检索结果-内蒙古大学图书馆

丙型肝炎病毒非结构蛋白5A对干扰素α-2b诱导的信号传导和转录激活因子1磷酸化及核转移的影响

中华肝脏病杂志 2006年第12期14卷 894-897页

作者：曹婕周泱龚国忠湖南中南大学湘雅二医院肝病研究中心长沙410011

目的探讨丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白5A(NSSA)对干扰素α-2b诱导的Janus激酶-信号传导和转录激活子(JAK-STAT)信号传导途径中STAT1磷酸化及核转移的影响。方法用表达HCV NS5A的质粒(pCNS5A)转染Huh7细胞,应用免疫细胞化学技术检测HCV N... 详细信息

目的探讨丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白5A(NSSA)对干扰素α-2b诱导的Janus激酶-信号传导和转录激活子(JAK-STAT)信号传导途径中STAT1磷酸化及核转移的影响。方法用表达HCV NS5A的质粒(pCNS5A)转染Huh7细胞,应用免疫细胞化学技术检测HCV NS5A的表达,用免疫荧光和Western blot方法检测HCV NS5A对干扰素α-2b诱导的STAT1磷酸化和核转移的影响。结果转染了pCNS5A的Huh7细胞质可见HCV NS5A蛋白的表达；以干扰索α-2b诱导30 min后,STAT1磷酸化及核转移在转染了表达HCV NS5A的质粒组比转染空白载体pRC/CMV组及未转染组减少,而未转染组及转染空白载体pRC/CMV组间无明显差别。结论表达HCV NS5A的质粒pCNSSA成功转染至Huh7细胞,HCV NS5A减弱干扰素α-2b诱导的STAT1的磷酸化及核转移,提示NS5A影响干扰素α-2b的JAK-STAT信号传导途径可能是HCV干扰素抵抗的机制之一。

关键词：肝炎病毒,丙型病毒非结构蛋白质类干扰素α 信号传导

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HepG2细胞中HCV NS5A蛋白对HCV IRES启动蛋白翻译的影响

引用

中华肝脏病杂志 2007年第7期15卷 489-492页

作者：陈娟陈维贤张祯祯黄爱龙重庆医科大学病毒性肝炎研究所、教育部感染性疾病分子生物学重点实验室 400010

目的探讨HepG2细胞中HCV非结构蛋白5A（NS5A）对HCV IRES启动蛋白翻译的影响，以了解HCV的复制调控机制。方法将构建的表达双荧光素酶的双顺反子载体pCMV-Rluc-IRES-Fluc和含HCV NS5A基因的表达质粒pcDNA-NS5A共转染HepG2细胞，用双荧... 详细信息

目的探讨HepG2细胞中HCV非结构蛋白5A（NS5A）对HCV IRES启动蛋白翻译的影响，以了解HCV的复制调控机制。方法将构建的表达双荧光素酶的双顺反子载体pCMV-Rluc-IRES-Fluc和含HCV NS5A基因的表达质粒pcDNA-NS5A共转染HepG2细胞，用双荧光素酶检测系统检测虫荧光素酶的表达水平，细胞免疫荧光技术检测HCV-NS5A蛋白的表达，RT-PCR检测虫荧光素酶基因mRNA水平，并与相应对照做比较，以观察HCV NS5A对HCV IRES介导虫荧光素酶翻译水平的影响。结果转染pcDNA-NS5A的HepG2细胞中虫荧光素酶活性明显高于转染pCDNA3．I-3flag的对照组，并存在剂量依赖关系；而RT-PCR虫荧光素酶基因mRNA水平在两组间差异无统计学意义。转染pcDNA-NS5A的HepG2细胞质中可见HCV NS5A蛋白的表达。结论HCV NS5A蛋白对HCV IRES介导虫荧光素酶的翻译有正调节作用，并存在剂量依赖关系．

