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养猪 2009年第3期 65-68页

作者：苗岚飞胡守萍张超范张卓崔尚金中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学学院哈尔滨150030

本研究旨在研究猪细小病毒分离株感染初孕母猪后母猪和胎猪的病毒组织分布和组织病理学变化情况。试验选用妊娠35d的初孕母猪接种PPV-BQ株第15代细胞毒,以接种RPMI1640的母猪作为对照。攻毒40d后剖杀,采集母猪的心脏、肝脏、脾脏、肺脏... 详细信息

本研究旨在研究猪细小病毒分离株感染初孕母猪后母猪和胎猪的病毒组织分布和组织病理学变化情况。试验选用妊娠35d的初孕母猪接种PPV-BQ株第15代细胞毒,以接种RPMI1640的母猪作为对照。攻毒40d后剖杀,采集母猪的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、扁桃体、子宫内膜和腹部淋巴结,胎猪的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、脑和小肠,进行组织病毒载量测定和组织病理学检测。实时定量PCR检测结果显示,攻毒组母猪的心脏、脾脏、肺脏、肾脏和子宫内膜存在病毒复制,子宫内病毒含量最高;胎猪的心脏、脾脏、肺脏中存在病毒复制。对照组脏器中无病毒复制。病理切片结果显示,攻毒组母猪肺脏出现细支气管性肺炎,脾脏出现淋巴细胞减少,心脏、肝脏、肾脏、扁桃体、子宫内膜和腹部淋巴结未见明显的组织病理学变化;胎猪的脏器未见明显的病理损伤。对照组未发现组织病理学变化。

关键词：猪细小病毒病毒组织分布组织病理学变化

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减蛋综合征病毒在不同品系小鼠体内的组织分布

引用

中国实验动物学报 2019年第2期27卷 160-166页

作者：范涛梁琳李嘉阳李刚中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京100193 中国食品药品检定研究院北京102629

目的通过人工感染减蛋综合征病毒(egg drop syndrome virus,EDSV),观察病毒在不同品系小鼠体内增殖情况以及动态变化规律,为EDSV构建载体提供理论依据与数据支持。方法选取免疫系统正常的BALB/c小鼠、T细胞免疫缺陷裸鼠(Nu)以及高度免... 详细信息

目的通过人工感染减蛋综合征病毒(egg drop syndrome virus,EDSV),观察病毒在不同品系小鼠体内增殖情况以及动态变化规律,为EDSV构建载体提供理论依据与数据支持。方法选取免疫系统正常的BALB/c小鼠、T细胞免疫缺陷裸鼠(Nu)以及高度免疫缺陷小鼠(NSG)为研究对象,每品系32只,雌性,5～6周龄,经腹腔注射人工感染EDSV,分别于攻毒后1、3、5、7、14、21、28、35 d采集血清,应用间接ELISA方法进行抗体监测;选择攻毒后1、7、14、21、28 d小鼠,采集心脏、肺、肝、脾、肾、小肠、子宫、气管、食管、脑10种组织,应用荧光定量PCR相对定量比较Ct法(△△CT)进行各组织内病毒载量的检测。结果 BALB/c小鼠于攻毒后3 d即可在血清内检测到抗体的表达,14 d抗体水平达到最高,并一直维持至监测期内35 d;Nu小鼠也可于攻毒后3 d检测到抗体,表达水平较BALB/c小鼠有所降低,攻毒14 d后,Nu小鼠血清中抗体水平出现下降,至35 d抗体一直维持在较低的水平;NSG小鼠在整个监测过程中,抗体水平一直处于阴性状态。核酸相对定量结果显示,BALB/c小鼠感染后1 d,肝组织中的病毒表达量最高,达到5.45个数量级,其次由高到低依次是脾、食管、子宫、小肠、肺、气管、肾、心脏,脑组织中病毒含量最低,随感染时间的延长,各组织内病毒表达量较感染1 d均有所下降,至攻毒后28 d,肝、脾病毒表达量依然维持着较高的水平;Nu小鼠和NSG小鼠感染1 d表现为脾中病毒表达量最高,分别为3.95和4.05个数量级,其次为肝,攻毒28 d,两种小鼠体内各器官内仍可以检出阳性信号,肝、脾病毒表达量较高。结论 EDSV可刺激小鼠产生免疫应答,在免疫缺陷小鼠体内抗体水平表达量较低。该病毒在小鼠体内有肝、脾等组织嗜性,为EDSV开发成为载体以及在实验动物模型上的进一步研究与应用提供了参考数据。

