检索结果-内蒙古大学图书馆

吉林大学学报(医学版) 2025年第1期51卷 51-57页

作者：张丽娜巴隆孟峻内蒙古医科大学附属医院临床检验诊断教研室内蒙古呼和浩特010059 内蒙古医科大学附属医院检验科内蒙古呼和浩特010050

目的:构建含有小鼠血清和糖皮质激素诱导激酶(SGK)1基因的真核表达载体pcDNA3.1-MYC-SGK1-mcherry,并观察载体在转染HEK293细胞后的表达情况。方法:PCR法扩增SGK1目的基因片段,并与经过HindⅢ和SbfⅠ双酶切的pcDNA3.1-MYC-C-mcherry载... 详细信息

目的:构建含有小鼠血清和糖皮质激素诱导激酶(SGK)1基因的真核表达载体pcDNA3.1-MYC-SGK1-mcherry,并观察载体在转染HEK293细胞后的表达情况。方法:PCR法扩增SGK1目的基因片段,并与经过HindⅢ和SbfⅠ双酶切的pcDNA3.1-MYC-C-mcherry载体连接。酶切和测序验证成功后,采用脂质体转染法将pcDNA3.1-MYC-SGK1-mcherry转染至HEK293细胞中,Western blotting法测定HEK293细胞中真核表达载体的表达情况。结果:酶切载体条带位于5200 bp,目的基因条带位于3100 bp,与预期结果相符。Snap Gene软件比对,pcDNA3.1-MYC-SGK1-mcherry的测序结果与预期序列一致,表明真核表达载体pcDNA3.1-MYC-SGK1-mcherry构建成功。Western blotting法观察到转染后的HEK293细胞在相对分子质量49000附近显现出明显的条带,真核表达载体pcDNA3.1-MYC-SGK1-mcherry成功表达。结论:成功构建真核表达载体pcDNA3.1-MYC-SGK1-mcherry,为后续研究SGK1基因对小鼠受精卵细胞早期发育的作用机制奠定了基础。

关键词：血清和糖皮质激素诱导激酶1 真核表达载体 HEK293细胞载体构建质粒

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鸡TXNRD1基因真核表达载体的构建、组织表达和功能研究

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黑龙江畜牧兽医 2025年第2期 60-66页

作者：徐庶勋魏志恒姜新城刘世昊吴文平王倚兰邵芳顾志良常熟理工学院生物与食品工程学院江苏常熟215500 南京医科大学附属常州市第二人民医院江苏常州213003

为了探究硫氧还蛋白还原酶1(thioredoxin reductase1,TXNRD1)基因对鸡肝细胞脂类代谢相关基因表达的影响,试验以鸡的肝脏和脂肪组织cDNA为模板,PCR扩增鸡TXNRD1基因编码序列(CDS),测序鉴定后用生物信息学分析编码蛋白及其特性,构建鸡TXN... 详细信息

为了探究硫氧还蛋白还原酶1(thioredoxin reductase1,TXNRD1)基因对鸡肝细胞脂类代谢相关基因表达的影响,试验以鸡的肝脏和脂肪组织cDNA为模板,PCR扩增鸡TXNRD1基因编码序列(CDS),测序鉴定后用生物信息学分析编码蛋白及其特性,构建鸡TXNRD1基因的真核表达载体,将其转染鸡肝癌细胞系(LMH)后对表达产物用Western-blot鉴定,采用实时荧光定量PCR检测LMH细胞中过表达TXNRD1基因对脂类代谢相关基因表达的影响,以及鸡不同组织TXNRD1基因的表达情况。结果表明:获得了鸡TXNRD1基因1497 bp的CDS片段,共编码499个氨基酸;该蛋白分子量为54818.7 u,理论等电点pI为6.03,不稳定系数为34.60(<40),为稳定蛋白,平均亲水性为-0.168(<0),为亲水蛋白质;构建真核重组表达载体gga-TXNRD1/pCMV-3Tag-9在LMH细胞中成功融合,并表达鸡TXNRD1-MYC;在LMH中过表达TXNRD1基因后LPL基因表达量显著下降(P<0.05),FASN基因表达量显著上升(P<0.05);TXNRD1基因在小肠、肾脏中表达量较高,在肝脏、腿肌、腺胃、胸肌表达量较低。说明TXNRD1基因对鸡肝脏脂类的合成具有促进作用。

