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文献类型

3 篇 学位论文
2 篇 会议

馆藏范围

5 篇 电子文献
0 种 纸本馆藏

日期分布

学科分类号

5 篇 农学
- 5 篇 植物保护
1 篇 工学
- 1 篇 计算机科学与技术...

主题

5 篇 病毒与寄主互作
3 篇 真菌病毒
2 篇 egfrs-like蛋白
1 篇 水稻条纹病毒
1 篇 酵母双杂交
1 篇 rbcs1蛋白
1 篇 双分体病毒
1 篇 抗体制备
1 篇 线性病毒
1 篇 核穿梭蛋白
1 篇 生物防治
1 篇 弱毒病毒
1 篇 ras相关蛋白
1 篇 nbgr-rb
1 篇 np
1 篇 核盘菌
1 篇 苎麻花叶病毒
1 篇 致病因子

机构

3 篇 华中农业大学
2 篇 湖北省作物病害监...
2 篇 福建农林大学

作者

2 篇 付艳苹
2 篇 刘四
2 篇 姜道宏
2 篇 谢甲涛
2 篇 程家森
1 篇 叶婷
1 篇 郑立敏
1 篇 江宵烽

语言

5 篇 中文

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水稻条纹病毒NP的植物寄主互作因子鉴定与研究

水稻条纹病毒NP的植物寄主互作因子鉴定与研究

引用

作者：江宵烽福建农林大学

学位级别：硕士

水稻条纹病毒(rice stripe tenuivirus,RSV)是东亚最重要的水稻病毒之一。核衣壳蛋白(nucleocapsid protein,NP/Pc3)是RSV的主要结构蛋白,在寄主植物细胞中大量积累,但NP与哪些植物寄主因子互作,目前还少有报道。本文对与RSV NP互作的... 详细信息

水稻条纹病毒(rice stripe tenuivirus,RSV)是东亚最重要的水稻病毒之一。核衣壳蛋白(nucleocapsid protein,NP/Pc3)是RSV的主要结构蛋白,在寄主植物细胞中大量积累,但NP与哪些植物寄主因子互作,目前还少有报道。本文对与RSV NP互作的植物寄主因子进行了筛选、验证与功能研究,获得的主要结果如下:(1)NP互作植物寄主因子的筛选与验证:在本氏烟叶片表达RSV NP与生物素连接酶Air ID的融合蛋白,利用邻近标记技术,筛选到16个与NP互作的候选蛋白。将16个候选蛋白基因与RSV NP分别构建到p GADT7/p GBKT7、YN/YC及p Early Gate-101/102载体,进行酵母双杂交(Y2H)、双分子荧光互补(Bi FC)和亚细胞共定位实验。其结果表明,本氏烟Ras相关蛋白(ras-related protein RABH1b,Nb Ra RH1b;ras-related protein RABB1c-like,Nb Ra RB1c)和本氏烟脱落酸受体蛋白(abscisic acid receptor PYR1-like,Nb ARP1)与NP的互作能在Y2H和Bi FC实验中重复;本氏烟核酸外切酶(small rna degrading nuclease 1,Nbs RGNc)、本氏烟富含甘氨酸RNA结合蛋白(glycine-rich RNA-binding protein-like,Nb GR-RBP)和本氏烟双链RNA结合蛋白(double-stranded rna-binding protein 6,Nb DBR6)与NP的互作能在Bi FC实验中重复,但在Y2H实验中存在报告基因被融合表达和自激活同时存在的现象;所有六个蛋白都与NP存在共定位。(2)NP与Nb Ra RH1b/Nb Ra RB1c互作的Pull-down验证和关键区域鉴定:Nb Ra RH1b和Nb Ra RB1c是两个同源的小型GTP结合蛋白,为了体外验证二者与RSV NP的互作,在大肠杆菌中表达了Nb Ra RH1b/Nb Ra RB1c与HIS及NP与GST的融合蛋白,并以表达产物进行了GST pul-down实验。结果显示,GST抗体可以同时“拉下”NP-GST和Nb Ra RH1b/Nb Ra RB1c-HIS,即Nb Ra RH1b/Nb Ra RB1c与NP在体外也存在互作。为研究NP与Nb Ra RH1b/Nb Ra RB1c互作的关键区域,构建了5个C端氨基酸缺失的NP突变体,以Y2H和Bi FC分别研究了各突变体与Nb Ra RH1b/Nb Ra RB1c的互作。结果显示,N端56到163位氨基酸区域是NP与Nb Ra RH1b/Nb Ra RB1c互作所必须的。(3)Nb Ra RH1b/Nb Ra RB1c在RSV侵染中的作用:为研究RSV NP和Nb Ra RH1b/Nb Ra RB1c互作的意义,运用烟草脆裂病毒(tobacco rattle virus,TRV)诱导的基因沉默技术,获得了Nb Ra RH1b或Nb Ra RB1c沉默的本氏烟。接种RSV后观察症状,并以q RT-PCR检测病毒RNA在接种第14天、21天和28天的积累。结果表明,RSV在Nb Ra RH1b、Nb Ra RB1c沉默本氏烟上引起的症状明显轻于对照,在接种第28天时,病毒RNA积累量也明显更低。这表明Nb Ra RH1b和Nb Ra RB1c可能正调控RSV的侵染,RSV可能通过NP激活或招募Nb Ra RH1b、Nb Ra RB1c的某种功能。综上,本文通过筛选和验证,得到6个与RSV NP互作的植物寄主因子,并对其中的Nb Ra RH1b和Nb Ra RB1c开展了进一步研究。结果显示,NP以第56到163位氨基酸与Nb Ra RH1b/Nb Ra RB1c互作,而这种互作可能有利于RSV的侵染。这些数据为进一步解析NP如何参与RSV与植物寄主的互作奠定了重要基础,对于RSV防控策略的设计也有一定参考意义。

