检索结果-内蒙古大学图书馆

中华中医药杂志 2017年第12期32卷 5334-5338页

作者：马艺鑫宋囡贾连群王德山单德红张哲杨关林辽宁中医药大学中医脏象理论及应用教育部重点实验室沈阳110847 辽宁省中医转化医学研究中心沈阳110847 辽宁中医药大学基础医学院沈阳110847 辽宁中医药大学附属医院沈阳110032

目的:应用相对和绝对定量同位素标记(iTRAQ)技术研究脾气虚大鼠回肠蛋白质组的表达,寻找有意义的差异蛋白,为探索脾气虚证的现代科学本质提供新的实验方法与依据。方法:12只健康雄性SD大鼠随机分为正常组和脾气虚组,脾气虚组采用饮食不... 详细信息

目的:应用相对和绝对定量同位素标记(iTRAQ)技术研究脾气虚大鼠回肠蛋白质组的表达,寻找有意义的差异蛋白,为探索脾气虚证的现代科学本质提供新的实验方法与依据。方法:12只健康雄性SD大鼠随机分为正常组和脾气虚组,脾气虚组采用饮食不节加力竭游泳方法造模,15d后分离提取回肠总蛋白,以iTRAQ试剂标记后进行质谱检测,并对差异表达的蛋白进行生物学分析。结果:与正常组比较,脾气虚组回肠271个上调蛋白,303个下调蛋白;Pathway显著性富集分析确定下调差异蛋白参与的主要生化代谢途径和信号转导途径有细胞外基质受体交互作用、黏着斑等19条,上调差异蛋白参与包括PPAR信号通路、甾类激素生物合成在内的通路24条。选择细胞外基质受体交互作用为兴趣通路,发现与小肠屏障功能密切相关的层粘连蛋白、胶原蛋白以及整合蛋白等19个蛋白发生下调。结论:脾气虚证可能与回肠细胞外基质受体交互作用通路改变及回肠黏膜屏障功能受损相关。

关键词：脾气虚证蛋白质组相对和绝对定量同位素标记细胞外基质受体交互作用回肠

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利用iTRAQ技术联合2D LC-MS研究不同加工工艺鹿茸的差异蛋白质组学

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药学学报 2015年第12期50卷 1637-1644页

作者：靳梦亚董玲罗元明隗丽莫美侯成波李志远北京中医药大学北京100102 北京中医药大学东方医院北京100078 中国科学院微生物研究所北京100101

利用i TRAQ同位素标记法结合2D LC-MS/MS法对不同加工工艺鹿茸(鲜品、煮炸、直接冻干、匀浆、冻干加保护剂、冻干未加保护剂、冻干加保护剂40℃,10天)进行比较蛋白质组研究。经质谱共分析共得到蛋白质1 015种。利用Protein Pilot软件(Ve... 详细信息

利用i TRAQ同位素标记法结合2D LC-MS/MS法对不同加工工艺鹿茸(鲜品、煮炸、直接冻干、匀浆、冻干加保护剂、冻干未加保护剂、冻干加保护剂40℃,10天)进行比较蛋白质组研究。经质谱共分析共得到蛋白质1 015种。利用Protein Pilot软件(Version 4.5)进行比较分析,差异蛋白(阈值在>1.50或<0.60范围,P≤0.05)蛋白为87种。变化最大的是煮炸鹿茸组,其差异蛋白质(P≤0.05)相对于鹿茸鲜品,上调蛋白质有24种,下调蛋白质有33种。7种差异极显著(P≤0.001)下调蛋白多具有参与钙离子结合及ATP结合等功能。其他组差异蛋白质种类没有明显变化,与通过层次聚类分析的结果相同。冻干加保护剂(海藻糖)工艺可提高差异极显著蛋白质包括II型、XII型胶原蛋白质(P≤0.001)的相对含量,并且使得功能显著蛋白质与鲜品鹿茸比较,含量相对增加。这些蛋白具有活化血小板、维护精原细胞、使肿瘤细胞表达失调等生理功能。通过对差异蛋白质的层次聚类(hierarchical clustering)及GO(gene ontology)注释分析,表明不同加工工艺鹿茸与鲜品鹿茸的差异蛋白质在分子功能、生物过程及细胞成分中,具有广泛的生物学功能覆盖范围,其中分子功能主要体现在结合功能(52.7%)、催化活性功能(25.3%)、结构分子活性及转运功能(6.6%)。