关键词：鸡硫氧还蛋白还原酶1基因真核表达载体脂蛋白脂肪酶基因脂肪酸合成酶基因

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MAVS全长及其截短体真核表达载体的构建和鉴定

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浙江农业学报 2025年第1期37卷 49-60页

作者：玉妹毕冬琳郑天倚李琼毅西北民族大学生命科学与工程学院甘肃兰州730030

建立线粒体抗病毒蛋白(mitochondrial antiviral-signaling protein,MAVS)全长及截短体的真核表达载体,并检测其在HEK293细胞中的表达,为后续探索MAVS在病毒逃逸机制研究中的作用提供重要的实验材料。首先,根据NCBI数据库中人源MAVS的... 详细信息

建立线粒体抗病毒蛋白(mitochondrial antiviral-signaling protein,MAVS)全长及截短体的真核表达载体,并检测其在HEK293细胞中的表达,为后续探索MAVS在病毒逃逸机制研究中的作用提供重要的实验材料。首先,根据NCBI数据库中人源MAVS的全长序列,设计截短体引物,通过PCR从cDNA模板中扩增出MAVS全长及不同截短体的基因片段,并将其克隆到pcDNA3.1-3xflag载体中。随后,将构建好的载体转染到HEK-293细胞中,利用RT-PCR技术检测扩增产物大小,与目的大小进行对比,用Western blot技术检测MAVS蛋白在293细胞中的表达情况。结果表明,成功构建了全长MAVS(MAVS-FL)及其截短体MAVS-△C、MAVS-△CP、MAVS-PBD、MAVS-△Tm的真核表达载体,Western blot结果表明,构建的载体蛋白在HEK-293中能够有效表达。本研究成功构建了MAVS全长及其截短体的真核表达载体,并在HEK-293细胞中表达了这些蛋白,为后续研究MAVS蛋白的功能和抗病毒机制提供了实验材料。

关键词：线粒体抗病毒蛋白真核表达载体截短体构建蛋白表达

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脑心肌炎病毒VP22A基因真核表达载体的构建

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中国动物保健 2025年第1期27卷 240-241页

作者：邵帅纪晓岚刘明启李琼毅西北民族大学生命科学与工程学院甘肃兰州730000 西北民族大学生物医学研究中心生物工程与技术国家民委重点实验室甘肃兰州730000

为构建脑心肌炎病毒VP2 2A基因真核表达载体。参考EMCV毒株基因组序列,设计VP2 2A基因特异性引物,PCR扩增VP22A基因目的片段,双酶切目的基因和pc DNA3.1-Flag质粒产生相同的黏性末端,使用T4 DNA连接酶连接相同的黏性末端,连接产物转化至... 详细信息

为构建脑心肌炎病毒VP2 2A基因真核表达载体。参考EMCV毒株基因组序列,设计VP2 2A基因特异性引物,PCR扩增VP22A基因目的片段,双酶切目的基因和pc DNA3.1-Flag质粒产生相同的黏性末端,使用T4 DNA连接酶连接相同的黏性末端,连接产物转化至DH5α感受态细胞,菌液PCR鉴定阳性单克隆菌落,对阳性单克隆提取重组质粒并双酶切进行验证,对阳性重组质粒进行测序。重组质粒双酶切和测序结果表明,pc DNA3.1-Flag-VP2和pc DNA3.1-Flag-2A真核表达载体构建成功。

关键词：脑心肌炎病毒 VP2基因 2A基因真核表达载体

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真核表达载体pEGFP-claudin-1的构建及其在293T细胞中的表达

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细胞与分子免疫学杂志 2008年第5期24卷 444-446页

