检索结果-内蒙古大学图书馆

中西医结合肝病杂志 2002年第3期12卷 158-159页

作者：刘粤王松何清刘聪马为民赵连三深圳市东湖医院 518020 华西医科大学病毒性肝炎研究室

目的:比较真核细胞表达质粒混合与单独接种对各自表达的影响。方法:在小鼠肌组织内单独或混合接种编码HBV主蛋白、HCV-CE2抗原的两种真核细胞表达质粒,取不同时间肌组织进行免疫组化检测,进行比较分析。结果:混合接种后相应蛋白均能够表... 详细信息

目的:比较真核细胞表达质粒混合与单独接种对各自表达的影响。方法:在小鼠肌组织内单独或混合接种编码HBV主蛋白、HCV-CE2抗原的两种真核细胞表达质粒,取不同时间肌组织进行免疫组化检测,进行比较分析。结果:混合接种后相应蛋白均能够表达,但表达强度及持续时间明显不及单独免疫。结论:两种真核表达质粒可以在小鼠肌细胞内表达,但其程度较弱,可能与相对较弱的体液免疫应答有关。

关键词： HBV主蛋白 HCV-CE2 真核细胞表达质粒小鼠肌细胞

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HBV主蛋白、HCV-CE_2真核细胞表达质粒在小鼠肌细胞内的共表达与存续

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海南医学 2002年第9期13卷 54-55页

作者：刘粤王松何清马为民刘聪赵连三深圳市东湖医院深圳518020 华西医科大学病毒性肝炎研究室

目的　比较真核细胞表达质粒混合与单独接种对各自表达的影响。方法　在小鼠肌组织内单次或多次 ,单独或混合接种编码HBV主蛋白、HCV -CE2 抗原的两种真核细胞表达质粒 ,取不同时间肌组织进行免疫组化检测 ,进行比较分析。结果　混合接... 详细信息

目的　比较真核细胞表达质粒混合与单独接种对各自表达的影响。方法　在小鼠肌组织内单次或多次 ,单独或混合接种编码HBV主蛋白、HCV -CE2 抗原的两种真核细胞表达质粒 ,取不同时间肌组织进行免疫组化检测 ,进行比较分析。结果　混合接种后相应蛋白均能够表达 ,但表达强度及持续时间明显不及单独免疫 ,多次接种后存续时间可延长。结论　两种真核表达质粒可以在小鼠肌细胞内共表达 ,但其程度较弱 ,存续时间较短 ,可能与相对较弱的体液免疫应答有关 ,多次接种可望有所改善。

关键词： HBV主蛋白 HCV-CE2 真核细胞表达质粒小鼠肌细胞体液免疫应答免疫组织化学

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***主蛋白、HCV-CE<,2>真核细胞表达质粒在小鼠肌细胞内的共表达

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全国第十届中医肝胆病学术会议

作者：刘粤王松何清刘聪马为民赵连三深圳市东湖医院华西医科大学病毒性肝炎研究室

目的:比较真核细胞表达质粒混合与单独接种对各自表达的影响.方法:在小鼠肌组织内单独或混合接种编码HBV主蛋白、HCV-CE抗原的两种真核细胞表达质粒,取不同时间肌组织进行免疫组化检测,进行比较分析.结果:混合接种后相应蛋白均能够表达... 详细信息

目的:比较真核细胞表达质粒混合与单独接种对各自表达的影响.方法:在小鼠肌组织内单独或混合接种编码HBV主蛋白、HCV-CE<,2>抗原的两种真核细胞表达质粒,取不同时间肌组织进行免疫组化检测,进行比较分析.结果:混合接种后相应蛋白均能够表达,但表达强度及持续时间明显不及单独免疫.结论:两种直接表达质粒可以在小鼠肌细胞内表达,但其程度较弱,可能与相对较弱的体液免疫应答有关.

