检索结果-内蒙古大学图书馆

作物学报 2014年第11期40卷 1905-1913页

作者：陈坤梅李宏伟林凡云陈耀锋李滨郑琪李振声西北农林科技大学农学院陕西杨凌712100 中国科学院遗传与发育生物学研究所植物细胞与染色体工程国家重点实验室北京100101

为了鉴定可能的小麦抗光氧化基因,利用大麦条斑病毒(barley stripe mosaic virus,BSMV)介导的基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)系统,对6个小偃54响应强光的基因进行了沉默表达研究。以BSMV:GFP植株为对照,分析了这些基因的... 详细信息

为了鉴定可能的小麦抗光氧化基因,利用大麦条斑病毒(barley stripe mosaic virus,BSMV)介导的基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)系统,对6个小偃54响应强光的基因进行了沉默表达研究。以BSMV:GFP植株为对照,分析了这些基因的减量表达植株在低温强光、DCMU、MV、H2O2等处理下的PSII最大光化学效率(F v/F m)和光合性能指数(P.I.)、MDA含量及整株生物量变化。结果显示,Ta23008和Ta92165均参与小麦对低温强光、DCMU、MV和H2O2等胁迫的响应过程;Ta106078参与小麦对DCMU、MV和H2O2等胁迫的响应过程;Ta27787参与小麦对低温强光、DCMU和H2O2等胁迫的响应过程;Ta24695参与小麦对低温强光和H2O2胁迫的响应过程;而Ta119251仅参与小麦对DCMU的响应过程。此外,Ta23008、Ta92165、Ta106078、Ta119251四个基因被抑制表达后,其转化株系的生物量比对照显著降低,推测其可能参与调控小麦生物量的积累。

关键词：小麦大麦条斑病毒(BSMV) 病毒介导的基因沉默基因功能光氧化

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基于黄瓜花叶病毒的基因沉默载体优化

基于黄瓜花叶病毒的基因沉默载体优化

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作者：施伟浙江理工大学

学位级别：硕士

黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus, CMV)是雀麦花叶病毒科(Bromoviridae)黄瓜花叶病毒属(Cucumovirus)的典型成员,是世界上寄主范围最广的病毒。病毒诱导的基因沉默(Virus Induced Gene Silencing, VIGS)是一快速高效的研究植物基因... 详细信息

黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus, CMV)是雀麦花叶病毒科(Bromoviridae)黄瓜花叶病毒属(Cucumovirus)的典型成员,是世界上寄主范围最广的病毒。病毒诱导的基因沉默(Virus Induced Gene Silencing, VIGS)是一快速高效的研究植物基因功能工具。本研究在前人的基础上,基于CMV-Tsh株系的RNA2构建基因沉默载体,选择不同的指示基因进行沉默效果分析,并成功构建CMV的农杆菌侵染性克隆。主要内容如下：一、CMV-Fny假重组弱病毒组合的筛选以CMV-Fny与CMV亚组Ⅰ中不同株系的NA2(Cb7RNA2、CNa RNA2和Tsh RNA2)构建RNA2不同的假重组病毒,接种本氏烟。接种7天后,F1F2F3、F1C2F3、F1CNa2F3在寄主上均引起叶片皱缩、蜷曲的症状,而F1Tsh2F3在本氏烟上则引起轻花叶的症状反应,因此以CMV-Tsh RNA2作为构建VIGS载体母本。二、基于CMV-Tsh RNA2的2b构建基因沉默载体采用PCR以及双酶切等手段对CMV-Tsh RNA2进行了三种改造,构建Tsh的2b基因缺失95nt、完全缺失的Tsh RNA2,及在2b的终止密码子后,RNA2的UTR前引入Mlu Ⅰ和SnaBⅠ酶切等酶切位点,前两个载体分别命名为Tsh R23/42b、Tsh R2Δ2b,而Tsh RNA2的终止密码子后,RNA2的UTR前直接引入酶切位点构建而来的载体则命名为Tsh R22b。 pTsh R23/42b、pTsh R2Δ2b以及pTsh R22b体外转录产物分别与CMV-Fny RNA1和FnyRNA3混合接种本氏烟,证实假重组病毒具有侵染活性后；在上述的克隆位点分别插入354pb大小的本氏烟PDS片段,体外转录接种后比较本氏烟的光漂白程度,最终确定pTshR23/42b为本研究的基因沉默载体作为进一步分析对象。三、不同指示基因沉默效果的研究 pTsh R23/42b载体中插入PDS或Su基因部分片段以及绿色荧光蛋白基因(GFP)部分片段,分析寄主的光漂白、叶表黄化和转GFP本氏烟(16c)变红程度,并采用semi RT-PCR分析靶标基因在植株中的表达量。结果表明：F1Tsh R23/42b-NbPDS354F3接种本氏烟后,植株叶表呈现明显的光漂白,F1Tsh R23/42b-Su351F3诱导本氏烟产生黄化现象,相应的植株中PDS和Su的表达量均下调；在UV lamp照射下,接种F1Tsh R23/42b-GFP217F3的16C植株则呈现发红,而接种F1Tsh R23/42bF3植株呈绿色,semi RT-PCR检测到植株中的GFP表达量下调。采用汁液摩擦接种的方法,分析F1Tsh R23/42b-NbPDS354F3在本氏烟的稳定性,结果表明,转接15次,F1Tsh R23/42b-NbPDS354F3均能稳定存在于寄主中,并使得本氏烟产生光漂白现象。四、以启动子序列和大豆PDS为插入片段的沉默效应以及下调Beclin基因后转NN基因烟草对TMV的症状反应在pTsh R23/42b载体中插入本氏烟PDS或GFP的启动子部分片段、大豆PDS部分片段(分别命名为proPDS、35s、GmPDS)以及Beclin基因部分片段,分析本氏烟的光漂白、16C变红程度、大豆的光漂白和NN基因烟草对TMV的症状反应。结果表明：本氏烟接种F1Tsh R23/42b-proPDS223F3后出现明显光漂白；16C接种F1Tsh R23/42b-35s120F3后,在UVlamp照射下呈现发红；在大豆的PDS被F1Tsh R23/42bGmPDS277F3被下调表达后,植株呈现光漂白表型。转NN基因烟草(本氏烟和三生烟)接种F1Tsh R23/42b-Beclin346F3后,经过7天再接种TMV,转NN基因烟草出现系统性坏死,而对照病毒F1Tsh R23/42bF3接种的植株,TMV则引起枯斑症状。五、CMV农杆菌侵染性克隆的构建以及应用 PCR扩增TshR23/42b、Tsh R23/42b-NbPDS354、Tsh R23/42b-Su351、Fny RNA1、RNA2、RNA3全长序列,目的片段回收后将其克隆至瞬时表达载体pCB301中,阳性克隆转入农杆菌GV3101。通过农杆菌浸润接种本氏烟,分析农杆菌CMV-Fny,F1Tsh R23/42b-NbPDS353F3和F1Tsh R23/42b-PDS353F3在本氏烟上引起的光漂白和叶表黄化现象。结果显示：农杆菌CMV-Fny引起的症状反应跟体外转录接种CMV-Fny相一致,而浸润接种F1Tsh R2

关键词：病毒介导的基因沉默黄瓜花叶病毒基因组RNA2 农杆菌侵染性克隆

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SlSnRK1.2调控番茄抗灰霉病功能分析

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中国农业科学 2024年第21期57卷 4238-4247页

作者：李杰梁郅林孙燕檀根甲怀宝玉安徽农业大学植物保护学院/作物有害生物综合治理安徽省重点实验室

【背景】由灰葡萄孢（Botrytis cinerea）侵染番茄（Solanum lycopersicum）引起的灰霉病严重威胁番茄生产。植物蔗糖非发酵-1-相关蛋白激酶-1(sucrose non-fermenting-1-related protein kinase 1,SnRK1)参与多种植物对生物胁迫和非生物胁迫响应的调控，然而，番茄SnRK1是否参与对灰霉病抗性未见报道。【目的】以灰葡萄孢侵染番茄过程中上调表达的SlSnRK1.2为研究对象，克隆并分析其调控灰霉病抗性功能，为番茄灰霉病防治提供理论依据和基因资源。【方法】采用实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR,qRT-PCR)技术，分析SlSnRK1.2在灰葡萄孢侵染番茄过程中以及在番茄不同组织中的表达模式；利用农杆菌介导的瞬时表达技术分析SlSnRK1.2的亚细胞定位情况；借助烟草脆裂病毒（tobacco rattle virus,TRV）介导的基因沉默技术（virus induced gene silencing,VIGS）构建SlSnRK1.2沉默植株，初步分析SlSnRK1.2在番茄与灰葡萄孢互作过程中的作用；利用农杆菌介导的番茄遗传转化体系创制SlSnRK1.2过表达植株，进一步明确SlSnRK1.2在调控番茄对灰霉病抗性中的作用；利用TRV-VIGS技术构建SlSnRK1.2同源基因NbSnRK1.2的沉默植株，分析NbSnRK1.2在烟草与灰葡萄孢互作中的作用。【结果】以Micro-Tom为材料，利用qRT-PCR技术明确SlSnRK1.2的转录表达显著受到灰葡萄孢侵染诱导；亚细胞定位结果显示SlSnRK1.2定位于细胞质和细胞核；qRT-PCR分析表明，SlSnRK1.2在番茄的根、茎、幼嫩叶片、成熟叶片、花蕾和花中均有表达，在茎部的表达量最高；瞬时沉默SlSnRK1.2减弱番茄对灰霉病的抗性，过表达SlSnRK1.2增强番茄对灰霉病的抗性；在此基础上，瞬时沉默SlSnRK1.2的同源基因NbSnRK1.2减弱烟草对灰霉病的抗性。【结论】SlSnRK1.2正调控番茄对灰霉病的抗性，可作为番茄抗灰霉病分子育种的基因资源。