关键词：减蛋综合征病毒不同品系小鼠病毒组织分布

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猪细小病毒分离株感染母猪及胎猪的体内组织分布及病理变化

猪细小病毒分离株感染母猪及胎猪的体内组织分布及病理变化

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作者：苗岚飞东北农业大学

学位级别：硕士

猪细小病毒病是由猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)感染引起的,本病主要可导致初产母猪的繁殖障碍,表现为流产、死胎及木乃伊胎。PPV作为一种主要的猪病病原严重束缚了养猪业的健康发展。本实验室分离到PPV-BQ株,分子生物学分析证实... 详细信息

猪细小病毒病是由猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)感染引起的,本病主要可导致初产母猪的繁殖障碍,表现为流产、死胎及木乃伊胎。PPV作为一种主要的猪病病原严重束缚了养猪业的健康发展。本实验室分离到PPV-BQ株,分子生物学分析证实该毒株与经典强毒株Kresse株同源性较高,同源率达到99.4%;VP2基因及编码蛋白的序列比对结果表明PPV-BQ株与Kresse株编码氨基酸序列完全一致。本次试验选择PPV-BQ株人工感染初孕母猪,试验选用4头11月龄PPV阴性杜洛克初孕母猪,妊娠日龄为35天,随机分为2组,即健康对照组和PPV攻毒组,每组2头。攻毒组于第1天接种PPV-BQ株细胞培养毒10mL(TCID50=107/mL);健康对照组接种RPMI 1640培养液10mL,接种途径为口服加静脉。所有母猪在接种后40天处死,无菌取出母猪体内的胎猪,以及母猪和胎猪的主要脏器。根据PPV NS-1基因设计了一对特异性引物,建立了检测PPV的实时荧光定量PCR方法,对该毒株在感染母猪及其胎猪的体内组织的病毒载量进行测定,进而对病毒的组织分布情况进行分析。采集母猪及其胎猪的主要脏器制成病理切片,HE染色,光学显微镜下观察,对猪体的组织病理学变化进行观测。结果如下: 1.怀孕母猪的剖检结果显示,对照组母猪的各组织无可见的病理损伤,其子宫内胎猪外观形态正常,亦无可见的病理损伤;攻毒组母猪子宫出现肉眼可见的子宫内膜炎症,子宫内胎猪出现木乃伊胎和溶胎现象。 2.病毒组织分布结果显示,对照组母猪及胎猪脏器中均未检出PPV病毒。攻毒组母猪的心脏、脾脏、肺脏、肾脏和子宫中检出PPV病毒,以子宫内病毒含量最高,可达到1012拷贝。攻毒组胎猪仅在心脏、脾脏和肺脏中检出了PPV病毒。 3.组织病理学检测结果显示,对照组母猪及其体内胎猪各脏器均未发现明显的组织病理学损伤;攻毒组母猪的肺脏出现细支气管性肺炎,脾脏出现淋巴细胞减少,心脏、肝脏、肾脏、扁桃体和腹部淋巴结未见明显的组织病理学变化;攻毒组胎猪所检脏器未见明显的组织病理学变化。本试验证实PPV-BQ株可以感染初孕母猪,通过建立PPV实时荧光定量PCR方法检测了PPV在母猪及胎猪脏器中的病毒载量,对病毒的组织分布情况进行了分析,并对相应脏器进行了病理组织学观察,从器官、分子水平上探讨了PPV-BQ株感染初孕母猪及其胎猪的病毒组织分布和组织病理学变化;为猪细小病毒病的后续研究奠定了理论及实践基础。

关键词：猪细小病毒实时荧光定量PCR 病毒组织分布组织病理学

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实验小鼠感染诺如病毒后组织病理变化及病毒含量分析

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中国比较医学杂志 2020年第8期30卷 42-48页

作者：李晓波付瑞王吉王淑菁王莎莎李威秦骁黄宗文贺争鸣岳秉飞中国食品药品检定研究院实验动物资源研究所北京102629

目的研究常用实验小鼠在人工感染小鼠诺如病毒后组织病理改变及病毒含量变化情况。方法使用KM、BALB/c、NIH、C57BL/6及BALB/c-nu等五个品系小鼠,每个品系分为对照组和感染组,感染组以灌胃方式接种小鼠诺如病毒液,对照组灌同等体积生理... 详细信息