关键词：相对和绝对定量同位素标记鹿茸差异蛋白质组学 2DLC-MS 生物学信息

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亚砷酸钠诱导大鼠肝纤维化的蛋白组学观察

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中华地方病学杂志 2016年第3期35卷 182-188页

作者：吴顺华李静张露露王晨璐刘小英新疆医科大学公共卫生学院劳动卫生与环境卫生学教研室乌鲁木齐830011

目的观察亚砷酸钠慢性饮水染毒诱导大鼠肝纤维化的蛋白组学改变。方法将40只健康8周龄无特定病原体（speceficpathogenfree，SPF）***（SD）雄性大鼠按体质量采用随机数字表法分为4组，每组10只，分别为对照组（饮用去离子水）及低、中... 详细信息

目的观察亚砷酸钠慢性饮水染毒诱导大鼠肝纤维化的蛋白组学改变。方法将40只健康8周龄无特定病原体（speceficpathogenfree，SPF）***（SD）雄性大鼠按体质量采用随机数字表法分为4组，每组10只，分别为对照组（饮用去离子水）及低、中、高剂量染砷组（饮用0．68、1．36、2．73mg／kg亚砷酸钠溶液）。自由饮水24周时，采集大鼠血样，取肝脏。采用酶联免疫分析（ELISA）法检测肝纤维化指标：血清透明质酸（HA）、Ⅲ型前胶原（PCⅢ）、Ⅳ型胶原（Ⅳ-C）、层粘连蛋白（LN）。基于相对和绝对定量同位素标记（isobarictagsforrelativeandabsolutequantitation，iTRAQ）的8标实验，结合二维液相色谱串联质谱（2DLC—MS／MS），检测对照组和中、高剂量染砷组大鼠肝脏组织差异蛋白表达。结果对照组，低、中、高剂量染砷组血清HA分别为（198．51±16．64）、（218．39±34．98）、（261．72±30．56）、（297．31±35．72）ng／L，PCIl分别为（15．32±2．15）、（16．78±2．64）、（19．51±0．85）、（21．42±1．63）μg／L，LN分别为（734．57±86．00）、（792．65μ94．15）、（916．83±84．40）、（1008．09±64．17）μg／L，IV．C分另0为（52．34±14．65）、（59．72±12．84）、（74．384-4．83）、（78．46±4．30）μg/L，组间比较差异均有统计学意义（F=21．136、19．957、22．007、14．288，P均〈0．05）。其中，中、高剂量染砷组上述指标均高于对照组和低剂量染砷组（P均〈0．05），且高剂量染砷组血清HA、PCIII、LN高于中剂量染砷组（P均〈0．05）。iTRAQ技术结合2DLC—MS／MS技术选取蛋白质的置信阈值unusedprotScore）〉1．3，且至少有1条匹配肽段在95％置信区间内作为蛋白质鉴定结果，鉴定出2948种蛋白质。文氏图比较发现对照组和中、高剂量染砷组均检测到2162种蛋白，除去对照组中有意义的差异蛋白，中剂量染砷组上调蛋白为687种，下调为548种；高剂量染砷组上调为633种，下调为519种。中、高剂量染砷组表达差异蛋白数量比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。与甲基代谢相关的差异蛋白砷甲基转移酶（AS3MT）、蛋氨酸腺苷转移酶（MAT）、丝氨酸羟甲基转移酶（SHMT）、甜菜碱同型半胱氨酸甲基转移酶（BHMT），线粒体内胆碱脱氢酶（CHDH）、胱硫醚酶（CTH）、半胱氨酸脱羧酶（CSAD），在中、高剂量染砷组均上调；甲硫氨酸合成酶（MTR）有2种蛋白，其中METK1上调，F1LRB8下调。与谷胱甘肽（GSH）相关蛋白18种，包括Gsta1、Gsta4、Gsta5、Gstt1、Gstt2、Gstk1、Gstp1、Gstm1、Gstm2、Gstm3，Gss、GOx1、GOx4、Esd、Hagh、Clo1、Mgst1、B6DYQ5，表达均上调；与肝纤维化有关的蛋白有Hic．5、谷氨酰胺合成酶（GSS）、原肌球蛋白（Tpm），其中Tpm有6种，包括Tpml三种、Tpm2两种、Tpm3一种．表达均上调。结论慢性砷暴露后导致肝脏纤维化改变，肝纤维化大鼠AS3MT、MTR、MAT、SHMT、BHMT、CHDH、CTH、CSAD、Hie．5、GSH、GSS、Tpm高表达，可能在砷代谢和肝纤维化中发挥重要作用，与肝纤维化的发生相关。

