检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：仲森林黄利平祁映璇管景灏姚瑶费正月刘冠楠 210009 江苏省南京市鼓楼区新模范马路5号

本发明公开了一种利用长引物快速从头合成目的片段的方法，包括如下步骤：(1)设计合成多条存在碱基重叠、覆盖整个目的片段的长引物；(2)使用偶数条步骤(1)获得的长引物交替重叠延伸进行PCR扩增，获得PCR产物；(3)利用一步法同源重组将... 详细信息

标准号: CN116426559A

本发明公开了一种利用长引物快速从头合成目的片段的方法，包括如下步骤：(1)设计合成多条存在碱基重叠、覆盖整个目的片段的长引物；(2)使用偶数条步骤(1)获得的长引物交替重叠延伸进行PCR扩增，获得PCR产物；(3)利用一步法同源重组将步骤(2)获得的PCR产物直接整合到线性化载体中，得到重组产物；(4)将步骤(3)获得的重组产物转化入感受态细胞，获得带有目的基因的转化子；所述方法从目的基因中长引物的设计到最终产品耗时2～5h。本发明所提供的方法适用于长片段DNA快速合成，具有合成周期短，正确率高的特点，适用于具有高G+C含量、重复序列或复杂的二级结构的DNA合成。

关键词：长引物目的基因目的片段重组产物感受态细胞线性化载体长片段DNA 二级结构合成周期碱基重叠交替重叠快速合成设计合成同源重组重复序列一步法正确率转化子整合耗时合成延伸覆盖转化

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提高目的片段与psiCHECK2载体连接效率的方法

提高目的片段与psiCHECK2载体连接效率的方法

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作者：孙伟曹修凯王珊袁泽湖王善禾 225009 江苏省扬州市大学南路88号

本发明提出了一种提高目的片段与psiCHECK2载体连接效率的方法，该方法以牛基因组DNA为模板，利用载体同源序列引物替换传统引物中的保护碱基序列，通过PCR扩增目的片段，将PCR扩增产物与psiCHECK2载体连接后导入感受态细胞，判断目的... 详细信息

标准号: CN113736791A

本发明提出了一种提高目的片段与psiCHECK2载体连接效率的方法，该方法以牛基因组DNA为模板，利用载体同源序列引物替换传统引物中的保护碱基序列，通过PCR扩增目的片段，将PCR扩增产物与psiCHECK2载体连接后导入感受态细胞，判断目的片段与psiCHECK2载体的载体连接效率。本发明的同源片段实验组的连接效率要比常规引物实验组和细菌内源性同源重实验组效率高，但该方法并不是基于同源重组原理，而是通过改变保护碱基的长度（本发明中采用的是载体同源序列）提高双酶切效率达到改善重组效率的目的。本发明可为其他载体构建提供技术依据。

关键词：目的片段载体连接实验组同源序列牛基因组DNA 感受态细胞常规引物传统引物碱基序列连接效率同源片段同源重组载体构建内源性双酶切碱基引物同源替换细菌

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提高目的片段与psiCHECK2载体连接效率的方法

提高目的片段与psiCHECK2载体连接效率的方法

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作者：孙伟曹修凯王珊袁泽湖王善禾 225009 江苏省扬州市大学南路88号

标准号: CN113736791B

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一种动物疫病检测中凝胶电泳目的片段回收切胶装置

一种动物疫病检测中凝胶电泳目的片段回收切胶装置

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作者：彭梅彭小莉龙晓婷于璇陈彩燕 511400 广东省广州市番禺市桥清河东路212号口岸大街1号

本实用新型公开了一种动物疫病检测中凝胶电泳目的片段回收切胶装置，包括盒体一及连接于盒体一两侧的盒体二，所述盒体一、盒体二的底部连接有切胶口，所述盒体二的一侧连接有多个连接块，所述盒体一连接有用于连接块锁紧的锁紧机构，... 详细信息

