检索结果-内蒙古大学图书馆

中国科学：生命科学 2013年第11期43卷 972-980页

作者：蒋春苗程在全孙正文李定琴余腾琼殷富有钟巧芳张敦宇付坚王玲仙黄兴奇云南大学生命科学学院昆明650091 云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所昆明650223 云南农业大学农学与生物技术学院昆明650201

以云南普通野生稻为材料,利用抑制差减杂交技术(SSH),构建了白叶枯病菌胁迫的云南普通野生稻特异表达基因的差减文库.通过对文库所有阳性单克隆进行测序,聚类分析后共获得494条高质量的表达序列标签(EST).经过BlastN分析,有417条与已知... 详细信息

以云南普通野生稻为材料,利用抑制差减杂交技术(SSH),构建了白叶枯病菌胁迫的云南普通野生稻特异表达基因的差减文库.通过对文库所有阳性单克隆进行测序,聚类分析后共获得494条高质量的表达序列标签(EST).经过BlastN分析,有417条与已知功能的序列有较高同源性;经BlastX分析,有104条EST与未知功能蛋白或假定蛋白有较高相似性,49条EST未能找到同源匹配,341条EST与已知功能蛋白有较高同源性.初步分析发现,这些基因主要涉及能量代谢、蛋白质代谢、核酸代谢、防御与抗逆应答反应、信号转导、光合作用及膜运输等代谢过程.使用半定量RT-PCR研究了7个可能与白叶枯病抗性相关的EST序列在云南普通野生稻对照和白叶枯病菌处理的叶片中的表达情况,并获得这些基因的表达谱.结果发现,克隆编号为OR7,OR68和OR826的EST受白叶枯病菌胁迫诱导上调表达,其中OR826 EST在蛋白数据库中无同源序列,可能是一类新的白叶枯病抗性基因,而组成型表达的OR143 EST在对照和接菌处理的叶片中均能检测到其mRNA的表达,但其表达量在白叶枯病菌胁迫48 h后逐渐增强,推测这些基因直接参与了云南普通野生稻抗病防御反应.本研究为从云南普通野生稻中发掘和克隆新的白叶枯病抗性基因提供了理论依据,为进一步研究云南普通野生稻抗白叶枯病的分子机制奠定了基础.

关键词：云南普通野生稻白叶枯病菌抑制差减杂交生物信息学分析半定量RT-PCR 白叶枯病抗性基因

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白叶枯病菌胞内蛋白的提取及电泳分离方法的构建

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基因组学与应用生物学 2015年第1期34卷 195-202页

作者：于海天阿新祥刘自单张恩来汤翠凤杨雅云董超张斐斐陈丹陈丽娟戴陆园云南农业大学昆明650091 云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所云南省农业生物技术重点实验室农业部西南作物基因资源与种质创制重点实验室农业部云南稻种资源科学观测实验站昆明650223

水稻白叶枯病菌已成为研究植物-病原物互作模式的病菌。要利用蛋白质组学方法深入研究其生物学特性和致病机理,人们面临着其胞内蛋白提取和有效分离方法尚未建立的问题。本文采用TCA丙酮沉淀法和裂解液沉淀法提取白叶枯病菌胞内蛋白,利... 详细信息

水稻白叶枯病菌已成为研究植物-病原物互作模式的病菌。要利用蛋白质组学方法深入研究其生物学特性和致病机理,人们面临着其胞内蛋白提取和有效分离方法尚未建立的问题。本文采用TCA丙酮沉淀法和裂解液沉淀法提取白叶枯病菌胞内蛋白,利用两种等点聚焦程序(IEFⅠ,IEFⅡ)进行一向等电聚焦,用三种蛋白上样浓度(400μg,600μg,800μg)进行双向电泳,G-250烤染后,通过Imagemaster软件对双向电泳图谱进行比较分析。结果表明,裂解液沉淀法、等电聚焦程序Ⅱ(IEFⅡ)、600μg上样浓度三者相结合的方法是提取和分离白叶枯病菌胞内蛋白的理想方法,能获得较好的实验效果。该方法的建立为白叶枯病菌蛋白质组学研究奠定基础。