作者：魏欣张野李军马力潘蕾王平忠白雪帆贾战生第四军医大学唐都医院全军感染病诊疗中心陕西西安710038

目的:构建真核表达载体pEGFP-claudin-1,并在293T细胞中进行表达。方法:用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法扩增claudin-1开放读码框(ORF)基因,将其插入到pEGFP-C3载体的Xho I和BamH I酶切位点,构建真核表达载体pEGFP-claudin-1,酶切鉴... 详细信息

目的:构建真核表达载体pEGFP-claudin-1,并在293T细胞中进行表达。方法:用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法扩增claudin-1开放读码框(ORF)基因,将其插入到pEGFP-C3载体的Xho I和BamH I酶切位点,构建真核表达载体pEGFP-claudin-1,酶切鉴定并测序。通过脂质体法转染293T细胞,进行荧光检测和Western blot分析。结果:构建了含有claudin-1 ORF的真核表达质粒pEGFP-claudin-1,转染293T细胞后,经荧光可见细胞膜有EGFP-claudin-1融合蛋白的表达,Western blot检测发现有相对分子质量(Mr)49000的蛋白条带。结论:成功地构建真核表达载体pEGFP-claudin-1,并在293T细胞中表达,为研究claudin-1的功能奠定了基础。

关键词： claudin-1 绿色荧光蛋白真核表达载体 293T细胞

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真核表达载体pIRES2-EGFP-Axin的构建及其在神经胶质瘤细胞内的表达

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细胞与分子免疫学杂志 2005年第4期21卷 408-410页

作者：张丽英李青陈广生林圣彩叶菁司少艳张丰第四军医大学西京医院病理科陕西西安710032 厦门大学生命科学学院福建厦门361000

目的:构建真核表达载体pIRES2EGFPAxin,并在神经胶质瘤细胞系C6中进行表达。方法:用PCR的方法扩增Axin基因,构建真核表达载体pIRES2EGFPAxin,经NheI及SalI双酶切鉴定并测序。通过脂质体法转染C6细胞,用荧光显微镜检测细胞中增强型绿色... 详细信息

目的:构建真核表达载体pIRES2EGFPAxin,并在神经胶质瘤细胞系C6中进行表达。方法:用PCR的方法扩增Axin基因,构建真核表达载体pIRES2EGFPAxin,经NheI及SalI双酶切鉴定并测序。通过脂质体法转染C6细胞,用荧光显微镜检测细胞中增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的表达,用免疫组化染色的方法检测细胞中Axin的表达。结果:构建了真核表达载体pIRES2EGFPAxin,用脂质体法转染神经胶质瘤细胞C6后,经荧光显微镜和免疫组化染色法检测,可见细胞内有EGFP及Axin的表达。结论:成功地构建真核表达载体pIRES2EGFPAxin,并在神经胶质瘤细胞C6中表达,为研究Axin对肿瘤的生物学作用以及Axin在肿瘤基因治疗中的应用奠定了基础。

关键词： Axin EGFP 真核表达载体神经胶质瘤细胞C6

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pNEgr-mIL-12真核表达载体的体外和体内生物学活性检测

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生物化学与生物物理进展 2002年第5期29卷 790-795页

作者：杨英刘树铮付士波吉林大学公共卫生学院卫生部放射生物学重点实验室长春130021

肿瘤的基因放射治疗是近年来发展起来的新技术 .分别于体外和体内检测含辐射敏感启动子和mIL 12基因的真核表达载体 (pNEgr mIL 12 )的生物学活性 .体外经酶联免疫吸附试验 (enzymelinkedimmunosorbentassay ,ELISA)法检测转染 pNEgr ... 详细信息