关键词：肝炎病毒丙型病毒非结构蛋白质类 HCV IRES

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甲型肝炎病毒P1B、P2A、P3AB和P3D蛋白在原核系统中的表达和抗原活性分析

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中华实验和临床病毒学杂志 2007年第1期21卷 50-52页

作者：宁尚勇伊瑶陈斯勇毕胜利中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所肝炎室北京100052

目的研究甲型肝炎病毒P1B、P2A、P3AB和P3D在原核系统中的表达，并探讨这些蛋白的抗原活性和作为诊断抗原的应用价值。方法采用PCR方法，从克隆有HAV HM175株全长cDNA基因的克隆载体pHAV16H1上扩增出目的基因，以M47作为表达载体，构... 详细信息

目的研究甲型肝炎病毒P1B、P2A、P3AB和P3D在原核系统中的表达，并探讨这些蛋白的抗原活性和作为诊断抗原的应用价值。方法采用PCR方法，从克隆有HAV HM175株全长cDNA基因的克隆载体pHAV16H1上扩增出目的基因，以M47作为表达载体，构建N端带硫氧还蛋白的重组表达质粒。重组质粒在大肠埃希菌BL21（DE3）中经IPTG诱导表达。采用DEAE阴离子交换和镍离子柱螯和亲和层析纯化的方法对重组蛋白进行纯化。以Western Blot和间接ELISA的方法检测重组蛋白的抗原活性。结果四个重组质粒经测序证明构建正确无误，在大肠埃希菌中表达四个蛋白的相对分子质量也正确无误。Western Blot分析和间接ELISA方法证实四个蛋白中只有p2a有抗原活性。结论原核表达的P2a蛋白，具有较好的抗原活性，在间接ELISA方法中检测出了所有的24份阳性血清和24份阴性血清，非常有希望做成诊断抗原用于诊断急性甲肝患者和区分甲型肝炎自然感染与注射疫苗所产生的不同免疫。

关键词：肝炎病毒,甲型病毒非结构蛋白质类抗原

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丙型肝炎病毒1b型NS3区与原发性肝癌的关系

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吉林大学学报（医学版） 2007年第6期33卷 1073-1076页

作者：周丹孟祥伟孙逊杨秀军徐光孙艳三代俊治迟宝荣吉林大学第一医院消化内科吉林长春130021 吉林大学第一医院病理科吉林长春130021 吉林省吉林市传染病医院传染科吉林吉林132001 吉林大学第二医院肿瘤科吉林长春130041 东京东芝病院研究所

目的:探讨丙型肝炎病毒(HCV)1b型的非结构蛋白3(NS3)区与原发性肝癌(HCC)的关系。方法:将患者分为丙型肝炎病毒携带者组、非HCC组及HCC组,从患者血清中提取HCV-RNA,采用巢式聚合酶链法(nested-PCR)进行HCV基因分型并扩增HCV-NS3片段,分... 详细信息

目的:探讨丙型肝炎病毒(HCV)1b型的非结构蛋白3(NS3)区与原发性肝癌(HCC)的关系。方法:将患者分为丙型肝炎病毒携带者组、非HCC组及HCC组,从患者血清中提取HCV-RNA,采用巢式聚合酶链法(nested-PCR)进行HCV基因分型并扩增HCV-NS3片段,分析HCV-NS3区片段的核苷酸序列、氨基酸序列、蛋白质二级结构。结果:3组均以1b型为主,3组间1b型所占百分率比较差异无显著性(P>0.05);3组核苷酸序列同源性95%,3组氨基酸序列的同源性为95%,且3组在NS31027-1206区间都无特殊的氨基酸突变;NS31027-1206区的蛋白质二级结构分为A、B 2型,携带组及非HCC组以A型为主,而HCC组以B型为主;携带组与非HCC组蛋白质二级结构分型差异无显著性(P>0.05),而HCC组与携带组、非HCC组之间差异有显著性(P<0.01)。结论:1b型HCV携带者及非HCC患者与HCC患者在蛋白质二级结构上有差异,HCV-NS3与HCC的发生有关联。

