检索结果-内蒙古大学图书馆

昆虫学报 2013年第8期56卷 925-933页

作者：孟庆峰刘晓勇江苏大学生命科学研究院江苏镇江212013

杆状病毒与昆虫宿主相互作用是一种基本的分子和生态问题,不仅在农业上,而且在真核表达系统、基因治疗、蛋白表面展示系统以及基因工程疫苗等方面都有重要的实际应用。杆状病毒还是一种很有潜力的病毒杀虫剂,而且对环境来说是安全的。... 详细信息

杆状病毒与昆虫宿主相互作用是一种基本的分子和生态问题,不仅在农业上,而且在真核表达系统、基因治疗、蛋白表面展示系统以及基因工程疫苗等方面都有重要的实际应用。杆状病毒还是一种很有潜力的病毒杀虫剂,而且对环境来说是安全的。研究这些相互作用也产生了许多重要和有价值的发现。杆状病毒生命循环中存在两种不同形式的病毒,即包埋型病毒粒子(occlusion derived virus,ODV)和出芽型病毒粒子(budded virus,BV)。ODV包裹于多角体中,主要负责宿主的原发感染;而BV由感染的宿主细胞释放后引发继发感染。病毒侵染起始于敏感的昆虫宿主食用了污染包涵体病毒的植物。在宿主中肠的碱性环境中,多角体溶解释放ODV,ODV与宿主肠道柱状上皮细胞细胞膜融合,通过内吞体进入细胞。之后核衣壳从内吞体中逃脱并被转运到细胞核。病毒转录和复制在细胞核进行,新生的BV粒子从基底膜出芽引起全身感染。杆状病毒与宿主细胞相互作用包括从病毒结合和进入时的相互作用,到宿主基因表达调节,以及修饰与调节细胞和机体所发生的生理和防御的相互作用的复杂和微妙的机制。本文主要以杆状病毒侵染昆虫宿主的过程为线索,总结和评述了杆状病毒与昆虫宿主相互作用方面研究的最新进展,特别是杆状病毒基因在病毒入侵过程中所起的作用。

关键词：杆状病毒昆虫宿主病毒-宿主相互作用侵染过程表达载体

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基于CRISPR-Cas9技术的全基因组敲除筛选体系的建立及其在黄热病毒与宿主相互作用中的初步应用研究

基于CRISPR-Cas9技术的全基因组敲除筛选体系的建立及其在黄热病...

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作者：张家瑜浙江大学

学位级别：硕士

黄热病毒(Yellow Fever Virus,YFV)是黄病毒科(Flavivirus)的原型病毒,能够导致黄热病的发生。黄热病毒主要流行于南美洲、非洲的热带和亚热带地区,据估计,全球每年有80000至200000人感染黄热病毒,其中有30000至60000人死亡。由于缺乏对... 详细信息

