检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：仲飞亮天津大学

学位级别：博士

国际GP-Write旨在从头设计合成多物种大型基因组,通过重新编码全基因组来构建抵抗天然病毒感染的“超安全”细胞。然而这一计划的实施面临大型基因组设计、合成、组装和转移等关键技术难题的突破。混合谱系白血病(Mixed Lineage Leukemi... 详细信息

国际GP-Write旨在从头设计合成多物种大型基因组,通过重新编码全基因组来构建抵抗天然病毒感染的“超安全”细胞。然而这一计划的实施面临大型基因组设计、合成、组装和转移等关键技术难题的突破。混合谱系白血病(Mixed Lineage Leukemia,MLL)是典型的与染色体异常相关的血液肿瘤,主要是由于11号染色体2区3带上的MLL基因与各种不同的伙伴基因发生融合,产生具有新功能的融合蛋白直接激活下游如MEIS1和HOXA9等关键靶基因的持续表达,从而导致白血病的发生。因此,对MLL染色体易位相关基因的进行设计合成是一种天然契合的适合用于探索合成基因组关键技术的研究。本研究主要对MLL染色体易位相关的MLL、AF4、AF6、AF9和MA9G 5个目标基因进行从头设计、合成组装、转移与功能验证。针对基因设计关键技术难点,本研究对MLL、AF4、AF6、AF9和MA9G 5个基因进行从头设计,包含:(1)为了区别天然DNA序列与合成DNA序列,对基因局部外显子的密码子进行同义替换,形成人工标签;(2)为了将合成的基因整合到目标细胞中,建立可能的组织特异性表达小鼠模型,在合成序列中引入Lox P位点;(3)为了高比例获得含合成基因的阳性转化细胞,引入荧光蛋白和抗性等筛选标签。针对基因合成组装关键技术难点,根据所设计的基因序列,本研究基于酵母醋酸锂转化和酵母原生质体转化方法,在酵母胞内组装获得MLL(90 kb)、AF4(206 kb)、AF6(145 kb)、AF9(280 kb)和MA9G(64 kb)5个基因。针对基因转移关键技术难点,本研究开发了适用于MLL染色体易位相关基因的转移方法:(1)基于脂质体转染试剂,利用秋水仙碱将CHO-K1细胞处理至有丝分裂中期使其体积增大,增加与DNA-脂质体复合物接触面积,从而提高DNA的转移效率。(2)以酵母细胞核为穿梭载体,开发一种酵母细胞核携带大片段DNA向哺乳动物细胞中递送DNA的方法。针对基因功能验证关键技术难点,本研究以合成的MA9G(MLL-AF9 Gene)基因为例,对其功能进行验证。MA9G基因在Cre酶的作用下发生删除得到MA9GCL基因。此时获得的MA9GCL用于分析其在哺乳动物细胞中的表达,发现MA9GCL基因在HEK293中表达,而在CHO-K1中未表达,说明不同细胞中对基因在中心法则其他层面有不同的调控。对比分析MA9C(MLL-AF9 c DNA)和MA9GCL在HEK293中表达而引发的转录组变化,发现MA9C与MA9GCL基因均参与TGF-β信号通路,转入MA9C的细胞独有差异基因参与AMPK信号通路和PPAR信号通路,转入MA9GCL的细胞独有差异基因参与Hippo信号通路,并且这些信号通路与急性髓系白血病(Acute myeloid leukemia,AML)密切相关,因此表达MA9融合蛋白的HEK293细胞可能作为研究AML的细胞模型。同时,本研究利用合成的MA9G基因构建了髓样细胞中特异性表达MA9融合蛋白的小鼠模型,为后续研究AML建立了关键的疾病模型。本研究对MLL染色体易位相关的5个基因进行设计与合成,实现了这5个基因的从头合成,开发了适用于将不同片段长度的DNA转移至哺乳动物细胞的方法,构建了AML小鼠模型。本研究实现了人源复杂基因设计合成组装与转移等关键技术的突破,同时为急性髓系白血病的机制研究和潜在治疗手段提供了疾病模型。

关键词：合成基因组学混合谱系白血病基因设计基因合成组装基因转移白血病小鼠模型

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甲基化抑制剂CPI-1205协同6-MP抑制B-ALL进程与机制初探