关键词：肝炎病毒病毒非结构蛋白质类肝肿瘤

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酵母双杂交技术筛选人白细胞cDNA文库中HCV NS4A结合蛋白及CAML基因的克隆

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中华实验和临床病毒学杂志 2007年第1期21卷 47-49页

作者：程勇前王琳成军刘妍徐东平钟彦伟曲建慧田江克戴久增李晓东解放军第三0二医院病毒性肝炎研究室军事医学科学院在读博士研究生北京100039 解放军第三0二医院病毒性肝炎研究室北京100039 北京地坛医院

目的应用酵母双杂交技术筛选人白细胞中与丙型肝炎病毒非结构蛋白4A（HCV NS4A）相互作用的蛋白。方法连接有HCV NS4A酵母表达的载体pGBKT7-NS4A，转化入单倍体酵母细胞AH109，与转化了人白细胞cDNA文库质粒的单倍体酵母细胞Y187进行... 详细信息

目的应用酵母双杂交技术筛选人白细胞中与丙型肝炎病毒非结构蛋白4A（HCV NS4A）相互作用的蛋白。方法连接有HCV NS4A酵母表达的载体pGBKT7-NS4A，转化入单倍体酵母细胞AH109，与转化了人白细胞cDNA文库质粒的单倍体酵母细胞Y187进行配合，在营养缺陷型培养基和X-a-半乳糖（X-a-Gal）上进行双重筛选阳性菌落，增菌后提取质粒，转化人大肠埃希细菌（DH5α），提取质粒并测序，进行生物信息学分析。对克隆重复率较高的蛋白编码基因进行克隆和回交验证。结果筛选出在四缺（SD／-Trp-Leu-Ade-His）培养基和在铺有X-a-gal的四缺培养基上均能生长并变成蓝色的真阳性菌落45个，其中钙离子信号调节亲环素配体（cAML）29个。对CAML基因成功克隆，回交验证了HCV NS4A与CAML的相互作用。结论成功筛选出7种在人白细胞cDNA文库中与HCV NS4A特异性相互作用的蛋白，为进一步探讨HCV的致病机制提供了新的线索。

关键词：肝炎病毒病毒非结构蛋白质类酵母菌杂交钙通道

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蚊浓核病毒非结构蛋白1的生物信息学分析

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中华实验和临床病毒学杂志 2009年第6期23卷 461-463页

作者：董云巧马文丽顾金保郑文岭南方医科大学基因工程研究所广东广州510515 公共卫生与热带医学学院华南基因组研究中心

目的通过生物信息学分析软件对蚊浓核病毒（mosquito densovirus，MDV）非结构蛋白1（Nostructual proteinl，NSl）的结构与功能进行分析预测。方法应用EXPASY pmtparamt001、ClustalX1.83、Bioedit、MEGA3.1、ScanProsite、Motifscan等分析软件和在线生物信息学分析工具对MDVNSl的理化特性、同源性、进化关系、二级结构与主要功能结构域进行分析预测。结果MDV NS1属不稳定亲水性蛋白，氨基酸序列高度保守，与虾传染性皮下及造血组织坏死病毒（Infectious hypodermal and hematopoietic necrosis virus，IHHNV）进化距离较近；MDVNS1具有小分子DNA病毒编码的解螺旋酶超家族3（Superfamily 3 heliease of DNA viruses）的结构域，该结构域包含有NTP-binding区域，使其具有金属离子依赖的ATPase的活性，蛋白靠近N端包含有病毒滚筒复制rolling-circle replication（RCR）起始蛋白的结构域并具有单链切口酶的生物学功能。结论生物信息学预测结果提示MDVNS1蛋白在病毒的复制、包装等各个阶段起关键性作用。

关键词：浓核病毒属病毒非结构蛋白质类计算生物学

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非结构蛋白1抗原捕获酶联免疫吸附法评价登革病毒抗体中和活性