关键词：真核细胞表达质粒肌细胞病毒性肝炎

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乙肝基因疫苗系列质粒的构建及其在真核细胞中的表达

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华西医科大学学报 2001年第2期32卷 172-174页

作者：秦山唐红赵连三刘丽林勇华西医科大学附属第一医院病毒性肝炎研究室成都610041 四川省感染病分子生物学重点实验室

目的　构建一系列乙肝病毒表面抗原大、中、小蛋白的真核细胞表达质粒 ,并研究其在真核细胞中的表达情况。方法　采用常规 PCR法扩增 S、前 S2 - S、前 S1 -前 S2 - S片断 ,利用重叠 PCR法扩增出前 S1 - S片断后 ,分别插入 Rc/ CMV及 p ... 详细信息

目的　构建一系列乙肝病毒表面抗原大、中、小蛋白的真核细胞表达质粒 ,并研究其在真核细胞中的表达情况。方法　采用常规 PCR法扩增 S、前 S2 - S、前 S1 -前 S2 - S片断 ,利用重叠 PCR法扩增出前 S1 - S片断后 ,分别插入 Rc/ CMV及 p SG5 U TPL/ Flag载体质粒中 ,并在其 ATG起始密码前加入 KOZAK序列后转染 SP2 / 0细胞 ,Western- Blot杂交检测所表达蛋白 ,并用核酸自动分析仪分析所插入片断的核酸序列。结果　插入片断的核苷酸序列与相应的大、中、小蛋白和前 S1 - S蛋白的编码基因一致 ,Western- Blot杂交检测出了相应的目的蛋白。结论　获得了 8个能高效表达乙肝病毒表面抗原大、中、小蛋白和前 S1 - S蛋白的真核细胞表达质粒。

关键词：乙肝病毒表面抗原真核细胞表达质粒 SP2/0细胞核酸疫苗

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表达过氧化物酶增殖物激活受体γ1全长基因质粒的构建及其在转染的系膜细胞中功能的鉴定

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中华医学杂志 2005年第33期85卷 2338-2343页

作者：孙晶马骥郝传明顾勇林善锬复旦大学附属华山医院肾脏科上海200040

目的构建过氧化物酶增殖物激活受体γ1(PPARγ1)全长表达基因质粒,观察PPARγ1过表达对系膜细胞细胞外基质(ECM)的作用。方法将野生型(WT)小鼠PPARγ1全长cDNA连接入真核细胞表达质粒pIRES2绿色荧光蛋白中,以脂质体介导的方法将该表达质... 详细信息

目的构建过氧化物酶增殖物激活受体γ1(PPARγ1)全长表达基因质粒,观察PPARγ1过表达对系膜细胞细胞外基质(ECM)的作用。方法将野生型(WT)小鼠PPARγ1全长cDNA连接入真核细胞表达质粒pIRES2绿色荧光蛋白中,以脂质体介导的方法将该表达质粒pIRES2EGFPmPPARγ1/WT转染入系膜细胞,采用RTPCR、Western印迹、PPARγ与PPRE结合活性测定等方法鉴定PPARγ1在系膜细胞中的表达与活性,并且给予高糖(30mmol/L)刺激,观察PPARγ1过表达对TGFβ1、PAI1及纤连蛋白等ECM的作用。本研究中同时以一用相同方法构建的表达功能缺陷型(DN)PPARγ1的质粒pIRES2EGFPmPPARγ1/DN作为对照。结果限制性酶切及DNA测序结果均说明所构建的质粒为PPARγ1全长表达基因质粒。该质粒的表达在转染48h后达到高峰。PPARγ1过表达能显著减少高糖所致的系膜细胞的转化生长因子(TGF)β1、纤溶酶原激活剂抑制物(PAI)1的mRNA和培养细胞上清液中FN的高表达(P<0.05)。结论PPARγ1全长表达基因质粒的构建为进一步研究PPARγ1的效应和机制提供了有利的工具,此研究结果显示PPARγ1过表达可以抑制高糖引起的细胞外基质的积聚。

关键词：转染质粒过氧化物酶增殖物激活受体γ1 系膜细胞过氧化物酶增殖物激活受体γ 全长cDNA 基因质粒细胞外基质(ECM) 鉴定真核细胞表达质粒

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含前S的乙肝病毒表面抗原真核表达质粒的构建重组CHO细胞株的建立和表达产物纯化鉴定

含前S的乙肝病毒表面抗原真核表达质粒的构建重组CHO细胞株的建立...