甲基化抑制剂CPI-1205协同6-MP抑制B-ALL进程与机制初探

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作者：刘姗重庆医科大学

学位级别：博士

第一部分CPI-1205协同6-MP抑制B-ALL细胞生长目的:肿瘤化疗药物中的6-巯基嘌呤(6-Mercaptopurine,6-MP)通过HPRT(Hypoxanthine Guanine Phosphoribosyltransferase)代谢为6-TGN(6-Thioguanine Nucleotide),或通过TPMP(Thiopurine Methyltransferase)代谢为6-MMP(6-Methyl-mercaptopurine),干扰嘌呤合成。同时,6-MMP易致严重毒副作用。因甲基化/去甲基化调节基因表达,甲基化抑制剂5-氮杂胞苷能重新激活因启动子区甲基化而表达抑制的HPRT基因。此外,甲基化转移酶与TPMP共用甲基供体SAM(S-Adenosylmethionine)。故,为降低6-MP使用剂量,减轻其毒副作用,拟寻找协同6-MP抑制急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)细胞生长的甲基化抑制剂,并探讨两种药物的有效浓度及联合用药比例。方法:通过Drug BANK数据库结合Clinical Trail注册信息,筛选4种甲基化小分子抑制剂。CCK-8检测与分析不同药物浓度、联合用药方案对B-ALL细胞生长抑制作用;利用Graph Prism、Calcusyn软件计算半数抑制浓度(IC50)及药物联合指数(CI)。结果:0.01n M-100μM 6-MP作用于B-ALL细胞株:Sup-B15、Reh、HAL-01及Bal01,IC50浓度分别为:2μM、1μM、1.5μM及138μM。但,Drug Central 2021分析儿童常用化疗药物,与其它化疗药物相比,6-MP血细胞毒性及复发率均较高。另一方面,通过Drug BANK数据库结合Clinical Trail筛选甲基化抑制剂CPI-1205、Decitabine、Temozolomide及Zebu Larine。0.01n M-100μM甲基化抑制剂作用于B-ALL细胞株,发现:CPI-1205抑制Sup-B15、Reh、HAL-01细胞株生长,IC50均约为50μM;Temozolomide抑制Sup-B15、HAL-01细胞株生长,IC50均约为70μM;其余均无效或IC50>100μM。进一步,2μM、1μM 6-MP分别作用于Sup-B15、Reh细胞株,转录组测序,分析发现:6-MP干预后RNA组改变与甲基化干预后RNA组改变类似。故,为探索6-MP与CPI-1205联合抑制B-ALL的可能,10n M-1μM 6-MP与60μM CPI-1205联用并发现:10n M-600n M 6-MP联合60μM CPI-1205作用Sup-B15、Reh,生长抑制率均>50%。但,6-MP与CPI-1205浓度比仅在100:1、200:1时分别在Sup-B15、Reh中具有良好浓度线性相关性。在最适药物浓度比例中,300n M 6-MP联合30μM CPI-1205可致Sup-B15达IC50;150n M 6-MP联合30μM CPI-1205可致Reh细胞达IC50。此外,30μM CPI-1205与300n M 6-MP联合使用,48小时二次给药,能抑制部分B-ALL细胞生长(3/8);同时,30μM CPI-1205与300n M 6-MP联合对非白血病患者外周血分离的单核细胞生长抑制作用比单独使用30μM CPI-1205或300n M 6-MP时抑制作用低。结论:30μM CPI-1205协同0.3μM/0.15μM 6-MP抑制Sup-B15/Reh细胞生长;30μM CPI-1205联合0.3μM 6-MP,48小时二次给药抑制部分B-ALL肿瘤细胞生长,且对非白血病病人外周血单核细胞生长抑制作用比0.3μM 6-MP作用时低。第二部分CPI-1205联合6-MP促进B-ALL细胞凋亡目的:CPI-1205联合6-MP有效抑制B-ALL细胞生长基础上,探讨联合用药后对抑制EZH2酶活性、6-MP胞内转运的影响,及细胞功能改变。方法:Edu、Ki67试验检测细胞增殖;流式细胞术PI染色检测细胞周期;流式细胞术及DAPI染色检测细胞不同时间点凋亡;酶联免疫检测H3K27甲基化转移酶总活性及比色法检测H3K27me3水平;高效液相色谱技术检测胞内6-MP浓度。结果:30μM CPI-1205联合0.3μM/0.15μM 6-MP作用于Sup-B15/Reh细胞,48小时后对细胞功能进行检测,发现:与6-MP相比,CPI-1205联合6-MP能有效抑制Sup-B15及Reh细胞增殖;Sup-B15细胞中G0/G1期细胞比例降低,而G2/M期细胞比例增高,但Reh细胞中G0/G1及G2/M期细胞比例均增高,S期细胞比例降低;药物作用24小时