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中华预防医学杂志 2009年第8期43卷 680-685页

作者：温坤丁彦青丘立文潘玉先蔡建飘岳彩峰狄飚车小燕南方医科大学珠江医院临床免疫研究所广州510282 南方医科大学南方医院病理科广州市疾病预防控制中心

目的在获得具有中和活性的针对Ⅰ型登革病毒（dengue virus serotype Ⅰ，DENV-1）的抗体基础上，评价已建立的非结构蛋白Ⅰ（nonstructural protein 1，NS1）抗原捕获酶联免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）分析... 详细信息

目的在获得具有中和活性的针对Ⅰ型登革病毒（dengue virus serotype Ⅰ，DENV-1）的抗体基础上，评价已建立的非结构蛋白Ⅰ（nonstructural protein 1，NS1）抗原捕获酶联免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）分析抗体中和活性的可行性，为中和抗体的筛选和疫苗效果的评价提供一个更为快速、简便的检测方法。方法使用重组DENV-1包膜蛋白Ⅲ区（envelope protein domain Ⅲ，EDⅢ）免疫5只BALB／c小鼠制备单克隆抗体（简称单抗），采用间接ELISA、间接免疫荧光法（immunofluorescence assay，IFA）和免疫印迹法（Western Blot）对单抗进行筛选及鉴定；同时用该重组蛋白免疫1只新西兰兔，制备多克隆抗体血清；以传统噬斑减少中和试验（plaque reduction neutralization test，PRNT）作为参比方法，采用NS1抗原捕获ELISA对所获抗体进行中和活性检测。结果获得4株针对DENV-1 EDⅢ单抗和1份兔多抗血清，且被PRNT试验证明均具有中和活性，四株单抗腹水（1A1、1B3、3D3、9D6）和兔多抗血清中和效价分别为1：1024、1：512、1：256、1：4096和1：4096。使用NS1抗原捕获EHSA法检测不到PRNT中和效价最低的3D3抗体对DENV-1有中和能力，而检测其余3株单抗（1A1、1B3、9D6）和多抗兔血清中和效价均远低于PRNT测定结果，分别为1：32、1：32、1：128和1：128。结论简单、快速的NS1抗原捕获ELISA可用于评价DENV抗体的中和活性，该方法适合于高效价中和抗体的筛选，有望成为评价疫苗效果的方法之一。

关键词：登革热病毒病毒包膜蛋白质类酶联免疫吸附测定病毒非结构蛋白质类中和试验

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T7噬菌体展示技术筛选丙型肝炎病毒非结构蛋白3的相互作用蛋白

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中华肝脏病杂志 2006年第8期14卷 561-564页

作者：黄英蔡雪飞何茂锐张君黄爱龙重庆医科大学病毒性肝炎研究所教育部感染性疾病分子生物学重点实验室 400010

目的用T7噬菌体筛选系统筛选丙型肝炎病毒非结构蛋白(NS)3的相互作用蛋白。方法应用T7噬菌体展示技术,以通过原核表达的方式得到的丙型肝炎病毒NS3为靶分子,对噬菌体人肝细胞cDNA文库进行筛选,对筛选到的克隆进行DNA序列分析及同源性研... 详细信息

目的用T7噬菌体筛选系统筛选丙型肝炎病毒非结构蛋白(NS)3的相互作用蛋白。方法应用T7噬菌体展示技术,以通过原核表达的方式得到的丙型肝炎病毒NS3为靶分子,对噬菌体人肝细胞cDNA文库进行筛选,对筛选到的克隆进行DNA序列分析及同源性研究。结果经鉴定得到2个阳性克隆,并确定能与丙型肝炎病毒NS3相互作用的蛋白质为serine peptidase inhibitor,clade A,member 1(SERPINA1)和cyclophilin-LC。结论T7噬菌体筛选系统是筛选相互作用蛋白的一种简单、快速和有效的手段,筛选到的相互作用蛋白为进一步探讨NS3的致病、致癌机制提供了重要依据。