关键词：砷代谢肝纤维化蛋白组学相对和绝对定量同位素标记

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基于iTRAQ技术研究丹参酮Ⅱ A对高脂血症大鼠肝脏蛋白质的影响

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中国中西医结合杂志 2017年第5期37卷 563-568页

作者：马艺鑫贾连群宋囡王俊岩冷雪张妮杨关林辽宁中医药大学中医脏象理论及应用教育部重点实验室沈阳110847 辽宁省中医转化医学研究中心沈阳110847

目的应用相对和绝对定量同位素标记技术(iTRAQ)研究丹参酮ⅡA对高脂血症大鼠肝脏蛋白质组表达的影响,探讨丹参酮ⅡA对肝脏保护的作用。方法 24只SD大鼠随机分为空白对照组、高脂血症组和丹参酮组,每组8只。空白对照组每日给予普通大鼠... 详细信息

目的应用相对和绝对定量同位素标记技术(iTRAQ)研究丹参酮ⅡA对高脂血症大鼠肝脏蛋白质组表达的影响,探讨丹参酮ⅡA对肝脏保护的作用。方法 24只SD大鼠随机分为空白对照组、高脂血症组和丹参酮组,每组8只。空白对照组每日给予普通大鼠饲料喂饲。高脂血症组和丹参酮组给予高脂饲料喂饲,4周后丹参酮组予丹参酮ⅡA磺酸钠10 mg/(kg·d)腹腔注射,空白对照组、高脂血症组给予等体积的磷酸盐缓冲生理盐水腹腔注射。用药8周后检测大鼠血脂、肝功能情况以及肝脏组织形态学变化。分离提取肝脏总蛋白,以iTRAQ试剂标记后进行质谱检测并以软件分析差异表达的蛋白质,用Western blot方法验证部分差异蛋白的表达趋势。结果与空白对照组比较,高脂血症组血清TC、TG、LDL-C、ALT、AST水平升高(P<0.01),HDL-C水平降低(P<0.01);与高脂血症组比较,丹参酮组血清中ALT、AST水平降低(P<0.05)。iTRAQ技术分析发现:丹参酮组肝脏中CES1、Apoa1、Acots2、3-KAT及细胞色素P450家族Cyp3a2、Cyp3a18、Cyp4a3、Cyp2b2、Cyp2c23这9个差异蛋白表达量上调,Tkt及eNT表达下调。Western blot验证差异蛋白CES1、Apoa1、Acots2变化趋势与蛋白质组结果相一致。结论丹参酮ⅡA可能通过促进胆固醇逆向转运、脂肪酸氧化,改善肝脏代谢功能,减少肝脏脂质沉积,达到其肝脏保护作用。

关键词：丹参酮ⅡA 高脂血症相对和绝对定量同位素标记肝脏

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基于蛋白组学技术的马铃薯晚疫病菌PAMP诱导免疫反应机制解析

基于蛋白组学技术的马铃薯晚疫病菌PAMP诱导免疫反应机制解析

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作者：郭晓华中农业大学

学位级别：硕士

马铃薯是我国第四大粮食作物,对维护我国粮食安全起重要作用,然而由Phytophthora infestans所引起的晚疫病严重威胁着马铃薯的生产。病原相关分子模式(PAMP)在进化上非常保守,由PAMP诱导免疫反应(PTI)可以为马铃薯提供更为持久的晚疫病... 详细信息