关键词：甲基化抑制剂CPI-1205 6-MP 联合用药协同作用细胞增殖细胞凋亡 H3K27甲基化转移酶 H3K27me3 胞内6-MP浓度凋亡基因TRIB3 膜转运子SLC43A3 凋亡白血病小鼠模型总体生存时间组织浸润

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磷酸肌醇依赖性蛋白激酶-1在Notch1诱导的小鼠急性T淋巴细胞白血病发展中的作用

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中国实验血液学杂志 2016年第3期24卷 637-642页

作者：王乐胡甜园陈幸李聪郭惠东初雅婧汪晓敏王伟丽程涛袁卫平中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020 华中科技大学同济医学院同济医院血液科湖北武汉430030

目的:应用Mx1-cre;Lox P系统,建立可诱导敲除PDK1的Notch1诱导的急性T淋巴细胞白血病小鼠模型,观察PDK1在急性T淋巴细胞白血病发展过程中的作用。方法:用流式细胞术检测小鼠骨髓白血病细胞的周期和凋亡率,应用实时荧光定量PCR检测小鼠... 详细信息

目的:应用Mx1-cre;Lox P系统,建立可诱导敲除PDK1的Notch1诱导的急性T淋巴细胞白血病小鼠模型,观察PDK1在急性T淋巴细胞白血病发展过程中的作用。方法:用流式细胞术检测小鼠骨髓白血病细胞的周期和凋亡率,应用实时荧光定量PCR检测小鼠白血病细胞中肿瘤相关基因和转录因子的表达水平。结果:成功建立诱导敲除PDK1的T-ALL小鼠模型;体内诱导PDK1敲除后,与对照组相比,敲除组白血病小鼠的生存期明显延长(P<0.01);PDK1敲除对白血病细胞的周期无影响;敲除组小鼠骨髓白血病细胞的凋亡率显著高于对照组(P<0.001);PDK1的敲除引起肿瘤相关基因和转录因子c-Myc和NF-κB表达水平降低(P<0.01)以及P53表达水平升高(P<0.01)。结论:PDK1的敲除可抑制T-ALL的发展,推测其机制可能是通过调控白血病细胞的凋亡和多种转录因子的表达来影响白血病的进程。

关键词： PDK1 Notch1 条件基因敲除急性T淋巴细胞白血病白血病小鼠模型

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鼠尾草酸逆转白血病细胞多药耐药的体内实验研究

鼠尾草酸逆转白血病细胞多药耐药的体内实验研究

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作者：王鲁群山东大学

学位级别：博士

鼠尾草酸(carnosic acid, CA)是迷迭香(Rosmarinus)的主要活性化合物之一具有抗氧化、抗炎及抗肿瘤等多种生物学活性。鼠尾草酸的抗炎和抗肿瘤活性是从动物体内和细胞株体外实验获得的,至今尚没有关于鼠尾草酸的动物毒性试验数据报道。... 详细信息