关键词：白叶枯病菌胞内蛋白提取双向电泳分离方法

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白叶枯病菌拮抗菌筛选及水稻叶围微生物互作研究初报

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中国水稻科学 2000年第3期14卷 161-164页

作者：赵新华陈卫良李德葆浙江大学生物技术研究所

:1 998年 7月～ 1 0月 ,于田间汕优 6 3水稻叶片上分离采集微生物 ,并进行叶围微生物鉴定 ,以筛选白叶枯病拮抗菌。结果表明 :除极少量分布的真菌和细菌外 ,主要种群包括真菌类群 Alternaria和 Fusarium属 ;细菌类群 Flavobacterium,Xan... 详细信息

:1 998年 7月～ 1 0月 ,于田间汕优 6 3水稻叶片上分离采集微生物 ,并进行叶围微生物鉴定 ,以筛选白叶枯病拮抗菌。结果表明 :除极少量分布的真菌和细菌外 ,主要种群包括真菌类群 Alternaria和 Fusarium属 ;细菌类群 Flavobacterium,Xanthomonas,Pseudomonas和 Bacillus属。对白叶枯病菌 (Xanthomonas oryzaepv. oryzae)具有明显拮抗作用的微生物为Bacillus属 ,而且 Bacillus属细菌对其余大部分叶围微生物具有程度不同的拮抗作用。

关键词：水稻叶围微生物白叶枯病菌拮抗菌生物防治

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水稻对白叶枯病菌抗性与活性氧关系的研究

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中山大学学报（自然科学版） 2002年第4期41卷 78-81页

作者：廖朝晖朱必凤刘安玲韶关学院英东生物工程学院广东韶关512005

以 3种水稻白叶枯病菌和 4个抗、感水稻品种为样品 ,研究了水稻对白叶枯病菌抗性与白叶枯病菌细胞保护酶以及氧自由基的关系。研究结果表明 :接种 15d的水稻SOD、POD显示活性 ,而CAT无活性 ;用水稻叶片酶解液培养 3种病原菌 ,菌体显示SO... 详细信息

以 3种水稻白叶枯病菌和 4个抗、感水稻品种为样品 ,研究了水稻对白叶枯病菌抗性与白叶枯病菌细胞保护酶以及氧自由基的关系。研究结果表明 :接种 15d的水稻SOD、POD显示活性 ,而CAT无活性 ;用水稻叶片酶解液培养 3种病原菌 ,菌体显示SOD和CAT活性 ,但未测出POD活性。抗、感水稻对白叶枯病菌的影响不同 ,感病水稻使病原菌SOD和CAT活性升高 ,抗病水稻使白叶枯病菌SOD、CAT活性降低。而抗、感水稻对白叶枯病菌氧自由基的影响 ,正好与对酶的影响相反。

关键词：抗性活性氧水稻白叶枯病菌氧自由基细胞保护酶抗病机制致病机制

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白叶枯病菌xopXoo基因在致病性中的作用

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中国水稻科学 2007年第3期21卷 242-246页

作者：杨娟许云鹤邹丽芳陈功友南京农业大学植物保护学院农业部病虫监测与治理重点开放实验室江苏南京210095

辣椒斑点病菌(Xanthomonas ***,Xcv)在非寄主烟草上的过敏反应与xopX基因有关,但在白叶枯病菌(Xanthomonas ***,Xoo)基因组中并未标注xopX同源基因的功能。为研究白叶枯病菌中xopX同源基因在致病性中的作用,对白叶枯病菌的xopXoo基因进... 详细信息

辣椒斑点病菌(Xanthomonas ***,Xcv)在非寄主烟草上的过敏反应与xopX基因有关,但在白叶枯病菌(Xanthomonas ***,Xoo)基因组中并未标注xopX同源基因的功能。为研究白叶枯病菌中xopX同源基因在致病性中的作用,对白叶枯病菌的xopXoo基因进行了克隆和突变,并对xopXoo突变体在非寄主烟草上的过敏反应、水稻苗期的水浸症状以及成株期的致病性和病菌生长能力进行了分析。测定结果显示,xopXoo基因突变并不改变白叶枯病菌在烟草上激发过敏反应和在水稻上产生水浸症状能力,但突变菌株在成株期水稻上的致病性和菌体生长能力显著下降。遗传互补能够恢复xopXoo突变体的致病性和菌体生长能力,表明xopXoo是白叶枯病菌的致病性基因。还对白叶枯病菌激发非寄主烟草产生过敏反应的可能基因进行了讨论。

