检索结果-内蒙古大学图书馆

中华实验外科杂志 2002年第3期19卷 270-271页

作者：刘方军曹谊林商庆新崔磊刘伟上海第二医科大学附属第九人民医院整复外科 200011 上海第二医科大学组织工程研究中心

目的　为研究软骨细胞基因转染的可行性创造条件 ,从而为基因修饰的软骨组织工程研究奠定基础。方法　应用基因重组技术和限制性内切酶酶切构建并鉴定 pcDNA3 .1 TGF β1真核表达载体 ,经Fugene6介导质粒转染 3T3细胞后应用逆转录聚... 详细信息

目的　为研究软骨细胞基因转染的可行性创造条件 ,从而为基因修饰的软骨组织工程研究奠定基础。方法　应用基因重组技术和限制性内切酶酶切构建并鉴定 pcDNA3 .1 TGF β1真核表达载体 ,经Fugene6介导质粒转染 3T3细胞后应用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)检测hTGF β1mRNA在真核细胞中的表达。结果　重组真核表达载体 pcDNA3 .1 TGF β1经限制性内切酶XhoⅠ和HindⅢ酶切 ,电泳后显示 1 .35kb的hTGF β1目的片段和 5 .40kb的 pcDNA3 .1载体片段 ,证明重组质粒连接正确 ;经RT PCR检测了hTGF β1在转录水平mRNA的表达情况 ,表明质粒转染 3T3细胞后hTGF β1mRNA的表达明显增强。结论　重组真核表达载体构建正确 ,并能在真核细胞 3T3中表达hTGF β1mRNA 。

关键词：真核表达载体 pcDNA3.1-h 转化生长因子-β1 构建

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α7 cDNA真核表达载体的构建及其在H4细胞中的表达

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复旦学报（医学版） 2003年第6期30卷 559-561,568页

作者：卢家红吕传真复旦大学附属华山医院神经内科上海200040

目的构建一个含α7 cDNA的真核表达载体,并在人神经胶质瘤细胞H4中进行表达。方法采用分子克隆技术将经测序证实的人α7 cDNA同真核表达载体pNASS-CMV-Neo连接,克隆PCR及酶切筛选出阳性重组体,并采用脂质体转染法将其导入H4细胞,免疫... 详细信息

目的构建一个含α7 cDNA的真核表达载体,并在人神经胶质瘤细胞H4中进行表达。方法采用分子克隆技术将经测序证实的人α7 cDNA同真核表达载体pNASS-CMV-Neo连接,克隆PCR及酶切筛选出阳性重组体,并采用脂质体转染法将其导入H4细胞,免疫印迹、免疫染色、标记钙法检测α7的表达。结果 α7 cD-NA连接至pNASS-CMV-Neo载体,并在H4细胞中获得表达。结论含人 α7 cDNA的真核表达重组体可在人神经胶质瘤细胞中有效而稳定地表达。

关键词： α7 cDNA 真核表达载体 H4细胞 α7烟碱型乙酰胆碱受体阿尔茨海默病基因表达

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真核表达载体pIRES2-EGFP/TRAIL,pIRES2-EGFP/CD的构建和鉴定

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山东医药 2011年第1期51卷 21-23页

作者：梁兵袁芳殷建瑞谭丽华高庆春高聪广州医学院第二附属医院神经科学研究所广州510260

目的构建真核表达载体pIRES2-EGFP/TRAIL和pIRES2-EGFP/CD,为研究其联合表达对恶性胶质瘤的联合治疗作用提供基础。方法将pCMV/CD质粒和pcDNA3.1(+)/TRAIL质粒行琼脂糖凝胶电泳检测,确定其完整性,并进行序列测定确定有无基因突变。pCMV... 详细信息

目的构建真核表达载体pIRES2-EGFP/TRAIL和pIRES2-EGFP/CD,为研究其联合表达对恶性胶质瘤的联合治疗作用提供基础。方法将pCMV/CD质粒和pcDNA3.1(+)/TRAIL质粒行琼脂糖凝胶电泳检测,确定其完整性,并进行序列测定确定有无基因突变。pCMV/CD质粒用SacⅡ/XhoⅠ双酶切,pcDNA3.1(+)TRAIL质粒用BamHⅠ/XhoⅠ双酶切,将目的基因定向克隆到真核细胞表达载体pIRES2-EGFP中,转化*** DH5α感受态细胞,通过限制性内切酶双酶切、PCR及核酸序列分析等筛选、鉴定重组质粒。结果所构建的真核表达载体pIRES2-EGFP/TRAIL经SacⅡ/XhoⅠ双酶切回收片段分别为1.0、5.2 kb;pIRES2-EGFP/CD经BamHⅠ/XhoⅠ双酶切回收片段分别为1.3、5.2 kb。PCR及测序证实,pIRES2-EGFP/TRAIL和pIRES2-EGFP/CD质粒基因组中分别包含TRAIL和CD基因。结论成功构建了真核表达载体pIRES2-EGFP/TRAIL和pIRES2-EGFP/CD,为研究其联合表达对恶性胶质瘤的联合治疗作用奠定了基础。