鼠尾草酸(carnosic acid, CA)是迷迭香(Rosmarinus)的主要活性化合物之一具有抗氧化、抗炎及抗肿瘤等多种生物学活性。鼠尾草酸的抗炎和抗肿瘤活性是从动物体内和细胞株体外实验获得的,至今尚没有关于鼠尾草酸的动物毒性试验数据报道。研究目的：基于鼠尾草酸的药理活性,评估鼠尾草酸在动物体内的急性和亚急性(30天)毒性。研究方法：以昆明小鼠为实验对象进行的急性口服毒性研究遵循OECD指南423条款,在Wistar大鼠进行的30天慢性口服毒性研究基于强化OECD试验指南407条款。进行急性口服毒性研究的昆明小鼠分为六个试验组,单次灌胃口服给药,鼠尾草酸的剂量分别为每公斤体重Omg、3500mg、4500mg、5500mg、7500mg 和 8500mg。亚急性毒性研究以7周龄Wistar大鼠为实验对象,随机分为四个试验组,每日灌胃口服给药,鼠尾草酸的剂量分别为每公斤体重Omg、150mg、300mg和600mg,连续给药最少28天。在不同的时间节点采集血液样本进行血液学和生物化学指标测定,或处死动物解剖观察各主要器官形态和重量的变化,并做病理学检查。研究结果：对小鼠的急性毒性研究显示口服半数致死剂量(LD50)为7100mg/kg体重。对所有存活小鼠的病理组织学检查发现,心脏和肝脏有轻微的水肿、细胞质变性,大剂量组肝脏可见单细胞点状坏死病灶,心脏可见心肌纤维化和炎症细胞浸润。亚急性毒性研究发现,连续30天给后实验组动物体重增加幅度稍微减少,但与对照组相比差异没有达到显著性水平。随着实验进程,饲料消耗量略有减少,但没有统计学差异。血生化测定发现在高、中剂量组血清总蛋白(TP)水平明显降低,而天门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平显著升高,其他指标四组之间没有统计学差异。与对照组相比,高剂量组雄性表现出器官与体重比值增加,包括肝、脾和心脏,肾/体重比降低。在中剂量和低剂量组,雌雄也显示脾的平均体重比增加。同时在高剂量组的组织病理学检查发现,心脏有少数心肌纤维化和少量的心肌纤维有炎性细胞浸润,肝脏中有单细胞点状坏死灶,肾脏有些近曲肾小管上皮细胞混浊肿胀及胞浆空泡的病理改变。未发现低剂量组病理检查方面与对照组的差异有统计学意义。研究结论：本研究口服CA的毒性实验结果表明,CA具有相对较低的口服毒性但其长时间的使用,特别是在高剂量时应非常谨慎。因此,有必要依据强化0ECD试验指南407条款,做延长的90天慢性毒性体内试验,以便进一步评估鼠尾草酸临床应用的可行性和安全性。急性白血病的疗效已取得显著提高,但仍面临严峻的挑战。耐药的发生仍是急性白血病治疗所面对的严重问题,MDR-1/P-gp是介导耐药发生的主要因素之一。许多化合物对MDR-1/P-gp的表达具有调节作用,但因为其有效剂量存在严重的毒性反应,因此绝大多数无法临床实际应用。体内外的研究均证实鼠尾草酸具有抗肿瘤效应。本研究的目的是在建立人类AML的K562/A02/SCID小鼠模型的基础上,研究CA联合阿霉素的抗白血病效应。研究目的：建立K562/A02/SCID小鼠模型,探讨鼠尾草酸联合阿霉素在体内是否能够抑制白血病细胞的增殖。研究方法：4周龄雌性裸鼠接种瘤细胞前三天给予环磷酰胺处理3天。收集体外培养的处于对数生长期的K562/A02细胞,调整细胞浓度为5×107／m1,每只裸鼠接种2个部位(左右腋下),每个部位接种1×107个细胞。注射K562/A02细胞2周后,处死6只小鼠,通过分离外周血细胞和骨髓细胞涂片,并采用RT-PCR检测MDR-1和BCR-ABL基因表达,来判断K562/A02/SCID小鼠模型是否建立成功。实验组给予1%(v/v)CA 2周,继而给予阿霉素1 mg/kg共三次,每次间隔2天。继续饲养4周后,采集血样、骨髓等进行白血病细胞计数、MDR-1和BCR-ABL基因和蛋白的检测以及细胞凋亡分析。研究结果：注射K562/A02细胞2周后,经采集外周血细胞和骨髓细胞涂片,并采用RT-PCR检测MDR-1和BCR-ABL基因表达,证明K562/A02/SCID小鼠模型建立成功。CA给药组与和对照组相比血液中白血病细胞分别占20%和32.5%,两者有显著差别。白血病细胞的凋亡率,CA联合阿霉素组(15.5±1.56)显著高于单用阿霉素组(11.2±1.80),同样MDR-1和BCR-ABL基因以及蛋白表达水平,前者显著低于后者。而肺肝肾和骨髓的病理检查两组间没有显著差异。但微血管中白血病细胞的数量在单用阿霉素组较多。两组小鼠的的存活时间分别为19(10.0-44.2)天和33(29.4-36.6)天,含CA的实验组小鼠存活期显著长于不含CA的对照组。研究结论：CA能够显著延长K562/A02小鼠模型的生存期,表明CA是一种很有前途的治疗AML的辅助化学药物,并