关键词：水稻白叶枯病菌 xopXoo基因过敏反应致病性

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白叶枯病菌与非亲和水稻IRBB4悬浮细胞互作中蛋白类激发子的纯化和鉴定

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植物病理学报 2005年第1期35卷 55-59页

作者：高学文张燕杨春王金生南京农业大学农业部病虫监测与治理重点开放实验室南京210095

本研究对水稻白叶枯病菌与水稻悬浮细胞非亲和互作中蛋白类激发子进行了分离纯化和鉴定。白叶枯病菌JXOⅤ与水稻IRBB4和IR24悬浮细胞互作 36h后的上清液,经Q Sepharose阴离子交换层析柱分离,对分离的各组分进行抗病性诱导测定,结果表明... 详细信息

本研究对水稻白叶枯病菌与水稻悬浮细胞非亲和互作中蛋白类激发子进行了分离纯化和鉴定。白叶枯病菌JXOⅤ与水稻IRBB4和IR24悬浮细胞互作 36h后的上清液,经Q Sepharose阴离子交换层析柱分离,对分离的各组分进行抗病性诱导测定,结果表明JXOⅤ与IRBB4非亲和互作的上清液中存在蛋白类激发子。有活性的蛋白组分经阴离子交换层析柱Mono Q进一步纯化后,SDS PAGE分析鉴定出 2个具激发活性的蛋白,其分子量分别为 17. 2kD和 49. 2kD,等电点分别为 5. 8和 6. 2。利用上述激发子处理水稻能减少病斑长度并诱导水稻防卫酶活性的增加。

关键词：白叶枯病菌水稻悬浮细胞非亲和互作蛋白类激发子 sDs—PAGE

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白叶枯病菌对杂交稻幼苗叶片中活性氧清除剂的影响

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作物学报 1998年第1期24卷 118-122页

作者：肖用森王正直郭绍川湘潭师范学院生物系湖南湘潭411201

不同抗性组合杂交稻威优6(V_6)和汕优63(S_(63)),三叶期幼苗接种白叶枯病菌,染病后叶片中超氧化物岐化酶(SOD)、过氧化物酶(POX)和苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性显著增强.抗坏血酸(ASA)、谷胱甘肽(GSH)和叶绿素含量下降,丙二醛(MDA)积累,膜... 详细信息

不同抗性组合杂交稻威优6(V_6)和汕优63(S_(63)),三叶期幼苗接种白叶枯病菌,染病后叶片中超氧化物岐化酶(SOD)、过氧化物酶(POX)和苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性显著增强.抗坏血酸(ASA)、谷胱甘肽(GSH)和叶绿素含量下降,丙二醛(MDA)积累,膜透性增大.抗病组合V_6的变化幅度明显大于感病组合S_(63).染病稻苗叶片膜脂脂肪酸组分发生变化,饱和脂肪酸的含量增加,不饱和脂肪酸指数(IUFA)下降,V_6变化较S_(63)小.植物在染病过程中体内活性氧清除剂的变化与植物的抗病性有密切关系.

关键词：杂交水稻白叶枯病菌活性氧清除剂膜脂过氧化

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水稻白叶枯病菌无毒基因的研究初报

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高技术通讯 1995年第1期5卷 5-9页

作者：徐文联李向红张学君王金生南京农业大学植保系

报道了用基因标签法克隆水稻白叶枯病菌无毒基因的研究过程。通过接合实验，将Ｔｎ５引入水稻白叶枯病菌日本系统５号小种中去，在ＬＢ＋Ｋｍ平板上筛选了２５００个接合子；用剪叶接种法，将接合子接种水稻品种ＩＲ２６，得到了４个无... 详细信息