目的研究常用实验小鼠在人工感染小鼠诺如病毒后组织病理改变及病毒含量变化情况。方法使用KM、BALB/c、NIH、C57BL/6及BALB/c-nu等五个品系小鼠,每个品系分为对照组和感染组,感染组以灌胃方式接种小鼠诺如病毒液,对照组灌同等体积生理盐水,分别在感染后第7、14、21、28、55天采集肝、脾、肺、盲肠、结肠及小肠,每个组织取2份,分别进行病理诊断及病毒核酸含量检测,最后对结果进行汇总分析。结果肝、脾、肺病理改变总发生率分别为8%(10/125)、5.6%(7/125)和4%(5/125),盲肠、结肠及小肠均未发现病变,其中KM及BALB/c小鼠病变主要发生在肝、脾和肺,C57BL/6小鼠主要在肝和肺,NIH及BALB/c-nu小鼠主要在肝和脾。在所观察的实验鼠中KM小鼠较易发生肺的病变;KM及NIH小鼠发生病变较早,C57BL/6小鼠较晚。所有实验鼠盲肠、结肠MNV核酸阳性率均为100%(125/125),小肠、肝、脾、肺及血阳性率分别为71.2%(89/125),17.6%(22/125),39.2%(49/125),3.2%(4/125)和1.6%(2/125);病毒含量比较盲肠>结肠>小肠>脾>肺>肝;BALB/c-nu小鼠结肠病毒含量显著高于其他品系小鼠(P<0.01),其它品系小鼠各组织病毒含量无统计学差异;C57BL/6小鼠在感染MNV第14天盲肠及结肠病毒含量达峰值(P<0.05),其它品系小鼠不同时间点病毒含量无统计学差异;组织器官病理检查及病毒核酸检测结果之间无相关性。结论小鼠诺如病毒感染会引起组织病变,建议进行病理有关的动物实验选择MNV阴性小鼠。

关键词：小鼠诺如病毒病理变化病毒组织分布

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禽腺病毒荧光定量PCR检测方法的建立与初步应用

禽腺病毒荧光定量PCR检测方法的建立与初步应用

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作者：邱丽叶东北农业大学

学位级别：硕士

禽腺病毒（Fowl adenovirus,FAd V）是无囊膜、线性双股DNA病毒,属于腺病毒科、禽腺病毒属成员。该病毒可感染鸡、火鸡及其他禽类。FAd V可致鸡发生包涵体肝炎（Inclusion body hepatitis,IBH）、心包积水综合征（Hydropericardium synd... 详细信息