关键词：番茄灰霉病灰葡萄孢 SlSnRK1.2 抗病性病毒介导的基因沉默

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TRV介导的E3泛素连接酶基因NbE3R14沉默对烟草基础免疫及南方根结线虫寄生的影响

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南京农业大学学报 2020年第1期43卷 65-71页

作者：刘琳硕贺祥李红梅元青王暄南京农业大学植物保护学院/农作物生物灾害综合治理教育部重点实验室

[目的]本文旨在研究E3泛素连接酶基因的沉默对植物基础免疫及线虫寄生的影响,为揭示植物寄生线虫侵染寄主的分子机制提供理论依据。[方法]利用烟草脆裂病毒(TRV)介导的基因沉默技术(VIGS)沉默本氏烟E3泛素连接酶基因NbE 3R14,用flg22处... 详细信息

[目的]本文旨在研究E3泛素连接酶基因的沉默对植物基础免疫及线虫寄生的影响,为揭示植物寄生线虫侵染寄主的分子机制提供理论依据。[方法]利用烟草脆裂病毒(TRV)介导的基因沉默技术(VIGS)沉默本氏烟E3泛素连接酶基因NbE 3R14,用flg22处理基因沉默烟草叶片,RT-qPCR检测PTI(病原相关分子模式触发免疫,PAMPs-triggered immunity)相关基因的表达水平;接种辣椒疫霉于基因沉默烟草叶片,观察叶片病斑症状;采用室内人工接种法测定靶基因的沉默对南方根结线虫寄生的影响。[结果]RT-qPCR检测显示:农杆菌转化的烟草植株中NbE 3R14基因已被成功沉默,flg22处理基因沉默烟草叶片激发的PTI相关基因GRAS 2、WRKY7及WRKY8表达量分别下降41.3%、63.9%及61.8%,与野生型对照(WT)相比均有显著性差异(P<0.05);接种辣椒疫霉36 h后,TRV∷NbE 3R14处理烟草叶片的病斑比WT增大28.5%;南方根结线虫在TRV∷NbE 3R14处理植株上产生的根结数、雌虫数及卵块数与WT相比分别显著增加22.1%、27.4%和17.2%(P<0.05),单卵块卵量则没有差异;而在TRV∷GFP处理植株上产生的根结数、雌虫数、卵块数以及单卵块卵量与WT均无明显差异。[结论]沉默NbE 3R14基因能干扰植物基础免疫,从而导致烟草对辣椒疫霉及南方根结线虫的侵染更为感病。

关键词： E3泛素连接酶病毒介导的基因沉默 RT-qPCR 辣椒疫霉南方根结线虫

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基于VIGS的柑橘黄化脉明病毒防控技术研究

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中国农业科学 2024年第22期57卷 4473-4482页

作者：李楚欣宋晨虎周金环李佳欣王新亮田旭斌宋震西南大学柑桔研究所/国家柑桔工程技术研究中心

【目的】柑橘黄化脉明病毒（citrus yellow vein clearing virus,CYVCV）是一种严重危害柑橘产业的新发病毒，目前尚无有效的治疗药剂，主要通过使用无病毒苗木和严格防控传播虫媒进行防控。本研究旨在探索基于病毒介导的基因沉默（viru... 详细信息