报道了用基因标签法克隆水稻白叶枯病菌无毒基因的研究过程。通过接合实验，将Ｔｎ５引入水稻白叶枯病菌日本系统５号小种中去，在ＬＢ＋Ｋｍ平板上筛选了２５００个接合子；用剪叶接种法，将接合子接种水稻品种ＩＲ２６，得到了４个无毒基因突变体，分别用粘粒载体ｐＳａ７４７和质粒载体ｐＵＣ１９构建了ＪＸＯＶ核基因文库和无毒基因探针，采用菌落原位杂交法在基因库中钓取了１３个无毒基因克隆。该无毒基因片断在此病原的不同小种中均有同源性。

关键词：水稻白叶枯病菌无毒基因突变体基因抗病性

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水稻白叶枯病菌中超氧阴离子的非酶来源分析

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植物生理与分子生物学学报 2007年第2期33卷 146-152页

作者：李欣李红玉冯汉青王金生兰州大学生命科学学院兰州730000 南京农业大学农业部病虫监测与治理重点实验室南京210095

以电子自旋共振法及羟胺氧化法检测超氧阴离子,分析水稻白叶枯病原细菌OS-14细胞中超氧阴离子的来源。结果显示,OS-14细胞中的超氧阴离子释放活性主要位于胞外,因此胞外组分很可能为主要的释放位点。实验从多个角度排除了胞外组分中蛋... 详细信息

以电子自旋共振法及羟胺氧化法检测超氧阴离子,分析水稻白叶枯病原细菌OS-14细胞中超氧阴离子的来源。结果显示,OS-14细胞中的超氧阴离子释放活性主要位于胞外,因此胞外组分很可能为主要的释放位点。实验从多个角度排除了胞外组分中蛋白质酶类分子对超氧阴离子释放贡献的可能性,有机酸分子有可能是水稻白叶枯病菌OS-14细胞胞外组分中超氧阴离子释放的非酶分子。

关键词：白叶枯病菌超氧阴离子(O2^-·) 电子自旋共振(ESR) 胞外组分非酶分子

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白叶枯病菌效应子PthXo1向水稻细胞质和细胞核转运的调控机制

白叶枯病菌效应子PthXo1向水稻细胞质和细胞核转运的调控机制

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作者：李萍南京农业大学

学位级别：博士

水稻白叶枯病是水稻种植中的一类重要细菌病害。稻黄单胞菌分泌的效应蛋白对于病害的发生极为重要,本文从两个方面介绍了水稻白叶枯病菌效应子PthXo1转运的机制,从水稻水通道蛋白和水稻核输入蛋白入手,阐明了效应蛋白PthXo1从细胞质转... 详细信息