关键词：鼠尾草酸急性毒性亚急性毒性动物鼠尾草酸 K562/A02细胞白血病小鼠模型阿霉素体内试验

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应用X线照射后的Balb/c小鼠制备白血病模型的方法学研究

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现代肿瘤医学 2011年第2期19卷 226-228页

作者：王存邦白海葸瑞钱震张茜兰州军区兰州总医院全军血液病中心甘肃兰州730050

目的:探索用SPF级Balb/c小鼠经X线照射后,尾静脉注射转染GFP及NeoR基因的K562细胞株以制备白血病模型的方法。方法:实验组小鼠分别经X线照射2Gy和3Gy,24小时后取对数生长期的K562(GFP+/Neo+)细胞尾静脉注射2×106个/只。对照组不予... 详细信息

目的:探索用SPF级Balb/c小鼠经X线照射后,尾静脉注射转染GFP及NeoR基因的K562细胞株以制备白血病模型的方法。方法:实验组小鼠分别经X线照射2Gy和3Gy,24小时后取对数生长期的K562(GFP+/Neo+)细胞尾静脉注射2×106个/只。对照组不予特殊处理。结果:实验组在接种5-7天时发病,分别于30、24天内全部死亡;生存天数显著短于对照组(P<0.01)。体重较对照组显著下降(P<0.05)。小鼠的白血病发病率为100%,无自发缓解。随照射剂量的增加,小鼠的存活时间缩短,且外周血及骨髓中白血病细胞所占比例增加。流式细胞仪测定及PCR方法也证实了GFP+细胞和NeoR基因在外周血、骨髓、肝、脾中的存在。结论:Balb/c小鼠经照射后从尾静脉注射K562细胞株可以获得白血病模型。

关键词： K562细胞绿色荧光蛋白基因新霉素磷酸转移酶基因白血病小鼠模型 Balb/c小鼠

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应用含标记基因K562细胞制备的小鼠白血病模型

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中国组织工程研究与临床康复 2010年第19期14卷 3550-3553页

作者：王存邦白海葸瑞钱震张茜解放军兰州军区总医院全军血液病中心甘肃省兰州市730050

背景：文献报道应用NOD/SCID及SCID小鼠可以建立移植性人白血病小鼠模型,但由于小鼠存在免疫缺陷,使得在自体干细胞移植及移植后相关过继免疫治疗方面的研究受到限制和影响。目的：探索用SPF级Balb/c小鼠和转染GFP及NeoR基因的K562细胞... 详细信息

背景：文献报道应用NOD/SCID及SCID小鼠可以建立移植性人白血病小鼠模型,但由于小鼠存在免疫缺陷,使得在自体干细胞移植及移植后相关过继免疫治疗方面的研究受到限制和影响。目的：探索用SPF级Balb/c小鼠和转染GFP及NeoR基因的K562细胞株制备白血病模型的方法。方法：实验分为5组,A、B组和C、D组分别经X射线照射2Gy和3Gy,24h后取对数生长期的K562（GFP＋/Neo＋）细胞,A、C组尾静脉注射2×106个/只;B、D组尾静脉注射5×106个/只;E组为正常对照组。观察小鼠生存时间,进行骨髓细胞及外周血白细胞分类,采用流式细胞仪测定GFP阳性细胞及PCR方法测定Neo基因。结果与结论：实验各组在接种5~7d时发病,分别于30,23,24,17d内全部死亡;生存天均显著短于正常对照组（P〈0.01）。体质量均较正常对照组显著下降（P〈0.05）。小鼠的白血病发病率为100%,无自发缓解。随接种细胞数量的增加和照射剂量的增加,小鼠的存活时间缩短,且外周血及骨髓中白血病细胞所占比例增加。流式细胞仪测定及PCR方法也证实了GFP＋细胞和NeoR基因在肝、脾中的存在。结果证实Balb/c小鼠经照射后从尾静脉注射K562细胞株可以制备获得白血病小鼠模型。