关键词： T7噬菌体肝炎病毒丙型病毒非结构蛋白质类相互作用蛋白

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丙型肝炎病毒非结构蛋白NS4B肝细胞结合蛋白基因的筛选与克隆

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中华实验和临床病毒学杂志 2005年第3期19卷 248-251页

作者：刘妍成军白桂芹严福明吴顺华王琳张玲霞解放军第三○二医院传染病研究所基因治疗研究中心全军病毒性肝炎防治研究重点实验室北京100039

目的筛选并克隆人肝细胞cDNA文库中与丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白4B(NS4B)相互作用蛋白的基因,明确其具体作用机制。方法应用酵母双杂交系统3,将多聚酶链反应(PCR)法扩增的HCVNS4B基因连接入酵母表达载体pGBKT7中构建诱饵质粒,转化酵... 详细信息

目的筛选并克隆人肝细胞cDNA文库中与丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白4B(NS4B)相互作用蛋白的基因,明确其具体作用机制。方法应用酵母双杂交系统3,将多聚酶链反应(PCR)法扩增的HCVNS4B基因连接入酵母表达载体pGBKT7中构建诱饵质粒,转化酵母细胞AH109并在其内表达,然后与转化了人肝cDNA文库质粒pACT2的酵母细胞Y187进行配合,在营养缺陷型培养基和Xα半乳糖(Xαgal)上进行双重筛选阳性菌落,提取阳性酵母菌落的质粒转化大肠埃希菌,接种在氨苄西林LB平板上,选择生长菌落,提取质粒酶切鉴定,测序并在GenBank中进行生物信息学分析。结果成功克隆出HCVNS4B基因并在酵母细胞中表达,与肝文库配合后选出既能在4缺(SD/TrpLeuAdeHis)培养基又能在铺有Xαgal的4缺培养基上生长,并变成蓝色的真阳性菌落5个,序列分析显示,筛选到的肝细胞蛋白编码基因参与细胞代谢、生物氧化、生长调节等多种生物学过程。结论成功克隆出HCVNS4B蛋白与肝细胞相互作用蛋白,为进一步研究NS4B蛋白的功能,阐明HCV致病的分子生物学机制提供了新线索。

关键词：肝炎,丙型肝炎病毒属病毒非结构蛋白质类双杂交系统技术丙型肝炎病毒(HCV) NS4B基因结合蛋白基因人肝细胞非结构蛋白克隆

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轮状病毒NSP1蛋白的泛素连接酶活性研究

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中华实验和临床病毒学杂志 2010年第6期24卷 451-454页

作者：秦岚雷晓波任丽丽王健伟洪涛中国医学科学院病原生物学研究所病毒基因工程国家重点实验室北京协和医学院100730 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所

目的通过实验确证轮状病毒（Rotavirus,RV）非结构蛋白1（NSP1）的泛素连接酶活性,为阐明其在RV复制和致病机制中的作用提供线索.方法将NSP1基因及其RING结构域缺失突变体构建到pEGFP-C1质粒上,与表达泛素的质粒pBlue-Script-HA-Ubiqu... 详细信息

目的通过实验确证轮状病毒（Rotavirus,RV）非结构蛋白1（NSP1）的泛素连接酶活性,为阐明其在RV复制和致病机制中的作用提供线索.方法将NSP1基因及其RING结构域缺失突变体构建到pEGFP-C1质粒上,与表达泛素的质粒pBlue-Script-HA-Ubiquitin共转染人胚肾293FT细胞,用免疫荧光和Western blot方法确定蛋白的表达,并通过免疫共沉淀方法分析蛋白的泛素化.结果 NSP1蛋白的表达可增加细胞内的泛素化水平,并且自身也发生泛素化.结论 NSP1蛋白具有E3泛素连接酶活性.可能在泛素化调控机制中发挥作用.

关键词：轮状病毒属病毒非结构蛋白质类泛素连接酶类

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