关键词：水稻条纹病毒 NP 病毒与寄主互作 Ras相关蛋白 NbGR-RB

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苎麻花叶病毒编码NSP与寄主RBCS1的互作研究

苎麻花叶病毒编码NSP与寄主RBCS1的互作研究

引用

作者：郑立敏福建农林大学

学位级别：硕士

苎麻花叶病毒(Ramie mosaic virus, RaMoV)是双生病毒科(Geminiviridae)菜豆花叶病毒属(Begomovirus)的双组份双生病毒,在自然界以RaMoVA/ RaMoVB病害复合体的形式侵染寄主。至今已在湖南、江苏和浙江的苎麻及福建的普通烟草上检测到该... 详细信息

苎麻花叶病毒(Ramie mosaic virus, RaMoV)是双生病毒科(Geminiviridae)菜豆花叶病毒属(Begomovirus)的双组份双生病毒,在自然界以RaMoVA/ RaMoVB病害复合体的形式侵染寄主。至今已在湖南、江苏和浙江的苎麻及福建的普通烟草上检测到该种病毒。本文所用毒源RaMoV F3分离物是从福州田间表现出矮化、卷叶和脉肿的普通烟草上分离得到病毒。双组份双生病毒在寄主植物细胞内的运动依赖于DNA-B组分BV1编码的核穿梭蛋白(nuclear shuttle protein, NSP)和BC1编码的运动蛋白(movement protein, MP)。因此,制备NSP的多克隆抗体对于研究病毒在寄主内的侵染和运动机制具有重要意义。本文s经克隆RaMoV的BV1基因、利用pET-28a(+)构建表达载体,转化原核表达细胞Escherichia coli BL21(DE3),IPTG诱导表达NSP,将此蛋白割胶研磨后,免疫新西兰白兔,制备了抗NSP的多克隆抗体。ELISA检测抗体的滴度为1:32000,Western blotting结果显示该抗体能与NSP发生特异性结合反应。在本氏烟中,通过PVX异源载体和瞬时表达技术,进行了RaMoV编码蛋白的致病性研究。结果表明,A组分AV2编码的蛋白和B组分BV1编码的NSP为致病因子,接种PVX-AV2和PVX-BV1植株的新生叶分别在第10天和第13天出现坏死症状,逐渐枯萎死掉,接种PVX-AC4的植株在第8天出现明显的花叶表型,而PVX-AC2和PVX-BC1及其所有基因的相应突变体在系统叶上只出现了轻微的花叶和曲叶症状,与单独接种PVX表现的症状相似。取系统叶片提取RNA,以PVX的CP基因为探针, Northern blotting结果显示,接种PVX-AV2的植株体内PVX的复制量较对照植株多,而表达NSP植株的PVX积累量没有明显变化。结果说明AV2和BV1编码的蛋白在RaMoV侵染寄主的过程中发挥重要的作用,可能是病毒能够顺利“逃脱”寄主防卫系统的关键因子,从而使病毒在寄主体内顺利进行系统侵染。激光共聚焦显微镜观察RaMoV DNA-B组分编码的蛋白的亚细胞定位情况,发现BV1编码的NSP定位在细胞核中,而BC1编码的MP主要定位在细胞质中。利用酵母双杂交技术研究了RaMoV的NSP和中国大青黄色花叶病毒(Clerodendrum yellow mosaic China virus,ClYMCNV)的NSP与寄主本氏烟1 , 5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶小亚基( Ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase/oxylase small subunit, RBCS1)的互作关系。提取本氏烟的总RNA,进行RT-PCR,克隆RBCS1基因,将RBCS1与BV1分别构建到酵母表达载体pGAD-T7和pGBK-T7获得重组载体pGAD-RBCS1和pGBK-BV1,将质粒pGAD-RBCS1和pGBK-BV1共转化到酵母菌AH109,通过不同的营养缺陷型培养基进行筛选,研究两者间的互作关系。结果表明RaMoV和ClYMCNV的NSP都可以与本氏烟RBCS1互作。双分子荧光互补实验表明,NSP与本氏烟RBCS1的互作主要发生在烟草叶片细胞的细胞核里。 Real time PCR检测表明,RaMoV侵染本氏烟能够使RBCS1的表达量下调55%左右。借助于pTRV诱导的沉默技术,将RBCS1基因沉默后接种RaMoV的侵染性克隆。提取基因组DNA,Southern blotting显示沉默RBCS1后,RaMoV的复制量明显增加。经DNA电泳,可在2700bp处看到一清晰条带,经测序分析后确定为RaMoV的病毒基因组,而对照的植物中没有出现这一大小的条带,说明RBCS1在病毒侵染过程中发挥重要的作用。为研究沉默RBCS1后,其它病毒侵染本氏烟的情况,接种PVX-GFP 12天后,手提式紫外灯照射显示,接种叶和系统叶的GFP表达量要比对照植株中明显增多,杂交结果表明,沉默RBCS1植株的PVX复制量比对照植株中PVX复制量增多。这些结果说明,RBCS1可能在病毒的防卫反应系统中发挥重要作用。