马铃薯是我国第四大粮食作物,对维护我国粮食安全起重要作用,然而由Phytophthora infestans所引起的晚疫病严重威胁着马铃薯的生产。病原相关分子模式(PAMP)在进化上非常保守,由PAMP诱导免疫反应(PTI)可以为马铃薯提供更为持久的晚疫病抗性。INF1是研究地比较清楚的晚疫病菌分泌的一种PAMP。CF是晚疫病菌液体培养滤液,其中除了主要含有INF1外,还含有其它类型PAMP。本研究分别用i TRAQ和SWATH蛋白质组学技术对INF1和CF诱导后的本氏烟草进行蛋白定量分析,并结合生物信息学手段对采集到的蛋白数据进行分析,探索马铃薯晚疫病PAMP诱导免疫反应机制。主要结果如下:1.通过iTRAQ技术对INF1诱导8h后本氏烟草叶片进行蛋白分析,总共鉴定到2964个蛋白,其中32个受INF1诱导差异表达,包括15个上调表达蛋白和17个下调表达蛋白。2.进一步对8个上调表达的差异蛋白基因进行了功能验证,通过对目标蛋白基因进行病毒诱导沉默(VIGS)后注射瞬时表达INF1基因,发现ATP依赖的转运蛋白(K4CBY0)和60S核糖体蛋白(O24114)对INF1诱导的免疫反应非常必要。3.通过SWATH技术对CF分别诱导0 h、8 h、12 h、24 h、48 h后的本氏烟草叶片进行蛋白分析,总共鉴定到4401个蛋白。与0h鉴定到的蛋白表达量相比,有1771个在8 h、12 h、24 h、48 h 4个时间点中至少一个时间点受CF诱导差异表达。结果总共鉴定到984个上调表达蛋白和799个下调表达蛋白,而其中有12个蛋白非单纯上调或下调。4.对筛选到的1771个差异蛋白进行GO注释,发现这些差异蛋白主要定位在质体,其次是在蛋白复合体、胞质溶胶、细胞质和线粒体等细胞组份,其主要通过离子结合和氧化还原等活性,参与胞内生物合成代谢、小分子合成代谢、胞内氮化合物代谢和胁迫响应等生物学过程,还有部分蛋白参与细胞免疫和细胞凋亡等抗病相关的生物学过程。5.通过KEGG分析发现部分差异蛋白参与植-病互作、Ca2+信号转导和MAPK信号、氧化磷酸化、蛋白运输、苯丙氨酸代谢等途径。其中鉴定到一些已知参与PTI抗性的重要蛋白如BSK1、SGT1、HSP90和Nt CDPK2等,相关信号通路中新发现的蛋白很可能也在植物PTI抗性中扮演重要角色。

关键词：马铃薯晚疫病相对和绝对定量同位素标记按窗口顺序采集所有碎片离子病原相关分子模式诱导免疫反应

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炭样小单孢菌JXNU-1中核苷类抗生素生物合成相关蛋白的筛选

炭样小单孢菌JXNU-1中核苷类抗生素生物合成相关蛋白的筛选

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作者：陈娟江西师范大学

学位级别：硕士

实验室在前期研究中筛选到一株具有广谱抗菌活性的炭样小单孢菌JXNU-1,其发酵所产核苷类抗生素对常见的G+和G-细菌均有抑制作用,但该抗生素的生物合成与分子调控机制尚不清楚。为探寻炭样小单孢菌JXNU-1中抗生素的生物合成与分子调控机... 详细信息

实验室在前期研究中筛选到一株具有广谱抗菌活性的炭样小单孢菌JXNU-1,其发酵所产核苷类抗生素对常见的G+和G-细菌均有抑制作用,但该抗生素的生物合成与分子调控机制尚不清楚。为探寻炭样小单孢菌JXNU-1中抗生素的生物合成与分子调控机制,本文采用相对和绝对定量同位素标记(isobaric tags for relative and absolute quantitation,iTRAQ)技术对炭样小单孢菌JXNU-1分泌抗生素前后期的蛋白质组进行分析,主要结论如下:(1)共鉴定出炭样小单孢菌菌体蛋白2390个,获得172个差异表达蛋白,产物合成期上调表达蛋白76个,下调表达蛋白96个;(2)根据蛋白质组学分析,上调蛋白中含有12个与抗生素合成密切相关蛋白,分别是ABC转运器底物结合蛋白、ABC转运器ATP结合蛋白、糖基转移酶、P450单加氧酶、S-腺苷甲硫氨酸依赖的甲基转移酶、甲基转移酶和丝氨酸羟甲基转移酶。利用实时荧光定量PCR(real-time quantitative reverse transcription PCR,qRT-PCR)技术对筛选出的相关蛋白的mRNA定量分析,结果表明这12个基因均为表达上调基因,与蛋白的表达趋势相符;(3)采用生物信息学方法对上述12个抗生素合成相关蛋白进行基因定位,结果表明相关蛋白分布在5个抗生素合成相关基因簇中,且Cluster 2被推测为炭样小单孢菌JXNU-1生物合成抗生素的基因簇。上述研究结果为阐明炭样小单孢菌JXNU-1中核苷类抗生素生物合成与分子调控机制提供了实验依据。

