检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：薛莉中国协和医科大学

学位级别：博士

白细胞介素（IL）-15具有与IL-2相似的生物学功能，能够促进T、B细胞和NK细胞增殖分化，增强CTL／NK细胞毒活性，并能发挥优于IL-2的抗肿瘤作用。本论文是在我们前期工作基础上深入探讨人（h）IL-15在真核细胞内表达和hIL-15基因修饰瘤... 详细信息

白细胞介素（IL）-15具有与IL-2相似的生物学功能，能够促进T、B细胞和NK细胞增殖分化，增强CTL／NK细胞毒活性，并能发挥优于IL-2的抗肿瘤作用。本论文是在我们前期工作基础上深入探讨人（h）IL-15在真核细胞内表达和hIL-15基因修饰瘤苗以及IL-15裸基因对小鼠肺腺癌的基因治疗作用。我们前期工作结果表明，hIL-15 cDNA转染的小鼠肺腺癌细胞LA795A与野生型LA795细胞和空载体转染细胞LA795neo相比，在同基因型T739小鼠体内的致瘤性明显下降。裸鼠实验证实这种抑瘤性至少为T细胞依赖的，且CD8+T细胞为主要的效应细胞。本论文研究进一步发现，经受LA795A肿瘤细胞接种小鼠的存活率明显高于LA795和LA795neo细胞攻击小鼠，其最长存活时间延长了20天。分别将LA795A、LA795neo和LA795三种细胞用60Co照射去增殖，作为瘤苗腹腔免疫T739小鼠后，再以不同浓度的野生型LA795肿瘤细胞进行攻击，发现LA795A肿瘤细胞免疫对T739小鼠肿瘤发生有一定的保护作用。T739荷瘤小鼠经去增殖的LA795A细胞早期治疗后，肿瘤生长虽未得以消退但受到显著抑制，取得较好疗效。经过分析，IL-15基因修饰瘤苗治疗组小鼠脾细胞的特异性CTL和非特异性NK细胞毒活性均高于其它对照组，但以NK水平增高明显。这提示，IL-15基因转染的肿瘤细胞分泌的IL-15可能通过提高机体的CTL和NK细胞毒作用来增强对肿瘤的杀伤能力。进一步观察发现，IL-15基因转染肿瘤细胞后，细胞表面的Ⅰ类MHC分子表达显著降低，推测肿瘤抗原可能是通过宿主抗原呈递细胞（APC）间接呈递给CD8+T细胞的。同时，基因修饰肿瘤细胞分泌的IL-15可能通过增强宿主APC对肿瘤抗原的呈递能力，促进CD4+T细胞对CD8+CTL的活化，直接或间接增强CTL活性，或通过TCR非依赖方式选择刺激记忆表型CD44hiCD8+T细胞增殖，来增强记忆细胞毒杀瘤活性。此外，肿瘤细胞表面Ⅰ类MHC分子水平的降低可解除NK细胞和部分CD8+T细胞表面杀伤细胞抑制受体（KIRs）对细胞毒功能的抑制作用，可能也是CTL，尤其NK细胞毒作用增强的重要原因。健康人外周血单个核细胞对人PG、PGneo和PG1肺鳞癌细胞的体外NK细胞毒实验进一步证实，NK细胞对Ⅰ类MHC分子表达水平显著降低的PG1细胞的杀伤能力明显增强。 hIL-15基因修饰瘤苗虽然在小鼠体内表现出较好的抑制肿瘤作用，但肿瘤细胞中IL-15的分泌量很少。为了解决问题，我们重新构建了人IL-15 cDNA真核表达载体，以期在哺乳类细胞中获得高效稳定表达。本论文以含有hIL-15 cDNA（574 bp）的测序质粒pBS-SK-IL-15为模板，从编码信号肽的起始密码子AUG开始设计引物，采用PCR技术扩增出hIL-15cDNA 486 bp的全编码序列（去除了所有非编码区），并与pcDNA3质粒的EcoR Ⅰ和Xba Ⅰ位点定向连接，构建受控于人巨细胞病毒（CMV）启动子的重组真核表

关键词：人白细胞介素15(IL-15) 基因修饰肿瘤细胞真核基因表达裸质粒DNA注射基因治疗抗原呈递细胞毒

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人分泌型白细胞介素－2受体αcDNA的真核基因表达（简报）

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中国医学科学院学报 1995年第4期17卷 268-268页

作者：程小款杜恺衡凤燕王劲松吴宁华沈珝琲中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室

人分泌型白细胞介素－２受体αｃＤＮＡ的真核基因表达（简报）程小款，杜恺，衡凤燕，王劲松，吴宁华，沈　（中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室，北京１００００５）在机体免疫网络中具有重... 详细信息

人分泌型白细胞介素－２受体αｃＤＮＡ的真核基因表达（简报）程小款，杜恺，衡凤燕，王劲松，吴宁华，沈　（中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室，北京１００００５）在机体免疫网络中具有重要作用的白细胞介素－２受体（ＩＬ－...