标准号: CN220614284U

本实用新型公开了一种动物疫病检测中凝胶电泳目的片段回收切胶装置，包括盒体一及连接于盒体一两侧的盒体二，所述盒体一、盒体二的底部连接有切胶口，所述盒体二的一侧连接有多个连接块，所述盒体一连接有用于连接块锁紧的锁紧机构，所述锁紧机构包括多个楔形压块、四个竖板、两个推拉板、螺柱，所述螺柱用于驱动两个推拉板相互靠近或远离，所述盒体一、盒体二连接有与切胶口相匹配的推杆，所述推杆连接有用于驱动推杆升降的驱动机构。本实用新型可握住套管将三个切胶口同步对凝胶进行切割，使凝胶位于切胶口内，随即按压压盘驱动驱动杆下移，进而带动三个推杆同步下移，可将凝胶从切胶口内推出，实现多个切割，操作简单灵活，提高作业效率。

关键词：盒体切胶口凝胶推杆本实用新型锁紧机构推拉板螺柱切胶下移切割动物疫病检测底部连接目的片段凝胶电泳切胶装置驱动机构驱动推杆推杆连接楔形压块作业效率盘驱动驱动杆竖板锁紧套管匹配握住升降回收驱动灵活

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一种目的片段与植物表达载体快速连接的方法

一种目的片段与植物表达载体快速连接的方法

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作者：刘佳音张国栋邹丹丹吴洁芳张继雨王克响米铁柱 266041 山东省青岛市李沧区金水路171号16号楼

本申请公开了一种目的片段与植物表达载体快速连接的方法，包括以下步骤：A：目的片段的PCR扩增；B：目的片段的TA克隆和大肠杆菌感受态的转化；C：目的片段从克隆载体中双酶切获得；D：目的片段与植物双元载体的连接；E：重组子转化大... 详细信息

标准号: CN108148856A

本申请公开了一种目的片段与植物表达载体快速连接的方法，包括以下步骤：A：目的片段的PCR扩增；B：目的片段的TA克隆和大肠杆菌感受态的转化；C：目的片段从克隆载体中双酶切获得；D：目的片段与植物双元载体的连接；E：重组子转化大肠杆菌DH5α感受态；F：重组子的鉴定和转化农杆菌感受态。本发明目的片段与植物表达载体快速连接的方法，提供了一种植物功能基因分析中目的基因片段与植物表达载体连接时可大大缩短连接时间且费用较低的连接方法。

关键词：目的片段大肠杆菌DH5 α 植物表达载体快速连接感受态重组子转化大肠杆菌感受态植物双元载体功能基因克隆载体目的基因农杆菌双酶切种植物申请分析

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RecA介导的特异性目的DNA片段捕获方法

RecA介导的特异性目的DNA片段捕获方法

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作者：于文强张如奎 200433 上海市邯郸路220号

本发明属分子生物学-生物化学技术领域，涉及在RecA的介导下特异性捕获样品中的同源目标DNA片段的方法。本发明在体外模拟RecA在体内同源重组中的作用模式，设计针对目的DNA片段的同源探针，通过RecA辅助探针和洗脱试剂，在含有RecA和A... 详细信息

标准号: CN103374565A

本发明属分子生物学-生物化学技术领域，涉及在RecA的介导下特异性捕获样品中的同源目标DNA片段的方法。本发明在体外模拟RecA在体内同源重组中的作用模式，设计针对目的DNA片段的同源探针，通过RecA辅助探针和洗脱试剂，在含有RecA和ATP-γ-S的反应体系中特异性的捕获样品中的同源目标DNA片段。本方法可用于外显子或其他目的片段的捕获测序，为肿瘤和其他疾病罕见的突变位点检测提供技术改进，能避免目前外显子或其他目的片段捕获过程中探针设计需要Tm值均一性，探针杂交具有非特异性，所需样品初始量相对较大等问题。还可用于真核生物染色质状态下，基于Rad51的同源重组来捕捉体内DNA结合蛋白。

关键词：同源捕获目的片段生物化学技术体内同源重组分子生物学染色质状态辅助探针技术改进结合蛋白探针设计探针杂交体外模拟突变位点真核生物作用模式探针肿瘤捕捉疾病检测

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一种通过多聚核苷酸激酶构建长片段目的基因的方法及其应用

一种通过多聚核苷酸激酶构建长片段目的基因的方法及其应用

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作者：姚凯覃欢张士尧冯源张文良姚浩哲肖鹦王佳汝吴嘉轩 430000 湖北省武汉市和平大道947号