关键词：炭样小单孢菌核苷类抗生素相对和绝对定量同位素标记基因簇

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应用重组表达的SELENOF和基因敲除鼠研究SELENOF的生物学功能

应用重组表达的SELENOF和基因敲除鼠研究SELENOF的生物学功能

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作者：王恒深圳大学

学位级别：硕士

硒作为生命体中的必需微量元素有着增强人体免疫能力,降低病毒感染,防治癌症等功能。而在生物体内,硒蛋白是硒元素(Se)发挥生物学作用的主要载体,迄今为止,人体中共发现有25种硒蛋白。在体内环境下,由于硒蛋白中的硒代半胱氨酸(Sec)比... 详细信息

硒作为生命体中的必需微量元素有着增强人体免疫能力,降低病毒感染,防治癌症等功能。而在生物体内,硒蛋白是硒元素(Se)发挥生物学作用的主要载体,迄今为止,人体中共发现有25种硒蛋白。在体内环境下,由于硒蛋白中的硒代半胱氨酸(Sec)比半胱氨酸(Cys)的活性更强且更易亲合,使它在氧化还原反应中发挥了重要作用,硒蛋白的氧化还原功能研究也因此更为完整全面,其中硫氧还蛋白氧化还原酶家族(TrxRs)、谷胱甘肽过氧化物酶家族(GPXs)和脱碘酶家族(DIOs)是目前为止了解最为清楚的硒蛋白家族。与之相比,人们对其他硒蛋白的具体结构和功能知之甚少,本文所研究的硒蛋白F(SELENOF)也是如此。文献报道SELENOF是Trx样折叠超家族中的一员;能通过其N端富含Cys的区域与UDP-葡萄糖:糖蛋白葡萄糖基转移酶(UGGT)紧密结合,增强UGGT的酶活性,推测SELENOF可与UGGT共同参与内质网(ER)上糖蛋白折叠的加工过程;且结构上与ER上的一种二硫键异构酶(PDI)高度相似,并在表面有含Sec的氧化还原活性基序(-CxU-)。虽然对SELENOF结构的探究越来越完善,但其潜在功能尚未被验证,生物学作用也尚未被发现。为了验证SELENOF的功能,并探寻SELENOF的潜在作用,本文首先在体外表达纯化了半胱氨酸替代硒代半胱氨酸的SELENOF(Sec→Cys),对其进行了硫氧还蛋白相关活性检测,使用蛋白质体外结合实验(Pull-down)找出相互作用蛋白并进行生物信息学分析;随后,为了进一步明确其在生物体内的作用,我们构建了SELENOF基因敲除小鼠模型,使用相对和绝对定量同位素标记(iTRAQ)方法,检测海马及肝脏组织的差异表达蛋白并进行生物信息学分析;最后,我们使用PET/CT、组织切片染色等方法对iTRAQ结果进行了进一步验证,并将iTRAQ差异表达蛋白与Pull-down结果进行比对,为SELENOF生物学功能研究提供实验数据作为基础。在成功体外纯化出SELENOF(Sec→Cys)的蛋白后,活性检测结果显示,SELENOF分别可以作为TrxR和Trx的底物参与到硫氧还蛋白反应中,并且可与氧化型谷胱氨肽(GSSG)以及过氧化氢相互反应。表明SELENOF与Trx超家族功能相似,具有氧化还原活性。Trx超家族主要通过氧化还原二硫键的方式对蛋白质折叠产生影响,而从我们的实验结果显示,SELENOF并不能氧化还原胰岛素中的二硫键,因此猜测SELENOF通过其他方式参与蛋白质的质量控制机制。Pull-down实验中共鉴定出109个与SELENOF相互作用蛋白。在SELENOF基因敲除鼠的海马组织iTRAQ结果中共筛选到86个差异表达蛋白,其中,上调的差异表达蛋白50个,下调的差异表达蛋白36个。而在肝脏组织中共筛选到69个差异表达蛋白,其中,上调的差异表达蛋白17个,下调的差异表达蛋白52个。生物信息学分析结果显示,Pull-down实验鉴定的蛋白主要参与了柠檬酸循环、蛋白质合成、核糖合成与运输、胞吞作用等生物过程。SELENOF基因敲除鼠的组学结果分析显示,SELENOF的敲除使海马内的磷酸戊糖途径上调,而肝脏的糖代谢水平下调,小鼠整体表现出血糖耐受性减弱的现象,表明SELENOF影响了包括磷酸戊糖途径在内的糖代谢过程。同时SELENOF通过影响胆固醇合成及载脂蛋白合成等生物过程,在脂代谢中发挥功能,敲除后小鼠脂代谢能力下降,高脂喂养后较于对照组呈现异常肥胖症状。表明SELENOF的敲除会导致脂质代谢的减弱,从而导致脂肪更易堆积。此外,SELENOF敲除后,参与吞噬作用相关信号通路的蛋白下调。因此,SELENOF可能主要影响了参与蛋白质与核糖合成、胞吞作用、糖代谢、脂代谢等生物过程的蛋白质。综上,本研究对SELENOF基于结构上的氧化还原功能进行了验证,并通过对SELENOF互作蛋白和基因敲除引起的差异表达蛋白进行系统性的鉴定及比对,为今后SELENOF功能研究提供了组学基础及探索方向。