关键词：受体α 真核基因表达分泌型白细胞介素

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一种下调真核基因表达的方法及其试剂盒

一种下调真核基因表达的方法及其试剂盒

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作者：刘东石运伟董张及王新 226000 江苏省南通市崇川区啬园路9号

本发明公开了一种下调真核基因表达的方法及其试剂盒，采用5’‑磷酸化单链寡聚脱氧核糖核苷酸(5’‑p‑ss‑DNA Oligo)和Argonaute mRNA联合下调基因表达，包括NgAgo基因的改造，表达质粒的构建，表达质粒经过线性化、体外转录、回收步骤获... 详细信息

标准号: CN106566844B

本发明公开了一种下调真核基因表达的方法及其试剂盒，采用5’‑磷酸化单链寡聚脱氧核糖核苷酸(5’‑p‑ss‑DNA Oligo)和Argonaute mRNA联合下调基因表达，包括NgAgo基因的改造，表达质粒的构建，表达质粒经过线性化、体外转录、回收步骤获得Argonaute mRNA，根据目的基因序列设计并合成5’‑p‑ss‑DNA Oligo，将Argonaute mRNA和5’‑p‑ss‑DNA Oligo导入靶细胞中等步骤；本发明所述的方法中改造的NgAgo基因能够在靶细胞中快速高效的进入细胞核；5’‑p‑ss‑DNA Oligo序列依据目的基因设计，对靶序列识别具有良好的特异性；5’‑p‑ss‑DNA Oligo/NgAgo系统通过对真核细胞DNA水平的抑制作用，能够稳定高效的下调目的基因表达；5’‑p‑ss‑DNA Oligo具有良好的稳定性，利于在细胞内发挥作用；真核细胞自然条件下不存在内源性的5’‑p‑ss‑DNA Oligo因此特异性高。

关键词：目的基因表达质粒靶细胞脱氧核糖核苷酸真核基因表达细胞核下调真核细胞DNA 体外转录下调基因序列设计序列识别真核细胞自然条件基因磷酸化内源性试剂盒线性化单链对靶构建寡聚改造合成细胞回收联合

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一种下调真核基因表达的方法及其试剂盒

一种下调真核基因表达的方法及其试剂盒

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作者：刘东石运伟董张及王新 226000 江苏省南通市崇川区啬园路9号

标准号: CN106566844A

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一种真核基因表达启动子及其表达载体和应用

一种真核基因表达启动子及其表达载体和应用

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作者：张磊王文天张文慧杨仁池薛峰池颖李慧媛 300020 天津市和平区南京路288号

本发明提供一种真核基因表达启动子及其表达载体和应用。所述真核基因表达启动子具有如(I)、(II)或(III)所述的核苷酸序列中的任意一个：(I)编码RPS家族表达启动子的核苷酸序列；(II)如(I)所述的核苷酸序列经修饰、取代或突变至少一个... 详细信息

标准号: CN112852810A

本发明提供一种真核基因表达启动子及其表达载体和应用。所述真核基因表达启动子具有如(I)、(II)或(III)所述的核苷酸序列中的任意一个：(I)编码RPS家族表达启动子的核苷酸序列；(II)如(I)所述的核苷酸序列经修饰、取代或突变至少一个核苷酸获得的核苷酸序列；(III)与(I)所述的核苷酸序列具有≥90％同源性的核苷酸序列。本发明中提供的表达启动子不含潜在起始翻译序列，从根本上消除了非目的翻译起始；同时，所述启动子能够驱动外源基因的表达，利用其构建的表达载体在不同细胞中均能实现目的基因的高效表达，因此，该启动子在临床基因治疗领域具有广泛的应用前景。

关键词：核苷酸序列启动子真核基因表达表达启动子表达载体驱动外源基因翻译起始高效表达临床基因目的基因起始翻译核苷酸同源性构建修饰突变应用细胞治疗

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一种真核基因表达启动子及其表达载体和应用

一种真核基因表达启动子及其表达载体和应用

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作者：张磊王文天张文慧杨仁池薛峰池颖李慧媛 300020 天津市和平区南京路288号