肿瘤的基因放射治疗是近年来发展起来的新技术 .分别于体外和体内检测含辐射敏感启动子和mIL 12基因的真核表达载体 (pNEgr mIL 12 )的生物学活性 .体外经酶联免疫吸附试验 (enzymelinkedimmunosorbentassay ,ELISA)法检测转染 pNEgr mIL 12重组质粒的COS 7和B16细胞可经辐射诱导mIL 12p70表达 ,于 1 5～ 2 0Gy照射后表达增高最明显 ,COS 7细胞于照后4h达峰值 ,B16细胞的表达水平随照射后时间延长而逐渐增高 ;pNEgr mIL 12重组质粒联合电离辐射治疗小鼠移植肿瘤 ,单次或多次注射pNEgr mIL 12重组质粒 ,联合局部照射能够抑制小鼠移植肿瘤生长 ,与单纯照射组比较肿瘤生长速度减慢 ,瘤重降低 ,尤以多次给予质粒治疗组效果明显 .

关键词： pNEgr-mIL-12 真核表达载体体外体内生物学活性特性电离辐射转染肿瘤生长抑制作用

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真核表达载体pIRES2-ZsGreen1-opLA的构建及其在猪成纤维细胞的表达

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农业生物技术学报 2012年第8期20卷 948-954页

作者：李艳玲王颖党文庆郝柱徐宁迎张金枝浙江大学动物科学学院

α-乳清蛋白(α-lactalbumin,α-LA)是哺乳动物乳汁中一种重要的蛋白质,富含机体必需氨基酸和支链氨基酸,其极佳的氨基酸比例、易吸收性以及功能特异性,使得α-LA在婴幼儿个体正常生长中具有重要的意义。本实验旨在构建人α-乳清蛋白真... 详细信息

α-乳清蛋白(α-lactalbumin,α-LA)是哺乳动物乳汁中一种重要的蛋白质,富含机体必需氨基酸和支链氨基酸,其极佳的氨基酸比例、易吸收性以及功能特异性,使得α-LA在婴幼儿个体正常生长中具有重要的意义。本实验旨在构建人α-乳清蛋白真核表达载体pIRES2-ZsGreen1-opLA,将其转染至猪(Susscrofa)的成纤维细胞,获得稳定表达人α-LA的细胞。根据猪基因密码子偏爱性优化并合成人α-乳清蛋白基因mRNA序列opLA,并将其定向克隆入pIRES2-Zs Green1真核表达载体,双酶切及测序方法鉴定重组载体;脂质体介导的方法将载体转染入培养的猪成纤维细胞,荧光显微镜下观察转染效果,G418抗性筛选重组细胞;RT-PCR方法检测目的基因的表达。结果表明,通过酶切以及测序鉴定得到的重组载体pIRES2-Zs Green1-opLA构建成功;荧光显微镜下观察,转染了pIRES2-Zs Green1-opLA和pIRES2-Zs Green1空载体的细胞均发出绿色荧光,且荧光多集中于细胞核;筛选重组细胞的最小G418浓度为400ng/μL;RT-PCR法检测到与目的基因大小一致的片段,而未转染组和转染空载体组均未检测到。本实验成功构建真核表达载体pIRES2-ZsGreen1-opLA,并获得稳定表达目的基因的猪成纤维细胞,该细胞可作为进一步研究转基因克隆猪的供体细胞。

关键词： α-乳清蛋白(α-LA) 真核表达载体转染猪成纤维细胞

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真核表达载体pIRES2-EGFP-NT3的构建及在豚鼠耳蜗成纤维细胞中的表达

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细胞与分子免疫学杂志 2002年第6期18卷 528-530页

作者：邓志宏王锦玲邱建华金明高下王成济杨安纲第四军医大学西京医院耳鼻喉科陕西西安710032 第四军医大学生物化学与分子生物学教研室陕西西安710032

目的　构建真核表达载体pIRES2 EGFP NT3,并观察其在豚鼠耳蜗成纤维细胞中的表达及分布。方法　用RT PCR法 ,从人肝脏组织中克隆NT3 cDNA基因 ,构建真核表达载体 pIRES2 EGFP NT3,并经PCR及EcoRI/BamHI双酶切鉴定。用脂质体介导的方... 详细信息