关键词：硒蛋白F 硫氧还蛋白活性蛋白质体外结合实验 CRISPR-Cas9基因敲除小鼠相对和绝对定量同位素标记

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氯乙烯职业卫生现状评价分析与血清生物标志物的研究

氯乙烯职业卫生现状评价分析与血清生物标志物的研究

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作者：闫欢天津医科大学

学位级别：硕士

研究目的聚氯乙烯(Polyvinyl chloride,PVC)是一种被广泛使用的合成材料,有数据显示,2012年全国聚氯乙烯树脂的产量达1317.76万吨。氯乙烯(Vinyl Chloride),作为合成聚氯乙烯(PVC)的单体,在塑料工业是一种重要的化工原料。而VCM是国际... 详细信息

研究目的聚氯乙烯(Polyvinyl chloride,PVC)是一种被广泛使用的合成材料,有数据显示,2012年全国聚氯乙烯树脂的产量达1317.76万吨。氯乙烯(Vinyl Chloride),作为合成聚氯乙烯(PVC)的单体,在塑料工业是一种重要的化工原料。而VCM是国际癌症研究总署(IARC)认定的确定的人类致癌物(IA级)之一,已证明长期接触氯乙烯可以对多个器官系统产生毒性。VCM是确定的人类致癌剂,可导致多系统、多器官肿瘤的发生。对其致癌机制的研究认为主要是VCM活性代谢产物导致遗传物质损伤而启动致癌过程。目前,发达国家VCM职业接触限值多为1ppm(2.79mg/m3,PEL),而我国VCM时间加权平均容许浓度(PC-TWA)为10mg/m3,短时间接触容许浓度(PC-STEL)为20mg/m3,高于西方国家卫生标准数倍。应用职业卫生学调查方法,对职业接触进行现状评价和健康危害调查;了解该聚氯乙烯生产企业存在的职业病危害因素和采取的职业病危害防护措施,为职业病防治工作提供依据。以往的研究主要分析基因多态性和VCM损伤之间的关系,仅从基因多态性角度出发寻找易感性生物标志物,尚未从基因的产物、生命功能的真正执行者——蛋白质的层面加以分析。许多蛋白质生物标记物以含量丰度的变化来显示生物体内某种功能的实现或者疾病的发生,因此,利用蛋白质组学对蛋白质的相对和绝对浓度进行测量非常重要。而蛋白质组学定量方法间比较,iTRAQ联合LC-MS/MS技术克服了双向凝胶电泳受蛋白丰度、等电点、分子量、疏水性等限制的弊端,可以对任何种蛋白进行鉴定。利用iTRAQ联合LC-MS/MS技术筛选不同氯乙烯接触浓度的工人血清中的差异蛋白,为阐明VCM接触所致疾病发病机制、寻找氯乙烯接触的生物标志物提供一定的依据。研究方法根据该厂安全科提供的厂区平面布置图和生产工艺资料,了解该厂的基本生产情况,确定接触的主要车间。进入车间现场,对生产建筑和生产装置进行实地调查,掌握可能逸散的生产环节和地点。同时与工人交谈和问卷调查,了解各车间工种、工作制度、工作方式等情况。本次研究对象包括天津某化工企业接触工人人数135例,该企业暴露组112名,对照组23名,按照不同的工作岗位设置累积暴露剂量组,分别采集健康对照23人、VCM接触工人112人(低剂量暴露29人,中剂量暴露22人,高剂量暴露61人)的空腹静脉血,去除白蛋白和球蛋白后,采用丙酮沉淀法富集蛋白,经酶解和iTRAQ标记后,利用2D-Nano LC-ESI-TOF/MS进行蛋白鉴定,对发现的11种差异蛋白进行分析。研究结果本研宄应用职业卫生学调查方法,对职业接触进行现状评价并进行分析;分析结果显示企业应通过职业健康教育促进使员工改变不良饮食和生活习惯。并且企业要考虑选择密闭性能可靠的设备,同时,考虑到氯乙烯还具有致癌性,还需通过加强警示告知、个体防护及职业健康查体等方面减少其对作业人员健康的远期危害。采用iTRAQ蛋白组学方法,共选出了248种蛋白,其中定量蛋白共216种。本次试验共获得11个差异蛋白,包括凝血因子V(Coagulation factor V)、角蛋白(Keratin)等7个上调蛋白,和钙粘蛋白5(Cadherin 5)等4个下调蛋白。结论应根据聚氯乙烯生产企业的特点进行职业病危害预防与控制完善所采取的职业病危害防护措施以更好地保护劳动者健康。本次蛋白质组学实验针对不同暴露剂量的氯乙烯作业人群血清进行研究,发现了钙粘蛋白5,多种角蛋白,转移生长因子诱导的蛋白与VCM接触致肿瘤发生相关,补体C4、凝血因子V与肝损伤相关,可以作为VCM接触致肝损伤、多器官肿瘤的蛋白生物标志物候选,同时也为解释VCM接触致肿瘤和肝损伤机制提供了一定的线索。