关键词：苎麻花叶病毒核穿梭蛋白抗体制备致病因子病毒与寄主互作酵母双杂交 RBCS1蛋白

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真菌病毒BfHV-2/10HN454 EGFRS-like蛋白与寄主互作的研究

真菌病毒BfHV-2/10HN454 EGFRS-like蛋白与寄主互作的研究

引用

中国植物病理学会第十届全国会员代表大会暨2014年学术年会及第四届中美植物病理学学术研讨会

作者：刘四谢甲涛程家森姜道宏付艳苹湖北省作物病害监测和安全控制重点实验室华中农业大学/农业微生物学国家重点实验室

真菌病毒是指侵染真菌并在寄主体内复制的病毒。弱毒病毒感染栗疫病菌导致寄主致病力减弱,并成功控制了板栗疫病菌对美洲栗树的危害,引起了人们对植物病原真菌病毒的广泛关注。在真菌病毒与寄主长期共存的过程中,病毒与寄主相互作用协... 详细信息

真菌病毒是指侵染真菌并在寄主体内复制的病毒。弱毒病毒感染栗疫病菌导致寄主致病力减弱,并成功控制了板栗疫病菌对美洲栗树的危害,引起了人们对植物病原真菌病毒的广泛关注。在真菌病毒与寄主长期共存的过程中,病毒与寄主相互作用协同进化。目前关于真菌病毒与寄主互作的研究主要集中在栗疫病菌弱毒病毒与栗疫病菌之间的互作,其他真菌病毒与寄主（病毒与核盘菌等）的互作体系也已陆续建立。前期研究过程中克隆得到真菌病毒BfHV-2/10HN454,该病毒基因组由6 251个核苷酸（不含Poly A结构）组成,含有两个推定的开放性阅读框（ORF）。ORF1编码具有RdRp结构域特性的蛋白,基于该结构域分析,病毒BfHV-2/10HN454与Hypoviridae科的病毒亲缘关系较近;ORF2推定编码的蛋白与人及动物的epidermal growth factor receptor（EGFR）pathway substrate（EGFRS）蛋白具有一定的相似性。其中与西印度海牛（Trichechus manatus latirostris）的EGFRS蛋白（XP04384482.1）相似性最高为25%,E值为0.053。保守结构域搜索发现该蛋白存在Chromosome segregation ATPases（Cell division and chromosome partitioning）保守结构域,E值为1.17e-07,并将该蛋白命名为EGFRS-1ike蛋白。EGFRS蛋白在生物体内与突触囊泡的回收和EGFR受体的内吞及其在质膜上的定位相关,但在病毒基因组中尚未见报道。该蛋白的类似基因为何会出现在真菌病毒BfHV-2/10HN454基因组中,其在寄主体内是否会表达并对寄主产生影响?为了解答该问题,我们通过农杆菌介导转化（ATMT）技术将该基因分别导入核盘菌和灰葡萄孢菌中,同时获得了生长缓慢、畸形扇变、菌丝尖端变细且分支增多、产孢量降低及致病力减弱的转化子;进一步通过DAPI染色及电镜观察细胞核,发现转化子的细胞核形态异常、核仁较少见且发生聚集现象。这些生物学表型与原始携带病毒BfHV-2/10HN454的菌株10HN454表型相似。说明该蛋白可能在核盘菌和灰葡萄孢菌中表达并且具有一定的功能,对寄主产生了一定的影响,相关分子机理研究正在进行之中。