黄热病毒(Yellow Fever Virus,YFV)是黄病毒科(Flavivirus)的原型病毒,能够导致黄热病的发生。黄热病毒主要流行于南美洲、非洲的热带和亚热带地区,据估计,全球每年有80000至200000人感染黄热病毒,其中有30000至60000人死亡。由于缺乏对YFV与宿主相互作用的分子机制及其致病性的了解,临床上现阶段并无有效的治疗药物。黄热病毒-17D(YFV-17D)是黄热病毒减毒疫苗株,被广泛应用于预防YFV的感染。YFV-17D与Asibi病毒株仅有0.63%的核酸序列差异以及0.94%的氨基酸序列差异。因为它不具备致病性,所以可以在BSL-2的实验室里培养,是研究YFV的理想模型。全基因组功能丧失筛选(Genome-wide Loss-of-Function Screening)是寻找影响特定生物学行为关键基因的重要工具,有助于我们理解生物学行为内在的分子机制。于基于RNA干扰技术的全基因组敲低筛选系统的相比,CRISPR基因敲除技术具有更高效的敲除效率,更低的脱靶效率等优点。近年来,基于CRISPR-Cas9技术的全基因组敲除筛选系统在病毒-宿主相互作用领域中的应用,有助于我们发现调控病毒感染的宿主因子,是理解病毒感染的分子机制的重要工具和研究平台。例如,该筛选体系的应用在西尼罗河病毒(West Nile Virus,WNV)、登革热病毒(Dengue Virus,DENV)等病毒的研究中发现了新的关键宿主因子,为我们理解和治疗这些病毒引发的疾病提供了新的研究线索。本研究旨在建立基于CRISPR-Cas9技术的全基因组敲除筛选体系,将该系统应用于YFV与宿主相互作用的研究中,以发现调控YFV感染的关键宿主因子。我们使用YFV-17D作为建立该系统的病毒模型,包装出具有感染能力的完整YFV-17D疫苗株病毒。首先,我们验证了 YFV-17D可以在人类肝癌细胞系Huh7细胞中完成完整的生命周期,能包装出具有感染能力的完整病毒。因为该细胞株能在感染YFV-17D时出现细胞病理效应(Cytopathic effect,CPE),所以我们选取了 Huh7细胞作为CRISPR-Cas9全基因组敲除筛选调控YFV-17D感染的宿主因子的细胞模型。随后,我们将CRISPR文库 GeCKO(Genome-scale CRISPRKnock-Out)文库包装成慢病毒文库后转导Huh7细胞,并使用YFV-17D进行感染。感染后筛选到对YFV-17D产生抵抗从而存活下来的细胞群,通过对他们所携带的guide RNA(gRNA)进行深度测序,以检测这些细胞中gRNA的丰度,我们鉴定出了数个候选的正向调控YFV-17D感染的宿主因子。其中,靶向基因ZNF629的gRNA具有最多拷贝数和富集。通过建立2株携带靶向ZNF629基因gRNA并对YFV-17D感染产生高抵抗力的单克隆细胞株,我们发现这2株细胞上清培养液中释放的YFV-17D病毒颗粒显著减少,这些初步数据提示ZNF629可能是一个能正向调控YFV-17D感染的宿主因子。在后续实验中,我们还需要验证ZNF629是否为真实的正向调控YFV-17D感染的宿主因子以及对它如何调控其感染的分子机制做深入的研究。综上所述,我们建立了基于CRISPR-Cas9技术的全基因组敲除筛选系统,以Huh7细胞为细胞模型,应用于黄热病毒与宿主相互作用的研究中。我们发现部分Huh7细胞对YFV-17D感染产生抵抗并筛选到了包括ZNF629在内的数个调控该病毒感染的候选宿主因子。本文所建立的应用于YFV与宿主相互作用研究的筛选系统筛选方法简单有效,在YFV研究中有重要的应用价值。

关键词：黄热病毒 CRISPR-Cas9 全基因组筛选病毒-宿主相互作用

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微小RNA在病毒与宿主相互作用中的功能

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微生物与感染 2017年第1期12卷 57-64页

作者：魏建春安静首都医科大学病原生物学教研室北京100069

微小RNA(microRNA,miRNA)是一类长度为22个核苷酸左右的内源性非编码小RNA分子。自1993年最先从秀丽隐杆线虫体内发现miRNA以来,目前为止已有35 000多条miRNA在植物、动物及病毒中被发现。它们作为重要的转录调控因子,参与细胞分化、凋... 详细信息

微小RNA(microRNA,miRNA)是一类长度为22个核苷酸左右的内源性非编码小RNA分子。自1993年最先从秀丽隐杆线虫体内发现miRNA以来,目前为止已有35 000多条miRNA在植物、动物及病毒中被发现。它们作为重要的转录调控因子,参与细胞分化、凋亡、代谢、信号转导、免疫等多种生物学过程。病毒和宿主细胞均可编码miRNA,病毒编码的miRNA可改变宿主内环境,而宿主编码的miRNA则可影响病毒生存。本文就miRNA对病毒与宿主相互作用的调控进行综述。

关键词：微小RNA 疱疹病毒肿瘤病毒-宿主相互作用

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miRNA调控病毒与宿主细胞相互作用的研究进展

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中国生物制品学杂志 2010年第5期23卷 549-553页

作者：张传军连海长春市朝阳区人民医院检验科长春130021 军事医学科学院军事兽医研究所长春130062

病毒是专性细胞内寄生物,其复制很大程度上依赖于宿主细胞。病毒与宿主细胞的相互作用对二者均具有重要意义。微小RNA(miRNA)是在多细胞真核生物中新近发现的一类重要的基因表达转录后调控分子,其作为关键的效应分子,在复杂的病毒与宿... 详细信息

