检索结果-内蒙古大学图书馆

中国医师杂志 2008年第11期10卷 1470-1472页

作者：莫其农周小梅姚良权李忠新宋林立冯玉丽郑义广州中医药大学附属深圳市中医院检验科广东深圳518033 广州中医药大学附属深圳市中医院外科清华大学深圳研究生院生命科学部

目的研究丙型肝炎病毒（HCV）非结构蛋白（NS4B）对宿主的防御系统的影响。方法建立稳定表达NS4B的细胞系后，利用微点阵技术研究其对细胞基因表达的影响，流式细胞仪分析IFNGR1的荧光强度证实微点阵分析的结果。结果资料显示HCV—NS4B... 详细信息

目的研究丙型肝炎病毒（HCV）非结构蛋白（NS4B）对宿主的防御系统的影响。方法建立稳定表达NS4B的细胞系后，利用微点阵技术研究其对细胞基因表达的影响，流式细胞仪分析IFNGR1的荧光强度证实微点阵分析的结果。结果资料显示HCV—NS4B抑制宿主的防御系统相关的基因，特别是与IFN-γ信号传导有关的基因。结论NS4B在HCV引起的感染的持续性以及对干扰素治疗耐受起一定的作用。

关键词：病毒非结构蛋白质类生理学遗传学肝炎病毒受体干扰素信号传导

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丙型肝炎病毒非结构蛋白3的体外表达与纯化

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中华临床医师杂志（电子版） 2012年第20期6卷 37-39页

作者：金博李楠吴凯张林王艳梅翟俊山朱超慧宋久刚解放军第309医院消化内科北京100091

目的构建丙型肝炎病毒非结构蛋白3(HCV NS3)表达质粒并在大肠杆菌中表达其全长蛋白。方法克隆HCV NS3的核酸序列3420-5312位点,插入pQE-11质粒的BamH1限制性酶切位点,将此重组质粒转入大肠杆菌表达,用Westernblot方法筛选阳性克隆,将含... 详细信息

目的构建丙型肝炎病毒非结构蛋白3(HCV NS3)表达质粒并在大肠杆菌中表达其全长蛋白。方法克隆HCV NS3的核酸序列3420-5312位点,插入pQE-11质粒的BamH1限制性酶切位点,将此重组质粒转入大肠杆菌表达,用Westernblot方法筛选阳性克隆,将含有额外拷贝的argU、ileY和leuW的tRNA基因的pACYA质粒引入HCV NS3表达系统以提高HCV NS3蛋白的表达量。收集培养扩增的大肠杆菌菌体,用卵白溶菌酶裂解,收集含有HCV NS3重组蛋白的不溶性包涵体,将包涵体充分洗涤后,溶于含10mmol/L二硫苏糖醇的缓冲液中。释放的可溶性蛋白用SDS-PAGE电泳分离、洗脱,用离心过滤方法浓缩,乙醇沉淀,重复洗涤去除内毒素。结果用此方法克隆的HCVNS3全长基因片段表达的重组蛋白分子量为69kD。含有额外拷贝的argU、ileY和leuW的tRNA基因的pACYA质粒引入HCV NS3表达系统后,HCV NS3蛋白的产出率可提高10倍以上。此方法生产的NS3纯化蛋白质产量,每升培养物为40mg。内毒素含量低于20EU/mg NS3蛋白。结论 HCV NS3与HCV的免疫逃逸及感染的慢性化有密切关系,是HCV的抗病毒治疗和疫苗研究的重要靶点,全长HCV NS3蛋白的体外合成为HCV研究提供了一个有用的工具。

关键词：肝炎病毒属病毒非结构蛋白质类重组蛋白质类

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丙型肝炎病毒NS5A反式激活蛋白2在大肠埃希菌中表达及生物信息学分析

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中西医结合肝病杂志 2009年第4期19卷 217-220页

作者：李晓光洪源王琦张锦前成军北京地坛医院传染病研究所北京100011 哈尔滨医科大学附属第二临床医院感染病科

目的:构建丙型肝炎病毒NS5A反式激活蛋白2(NS5ATP2)原核表达载体并诱导其在大肠埃希菌中表达。方法:应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,以从HepG2细胞提取的mRNA为模板,扩增NS5ATP2目的基因片段,T-A克隆连接到pGEM-T载体,测序正确后... 详细信息

目的:构建丙型肝炎病毒NS5A反式激活蛋白2(NS5ATP2)原核表达载体并诱导其在大肠埃希菌中表达。方法:应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,以从HepG2细胞提取的mRNA为模板,扩增NS5ATP2目的基因片段,T-A克隆连接到pGEM-T载体,测序正确后将目的片段插入原核表达载体pET-32a(+)中,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导NS5ATP2融合蛋白的表达,并通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、Western blot免疫印迹分析和证实融合蛋白的表达;以生物信息学方法对蛋白结构和功能进行预测。结果:利用RT-PCR扩增获得NS5ATP2基因片段,IPTG诱导BL21宿主菌成功表达了NS5ATP2,经SDS-PAGE和Western blot分析得到证实;生物信息学预测结果显示此蛋白富含螺旋结构,为非跨膜蛋白,无信号肽。结论:利用大肠埃希菌BL21(DE3)能够成功表达NS5ATP2蛋白,为今后研究NS5ATP2蛋白的免疫原性和生物学特性奠定了的基础。

关键词：原核表达病毒非结构蛋白质类反式激活蛋白肝炎病毒丙型

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HCV NS3诱导小鼠特异性T细胞反应的抗原多肽序列筛选

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中华临床医师杂志（电子版） 2013年第10期7卷 106-110页

作者：金博李楠吴凯张林王艳梅翟俊山朱超慧宋久刚解放军第309医院消化内科北京100091

目的筛选HCV NS3的小鼠T细胞表位多肽序列。方法 BALB/c小鼠用HCV NS3加poly(I∶C)或CpG ODN及Montanide ISA720佐剂免疫后,分离其脾淋巴细胞,以覆盖HCV NS3全基因的合成重叠多肽组成的不同多肽库进行刺激,以ELISPOT及流式细胞术检测分... 详细信息

目的筛选HCV NS3的小鼠T细胞表位多肽序列。方法 BALB/c小鼠用HCV NS3加poly(I∶C)或CpG ODN及Montanide ISA720佐剂免疫后,分离其脾淋巴细胞,以覆盖HCV NS3全基因的合成重叠多肽组成的不同多肽库进行刺激,以ELISPOT及流式细胞术检测分泌干扰素γ(IFN-γ)的细胞数及CD8+/IFN-γ+细胞或CD4+/IFN-γ+细胞百分比,确定抗原性最强的多肽库,找出HCV NS3的小鼠T细胞表位多肽。结果通过ELISPOT及流式细胞术检测,能够刺激淋巴细胞分泌IFN-γ最多及CD8+/IFN-γ+细胞或CD4+/IFN-γ+细胞百分比最高的多肽被选出作为阳性多肽,其中的一个多肽经进一步的ELISPOT及流式细胞术检测确认,其序列为GGCSGGAYDIIICDECHS。结论 HCV NS3小鼠T细胞表位序列的确定为HCV疫苗的研究打下了基础。

关键词：肝炎,丙型肝炎病毒病毒非结构蛋白质类小鼠表位,T淋巴细胞

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