关键词：真菌病毒 EGFRS-like蛋白病毒与寄主互作

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真菌病毒BfHV-2/10HN454 EGFRS-like蛋白与寄主互作的研究

真菌病毒BfHV-2/10HN454 EGFRS-like蛋白与寄主互作的研究

引用

中国植物病理学会2014年学术年会

作者：刘四谢甲涛程家森姜道宏付艳苹湖北省作物病害监测和安全控制重点实验室武汉430070 华中农业大学/农业微生物学国家重点实验室武汉430070 湖北省作物病害监测和安全控制重点实验室武汉430070

真菌病毒是指侵染真菌并在寄主体内复制的病毒.弱毒病毒感染栗疫病菌导致寄主致病力减弱,并成功控制了板栗疫病菌对美洲栗树的危害,引起了人们对植物病原真菌病毒的广泛关注.在真菌病毒与寄主长期共存的过程中,病毒与寄主相互作用协同进... 详细信息

真菌病毒是指侵染真菌并在寄主体内复制的病毒.弱毒病毒感染栗疫病菌导致寄主致病力减弱,并成功控制了板栗疫病菌对美洲栗树的危害,引起了人们对植物病原真菌病毒的广泛关注.在真菌病毒与寄主长期共存的过程中,病毒与寄主相互作用协同进化.目前关于真菌病毒与寄主互作的研究主要集中在栗疫病菌弱毒病毒与栗疫病菌之间的互作,其他真菌病毒与寄主(病毒与核盘菌等)的互作体系也已陆续建立.前期研究过程中克隆得到真菌病毒BfHV-2/10HN454,该病毒基因组由6 251个核苷酸(不含Poly A结构)组成,含有两个推定的开放性阅读框(ORF).ORF1编码具有RdRp结构域特性的蛋白,基于该结构域分析,病毒BfHV-2/10HN454与Hypoviridae科的病毒亲缘关系较近;ORF2推定编码的蛋白与人及动物的epidermal growth factor receptor (EGFR) pathway substrate (EGFRS)蛋白具有一定的相似性.

关键词：真菌病毒 EGFRS-like蛋白病毒与寄主互作

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核盘菌中新病毒的发掘及真菌病毒与核盘菌互作机制的研究

核盘菌中新病毒的发掘及真菌病毒与核盘菌互作机制的研究

引用

作者：叶婷华中农业大学

学位级别：博士

作为一种重要的植物病原性真菌,核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)能够引发油菜、向日葵、大豆等多种经济作物上的菌核病,严重危害农作物的产量和品质。真菌病毒是以真菌为宿主进行增殖的病毒;部分真菌病毒具有引发寄主致病力衰退的能... 详细信息

