蛋白

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

聚合物接枝型疏水性电荷诱导层析介质及抗体吸附研究

聚合物接枝型疏水性电荷诱导层析介质及抗体吸附研究

引用

2015中国化工学会学术年会

作者：韬刘东强林其磊张善泾姚浙江大学化学工程与生物工程学院

疏水性电荷诱导层析(Hydrophobic Chage-Induction Chromatography,HCIC)是一种新型的混合模式层析分离方法,在中性pH条件下通过疏水作用吸附蛋白,在酸性pH下以静电排斥作用实现蛋白洗脱,具有吸附容量高、选择性好、耐盐性强等优势.采... 详细信息

疏水性电荷诱导层析(Hydrophobic Chage-Induction Chromatography,HCIC)是一种新型的混合模式层析分离方法,在中性pH条件下通过疏水作用吸附蛋白,在酸性pH下以静电排斥作用实现蛋白洗脱,具有吸附容量高、选择性好、耐盐性强等优势.采用聚合物接枝可使分离介质具有更高的配基密度,且增加配基与目标蛋白的结合位点,提高动态载量.本文采用电子转移再生的原子转移自由基聚合反应(Activators Generated by Electron Transfer Atom Transfer Radical Polymerization,AGET- ATRP),制备聚合物接枝型疏水性电荷诱导型层析介质,以人IgG(hIgG)为吸附蛋白,探讨新介质的抗体结合性能.首先,优化AGET-ATRP反应,制备聚甲基丙烯酸缩水甘油酯(GMA)接枝的琼脂糖微球,偶联HCIC配基2-巯甲基咪唑(MMI),制备GMA接枝的HCIC介质G-MMI-4FF.考察了引发剂、单体和配基用量等对介质接枝密度和配基密度的影响,发现接枝密度随引发剂用量增加而增加,配基密度随单体和配基用量增加而增加.其次,考察了不同接枝密度和配基密度的G-MMI-4FF介质对hIgG吸附的影响,对于不同接枝密度的介质,hIgG饱和吸附容量和吸附速率均在合适配基密度下达到最高;不同接枝密度下,介质的最优吸附容量和最优吸附速率随着接枝密度增加而增加.最后,考察了不同接枝密度下具有最优吸附效果的G-MMI-4FF介质对hIgG的动态吸附性能,相比非接枝HCIC介质MMI-4FF、MEP HyperCel和葡聚糖接枝HCIC介质MMI-B-XL-200,新介质对hIgG的动态载量分别提高了861％、123％以及86％.结果表明,AGET-ATRP可实现介质表面接枝聚合物链长度和密度的可控反应,降低催化剂的用量,简化制备步骤;所制备的聚合物接枝型疏水性电荷诱导介质吸附容量大,动态载量高,具有规模化抗体分离应用的潜力.

关键词：疏水性电荷诱导层析聚合物接枝吸附配基密度 IgG

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

新型疏水性电荷诱导层析介质制备及人免疫球蛋白吸附

新型疏水性电荷诱导层析介质制备及人免疫球蛋白吸附

引用

2015中国化工学会学术年会

作者：王存响东强林韬刘善泾姚浙江大学化学工程与生物工程学院

疏水性电荷诱导层析(Hydrophobic charge-induction chromatography HCIC)是近年来发展的一种新型生物分离方法,其功能配基兼有疏水、氢键及静电相互作用,主要利用疏水作用吸附目标蛋白,通过调节缓冲液pH值,改变蛋白和介质的荷电特性,... 详细信息

疏水性电荷诱导层析(Hydrophobic charge-induction chromatography HCIC)是近年来发展的一种新型生物分离方法,其功能配基兼有疏水、氢键及静电相互作用,主要利用疏水作用吸附目标蛋白,通过调节缓冲液pH值,改变蛋白和介质的荷电特性,依靠静电排斥作用协助洗脱蛋白.HCIC吸附效率高,洗脱方便,且具有明显的耐盐特性,在低盐和高盐浓度下,都可实现有效吸附,避免了对料液的预处理.本文以5-氨基苯并咪唑(ABI)为新型HCIC配基,琼脂糖凝胶为基质,制备了不同配基密度的新型HCIC介质ABI-B-6FF,以人免疫球蛋白(hIgG)和牛血清白蛋白(BSA)为模型蛋白,考察配基密度对蛋白吸附的影响.首先,优化了介质制备过程,考察了烯丙基溴添加量对活化密度的影响,发现0.5 mL/g 添加量时,活化密度达到最大值(250 μmol/g);采用3倍双键密度的配基添加量,制备得到了一系列不同配基密度的ABI-B-6FF介质,最大配基密度达到180 μmol/g.其次,考察了不同配基密度介质对hIgG和BSA的静态和动态吸附性能.结果表明,当配基密度低于140 μmol/g时,随着配基密度增大,饱和吸附容量(Qm)显著增大,解离常数(Kd)减小;当配基密度高于140 μmol/g时,Qm和Kd趋于稳定.同时,孔扩散系数(De)和动态载量(DBC)随配基密度变化也有相似的规律.在高配基密度下,DBC几乎不随线性流速的增大而改变.此外,hIgG的Qm和DBC显著大于BSA,高配基密度下更加明显.采用孔表面配基密度(PSLD)关联了配基密度与Qm、De和DBC的关系,发现PSLD与Qm、De和DBC有着良好的线性关系.结果表明,以ABI 为新型功能配基的HCIC介质ABI-B-6FF,在高配基密度下对IgG吸附容量大,动态载量高,具有抗体分离应用的良好前景.