关键词：真核表达载体 pIRES2-EGFP/TRAIL pIRES2-EGFP/CD

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真核表达载体p4ARE-TK-GFP/Neo的构建及其表达

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细胞与分子免疫学杂志 2009年第11期25卷 1008-1009,1012页

作者：徐海荣卜平李湘鸣扬州大学医学院中西医结合研究所江苏扬州225001

目的:构建真核表达载体p4ARE-TK-GFP/Neo,并在HepG2细胞中进行表达。方法:PCR法扩增TK启动子克隆到pEGFP-N1上,构建表达载体pTK-GFP/Neo。人工合成4个ARE序列,经退火和磷酸化后插入pTK-GFP/Neo载体的TK启动子上游,构建由TK启动子启动以... 详细信息

目的:构建真核表达载体p4ARE-TK-GFP/Neo,并在HepG2细胞中进行表达。方法:PCR法扩增TK启动子克隆到pEGFP-N1上,构建表达载体pTK-GFP/Neo。人工合成4个ARE序列,经退火和磷酸化后插入pTK-GFP/Neo载体的TK启动子上游,构建由TK启动子启动以及上游有4个ARE调控的真核表达载体p4ARE-TK-GFP/Neo,将其转染入HepG2细胞株并筛选,进行稳定表达。结果:成功构建了真核表达载体p4ARE-TK-GFP/Neo,并建立HepG2细胞稳定表达株。结论:成功地构建了由TK启动子启动以及上游有4个抗氧化反应元件(ARE)重复序列调控的真核表达载体p4ARE-TK-GFP/Neo,并在HepG2细胞中稳定表达,为下一步研究ARE的调控作用奠定了基础。

关键词：抗氧化反应元件(ARE) 绿色荧光蛋白(GFP) 真核表达载体 HepG2细胞

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抗慢性粒细胞性白血病bcr/abl mRNA真核表达载体的构建

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复旦学报（医学版） 2003年第1期30卷 1-3页

作者：陈波斌林果为郭荣陆华中范华骅肖娟高跞高峰复旦大学附属华山医院血液科上海200040 上海市血液中心上海200051

目的　构建一个含M1RNA、具有特异性抗慢性粒细胞性白血病 (CML)细胞融合基因bcr/ablmRNA的真核表达载体 ,以用于CML的分子靶向治疗。方法　以pTK117为模板 ,通过PCR方法合成一个带有导引序列 (GS)的M1RNA ,再将PCR产物克隆到真核表达载... 详细信息

目的　构建一个含M1RNA、具有特异性抗慢性粒细胞性白血病 (CML)细胞融合基因bcr/ablmRNA的真核表达载体 ,以用于CML的分子靶向治疗。方法　以pTK117为模板 ,通过PCR方法合成一个带有导引序列 (GS)的M1RNA ,再将PCR产物克隆到真核表达载体pNAV 1上 ,得到重组质粒pAVGS4,转化大肠埃希菌JM 10 9,以碱裂解法小量抽提 ,酶切电泳鉴定 ,并测序鉴定。结果　以EcoRⅠ和SalⅠ酶切、1%的琼脂糖凝胶电泳显示在 5 0 0和 65 0 0bp附近各有一条明亮的条带。应用PCR方法测序的结果与模板序列一致。结论　构建的 pNAV 1经酶切和测序鉴定 ,与目标序列一致 ,含有核酶、具有抗bcr/ablmRNA的真核表达载体构建成功。

关键词： bcr/abl mRNA 慢性粒细胞性白血病核酶真核表达载体细胞融合基因 PCR

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真核表达载体pcDNA3.1(-)+KG的构建及在HeLa细胞中的表达

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生物技术通报 2010年第1期26卷 188-192页

作者：王洪振王晓光翟雷吉林师范大学生命科学学院四平136000 长春师范学院生命科学学院长春130032 东北师范大学遗传与细胞研究所长春130024

为了将绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)引入细胞核内,采用两轮PCR方法从原先克隆在pcD-NA3.1(-)+GFP载体中将GFP编码序列扩增出来并引入Kozak序列和核定位信号,使用常规酶切和连接方法将其重组至pUCm-T克隆载体中,再将目... 详细信息