【目的】柑橘黄化脉明病毒（citrus yellow vein clearing virus,CYVCV）是一种严重危害柑橘产业的新发病毒，目前尚无有效的治疗药剂，主要通过使用无病毒苗木和严格防控传播虫媒进行防控。本研究旨在探索基于病毒介导的基因沉默（virus-induced gene silencing,VIGS）的CYVCV防控技术，以期获得抗病毒“疫苗”，为柑橘病毒病防控提供新思路。【方法】基于实验室前期构建的VIGS载体pCLBV201，针对CYVCV基因组ORF1(open reading frame 1)、ORF6、CP(coat protein)和TGB(triple gene block)的保守区域设计、构建一系列重组载体，通过农杆菌介导的真空浸润接种尤力克柠檬并进行RT-PCR检测。获得pCLBV201-ORF1、pCLBV201-ORF6、pCLBV201-CP、pCLBV201-TGB阳性植株后，通过农杆菌介导的注射法接种CYVCV侵染性克隆，并以pCLBV201空载接种植株为对照，开展RT-qPCR、Western blot检测、症状观察和病情指数统计，从而明确不同VIGS重组载体对CYVCV的防控效果。【结果】构建了系列pCLBV201重组载体，接种后的RT-PCR检测结果表明，分别获得p CLBV201-ORF1、pCLBV201-ORF6、pCLBV201-CP、pCLBV201-TGB阳性植株多株；注射接种CYVCV侵染性克隆，7、14、28、70和150 dpi(days post infection)的RT-qPCR检测结果显示，pCLBV201-CP和pCLBV201-TGB处理组的CYVCV相对表达量均较对照显著降低；70和150 dpi Western blot检测结果表明，pCLBV201-CP和pCLBV201-TGB处理组的CP蛋白表达量显著下降；症状观察显示，对照组表现为严重的脉明、叶片扭曲等CYVCV侵染典型症状，pCLBV201-CP处理组植株的症状轻微，pCLBV201-TGB处理组植株不表现明显症状；70和150 dpi病情指数统计显示，pCLBV201-CP和pCLBV201-TGB的病情指数最低，分别为17.6、41.2和15.6、29.1，而对照组为52.1、80.0，差异明显。【结论】研发了基于VIGS的CYVCV防控技术，明确了pCLBV201-CP、pCLBV201-TGB能够显著降低病毒滴度、减轻病毒引起症状，有用作CYVCV防控“疫苗”的潜力。

关键词：柑橘黄化脉明病毒 pCLBV201 病毒介导的基因沉默 RNA干扰

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换锦花LsMYB7基因克隆与功能研究

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浙江农林大学学报 2024年第3期41卷 586-596页

作者：郑正权赵梦婧高燕会浙江农林大学林业与生物技术学院/亚热带森林培育国家重点实验室浙江杭州311300

【目的】研究转录因子LsMYB7基因对换锦花Lycoris sprengeri花色苷积累的调控作用。【方法】采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)方法从换锦花花瓣中克隆获得花色苷形成相关R2R3-MYB转录因子LsMYB7基因,并进行生物信息学分析,再通过病毒介导... 详细信息

【目的】研究转录因子LsMYB7基因对换锦花Lycoris sprengeri花色苷积累的调控作用。【方法】采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)方法从换锦花花瓣中克隆获得花色苷形成相关R2R3-MYB转录因子LsMYB7基因,并进行生物信息学分析,再通过病毒介导的基因沉默(VIGS)技术研究LsMYB7基因对花色苷积累的调控作用。【结果】克隆到1条长951 bp的LsMYB7基因cDNA序列,开放阅读框(ORF)为825 bp,编码274个氨基酸,LsMYB7蛋白含有2个R2和R3结构域,属R2R3-MYB转录因子家族;系统进化分析表明LsMYB7与拟南芥Arabidopsis thaliana S22亚族基因聚为一类;LsMYB7亚细胞定位于细胞核,在不同花发育阶段和不同花色无性系中,LsMYB7基因表达与花色苷合成相关基因的表达趋势一致,主要在败花期和花色苷含量较高的H1无性系中表达;LsMYB7基因沉默后,换锦花花瓣明显变短,颜色变深,且LsCHS、LsF3'H、LsANS、LsUFGT1和LsUFGT2等花色苷形成相关基因的表达显著下调。【结论】LsMYB7属R2R3-MYB转录因子家族S22亚族,通过正向调控LsCHS、LsF3'H、LsANS、LsUFGT1和LsUFGT2花色苷生物合成相关基因的表达促进花色苷积累。