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作者：颜华武汉生物制品研究所

学位级别：博士

该文的目的是构建可表达含前S乙肝病毒表面抗原的真核表达质粒;转染真核细胞,获得稳定高效表达目的蛋白的细胞株;对表达产物进行生化和免疫特性进行分析,并建立初步的纯化方法.以含有乙肝病毒全基因的质粒pADR4为模板,通过PCR方法分别... 详细信息

该文的目的是构建可表达含前S乙肝病毒表面抗原的真核表达质粒;转染真核细胞,获得稳定高效表达目的蛋白的细胞株;对表达产物进行生化和免疫特性进行分析,并建立初步的纯化方法.以含有乙肝病毒全基因的质粒pADR4为模板,通过PCR方法分别扩增乙肝病毒表面抗原S和前S1及S2基因,利用引物的柔性短肽连接头,经第二次PCR扩增,获得完整乙肝病毒表面抗原的融合基因.分别插入到pcDNA3和pSV2载体构建真核细胞表达质粒.经酶切、PCR和测序,确认构建的融合基因与设计的序列是一致的.获得四个表达质粒pcHBSP、psHBSP、pcHBSPP和psHBSPP.以质粒pcHBSPP和psHBSPP对CHO/dhfr-细胞分别进行转染和共转染,通过共转染后,经筛选获得转染成功的可表达含前S基因乙肝病毒表面抗原的重组CHO细胞,然后进行亚克隆,用氨甲喋呤(MTX)加压选择,以ELISA法进行筛选,对所获得的细胞株进行特性鉴定.获得C10和A10两株能稳定高表达含前S基因乙肝病毒表面抗原的细胞株.稳定表达含前S的乙肝病毒表面抗原的重组细胞经培养,收取培养液上清.通过SDS-PAGE电泳、免疫印迹和高效液相层析等实验,分析表达产物,表明重组细胞表达产物具有乙肝表面抗原——大蛋白(LS)的生物特性.并通过沉淀离心和Sepharose CL-4B柱层析初步纯化.通过ELISA法和免疫沉淀法测估,其表达产物在细胞上清液中的含量为8-15μg/10<'6>/96小时/ml.

关键词：含前S乙型肝炎病毒表面抗原前S基因真核细胞表达质粒中国仓鼠卵巢/dhfr-细胞二氢叶酸还原酶氨甲喋呤亚克隆染色体表达 SDS-聚丙烯酰氨电泳免疫印迹反应高效液相层析免疫胶乳浊度测定

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反义转化生长因子βⅠ型受体表达质粒对大鼠肝星状细胞功能的影响

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肝脏 2004年第3期9卷 145-147页

作者：蒋炜王吉耀杨长青刘文滨王逸青复旦大学附属中山医院消化科上海200032

目的　观察反义转化生长因子 (TGF) βⅠ型受体 (TβRⅠ )表达质粒对大鼠肝星状细胞 (HSC)增殖及细胞外基质分泌的影响。方法　双酶灌注和梯度离心法分离大鼠HSC ,将构建的反义TβRⅠ真核细胞表达质粒与 pcDNA3空质粒经脂质体转染培养... 详细信息

目的　观察反义转化生长因子 (TGF) βⅠ型受体 (TβRⅠ )表达质粒对大鼠肝星状细胞 (HSC)增殖及细胞外基质分泌的影响。方法　双酶灌注和梯度离心法分离大鼠HSC ,将构建的反义TβRⅠ真核细胞表达质粒与 pcDNA3空质粒经脂质体转染培养活化的HSC ,通过RT PCR、Western印迹检测外源导入质粒在HSC中的表达 ,采用MTT法、3 H TdR掺入法检测细胞增殖情况 ,ELISA法检测TGF β1含量变化 ,并应用Western印迹检测HSC中Ⅰ、Ⅲ型胶原表达。结果　反义TβRⅠ真核细胞表达质粒可抑制活化HSC中TβRⅠmRNA及蛋白表达。与 pcDNA3转染组相比 ,反义TβRⅠ质粒表达可抑制HSC增殖 (P <0 .0 1) ,降低TGF β1含量 (P <0 .0 5 ) ,抑制Ⅰ、Ⅲ型胶原分泌 (P <0 .0 5 )。结论　重组反义TβRⅠ表达质粒可在HSC中获得较好表达 ,并可显著抑制HSC增殖及细胞外基质分泌。

关键词： HSC 反义大鼠 Ⅰ型受体鼠肝肝星状细胞真核细胞表达质粒增殖分泌 Ⅲ型胶原

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Wilson病基因突变体的体外构建及表达研究

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中华神经科杂志 2003年第5期36卷 339-342页

作者：吴志英王柠慕容慎行福建医科大学附属第一医院神经内科福州350005

目的　研究并比较正常ATP7B蛋白及其突变体蛋白的表达水平 ,为进一步探寻ATP7B蛋白参与铜转运的机制奠定基础。方法　构建含健康人全长Wilson病 (WD)cDNA片段的真核细胞表达质粒ATP7BcDNA/ pcDNA3,定点诱变三种具有代表意义的突变体表... 详细信息