关键词：绿色荧光蛋白基因 K562细胞新霉素磷酸转移酶基因白血病小鼠模型 Balb/c小鼠

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应用基因标记技术探讨混合造血干细胞移植后过继免疫治疗疗效的研究

应用基因标记技术探讨混合造血干细胞移植后过继免疫治疗疗效的研...

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作者：王存邦第三军医大学

学位级别：博士

异体造血干细胞移植(allo-HSCT)因具有移植物抗白血病(GVL)效应,移植后复发率低;但移植物抗宿主病fGVHD)及感染等并发症发生率高,致使移植相关死亡率高,且由于存在HLA配型相合问题,大部分患者无行异体造血干细胞移植治疗的可能,致使临... 详细信息

异体造血干细胞移植(allo-HSCT)因具有移植物抗白血病(GVL)效应,移植后复发率低;但移植物抗宿主病fGVHD)及感染等并发症发生率高,致使移植相关死亡率高,且由于存在HLA配型相合问题,大部分患者无行异体造血干细胞移植治疗的可能,致使临床应用受限。自体造血干细胞移植(auto-HSCT)丌展已近40年。它虽不受配型限制,并发症较轻,但因缺乏GVL效应而复发率较高。复发是自体造血干细胞移植失败的重要原因,减少复发成为提高疗效的关键。我们以往的研究证明,以自体为主,混合HLA半相合异体造血干细胞的干细胞移植(混合造血干细胞移植,mixed-HSCT)可在一定程度上兼有两者的优点,克服其不足,诱导形成混合嵌合体,减轻GVHD,同时保留GVL效应。鉴于此,本课题从动物实验入手,应用含有标记基因的K562细胞和BALB/C小鼠制备白血病小鼠模型;应用基因标记技术进行动物实验,探讨以自体为主,混合H-2半相合异体造血干细胞的干细胞移植(即混合造血干细胞移植)及移植后应用供体淋巴细胞输注联合IL-2治疗急性髓性白血病的疗效和嵌合体形成情况,为临床应用提供依据;并应用于临床实践,观察该方法对成人急性髓性白血病的治疗效果。 1.研究内容及方法: (1)K562细胞株的基因转移:培养PA317-GCGPXSN和NIH3T3及K562细胞株;应用PA317。GCGPXSN细胞株制备病毒上清,NIH3T3细胞株测定病毒滴度;应用rhIL-3、rhIL-6及rhSCF刺激K562细胞株后,实施基因转移;应用流式细胞仪测定基因转移效率及PCR方法测定NeoR基因,将完成基因转移的K562细胞株命名为K562+细胞株。 (2)BALB/C小鼠模型制备:SPF级BALB/C小鼠按实验分组后分别经直线加速器照射2GY和3GY,24小时后取对数生长期的K562+细胞按实验分组以尾静脉一次性注射K562+细胞。观察小鼠的一般情况及生存时间、骨髓细胞分类及外周血白细胞计数、分类、细胞亚群及相关脏器病理检查、流式细胞仪测定K562+细胞、PCR方法测定组织浸润情况。 (3)常规方法培养BALB/CxC57BL F1代小鼠骨髓细胞,并应用流式细胞仪测定T亚群及NK细胞,CD34+细胞。在经过PHA,rhIL-2,rhIL.3、rhIL-6及rhSCF刺激后实施基因转移,应用流式细胞仪测定基因转移效率,PCR方法测定NeoR基因。将完成基因转移的F1代细胞命名为F1+细胞。 (4)动物实验:用上述方法制备白血病小鼠模型,按实验分组。7天后做6Gy照射,照射后24小时做自体骨髓移植或混合骨髓移植,混合移植间隔1小时。混合移植组每7天输F1代细胞一次,应用IL-2者隔日腹腔注射一次。观察4周后杀死存活小鼠,做外周血及骨髓细胞形态检查,细胞亚群测定,GFP+细胞测定,NeoR基因测定,肝脏、脾脏病理学检查及组织匀浆细胞的GFP+细胞和NeoR基因的测定。 (5)13例急性髓性白血病患者在完全缓解期实施了Mixed-HSCT,于造血恢复后,给予DLI联合IL-2治疗2-7次:另有11例急性髓性白血病患者在同样条件下实施Mixed-HSCT,移植后未予特殊治疗。 2.实验结果: (1)K562细胞基因转移效率K562-细胞应用流式细胞仪测定的荧光强度数值为0.56%,K562+细胞荧光强度为77.16%。两者差异显著(P＜0.01)。PCR方法扩增到了NeoR基因的特异性片断,说明含GFP和NeoR基因的逆转录病毒载体质粒已转移并整合进入K562细胞的基因组中。 (2)白血病模型制备情况 ①照射对小鼠免疫功能的影响E组小鼠经2Gy照射后外周血CD3、CD4、CD8、CD16+CD56+细胞呈进行性降低,至第3周开始出现逐渐恢复迹象,4周后恢复正常。F组在3GY照射后CD3、CD4、CD8、CD16+CD56+细胞呈进行性降低,至第4周开始出现逐渐恢复迹象,5周后恢复正常。在同一时间,3GY照射较2GY照射所导致的细胞亚群降低的程度更为明显(P＜0.05)。脾、胸腺在照射后外观较正常小鼠缩小,重量减轻并延续至4周才基本恢复至照射前的水平,肝脏重量无明显变化。 ②发病情况照射2、3GY后未接种K562+细胞的BALB/C小鼠(E、F组)观察4周未出现自然死亡。照射2、3GY后分别接种K562+细胞2x10～6、5x10～6的BALB/C小鼠(A、B、C、D组)在接种5-7天时发病。A组于30天内全部死亡;C组于24天内全部死亡;B组于23天内全部死亡;D组于17天内全部死亡;各组小鼠生存天数有显著性差异,均显著短于正常对照组(P＜0.01)。体重均较正常对照组