病毒是专性细胞内寄生物,其复制很大程度上依赖于宿主细胞。病毒与宿主细胞的相互作用对二者均具有重要意义。微小RNA(miRNA)是在多细胞真核生物中新近发现的一类重要的基因表达转录后调控分子,其作为关键的效应分子,在复杂的病毒与宿主相互作用网络中发挥重要作用。病毒和宿主细胞均可编码miRNA。病毒编码的miRNA能够直接改变宿主环境,包括免疫系统分子构成;而细胞编码的miRNA能够直接影响病毒的复制周期。本文主要对miRNA调控病毒与宿主细胞相互作用的最新进展作一综述。

关键词：微小RNA 调控分子病毒-宿主相互作用

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猪脑心肌炎病毒3AB蛋白与宿主蛋白RPL11相互作用的鉴定

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中国预防兽医学报 2018年第5期40卷 375-380页

作者：薛娟张昆丽张元峰黄丽杨玉莹翁长江长江大学动物科学学院湖北荆州434025 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所基础免疫创新团队/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

为了研究与猪脑心肌炎病毒(EMCV)3AB相互作用的宿主蛋白,本实验采用酵母双杂交方法筛选BHK-21细胞cDNA酵母表达文库,获得6个与EMCV 3AB相互作用的宿主蛋白(RFC5、LRWD1、PIH1D1、RPL11、RPS20和LGALS1),经分析显示这些蛋白分别参与DNA... 详细信息

为了研究与猪脑心肌炎病毒(EMCV)3AB相互作用的宿主蛋白,本实验采用酵母双杂交方法筛选BHK-21细胞cDNA酵母表达文库,获得6个与EMCV 3AB相互作用的宿主蛋白(RFC5、LRWD1、PIH1D1、RPL11、RPS20和LGALS1),经分析显示这些蛋白分别参与DNA复制、有丝分裂和细胞凋亡等过程;酵母共转化试验与免疫共沉淀试验证实EMCV 3AB和RPL11两者之间存在特异性结合;激光共聚焦试验显示EMCV 3AB与RPL11共同过度表达时,二者共定位在细胞核中,而在EMCV感染状态下,3AB与RPL11主要共定位在细胞质中。另外,EMCV感染HeLa细胞能降低细胞中p53的蛋白水平,但3AB并不直接促进p53蛋白降解,表明EMCV 3AB对RPL11-MDM2-p53通路无影响。本研究发现并证实了RPL11与EMCV 3AB之间的相互作用,为进一步研究RPL11蛋白在EMCV复制中的作用奠定了基础。

关键词：猪脑心肌炎病毒 3AB蛋白 60S核糖体蛋白L11 病毒-宿主相互作用

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寨卡病毒及其与宿主蛋白相互作用研究进展

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病毒学报 2020年第6期36卷 1201-1207页

作者：任琴杜寿文吕孔鹏张星艳戴少波李体远田明尧吴诗品李昌暨南大学第二临床医学院(深圳市人民医院)感染内科深圳518000 军事科学院军事医学研究院军事兽医研究所中国医学科学院人兽共患病毒病防控关键技术研究创新单元长春130062

寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)作为一种新出现的蚊媒病原体,与成人格林-巴利综合征(Guillain–Barresyndrome,GBS)、新生儿小头畸形以及神经系统缺陷等疾病有关。2016年世界卫生组织将寨卡疫情列为国际关注的公共卫生突发事件,近年来关于Z... 详细信息

寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)作为一种新出现的蚊媒病原体,与成人格林-巴利综合征(Guillain–Barresyndrome,GBS)、新生儿小头畸形以及神经系统缺陷等疾病有关。2016年世界卫生组织将寨卡疫情列为国际关注的公共卫生突发事件,近年来关于ZIKV病原学、流行病学、感染与致病、抗病毒免疫应答、疫苗与药物的研究越来越多,为有效防控该病提供了理论依据和具体实践。本文就ZIKV蛋白组成及相应功能、感染周期、ZIKV受体及ZIKV-宿主相互作用等的最新研究进展进行综述,旨在正确认识和深入理解ZIKV致病与机体抗病相关机制,为设计有效的预防或治疗疫苗或药物提供参考资料。

关键词：寨卡病毒(ZIKV) 蛋白组成及功能病毒受体病毒-宿主相互作用

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猪瘟病毒衣壳蛋白与宿主丝/苏氨酸蛋白激酶N1相互作用的鉴定

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中国预防兽医学报 2015年第7期37卷 495-498页

作者：何文瑞廖亚金李素冯烁董泓陈佳宁仇华吉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为筛选并鉴定与猪瘟病毒(CSFV)衣壳(C)蛋白相互作用的宿主蛋白,本研究采用酵母双杂交技术以CSFV C蛋白为诱饵从猪外周血单个核细胞(PBMC)c DNA表达文库中筛选与之相互作用的宿主蛋白,共筛选到6种蛋白,分别为ATP5B、SON3、PKN1、PCBP1、R... 详细信息