关键词：换锦花 R2R3-MYB转录因子花色苷积累病毒介导的基因沉默调控作用

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小麦抗病基因类似序列BRG1的分离与功能分析

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作物学报 2011年第6期37卷 998-1004页

作者：李宁黄茜刘燕赵丹刘艳黄占景张增艳中国农业科学院作物科学研究所/农作物基因资源与基因改良国家重大科学工程/农业部作物遗传育种重点开放实验室北京100081 河北师范大学生命科学院河北石家庄050016 中国农业科学院植物保护研究所北京100193

利用cDNA-AFLP技术筛选到1个在抗黄矮病的小麦-中间偃麦草易位系YW642中特异表达的小麦抗病基因类似序列(BYDV resistance-related gene1,BRG1)的基因片段。利用cDNA末端快速扩增技术(RACE)和RT-PCR技术,从YW642中分离出BRG1基因全长cDN... 详细信息

利用cDNA-AFLP技术筛选到1个在抗黄矮病的小麦-中间偃麦草易位系YW642中特异表达的小麦抗病基因类似序列(BYDV resistance-related gene1,BRG1)的基因片段。利用cDNA末端快速扩增技术(RACE)和RT-PCR技术,从YW642中分离出BRG1基因全长cDNA序列,获得了一个通读的抗病同源基因cDNA序列,编码由645个氨基酸组成的蛋白质,包含1个NB-ARC保守结构域和3个LRR结构域,该蛋白属于nucleotide-site binding,leucine-rich repeats(NBS-LRR)家族。荧光定量或半定量RT-PCR表达分析表明,BRG1在抗病小麦易位系YW642叶片中优势表达,受BYDV的诱导,BYDV接种后48h表达量最高,BRG1在感病小麦亲本中8601中表达量始终较低,随BYDV接种时间延长呈轻微的下调趋势;而且外源激素水杨酸(SA)与茉莉酸(JA)处理可上调该基因在YW642中的表达。利用病毒介导的基因沉默技术分析了BRG1基因的功能,结果表明该基因沉默的抗病小麦易位系YW642中BYDV相对含量增加,但未造成抗病性表型显著改变,说明该基因参与抗黄矮病反应,但不是小麦抗黄矮病重要基因。

关键词：小麦-中间偃麦草易位系小麦黄矮病抗性 cDNA-AFLP 抗病基因类似序列病毒介导的基因沉默

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南方根结线虫乳酸脱氢酶基因克隆及其沉默效应分析

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中国农业科学 2013年第16期46卷 3384-3391页

作者：梅眉黄永红茆振川刘志敏谢丙炎湖南农业大学园艺园林学院中国农业科学院蔬菜花卉研究所广东省农业科学院果树研究所/农业部南亚热带果树生物学与遗传资源利用重点试验室湖南第一师范学院

【目的】对南方根结线虫乳酸脱氢酶基因(mildh)进行克隆分析,并探索mildh沉默对南方根结线虫(Meloidogyne incognita)病害的抑制作用。【方法】在前期研究中,利用生物信息学方法在线虫全基因组中预测了一些线虫RNA干扰(RNAi)表型基因。... 详细信息

【目的】对南方根结线虫乳酸脱氢酶基因(mildh)进行克隆分析,并探索mildh沉默对南方根结线虫(Meloidogyne incognita)病害的抑制作用。【方法】在前期研究中,利用生物信息学方法在线虫全基因组中预测了一些线虫RNA干扰(RNAi)表型基因。本研究以预测的线虫ldh设计特异引物克隆南方根结线虫中mildh。对克隆到的mildh序列进行了特征分析后,利用病毒诱导的基因沉默(VIGS)技术,将其导入番茄植株,并接种南方根结线虫,研究mildh基因沉默对根结线虫根结数量影响。【结果】克隆到的mildh包含1个完整的编码框序列,编码315个氨基酸。该基因与预测到的mildh核苷酸序列一致性高达94.9%,所编码的氨基酸一致性高达95.5%。构建烟草脆裂病毒(Tobacco rattle virus,TRV)介导的沉默载体pTV-mildhi,并用该沉默载体对番茄植株进行处理后,接种南方根结线虫。60 d后统计发现,pTV-mildhi处理的番茄植株上根结数分别比空载体对照减少48.6%,比清水对照降低48.4%。【结论】mildh基因沉默对南方根结线虫具有显著的抑制作用,也说明mildh可能参与根结线虫的致病性,该研究对线虫的病理学研究及线虫病害防控研究提供了新的理论基础。