目的　构建真核表达载体pIRES2 EGFP NT3,并观察其在豚鼠耳蜗成纤维细胞中的表达及分布。方法　用RT PCR法 ,从人肝脏组织中克隆NT3 cDNA基因 ,构建真核表达载体 pIRES2 EGFP NT3,并经PCR及EcoRI/BamHI双酶切鉴定。用脂质体介导的方法 ,将用真核表达载体 pIRES2 EGFP NT3瞬时转染豚鼠原代耳蜗成纤维细胞。转染 4 8h后 ,分别在荧光显微镜下及用免疫组化法观察转染细胞中NT 3的表达。结果　人NT 3cDNA的PCR产物约为 74 4bp。序列测定结果用BLAST软件进行同源性比较 ,同源性为 10 0 %。经EcoRI/BamHI双酶切证实 ,NT 3cDNA已成功地克隆到真核表达载体pIRES2 EGFP中。用脂质体介导法 ,将 pIRES2 EGFP NT3瞬时转染豚鼠原代耳蜗成纤维细胞 ,在荧光显微镜下观察到呈绿色荧光的成纤维细胞。NT 3免疫组化染色结果显示 ,转染NT 3基因的成纤维细胞胞浆呈棕黄色着色 ;而转染空载体的成纤维细胞免疫组化染色呈阴性。结论　成功地构建真核表达载体pIRES2 EGFP NT3,并在豚鼠耳蜗原代成纤维细胞中表达 ,为NT

关键词： NT-3 基因克隆真核表达载体成纤维细胞耳聋基因疗法

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人纤溶酶原K5区基因真核表达载体的构建和活性鉴定

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复旦学报（医学版） 2003年第5期30卷 409-413,F002页

作者：杨健王跃祥官孝群马春姑陶贤梅宋后燕复旦大学上海医学院细胞与遗传学系-教育部分子医学重点实验室上海200032

目的　构建含人纤溶酶原K5区基因的真核表达载体 ,转染人乳腺癌细胞株MDA MB 2 31,观察阳性克隆表达的K5蛋白对人脐静脉内皮细胞株ECV30 4和MDA MB 2 31细胞增殖的影响。方法　应用PCR将人纤溶酶原信号肽序列引入K5cDNA ,所得的目的片... 详细信息

目的　构建含人纤溶酶原K5区基因的真核表达载体 ,转染人乳腺癌细胞株MDA MB 2 31,观察阳性克隆表达的K5蛋白对人脐静脉内皮细胞株ECV30 4和MDA MB 2 31细胞增殖的影响。方法　应用PCR将人纤溶酶原信号肽序列引入K5cDNA ,所得的目的片段与真核表达载体 pcDNA3重组 ,构建重组质粒pcDNA3K5 ,脂质体法将其转染MDA MB 2 31,G4 18筛选阳性克隆 ,PCR鉴定 ,RT PCR和Westernblot检测K5的表达。将鉴定正确的阳性克隆的培养上清作用于ECV30 4细胞 ,MTT法检测其增殖情况 ,并用MTT法检测转染 pcD NA3K5对MDA MB 2 31细胞增殖的影响。结果　构建的重组质粒 pcDNA3K5经酶切鉴定、测序正确 ,将其转染MDA MB 2 31后挑取的阳性克隆有 3个经PCR鉴定正确 ,并经RT PCR和Westernblot检测证实K5的表达。阳性克隆的培养上清作用于ECV30 4细胞后 ,其存活率降低 ;转染 pcDNA3K5对MDA MB 2 31细胞增殖无明显影响。结论　应用脂质体法将带有人纤溶酶原信号肽序列的K5cDNA转染MDA MB 2 31细胞后 ,其分泌产生的有生物学活性的K5 ,呈现对ECV30 4细胞增殖的抑制作用 ,而对MDA MB 2 31细胞的生长则无影响。

关键词：乳腺癌基因治疗重组新生血管生成抑制因子K5 基因表达真核表达载体构建活性鉴定

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