为了将绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)引入细胞核内,采用两轮PCR方法从原先克隆在pcD-NA3.1(-)+GFP载体中将GFP编码序列扩增出来并引入Kozak序列和核定位信号,使用常规酶切和连接方法将其重组至pUCm-T克隆载体中,再将目的片段重组至pcDNA3.1(-)中,对阳性克隆进行酶切、PCR和测序鉴定后,构建了带有Kozak序列和核定位信号的绿色荧光蛋白(GFP)真核表达载体pcDNA3.1(-)+KG。真核表达载体pcDNA3.1(-)+KG被转染试剂Su-perfect转染至HeLa细胞中,绿色荧光蛋白基因在HeLa细胞中得到表达而且在细胞核中观察到绿色荧光。该研究以绿色荧光蛋白为标记初步建立了活体观察真核细胞核动态变化的研究体系。

关键词： Kozak序列核定位信号绿色荧光蛋白真核表达载体

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mTEL-cFms激酶结构域融合蛋白真核表达载体的构建及其对信号转导和转录激活因子核转位的影响

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中国药理学与毒理学杂志 2011年第5期25卷 456-462页

作者：杨胜乾龙隆李微王莉莉军事医学科学院毒物药物研究所北京100850

目的构建激酶盘真核表达载体,观察豆蔻酰化的TEL转录调节因子HLH结构域与c-Fms激酶结构域融合蛋白(mTEL-cFmskd)的表达对信号转导和转录激活因子1(STAT1)和STAT3核转位的影响。方法利用DNA重组技术,将人的c-Src豆蔻酰化多肽、TEL转录调... 详细信息

目的构建激酶盘真核表达载体,观察豆蔻酰化的TEL转录调节因子HLH结构域与c-Fms激酶结构域融合蛋白(mTEL-cFmskd)的表达对信号转导和转录激活因子1(STAT1)和STAT3核转位的影响。方法利用DNA重组技术,将人的c-Src豆蔻酰化多肽、TEL转录调节因子HLH结构域、c-Fms激酶结构域以及c-Myc标签的DNA序列克隆在pCORON/neo载体上,构建pCORON/neo-HcSrc-Tel-cfmskd-Myc真核表达载体。将载体转染至稳定表达GFP-STAT1的人骨肉瘤细胞(U2OS)和稳定表达EGFP-STAT3的幼仓鼠肾细胞24 h后,采用IN Cell Analyzer1000获取细胞图像,分析细胞内GFP-STAT1或EGFP-STAT3融合蛋白的核转位程度。结果质粒酶切和测序鉴定表明,构建的pCORON/neo-HcSrc-Tel-cfmskd-Myc真核表达载体序列正确。载体转染细胞24 h后,绿色荧光蛋白标记的STAT1和STAT3均进入细胞核,发生核转位现象。c-Fms激酶抑制剂GW2580和Sutent能抑制mTEL-cFmskd诱导EGFP-STAT3核转位的发生。结论成功构建激酶盘真核表达载体pCORON/neo-HcSrc-Tel-cfmskd-Myc。载体在细胞中表达的mTEL-cFmskd豆蔻酰化融合蛋白具有M-CSF/c-Fms配体受体复合物激活下游信号分子的生物学功能。

关键词：巨噬细胞集落刺激因子受体真核表达载体 TEL 豆蔻酰化信号转导和转录激活因子核转位激酶抑制剂

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真核表达载体pcDNA3.1(+)-GFP-M2的构建及在小鼠骨髓树突状细胞中的表达

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药物生物技术 2014年第4期21卷 283-286页

作者：曹荣月孙翁陈檬杨梦琪宦晓军肖芳李盼龙军中国药科大学生命科学与技术学院微基因药物实验室江苏南京210009 南京中医药大学江苏南京210023

为了构建含有绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein,GFP)报告基因的M2真核表达载体pcDNA3.1(+)-GFP-M2(2段热休克蛋白70表位序列407-426,mHSP70407-426,M2),探讨M2基因转染小鼠骨髓树突状细胞(Dendritic cell,DC)的表达情况。采用4轮PCR方法从pcDNA3.1(+)-GFP载体中将GFP编码序列扩增出来,并在其上游引入Kozak序列,下游引入M2序列,使用限制性内切酶HindIII和BamHI将目的片段插入到pcDNA3.1(+)中,利用质粒自带的氨苄青霉素抗性筛选出阳性克隆,获得重组基因的表达载体。重组载体通过转染试剂Lipofectamine2 000转染至DC中,通过倒置荧光显微镜观察绿色荧光蛋白在细胞内的表达。构建的pcDNA3.1(+)-GFP-M2经双酶切、PCR和测序鉴定和预期结果一致。荧光显微镜观察显示在转染pcDNA3.1(+)-GFP-M2基因的树突状细胞中,荧光均匀地分布于整个细胞。成功构建含有绿色荧光蛋白报告基因的M2真核表达载体pcDNA3.1(+)-GFP-M2。M2基因成功转染至树突状细胞中。