关键词：疏水性电荷诱导层析人免疫球蛋白牛血清白蛋白蛋白吸附配基密度

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

新型疏水性电荷诱导配基设计及层析分离抗体研究

新型疏水性电荷诱导配基设计及层析分离抗体研究

引用

作者：童红飞浙江大学

学位级别：博士

单克隆抗体是一类重要的生物技术药物,具有巨大的市场前景。基于蛋白A亲和层析的抗体分离过程存在一些局限,制约了抗体产业发展,开发经济高效的抗体分离新方法,具有重要的意义。疏水性电荷诱导层析(HCIC)是抗体分离的新方法,不过相关机... 详细信息

单克隆抗体是一类重要的生物技术药物,具有巨大的市场前景。基于蛋白A亲和层析的抗体分离过程存在一些局限,制约了抗体产业发展,开发经济高效的抗体分离新方法,具有重要的意义。疏水性电荷诱导层析(HCIC)是抗体分离的新方法,不过相关机制的认识仍不够深入,分离工艺尚待完善,配基性能也有待提高。本论文以抗体分离为目标,结合实验手段和计算机分子模拟方法,分析HCIC分离的分子机制,设计新型配基,探讨HCIC分离抗体的新工艺。首先比较了HCIC介质(MEP HyperCel和Bestarose-4FF-MMI)和蛋白A亲和介质的吸附分离性能,进行了单抗分离工艺的优化,发现优化后的HCIC抗体分离工艺与蛋白A亲和层析的效果接近,但仍有进一步提升的空间。进一步以牛血清白蛋白(BSA)为典型杂质,系统考察了溶液条件(pH、盐以及添加辛酸钠等)对蛋白吸附和解吸行为的影响,探讨了蛋白和MEP配基间的相互作用。通过调节pH、离子强度和添加辛酸钠可以显著提高HCIC结合抗体的选择性,有效降低BSA在HCIC介质上的吸附,提高抗体分离的效率。采用计算机分子模拟方法探讨了HCIC配基和抗体间的相互作用,从分子尺度揭示了HCIC的分离机制。结果表明,抗体分子上存在多个可能的结合位点,疏水相互作用、pi-pi、pi-日离子以及氢键作用在配基-抗体结合过程中起了重要作用。证实了高配基密度对抗体吸附的重要性,并观察到类似于诱导契合的蛋白构象调整,以及典型的多位点协同作用。酸性条件下,碱性氨基残基与质子化的HCIC配基间存在静电排斥力,是蛋白解吸的主要推动力。通过分子动力学模拟研究了抗体的Fc片段和天然的Fc特异性配基间分子识别和结合模式。结果显示,疏水作用是特异性配基结合的主要驱动力。进一步通过丙氨酸扫描方法,分析比较了配基-抗体间的相互作用能,鉴别出配基和Fc结合界面上的热点残基,提出了基于色氨酸或酪氨酸残基的两种结合模式,为仿生Fc亲和配基的设计提供了指导。设计了两种HCIC新配基：氨基苯并咪唑(ABM)和色氨酸-氨基苯并咪唑双功能配基(W-ABM),成功偶联于琼脂糖凝胶,制备了新型HCIC介质,考察了吸附性能,并用于抗体分离。结果表明,在中性pH范围内,两种介质对IgG具有较高的饱和吸附容量,对BSA吸附量低,且对抗体吸附具有显著的非盐依赖特性。在弱酸性pH条件下,能够实现抗体的有效回收。两种介质的动态载量受流速影响较小,在高流速下仍能维持较高的载量,性能优于商业化的MEPHyperCel介质。进一步实现了模拟血清和细胞培养上清液中分离抗体,结果表明两种介质分离性能优良,显示出良好的应用前景。本又从提高HCIC分离抗体的效率出发,对分离工艺进行了优化,探讨了HCIC分离的分子机制,设计并制备了两种性能良好的HCIC新介质,成功用于抗体分离,有助于HCIC在抗体制备中的推广应用。

关键词：疏水性电荷诱导层析分子模拟免疫球蛋白G 抗体配基生物分离过程设计

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：