本发明属于分子生物学技术领域，特别涉及一种通过多聚核苷酸激酶构建长片段目的基因的方法及其应用。本发明提供的构建长片段目的基因的方法能够有效降低目的基因构建时的经济成本，同时，降低碱基突变的概率。其技术要点包括：将目的... 详细信息

标准号: CN110106196A

本发明属于分子生物学技术领域，特别涉及一种通过多聚核苷酸激酶构建长片段目的基因的方法及其应用。本发明提供的构建长片段目的基因的方法能够有效降低目的基因构建时的经济成本，同时，降低碱基突变的概率。其技术要点包括：将目的基因序列根据实际需要分段，并分别在每段的两端加入酶切位点序列，然后合成相应目标产物序列片段；利用T4多聚核苷酸激酶的寡核苷酸5’末端将目标产物磷酸化；将磷酸化的目标产物退火，得到目的片段；将载体质粒酶切，所形成的粘性末端与第一步中所加入的酶切位点序列对应，并回收酶切产物，得到载体片段；将目的片段与载体片段连接，得到连接产物。

关键词：目的基因目标产物酶切位点序列多聚核苷酸目的片段载体片段长片段磷酸化构建分子生物学技术退火寡核苷酸激酶构建技术要点碱基突变经济成本连接产物酶切产物序列片段载体质粒粘性末端激酶酶切分段合成回收概率应用

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牛分支杆菌ESAT-6/Ag85B/Mtb8.4基因与牛IL-2基因融合表达

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畜牧与兽医 2010年第6期42卷 67-70页

作者：李海涛苗利光刘艳环李庆超张广雷孙金霞中国农业科学院特产研究所吉林吉林132109

本研究拟制备牛IL-2与牛分支杆菌ESAT-6、Ag85B和Mtb8.4基因的融合蛋白。从患结核病鹿的肺组织中分离牛分支杆菌并提取基因组DNA,PCR扩增牛分支杆菌ESAT-6、Ag85B和Mtb8.4基因;提取牛淋巴细胞,经总RNA提取、RT-PCR得到了IL-2基因片段。... 详细信息

本研究拟制备牛IL-2与牛分支杆菌ESAT-6、Ag85B和Mtb8.4基因的融合蛋白。从患结核病鹿的肺组织中分离牛分支杆菌并提取基因组DNA,PCR扩增牛分支杆菌ESAT-6、Ag85B和Mtb8.4基因;提取牛淋巴细胞,经总RNA提取、RT-PCR得到了IL-2基因片段。经测序鉴定后,将4个目的片段重组,构建原核表达载体,并对表达的融合蛋白进行鉴定。克隆出了牛IL-2,以及牛分支杆菌ESAT-6、Ag85B和Mtb8.4基因;构建了原核表达载体pME290-SDCZ,并表达出了融合蛋白;Western印迹结果证实该重组蛋白能与抗牛分支杆菌多克隆抗体发生特异免疫结合反应。制备了牛IL-2与牛分支杆菌ESAT-6、Ag85B和Mtb8.4融合蛋白,本研究为下一步研制重组牛结核亚单位疫苗奠定了基础。

关键词：牛分支杆菌 IL-2基因融合蛋白原核表达载体 Mtb8.4 ESAT-6 Ag85B 重组蛋白 RNA提取亚单位疫苗多克隆抗体制备特异免疫目的片段淋巴细胞结合反应测序鉴定构建 PCR扩增牛结核

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石榴软籽性状基因连锁标记的克隆与测序

石榴软籽性状基因连锁标记的克隆与测序

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作者：陆丽娟安徽农业大学

学位级别：硕士

白玉石籽是三白石榴的芽变品种,对白玉石籽和三白石榴主要经济性状对比研究表明,两者在成熟期、采前裂果、耐贮性和抗逆性等方面无明显差异。模糊综合评判结果,白玉石籽综合经济性状明显优于三白石榴。白玉石籽变异性状的突出表现为百... 详细信息