关键词：真核表达载体基因转染树突状细胞 mHSP70407-426 绿色荧光蛋白 Kozak序列

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BCR/ABL特异性siRNA真核表达载体构建及其对K562细胞的影响

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中国实验血液学杂志 2016年第6期24卷 1698-1704页

作者：李明王宝林王丽娜席亚明兰州大学第一医院血液科血液病研究所甘肃兰州730000 甘肃省妇幼保健院甘肃兰州730000

目的:构建特异性BCR/ABL的siRNA真核细胞表达载体并探讨其对K562细胞BCR/ABL的干扰和生长增殖的影响。方法:根据GenBank数据库提供的BCR/BAL基因核苷酸序列,按照Tuschl设计原则,选择设计双链小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),再... 详细信息

目的:构建特异性BCR/ABL的siRNA真核细胞表达载体并探讨其对K562细胞BCR/ABL的干扰和生长增殖的影响。方法:根据GenBank数据库提供的BCR/BAL基因核苷酸序列,按照Tuschl设计原则,选择设计双链小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),再转化为能表达其小发卡结构RNA(Small hairpin RNAs,shRNA)的DNA序列,并与pTER质粒定向连接,构建受控于人RNA聚合酶Ⅲ启动子H1的真核表达载体pTER117和pTER363,经限制性内切酶酶切和DNA测序进行鉴定;该载体带有zeocin药物抗性和受四环素(tet)调控的开关基因,通过Lipofectamine 2000转染K562细胞,并筛选出阳性K562细胞克隆。采用TaqMan real-time quantitative RTPCR(RQ-PCR)和Western blot技术检测BCR/ABL mRNA和P210蛋白表达;台盼蓝染色法观察细胞的生长增殖,流式细胞术(FCM)检测细胞的凋亡。结果:构建BCR/ABL融合基因siRNA真核表达载体pTER117和pTER363,经限制性内切酶酶切和DNA测序证实与设计完全一致。用筛选出重组载体转染阳性K562细胞克隆,经过四环素诱导基因表达后,细胞的生长增殖明显受到抑制;pTER117和pTER363诱导K562细胞48 h和72 h后,其凋亡率分别为34.4%、31.8%和58.1%;54.6%;BCR/ABL的mRNA表达明显下调,分别为诱导前的10%、18%和8.5%、16%;P210蛋白表达下降明显,几乎检测不到表达。结论:BCR/ABL融合基因siRNA真核细胞表达载体构建成功,并有效干扰K562细胞BCR/ABL的表达,抑制细胞生长,诱导细胞调亡。

关键词：慢性髓系白血病 BCR/ABL融合基因真核表达载体 RNA干扰 K562细胞

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真核表达载体pEGFP-VASP-lC的构建及其在HeLa细胞中的表达

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武汉大学学报（医学版） 2006年第4期27卷 421-424,F0002页

作者：张利军魏蕾王婷婷张京伟彭小春文显梅李华武汉大学医学院病理生理学教研室武汉430071 武汉大学中南医院肿瘤外科武汉430071

目的:构建真核表达载体pEGFP-VASP-lC并稳定转染人宫颈癌细胞系HeLa细胞,为进一步探讨VASP-lC区介导的VASP的寡聚化在HeLa细胞迁移中的作用奠定基础。方法:用RT-PCR技术从人内皮细胞株ECV304细胞中获得VASP-lC区的cDNA并将其插入表达载... 详细信息

目的:构建真核表达载体pEGFP-VASP-lC并稳定转染人宫颈癌细胞系HeLa细胞,为进一步探讨VASP-lC区介导的VASP的寡聚化在HeLa细胞迁移中的作用奠定基础。方法:用RT-PCR技术从人内皮细胞株ECV304细胞中获得VASP-lC区的cDNA并将其插入表达载体pEGFP-C1中,构建的重组质粒经脂质体介导转染HeLa细胞,Western blot鉴定VASP-lC区在HeLa细胞中的稳定表达。结果:RT-PCR成功地扩增出一条约310bp的片段,经限制性内切酶酶切图谱分析和DNA序列测定证实目的基因已插入重组质粒,荧光显微镜下观察到稳定转染的细胞发出较强绿色荧光,Western blot证明人VASP-lC区能以融合蛋白的形式在HeLa细胞中稳定表达。结论:成功构建了真核表达载体pEGFP-VASP-lC,获得了稳定表达人VASP-lC区基因的HeLa细胞克隆,便于进一步探讨VASP-lC区介导的VASP的寡聚化在HeLa细胞迁移中的作用。

关键词：血管扩张刺激磷蛋白真核表达载体 HeLa细胞表达

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