作为一种重要的植物病原性真菌,核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)能够引发油菜、向日葵、大豆等多种经济作物上的菌核病,严重危害农作物的产量和品质。真菌病毒是以真菌为宿主进行增殖的病毒;部分真菌病毒具有引发寄主致病力衰退的能力而被称为弱毒相关病毒,是自然界中珍贵的生防资源,具有研究价值和应用潜能。挖掘核盘菌中真菌病毒资源和研究不同核酸类型病毒与核盘菌互相作用,有助于提升对病毒多样性、侵染特性及病毒与寄主互作机制的认识,同时也可为菌核病的防治提供生防资源和理论指导。本论文通过宏病毒组及转录组测序技术,对向日葵病田中核盘菌病毒的组成进行分析,同时在转录组层面对不同核酸类型的病毒与核盘菌互作过程进行了研究,获得主要研究结果如下:从124株来自美国华盛顿州地区向日葵菌核病病田中核盘菌菌株中鉴定到37种真菌病毒,包含9种新病毒。根据基因组分类,这些病毒中+ss RNA病毒种类最为丰富,占比64.9%;其次是ds RNA病毒,占比29.7%;而-ss RNA病毒种类最少,占比仅5.4%。在+ss RNA病毒中,线粒体病毒和欧尔密病毒种类最多,占比高达75%,为当地自然条件下向日葵病田核盘菌中的生态优势病毒;ds RNA病毒中双分体病毒占比73%,包含6个新病毒,且部分新病毒片段与植物病毒序列一致性较高。这些结果表明了美国华盛顿地区核盘菌蕴含较丰富的真菌病毒资源,而其中新病毒的发现为真菌病毒的分类、进化研究及其应用研究提供新材料。在核盘菌中首次发现了与弱毒特性相关的甲型双分体病毒。核盘菌甲型双分体病毒1(Sclerotinia sclerotiorum alphapartitivirus 1,Ss APV1)基因组包含两条大小相似的ds RNA,ds RNA1长1983 bp,编码Rd Rp;ds RNA2长1803 bp,编码CP;两条片段的5’UTR非常保守,3’末端具有ploy(A)结构;在复制过程中ds RNA1产生缺陷型片段ds RNA1-S,长1757 bp,与ds RNA1相比该片段在编码Rd Rp的核心部位存在一段226 bp的缺失区域;系统发育分析表明Ss APV1的Rd Rp和CP分别与甲型线性病毒属成员编码的Rd Rp和CP聚为一支,表明Ss APV1为甲型双分体病毒属的新成员;甲型双分体病毒属成员的CP与植物中的ILR2蛋白具有高度的同源性;在双分体病毒科病毒的CP蛋白和各种植物中的ILR2蛋白的ML树中,ILR2蛋白仅与甲型双分体病毒的CP蛋白聚在一簇,且交错排列,说明植物与甲型双分体病毒之间广泛存在基因水平转移事件;此外,Ss APV1的病毒粒子为直径约26 nm的大小均一的球形粒子,且Ss APV1病毒粒子转染的Ep-1PNA367菌株致病力下降,说明Ss APV1是与弱毒特性直接相关的病毒,对核盘菌生物防治具有应用潜能。在弱毒菌株AHS31中分离出新病毒核盘菌甲型线性病毒1(Sclerotinia sclerotiorum alphaflexivirus 1,Ss AFV1)的毒株Ss AFV1/AHS31。寄主菌株AHS31中共含有5种病毒,菌落形态与Ep-1PNA367相似,但生长速率和致病能力都显著弱于对照菌株,具有弱毒表型。Ss AFV1/AHS31基因组是一条长为6939 bp的正单链RNA,含有四个ORF含有四个ORF,其中ORF1和ORF3分别编码复制酶和CP,而ORF2和ORF4编码的蛋白功能尚不明确;Ss AFV1/AHS31的病毒粒子形态为纤长的丝状粒子,长480-510 nm,直径为9-10 nm;系统发育分析结果表明Ss AFV1/AHS31的复制酶和衣壳蛋白都分别与Allexivirus病毒属成员编码的复制酶和衣壳蛋白聚为一簇,并形成独立的分支,说明Ss AFV1/AHS31是甲型线性病毒科的新成员,且不属于任何已知属,建议在该科下成立一个新属Sclerotexvirus来容纳此病毒。在同一遗传背景下,分析了12种不同类型的真菌病毒对寄主基因转录水平的影响。对病毒侵染的核盘菌Ep-1PNA367的转录组进行分析,筛选出了受不同类型病毒影响而差异表达的基因。其中包含共同显著上调表达的基因24个及下调表达的基因2个:上调表达的24个基因中,3个基因的结构域与信号传导有关,2个基因保守结构域与跨膜运输相关;下调表达的2个基因分别具有甲硫氨酸合成酶和脂酰基转移酶结构域,分别与甲硫氨酸循环和磷脂代谢相关。这些基因均是核盘菌与不同核酸类型病毒的相互作用中的关键基因。此外,寄主中受7个+ss RNA病毒影响特异性上调的基因有25个,其中一半的基因与跨膜转运相关,具有水解酶、氧化还原酶及蛋白激酶结构域的基因各2个;特异性下调的3个基因中有2个基因与甲硫氨酸循环相关,1个基因具有甘

关键词：核盘菌真菌病毒弱毒病毒双分体病毒线性病毒生物防治病毒与寄主互作

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