关键词：氯乙烯现状评价职业病危害相对和绝对定量同位素标记蛋白质组学差异蛋白

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基于iTRAQ技术的肾阳虚不育小鼠睾丸差异蛋白表达研究

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辽宁中医杂志 2020年第5期47卷 189-193,223页

作者：贾瑊马静卢建军陈昌波董海军空军军医大学西京医院中医科暨全军中医内科中心陕西西安710032 空军军医大学基础医学院学员四大队陕西西安710032 陕西省中医院外科陕西西安710001

目的应用iTRAQ技术研究肾阳虚证小鼠睾丸的差异蛋白表达,探讨肾阳虚引起雄性不育的机制。方法选用20只6周龄雄性昆明小鼠,随机分为空白对照组及肾阳虚证组,每组10只,肾阳虚组予氢化可的松25 mg/(kg·d)腹腔注射,空白对照组予生理盐... 详细信息

目的应用iTRAQ技术研究肾阳虚证小鼠睾丸的差异蛋白表达,探讨肾阳虚引起雄性不育的机制。方法选用20只6周龄雄性昆明小鼠,随机分为空白对照组及肾阳虚证组,每组10只,肾阳虚组予氢化可的松25 mg/(kg·d)腹腔注射,空白对照组予生理盐水0.2 mL/d腹腔注射10 d。提取睾丸总蛋白,利用iTRAQ技术对两者进行蛋白质组质谱检测,并通过筛选差异蛋白、GO富集以及Pathway信号通路富集等生物信息学方法分析两组间小鼠睾丸的差异蛋白表达。结果与空白对照组相比,肾阳虚组小鼠睾丸表达的差异蛋白共87个,其中27个上调,60个下调;显著富集于生物过程中"生殖"或"生殖过程"或"精子生成"的差异蛋白18个;主要集中在核糖体通路、PPAR信号通路及钙离子信号通路中信号转导分子的活性改变。GO与Pathway共富集于Rps5、Rps19、Rps28、Rpl11、Rplp1、Rplp2核糖体蛋白。结论肾阳虚证可能通过调节核糖体蛋白的表达进而影响细胞增殖、凋亡、分化及信号转导,或下调表达对精子有保护作用的分子,或影响睾丸脂质代谢及激素水平,从而引起睾丸中生精细胞的发育异常,最终导致精子活性改变及男性不育。

关键词：相对和绝对定量同位素标记生物信息学差异蛋白肾阳虚睾丸

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川崎氏症致病机转之研究

川崎氏症致病机转之研究

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作者：张家荣国立台湾大学

学位级别：博士

川崎氏病是一种急性全身性血管炎，主要发生于五岁以下幼童，尤其易侵犯心脏冠状动脉，并引起血管瘤的形成。研究指出，未治疗病患的冠状动脉瘤发率约为所有病患的百分之二十五；因此，目前在文明国家中，川崎氏症已成为儿童后天性心脏... 详细信息