标准号: CN112852810B

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一种用于真核基因表达的启动子及其载体和应用

一种用于真核基因表达的启动子及其载体和应用

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作者：张磊王文天张文慧杨仁池薛峰池颖李慧媛 300020 天津市和平区南京路288号

本发明公开了一种用于真核基因表达的启动子及其载体和应用。所述启动子具有如(I)、(II)或(III)所述的核苷酸序列中的任意一个：(I)编码RPS27启动子的核苷酸序列；(II)如(I)所述的核苷酸序列经修饰、取代或突变至少一个核苷酸获得的核... 详细信息

标准号: CN114480392B

本发明公开了一种用于真核基因表达的启动子及其载体和应用。所述启动子具有如(I)、(II)或(III)所述的核苷酸序列中的任意一个：(I)编码RPS27启动子的核苷酸序列；(II)如(I)所述的核苷酸序列经修饰、取代或突变至少一个核苷酸获得的核苷酸序列；(III)与(I)所述的核苷酸序列具有≥90％同源性的核苷酸序列。本发明中提供的表达启动子不含潜在起始翻译序列，从根本上消除了非目的翻译起始；同时，所述启动子能够驱动外源基因的表达，利用其构建的表达载体在不同细胞中均能实现目的基因的高效表达，因此，该启动子在临床基因治疗领域具有广泛的应用前景。

关键词：核苷酸序列启动子驱动外源基因真核基因表达表达启动子表达载体翻译起始高效表达临床基因目的基因起始翻译核苷酸同源性构建修饰突变应用细胞治疗

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一种用于真核基因表达的启动子及其载体和应用

一种用于真核基因表达的启动子及其载体和应用

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作者：张磊王文天张文慧杨仁池薛峰池颖李慧媛 300020 天津市和平区南京路288号

标准号: CN114480392A

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人分泌型白细胞介素2受体α链基因的克隆及其在真核细胞中的表达

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中国医学科学院学报 1995年第5期17卷 326-332页

作者：程小款杜恺衡凤燕吴宁华沈珝琲中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学医学分子生物学国家重点实验室

删除人白细胞介素－２受体α链ｃＤＮＡ中编码胞质内１３个氨基酸及跨膜区１９个氨基酸残基的ＤＮＡ片段后，接上人工合成的终止寡核苷酸片段，改建后的ｃＤＮＡ与真核表达载体ｐＲｃ／ＣＭＶ重组成质粒ｐＣＭＶ／ｒｓＩＬ２Ｒ。用电打... 详细信息

删除人白细胞介素－２受体α链ｃＤＮＡ中编码胞质内１３个氨基酸及跨膜区１９个氨基酸残基的ＤＮＡ片段后，接上人工合成的终止寡核苷酸片段，改建后的ｃＤＮＡ与真核表达载体ｐＲｃ／ＣＭＶ重组成质粒ｐＣＭＶ／ｒｓＩＬ２Ｒ。用电打孔及磷酸钙法将此质粒转染ＣＨＯ细胞，经Ｇ４１８筛出表达Ｎｅｏ基因的克隆２０株，通过ｍＲＮＡ狭缝杂交及ＥＬＩＳＡ检测，有５株能稳定表达分泌型α链ｍＲＮＡ及蛋白，其中４株细胞培养上清中的ＩＬ２Ｒα链的含量达１４００Ｕ／ｍｌ以上。

关键词：白细胞介素2 受体重组克隆真核基因表达

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重组人白细胞介素12基因在COS－7细胞的高效表达

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中国医学科学院学报 1996年第3期18卷 166-171页

作者：刘锰郑珊珊中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所世界卫生组织免疫学合作研究中心

将分别含有重组人ＩＬ－１２（ｒｈＩＬ－１２）两个亚单位ｃＤＮＡ的高效真核细胞表达载体，通过ＤＥＡＥ－Ｄｅｘｔｒａｎ改良方法，共转染至ＣＯＳ－７细胞中。结果高效表达了ｒｈＩＬ－１２蛋白，表达量为６００Ｕ／ｍｌ；并研究其... 详细信息

将分别含有重组人ＩＬ－１２（ｒｈＩＬ－１２）两个亚单位ｃＤＮＡ的高效真核细胞表达载体，通过ＤＥＡＥ－Ｄｅｘｔｒａｎ改良方法，共转染至ＣＯＳ－７细胞中。结果高效表达了ｒｈＩＬ－１２蛋白，表达量为６００Ｕ／ｍｌ；并研究其对人ＰＢＭＣ的促增殖作用和增加ＮＫ细胞毒活性的作用，为进一步研究ＩＬ－１２的生物学功能奠定了基础。

关键词：真核基因表达 COS-7细胞白细胞介素12

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