关键词：根结线虫乳酸脱氢酶病毒介导的基因沉默 RNA干扰

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烟草谷氧还蛋白NbGRX1的亚细胞定位及抗旱功能研究

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南京农业大学学报 2017年第1期40卷 34-39页

作者：郭玉双余婧蒲伟邹颉付强余世洲林世锋张孝廉赵杰宏夏范讲烟草行业分子遗传重点实验室贵州省烟草科学研究院贵州贵阳550081 贵州烟叶复烤有限公司铜仁复烤厂贵州铜仁554300 中国烟草总公司贵州省公司贵州贵阳550004

[目的]本文旨在分析烟草NbGRX1基因的亚细胞定位及抗旱功能。[方法]在前期研究中,我们从烟草中克隆了1个谷氧还蛋白基因NbGRX1,并对其表达特性进行了研究。在此基础上,对NbGRX1蛋白的亚细胞定位及抗旱功能进行研究。利用病毒介导的基因... 详细信息

[目的]本文旨在分析烟草NbGRX1基因的亚细胞定位及抗旱功能。[方法]在前期研究中,我们从烟草中克隆了1个谷氧还蛋白基因NbGRX1,并对其表达特性进行了研究。在此基础上,对NbGRX1蛋白的亚细胞定位及抗旱功能进行研究。利用病毒介导的基因沉默,在烟草中沉默了该基因,并调查NbGRX1基因沉默后烟草对干旱的响应。同时采用农杆菌介导法,将NbGRX1基因转化至拟南芥中,筛选单拷贝插入的纯合转基因拟南芥进行后续研究,对转基因拟南芥及对照进行干旱处理,并分析其表型。[结果]亚细胞定位研究表明,空载体中的GFP(绿色荧光蛋白)定位在细胞质和细胞核中,GFP:NbGRX1的融合蛋白均匀分布在细胞质和细胞核中,因此可以推测NbGRX1蛋白能定位在植物的细胞核和细胞质中。病毒介导的基因沉默研究表明,NbGRX1基因沉默烟草与对照相比对干旱胁迫更为敏感,更容易出现黄化和萎蔫的症状,叶片相对含水量下降;NbGRX1基因超量表达的株系干旱能力明显高于对照。[结论]烟草NbGRX1基因能够提高植物的抗旱性。

关键词：谷氧还蛋白基因干旱病毒介导的基因沉默超量表达

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藜麦CqAMSlike基因的克隆与功能分析

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西北农业学报 2024年第4期33卷 683-694页

作者：张玉敏林春刘正杰林彤董玉梅毛自朝云南农业大学农学与生物技术学院昆明650201 云南农业大学特色小宗作物研究中心昆明650201

为探究藜麦(Chenopodium quinoa,Willd.)花粉发育的分子机制,基于基因组和转录组数据,经同源比对及RT-qPCR表达分析等,预测藜麦中AMS候选基因并克隆其编码序列,随后经病毒介导的基因沉默(VIGS)及双分子荧光互补(BiFC)法进行候选基因的... 详细信息

为探究藜麦(Chenopodium quinoa,Willd.)花粉发育的分子机制,基于基因组和转录组数据,经同源比对及RT-qPCR表达分析等,预测藜麦中AMS候选基因并克隆其编码序列,随后经病毒介导的基因沉默(VIGS)及双分子荧光互补(BiFC)法进行候选基因的功能验证。结果显示,藜麦中有CqAMSlike1和CqAMSlike2两个基因,其中CqAMSlike1的CDS长1929 bp,而CqAMSlike2的CDS长1920 bp,两基因均在不同发育时期的圆锥花序中表达。与CqAMSlike2相比,CqAMSlike1的表达更与AMS的表达模式相一致,而被进一步用于基因的功能验证。与对照相比,基于烟草脆裂病毒(TRV)沉默CqAMSlike1的藜麦两性花出现部分花丝缩短、花药不裂,花粉败育,单株种子少,种子空瘪率增加的表型。BIFC结果显示CqAMSlike1自身,与CqTDF1和CqMYB80均有互作,预示CqAMSlike1可形成同源或异源聚体调控藜麦绒毡层发育基因的表达。

关键词：藜麦 AMS 病毒介导的基因沉默花粉发育蛋白互作

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