禽腺病毒（Fowl adenovirus,FAd V）是无囊膜、线性双股DNA病毒,属于腺病毒科、禽腺病毒属成员。该病毒可感染鸡、火鸡及其他禽类。FAd V可致鸡发生包涵体肝炎（Inclusion body hepatitis,IBH）、心包积水综合征（Hydropericardium syndrome,HPS）和肌胃糜烂（Gizzard erosions,GE）等疾病。禽腺病毒属中包含8个种,分为禽腺病毒AE、鹅腺病毒A、隼腺病毒A、及火鸡腺病毒B。蛋鸡和肉鸡均可感染该病毒,通常3～5周龄较为易感。该病常与禽类其他病原混合感染,感染鸡只可继发再生障碍性贫血、肝炎及产蛋量下降等。FAd V呈世界性分布,病毒可经粪-口途径水平传播,也可垂直传播,给养禽业造成巨大经济损失。本研究建立FAd V荧光定量PCR（real-time PCR）检测方法,为FAdV的快速检测提供技术手段,同时也为疫病净化提供技术平台,对促进养禽业健康发展具有重要意义。对Gen Bank发表的FAdV-A、B、C、D和E种参考毒株的Hexon基因序列进行多重比对,选择保守区域设计兼并引物,使检测引物具有FAdV各个种的种间通用性。应用常规PCR方法从FAdV-D基因组中扩增Hexon-1基因片段,大小为191bp,将此片段克隆到p MD18-T载体,制备标准品,以标准品为模板进行real-time PCR的扩增,建立标准曲线。标准品在质粒浓度为1×1010拷贝/μL1×104拷贝/μL检测范围内的错误率为0.0599,扩增效率为1.904,斜率为-3.575,具有良好的线性关系。对标准品1×1010拷贝/μL1×104拷贝/μL浓度范围进行real-time PCR扩增,其中标准品的敏感性为1×103拷贝/μL。并对其分别进行组内重复和组间重复,组内重复变异系数分别为0.22%、0.24%、0.11%、0.27%、0.18%、0.35%和0.37%;组间重复变异系数（CV%）分别为0.50%、0.86%、0.73%、1.32%、1.06%、0.56%和0.78%。因此本研究建立FAd V荧光定量PCR检测方法具有良好的重复性及稳定性。应用建立的荧光定量PCR检测方法,分别对禽腺病毒FAdV-D种及FAd V-C种的最小检出滴度进行测定,对FAd V-D和FAd V-C种的检测下限均为102TCID50/ml,是常规PCR检测方法的10倍。说明本研究建立的检测FAd V荧光定量PCR的方法具有较好的敏感性。将禽腺病毒FAd V-D毒株以相同剂量和滴度（100EID50）分别以卵黄囊（6.5日龄）、尿囊膜（9日龄）、尿囊腔（9日龄）途径接种SPF鸡胚,采集鸡胚的组织包括脑、心脏、肠、肺脏、胸腺、肝脏、腺胃、肾脏、脾脏、法氏囊以及鸡胚尿囊液和鸡胚尿囊膜。结果表明不同接种途径对FAd V-D在SPF鸡胚中的增殖影响较大,卵黄囊途径接种SPF鸡胚,鸡胚尿囊膜及尿囊液中DNA拷贝数高于其他两种接种途径,其中经卵黄囊、尿囊膜、尿囊腔途径接种SPF鸡胚,鸡胚尿囊膜中DNA拷贝数分别为1.32×108拷贝/mg、2.89×105拷贝/mg及9.07×104拷贝/mg,接胚尿囊液中DNA拷贝数分别为4.99×104拷贝/mg、3.28×104拷贝/mg及1.32×104拷贝/mg。因此,FAdV-D在SPF鸡胚中最适接种途径为卵黄囊接种,病毒在鸡胚尿囊膜和尿囊液中良好增殖,可收获尿囊膜及尿囊液作为病毒储液。病毒在鸡胚肝组织中DNA拷贝数最高,为4.67×108拷贝/mg。此外,用Günes等已报道的real-time PCR检测方法对上述结果进行符合性检验,与本研究建立的real-time PCR方法检测结果相比,病毒在鸡胚组织中的分布和组织中的病毒载量具有良好的一致性。FAd V-D感染1日龄SPF鸡,于攻毒后每4天采集口咽和泄殖腔拭子,使用本研究建立的FAd V real-time PCR检测方法检测感染鸡只排毒情况,持续检测至攻毒后72d。结果表明,感染鸡只于攻毒后4d开始排毒,攻毒后72d仍可从感染鸡只口咽和泄殖腔拭子中检测到病毒,经口咽拭子检出率为7/10（70%）,经泄殖腔拭子检出率为8/10（80%）。应用常规PCR检测方法对上述样品进行平行检测,感染鸡只于攻毒后4d开始排毒,至攻毒后72d,鸡只口咽和泄殖腔拭子均检测不到病毒。在攻毒后第8天,感染FAdV-D组的鸡群中有3只鸡发病严重、濒死,将3只濒死鸡安乐死处理,采集组织样品,real-time PCR检测病毒在感染鸡体组织分布情况。结果表明,感染鸡只各组织脏器中均有病毒存在,说明FAd V为泛嗜性病毒,但主要嗜性组织为肠和肝脏,在直肠中检测到病毒基因组拷贝数最高,在脾脏中病毒基因组拷贝数最低。分别使用本研究建

关键词：禽腺病毒荧光定量PCR 病毒组织分布排毒持续期

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猪细小病毒弱毒苗的免疫原性及猪体载量研究

猪细小病毒弱毒苗的免疫原性及猪体载量研究

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作者：王晓玲青岛农业大学

学位级别：硕士

本研究主要评价研制的猪细小病毒弱毒苗的免疫原性及在猪体的组织分布。选择PPV-BQ连续传代致弱的毒株免疫接种后备母猪和仔猪，试验选PPV阴性的11月龄母猪和30～40日龄的仔猪，随机分为2组，即健康对照组和免疫接种组。免疫组于第0d肌... 详细信息