目的　研究并比较正常ATP7B蛋白及其突变体蛋白的表达水平 ,为进一步探寻ATP7B蛋白参与铜转运的机制奠定基础。方法　构建含健康人全长Wilson病 (WD)cDNA片段的真核细胞表达质粒ATP7BcDNA/ pcDNA3,定点诱变三种具有代表意义的突变体表达质粒Arg778Leu/pcDNA3、Gln914Ter/ pcDNA3和Thr935Met/ pcDNA3;同时设计并制备包含ATP7B蛋白N端主要功能区的具有高度特异性和敏感性的ATP7Bn33 6 2 9抗体 ;分别以上述质粒瞬时转染中国仓鼠卵细胞 (Chinesehamsterovary ,CHO) ,收集细胞提取蛋白 ,以ATP7Bn33 6 2 9抗体为一抗 ,免疫印迹分析并比较正常和突变体ATP7B蛋白的表达程度。结果　ATP7B蛋白在正常ATP7BcDNA/pcDNA3表达质粒和Arg778Leu/ pcDNA3、Thr935Met/pcDNA3错义突变体表达质粒转染的CHO细胞中表达量一致 ,而在Gln914Ter/ pcDNA3截短突变体表达质粒转染的CHO细胞中表达量明显增加。结论　成功构建了WD突变体表达质粒并在转染细胞中表达 ,为进一步的功能研究打下基础。错义突变未改变ATP7B蛋白表达量 ,提示错义突变引起铜代谢障碍的机制与蛋白表达量无关。截短突变产生的ATP7B蛋白产物表达量增加可能与其所需的翻译时间相对较短有关。

关键词： Wilson病基因突变 ATP7B蛋白铜代谢障碍发病机制真核细胞表达质粒

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HBV DNA免疫的实验研究

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临床输血与检验 1999年第3期1卷 1-3,51页

作者：刘东辉汪兴太汪德刚李长贵张华远李河民中国药品生物制品检定所北京100050

从中国人血清中克隆出HBsAg adr亚型基因,采用pcDNA 3.1HisC真核细胞表达质粒进行基因重组。重组质粒pcDNA 3.1HisC-HBsAg分别用0.01、0.1、1、10和100μg腿部胫骨肌多点免疫BALB/C小鼠,4周时进行同样剂量加强免疫。初次免疫后4周和8周... 详细信息

从中国人血清中克隆出HBsAg adr亚型基因,采用pcDNA 3.1HisC真核细胞表达质粒进行基因重组。重组质粒pcDNA 3.1HisC-HBsAg分别用0.01、0.1、1、10和100μg腿部胫骨肌多点免疫BALB/C小鼠,4周时进行同样剂量加强免疫。初次免疫后4周和8周时分别检测HBsAg和HBsAb。结果表明,1μg以上剂量组加强免疫后,均可诱导小鼠产生特异性抗体。揭示HBV有发展DNA疫苗的可能性。

关键词： HBVDNA 加强免疫实验研究剂量免疫后真核细胞表达质粒胫骨克隆重组质粒基因重组

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增强核酸疫苗免疫应答的策略及方法

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华西医学 2005年第4期20卷 792-793页

作者：何煦雷秉钧四川大学华西医院临床医学中心实验室四川成都610041

核酸疫苗又称DNA疫苗,是指将编码某种目的抗原蛋白的外源基因插入真核细胞表达质粒,直接导入动物体细胞内,并通过宿主细胞的表达系统合成抗原蛋白,诱导宿主产生对该抗原蛋白的免疫应答,从而达到预防和治疗疾病的目的.核酸疫苗不仅能刺... 详细信息

核酸疫苗又称DNA疫苗,是指将编码某种目的抗原蛋白的外源基因插入真核细胞表达质粒,直接导入动物体细胞内,并通过宿主细胞的表达系统合成抗原蛋白,诱导宿主产生对该抗原蛋白的免疫应答,从而达到预防和治疗疾病的目的.核酸疫苗不仅能刺激机体产生特异性的体液免疫,还能诱导产生特异性的具有细胞毒杀伤性功能的CTL效应(细胞免疫),并可直接清除带有目的抗原的靶细胞,因此对病毒、细胞内寄生的细菌和寄生虫所引起的传染病具有广阔的治疗前景[1-6].

关键词：核酸疫苗免疫应答真核细胞表达质粒抗原蛋白外源基因插入宿主细胞治疗前景 DNA疫苗 CTL效应

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