白玉石籽是三白石榴的芽变品种,对白玉石籽和三白石榴主要经济性状对比研究表明,两者在成熟期、采前裂果、耐贮性和抗逆性等方面无明显差异。模糊综合评判结果,白玉石籽综合经济性状明显优于三白石榴。白玉石籽变异性状的突出表现为百粒重增加84.3%,种子硬度变软。前期的试验研究发现,石榴籽粒硬度呈双峰曲线,控制石榴籽粒硬度的基因中可能存在主效基因。试验以三白石榴和白玉石籽为研究材料,探索了两者之间基因组DNA的差异,寻找与石榴软籽性状相关的基因标记,并对其进行克隆测序,转化为SCAR(Sequence characterized amplified region)标记。为软籽石榴品种选育提供了分子生物学依据。采用改良CTAB法提取石榴叶片基因组DNA,对RAPD反应中的Taq酶浓度、模板DNA浓度、Mg2+浓度、dNTPs浓度及随机引物浓度进行了逐个优化,建立了石榴基因组DNA RAPD-PCR分析的适宜反应体系:反应总体积25μl,其中Taq酶1.0U,引物0.3μmol/L,dNTPs 0.2mmol/L,MgCl2 2.0mmol/L,模板DNA 40ng /μl。从113个随机引物中筛选出能够扩增出特异带的引物9个,共扩增出特异带11条。说明白玉石籽在DNA水平上呈现了较大范围的变异。以筛选出的9个引物重复扩增,选择了稳定性较好、条带清晰的特异带3条进行分离纯化。将纯化的目的片段连接到PMT18-T载体上,再转移到大肠杆菌进行扩增,然后进行菌落PCR检测;以过夜培养的菌液进行目的片断测序。根据测序结果,利用Primer Premier 5.0软件分析设计出大小18～22bp的特异引物,以白玉石籽和三白石榴的基因组DNA为模板进行SCAR-PCR扩增。结果表明,分离纯化的3个目的片段,有两个均存在于白玉石籽和三白石榴中,其分子量大小分别为562bp和804bp,说明这两条RAPD特异带并不是真实存在的SCAR标记;在白玉石籽中扩增出的分子量为537bp的特异带,在三白石榴未出现,说明白玉石籽与三白石榴存在此变异位点。本试验成功地将白玉石籽变异的RAPD标记转化为SCAR标记。试验结果为将石榴RAPD标记转化为SCAR标记提供技术体系;为今后利用RAPD标记进行石榴果实性状控制基因定位与作图和利用图谱克隆(Map-based cloning)果实性状基因提供DNA证据;为石榴软籽品种或大籽粒品种选育的早期鉴定提供参考依据。

关键词：石榴 RAPD分析目的片段克隆 SCAR标记

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细菌λRed重组技术的应用及其影响因素

细菌λRed重组技术的应用及其影响因素

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辽宁省畜牧兽医学会2014年学会年会

作者：付喜爱张德显周维于立辉田春莲刘明春沈阳农业大学畜牧兽医学院辽宁沈阳 110866

由λ噬菌体上的exo、beta、gam三个基因分别编码的Exo、Beta和Gam蛋白组成λRed同源重组系统.λRed重组是细菌靶基因置换的有效技术,该技术发展迅速,已广泛应用于大肠杆菌等细菌染色体DNA的基因敲除、基因整合,可以对任何大小的DNA分子... 详细信息

由λ噬菌体上的exo、beta、gam三个基因分别编码的Exo、Beta和Gam蛋白组成λRed同源重组系统.λRed重组是细菌靶基因置换的有效技术,该技术发展迅速,已广泛应用于大肠杆菌等细菌染色体DNA的基因敲除、基因整合,可以对任何大小的DNA分子进行精确修饰.利用九Red重组系统不仅可以构建工程菌,还可以为研究细菌的致病机理和耐药机制提供新的方法.然而,许多应用因重组频率而受到限制,底物浓度、同源片段的长度、内源性核酸酶、错配蛋白等许多因素均可影响重组频率.

关键词： λRed同源重组底物浓度目的片段错配蛋白内源性核酸酶

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