本研究主要评价研制的猪细小病毒弱毒苗的免疫原性及在猪体的组织分布。选择PPV-BQ连续传代致弱的毒株免疫接种后备母猪和仔猪，试验选PPV阴性的11月龄母猪和30～40日龄的仔猪，随机分为2组，即健康对照组和免疫接种组。免疫组于第0d肌肉注射接种PPV-BQ弱毒株(TCID50=104.5/mL)的10倍稀释液10mL，健康对照纽接种DMEM细胞培养液10mL。在0、7、14、21、28、35、42d采集血液并分离血清，-20℃保存。分别在试验第7、21、42d处死仔猪，母猪于免疫接种后第10d配种，于免疫后第35d处死，收集主要脏器，-20℃保存。血凝抑制、ELISA、病毒中和抗体试验检测抗体的变化水平;WST-8方法检测脾淋巴细胞增殖情况;PCR检测前21d的病毒血症情况;血凝试验检测脏器的病毒分布情况。主要脏器制成病理切片HE染色，观察猪体的组织病理学变化。根据PPV-VP2基因设计了一对特异性引物，建立了检测PPV的实时荧光定量PCR方法，对该毒株在后备母猪和仔猪的体内组织的病毒载量进行测定。结果如下:\n 1.临床症状及剖检结果显示，对照组无临床症状和病理变化，免疫组母猪和仔猪无临床症状和无可见的病理损伤。\n 2.抗体变化水平显示，对照组抗体水平一直处于阴性状态，母猪在免疫后7d产生保护性抗体，一直持续到试验结束;免疫组仔猪抗体水平较低，没有达到保护性抗体水平。淋巴细胞增殖试验结果显示，病毒性刺激可使免疫组猪体脾淋巴细胞增殖水平显著提高，对照组淋巴细胞在特异性刺激时不能产生明显增殖。\n 3.组织免疫形态学检测结果显示，对照组母猪和仔猪各脏器均未发现明显的免疫形态学损伤;免疫组母猪和仔猪的子宫未发现明显的免疫形态学损伤，其它组织有轻微损伤。\n 4.病毒组织分布结果显示，对照组母猪及仔猪脏器中均未检出PPV病毒。免疫组母猪心脏和子宫中检出PPV病毒，免疫组仔猪在心脏、脾脏和肾脏中检出了PPV病毒。\n 本试验探讨了PPV-BQ弱毒株接种后备母猪及仔猪的免疫原性，为猪细小病毒病弱毒株的后续研究奠定了基础。

关键词：猪细小病毒弱毒株免疫原性组织免疫形态学病毒组织分布

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犬瘟热病毒CDV-PS株致病力及基因进化分析

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特产研究 2019年第3期41卷 17-20页

作者：施鹏飞程悦宁罗国良王建科程世鹏易立中国农业科学院特产研究所

犬瘟热是由犬瘟热病毒引起急性、热性、高度接触性传染病,貂、狐、貉、犬、熊猫、虎等动物易感。本试验研究了犬瘟热CDV-PS株对犬的致病力。结果发现,试验犬于病毒接种后的19 d死亡;脏器剖检肺部有出血斑,肝脏肿大,肠系膜充血,膀胱壁变... 详细信息

犬瘟热是由犬瘟热病毒引起急性、热性、高度接触性传染病,貂、狐、貉、犬、熊猫、虎等动物易感。本试验研究了犬瘟热CDV-PS株对犬的致病力。结果发现,试验犬于病毒接种后的19 d死亡;脏器剖检肺部有出血斑,肝脏肿大,肠系膜充血,膀胱壁变厚;组织切片脾脏淋巴细胞浸润,肺气肿,脑组织神经细胞自噬现象;构建犬瘟热病毒H基因遗传发育树,CDV-PS株分类于Asia-1型分支,与目前我国主要的犬瘟热病毒流行株类型一致。本研究对犬瘟热病毒CDV-PS株感染犬的临床症状、脏器剖检、组织病理变化以及病毒体内分布和H基因特征进行了详细研究,为更好地预防和控制犬瘟热提供基础。

关键词：犬瘟热病毒致病力分析病理变化病毒组织分布 H基因遗传发育树

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