为筛选并鉴定与猪瘟病毒(CSFV)衣壳(C)蛋白相互作用的宿主蛋白,本研究采用酵母双杂交技术以CSFV C蛋白为诱饵从猪外周血单个核细胞(PBMC)c DNA表达文库中筛选与之相互作用的宿主蛋白,共筛选到6种蛋白,分别为ATP5B、SON3、PKN1、PCBP1、RPS20和IQGAP1,根据Gene Ontology分析结果,这些蛋白分别参与细胞的增殖和代谢等过程。本研究选取丝/苏氨酸蛋白激酶N1(PKN1)进行进一步验证,经酵母共转化试验、免疫共沉淀试验和GST pull-down试验证实,宿主PKN1蛋白与CSFV C蛋白之间存在特异性结合。本研究首次证明PKN1与CSFV蛋白之间的相互作用关系,为进一步研究PKN1蛋白在CSFV感染过程中发挥的作用奠定了基础。

关键词：猪瘟病毒 C蛋白丝/苏氨酸蛋白激酶N1 病毒-宿主相互作用

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猪脑心肌炎病毒VP1蛋白与宿主RPS20蛋白相互作用研究

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中国预防兽医学报 2018年第8期40卷 715-719页

作者：张元峰张昆丽薛娟黄丽杨玉莹翁长江长江大学动物科学学院湖北荆州434025 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所基础免疫创新团队/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

为筛选并鉴定与猪脑心肌炎病毒(EMCV) VP1蛋白相互作用的宿主蛋白,本实验采用酵母双杂交系统筛选BHK-21细胞cDNA酵母表达文库。酵母共转化和免疫共沉淀试验表明VP1和RPS20蛋白之间存在特异性相互作用。激光共聚焦试验显示,过表达的VP1和... 详细信息

为筛选并鉴定与猪脑心肌炎病毒(EMCV) VP1蛋白相互作用的宿主蛋白,本实验采用酵母双杂交系统筛选BHK-21细胞cDNA酵母表达文库。酵母共转化和免疫共沉淀试验表明VP1和RPS20蛋白之间存在特异性相互作用。激光共聚焦试验显示,过表达的VP1和RPS20共定位于细胞质中。本研究初步证实了RPS20与EMCV VP1蛋白之间的相互作用,为进一步研究RPS20蛋白在EMCV感染过程中的生物学功能奠定了基础。

关键词：猪脑心肌炎病毒 VP1蛋白核糖体蛋白S20 病毒-宿主相互作用

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猪瘟病毒C蛋白与宿主β-actin相互作用的鉴定

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畜牧兽医学报 2014年第12期45卷 1995-1999页

作者：董泓李丹陈佳宁李素何文瑞冯烁贺番廖亚金孙元胡永浩甘肃农业大学动物医学院兰州730000 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

为了研究猪瘟病毒(CSFV)和宿主间的相互作用,采用Co-IP方法,利用CSFV C蛋白从PK-15细胞中钓取与其相互作用的宿主蛋白质,经SDS-PAGE电泳,银染,选取差异条带,进行质谱分析,选取β-actin蛋白作为研究的对象。经内源性Co-IP试验和GST pulld... 详细信息

为了研究猪瘟病毒(CSFV)和宿主间的相互作用,采用Co-IP方法,利用CSFV C蛋白从PK-15细胞中钓取与其相互作用的宿主蛋白质,经SDS-PAGE电泳,银染,选取差异条带,进行质谱分析,选取β-actin蛋白作为研究的对象。经内源性Co-IP试验和GST pulldown试验进一步证实CSFV C蛋白和β-actin可以特异性结合,激光共聚焦试验表明两者共定位于细胞质。本研究表明CSFV C蛋白与宿主细胞β-actin蛋白存在相互作用,为深入研究CSFV蛋白质与宿主蛋白质间相互作用提供了实验依据。

关键词：猪瘟病毒 C蛋白 β-actin 病毒-宿主相互作用

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牛口蹄疫合成肽疫苗的研制及口蹄疫病毒蛋白与宿主细胞蛋白相互作用的研究

牛口蹄疫合成肽疫苗的研制及口蹄疫病毒蛋白与宿主细胞蛋白相互作...