关键词： K562细胞绿色荧光蛋白 NeoR基因基因转移白血病小鼠模型混合造血干细胞移植供者淋巴细胞输注白介素2- 过继免疫治疗嵌合体

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A pilot study on mechanism-based targeted therapy for t(8;21)leukemia

A pilot study on mechanism-based targeted therapy for t(8;21...

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作者：周光飚上海交通大学

学位级别：博士

本文初步探索了AML M2的基于发病机制的靶向治疗方法.首先,我们通过将 t(8;21)白血病细胞株 Kasumi-1 细胞注射入免疫缺陷小鼠体内建立了移植性白血病模型.其次,发现中药提取物SIH10在0.5~10μM浓度下,可诱导 t(8;21)阳性的 Kasumi-1 ... 详细信息

本文初步探索了AML M2的基于发病机制的靶向治疗方法.首先,我们通过将 t(8;21)白血病细胞株 Kasumi-1 细胞注射入免疫缺陷小鼠体内建立了移植性白血病模型.其次,发现中药提取物SIH10在0.5~10μM浓度下,可诱导 t(8;21)阳性的 Kasumi-1 细胞株及AML M2病人来源的白血病细胞出现凋亡小体与DNA"梯形"条带,磷脂酰丝氨酸表化与末端脱氧核苷酰转移酶介导的原位凋亡检测阳性,细胞周期出现亚G1峰,这种效应呈剂量一时间依赖性.SIH10可引起 Kasumi-1 细胞线粒体跨膜电位的崩解、caspases 的活化,而且可引起 AML1-ETO 蛋白的裂解.结果表明,SIH10降解 AML1-ETO 融合蛋白诱导 t(8;21)白血病细胞凋亡,改善荷瘤小鼠预后,可能是人类 t(8;21) 白血病靶向治疗的候选药物,具有潜在的临床应用价值.

关键词：肿瘤靶向疗法白血病小鼠模型染色体易位 SIH10 细胞凋亡

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