水稻白叶枯病是水稻种植中的一类重要细菌病害。稻黄单胞菌分泌的效应蛋白对于病害的发生极为重要,本文从两个方面介绍了水稻白叶枯病菌效应子PthXo1转运的机制,从水稻水通道蛋白和水稻核输入蛋白入手,阐明了效应蛋白PthXo1从细胞质转运到水稻细胞核的过程中水稻水通道蛋白和核输入蛋白对于PthXo1转运所发挥的调控作用。革兰氏阴性植物病原细菌主要是通过Ⅲ型分泌系统将有毒性或无毒性的效应蛋白转运到寄主细胞内从而引发一系列的抗病或感病性互作反应。许多植物致病菌依赖于向植物细胞中分泌毒性的类似转录激活效应(TALE)蛋白来激活寄主植物的感病基因的表达而导致植物发病。这一过程需要依赖于TALE与植物细胞核中寄主靶标基因启动子上的特定元件的结合。稻黄单胞菌(Xanthomonas oryzae ***,Xoo)分泌的效应蛋白TALEs可以定位在寄主植物的细胞核内,结合靶标基因的启动子区域进而发挥其转录调控的作用。水通道蛋白(aquaporins,AQPs)是可以促进水和中性小分子物质跨大多数生物的生物膜运输的膜通道蛋白质。在稻黄单胞菌侵染水稻的过程中,水稻中的水通道蛋白质在侵染过程中发挥着重要的作用,本研究发现,OsPIP1家族的蛋白质OsPIP1;3可以影响白叶枯病菌在侵染水稻时在水稻叶片上的定殖以及促进TALE效应蛋白的转运。经前期筛选,发现了 harpin蛋白与水稻的水通道蛋白之间存在着相互作用。1水稻水通道蛋白调控效应子PthXo1转运机制水通道蛋白可以促进水和中性小分子物质跨生物膜运输的膜通道蛋白质。在本课题组前期的研究基础上,已证实水稻水通道蛋白I家族中的OsPIP1;3和白叶枯病原菌的harpins蛋白hpal互作。但Hpa1Xoo-OsPIP1;3二者特异性互作的生物学功能仍然未曾有报道。在本章节研究中,我们在已构建好的沉默株系、过表达株系以及TALEN敲除突变体上分别测定了 PthXo1的转运作用。通过水稻叶片含菌量测定以及荧光定量法进一步测定了 PthXol的靶标基因Os8N3表达检测等手段探究不同OsPIP1;3转基因株系对水稻白叶枯病菌存在抗感性差异的调控机理。结果表明,通过接种白叶枯病菌PXO99A菌株在野生型水稻品种日本晴以及OsPIP1;3过表达、OsPIP1;3敲除或沉默株系上引起的水渍状病斑发病程度来测定其致病性。与野生型菌株PXO99A相比较,hpa1基因缺失突变体菌株在不同OsPIP1;3转基因株系上引起的水渍状病斑发病症状较对照明显的减弱。我们应用传统的腺苷酸环化酶(adenylate cyclase,Cya)报告系统进一步对PXO99A的主要毒力TAL效应蛋白PthXol的转运过程进行了检测。进一步明确了 PthXo1-cya融合蛋白从细菌细胞到水稻细胞质中的转位过程。本研究除了测定二者的生物学功能之外,还进一步的分析了其关键的互作功能域,通过利用水稻东格鲁杆状病毒Rice tungro bacilliform virus(RTBV)介导的过表达系统,分别构建了 OsPIP1;3和OsPIP1;1的LE功能域互换的水稻株系。在不同的功能域替换株系上测定了 PthXol的转运,阐明了 Hpa1Xoo-OsPIP1;3二者起关键互作的作用位点在OsPIP1;3的LE功能域。综上,Hpa1Xoo-OsPIP1;3二者的互作影响TAL效应蛋白PthXo1从白叶枯病菌向水稻胞内的转运过程,进而调控水稻水通道蛋白与白叶枯病菌的互作,影响水稻白叶枯菌的致病性。2水稻白叶枯病菌TAL效应子PthXo1在水稻中跨核运输机制在稻黄单胞菌分泌的效应蛋白中,有一类被称为TAL效应子(Transcription Activator-Like Effectors,简称TALEs),可定位到寄主细胞核内,通过结合靶标基因的启动子区域进行转录调控,从而引起寄主的感病或抗病反应。在此过程中,TALEs的核质转运是其能否发挥调控作用的关键步骤。通过酵母双杂交和双分子荧光互补试验,筛选与TAL效应子PthXo1互作的水稻核输入蛋白质(16个水稻核输入相关蛋白),筛选得知,效应子PthXo1可以与水稻核输入蛋白OsIMPα1a和OsIMPα1b互作。为了进一步的研究二者互作的生物学意义,运用水稻东格鲁杆状病毒系统构建了OsIMPα1a和OsIMPα1b的过表达突变体,对其致病力进行了测定,结果表明,过表达OsImpα1a和OsImpα1b可以促进TAL效应子PthXo1在水稻上的毒力作用。应用烟草脆裂病毒体系在烟草上沉默了OsImpα的同源基因NbImpα,研究发现NbImpα影响烟草的生长,并且使得黄单胞菌在非寄主烟草上引起的过敏反应加重。进一步说明PthXol的跨核转运过程中水稻核输入蛋白质OsIMPαla和OsIMPαlb

关键词：水稻水通道蛋白白叶枯病菌 PthXo1 核输入蛋白质效应子转运

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