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作者：张中旺中国农业科学院

学位级别：博士

口蹄疫(Foot-and-mouth disease,FMD)是一种具有高度传染性和极具经济破坏性的病毒性疾病,主要感染牛、羊等反刍动物、猪以及某些野生类偶蹄动物。口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)是引发该病的病原体,隶属小RNA病毒科口... 详细信息

口蹄疫(Foot-and-mouth disease,FMD)是一种具有高度传染性和极具经济破坏性的病毒性疾病,主要感染牛、羊等反刍动物、猪以及某些野生类偶蹄动物。口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)是引发该病的病原体,隶属小RNA病毒科口蹄疫病毒属。虽然针对FMD采取了严格的检疫制度以及疫苗接种等防控措施,但在我国及世界其它地区仍时有发生。研制更加安全有效的FMD新型疫苗具有重要性和紧迫性。VP1是FMDV最重要的结构蛋白和免疫原性蛋白,常被广泛应用于各种新型基因工程疫苗的研究。VP1蛋白通过与病毒自身编码蛋白或宿主细胞蛋白相互作用而在病毒感染和抗宿主免疫等方面发挥多种功能。2B蛋白是FMDV的一个非结构蛋白,具有多种活性,在FMDV感染和释放以及诱导自噬等过程中发挥重要作用。只有彻底了解FMDV蛋白与宿主细胞蛋白之间的相互作用关系及其发挥作用的各种机制,才能研制出更加安全有效的疫苗来预防该病。本研究初步研制了牛FMD合成肽疫苗,探索了作为新型疫苗主要候选元件的VP1蛋白与宿主的相互作用,并研究了非结构蛋白2B的宿主互作蛋白及其功能,为深入了解FMDV致病的分子机理以及研制新型疫苗提供了新思路和理论依据。本研究所获得的主要结果如下:1.以FMDV A/HuBWH/CHA/2009流行毒株结构蛋白VP1上12969位氨基酸、非结构蛋白3A上215位氨基酸、3D上34670位氨基酸为基础表位片段,设计并构建了三组A型FMD合成肽疫苗,分别在豚鼠和牛体内进行了免疫效力评价。结果显示以PB组,即3D(34670)-PPS-VP1(12934(T→C)56(Q→C)69),免疫动物产生的中和抗体滴度最高,攻毒保护效力最强。用其以50μg/只的剂量免疫豚鼠2次,可100%的抵抗同型病毒的攻击;以100μg/头份的剂量免疫牛1次,可达到60%的保护率。因此PB合成肽,有希望发展成为生产实践中有效的牛FMD合成肽疫苗。本研究为进一步发展和完善FMD合成肽疫苗奠定了一定的基础。2.采集经FMDV感染七天后的长白猪敏感组织,构建了高质量的cDNA表达文库。利用分裂-泛素酵母双杂交系统,以FMDV VP1为诱饵蛋白筛选猪组织cDNA文库,结果发现宿主细胞蛋白zyxin的C末端第32972位氨基酸能够与FMDV VP1蛋白发生相互作用。利用免疫共沉淀技术以及激光共聚焦技术,进一步验证了FMDV VP1蛋白与宿主细胞蛋白zyxin确实存在相互作用且在细胞中存在共定位。在研究zyxin蛋白对FMDV增殖的作用中发现,BHK-21细胞中zyxin蛋白的表达量随FMDV感染时间上调。之后,利用靶向zyxin基因的特异性干扰小RNA分子沉默细胞内源性zyxin蛋白的表达,经TaqMan荧光定量PCR检测和细胞毒价检测,发现下调zyxin蛋白的表达可抑制FMDV在细胞中的增殖,相反,过表达zyxin蛋白时可促进FMDV的增殖。3.以FMDV 2B为诱饵蛋白筛选猪组织cDNA文库,发现宿主细胞蛋白eEF1G的第20837位氨基酸能够与FMDV 2B蛋白相结合。通过免疫共沉淀技术以及激光共聚焦技术,进一步证实FMDV 2B蛋白与eEF1G蛋白确实存在相互作用且在细胞中存在共定位。在研究eEF1G蛋白对FMDV增殖的作用中发现,细胞eEF1G表达的上调促进FMDV的增殖,而eEF1G表达的敲低则抑制FMDV的增殖。这一发现与eEF1G的表达量随FMDV感染上调的试验结果一致。

关键词：口蹄疫病毒合成肽疫苗病毒-宿主相互作用 VP1 2B

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