川崎氏病是一种急性全身性血管炎，主要发生于五岁以下幼童，尤其易侵犯心脏冠状动脉，并引起血管瘤的形成。研究指出，未治疗病患的冠状动脉瘤发率约为所有病患的百分之二十五；因此，目前在文明国家中，川崎氏症已成为儿童后天性心脏病的主要原因。临床与流行病学证据显示，病原菌感染导致宿主发生不当免疫反应是诱发川崎氏症的决定性因子，宿主本身与免疫相关的遗传标记亦参与疾病的发生。然而，与免疫相关的遗传标记如何参与川崎氏症的发生，以及造成冠状动脉病变的致病机转，目前都尚未非常明了，因此本论文将针对此两项课题做进一步的探讨。本论文第一部分将针对免疫相关遗传标记如何参与川崎氏症的发生做深入的研究。BLK基因在过去台湾与日本的全基因组关联分析(GWAS)中，已被证实其与川崎氏症的并发有高度关性。因此，本论文的第一部分研究将借由整合不同族群的综合性分析来更近一步证明BLK基因与川崎氏症病人之易感性有高度相关性。经由统计研究发现，位于BLK基因启动子区域的单一核苷酸多型性位点rs2736340与台湾、日本、韩国、.欧洲的川崎氏症病人之易感性有明显相关性；进一步利用联锁不平衡(linkage disequilibrium)分析显示，与单一核苷酸多型性位点rs2736340相关连的区域︰包含启动子与基因内区(intron)，皆与川崎氏症有显着关联性。此外，我们在此疾病相关的风险性基因位点rs2736340与急性期川崎氏症病人周边血液B淋巴细胞的BLK基因表现量的相关联性研究中发现，在川崎氏症病人的分离初级B淋巴球以及由人类疱疹病毒所转染制造而成的B淋巴球细胞株中，带有风险性基因位点rs2736340会明显减少BLK基因以及蛋白质的表现量。由此基因关联性研究显示，B淋巴细胞在急性期川崎氏症的致病机转中扮演重要角色，且其BLK基因的低表现将改变其正常性功能并造成个体对于川崎氏症的易感染性。因此，借由了解基因多型性与B淋巴细胞功能性之间的连结将有助于了解川崎氏症的致病机转，并发展新型川崎氏症诊断及治疗方法。本论文第二部分为找寻造成川崎氏症病患冠状动脉病变的可能致病因子。我利用相对和绝对定量同位素标记(iTRAQ)蛋白质定量质谱分析技术，比较川崎氏症病人及非川崎氏症发烧病人血浆的蛋白质图谱的差异性，借此找寻导致冠状动脉病变的致病因子。研究结果发现有505个表现差异性蛋白在川崎氏症病人血浆中表现，并且进一步利用系统生物学分析软体暨生物资讯资料库(Ingenuity Pathway Analysis)分析出141个蛋白与心血管疾病具有相关性。其中过去被认为与冠状动脉疾病高度相关的类几丁质酶蛋白CHI3L1亦被发现在川崎氏症病人血浆中高度表现。我们进一步分析此蛋白在33个川崎氏症病人及41个非川崎氏症发烧病人血浆中的含量，结果显示CHI3L1蛋白在急性期及亚急性期川崎氏症病人血浆中有显着性的增高。此外，分析曾经产生冠状动脉瘤的川崎氏症病人在恢复期的CHI3L1蛋白表现量发现，其CHI3L1蛋白含量相对于同时期但未曾产生冠状动脉瘤的川崎氏症病人之含量具有显着性的增加。动物实验中发现，在野生(wild-type)小鼠腹腔连续注射CHI3L1合成蛋白后28天，会造成小鼠的冠状动脉有明显增厚现象发生。经由定量即时聚合酶链锁反应(Real-time PCR)实验发现，CHI3L1合成蛋白腹腔注射后的小鼠，其病变的冠状动脉有增强表现肌成纤维细胞蛋白及基质金属蛋白酶现象。本论文的第二部分研究推论，CHI3L1蛋白在川崎氏症病人中高度表现将是造成冠状动脉病变的重要因子，并可作为未来治疗川崎氏症冠状动脉病变的新药摽的。

关键词：川崎氏症 B淋巴?胞酪氨酸激? 单核?酸多型性统合分析冠状动脉异常类几丁质?蛋白相对和绝对定量同位素标记

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