检索结果-内蒙古大学图书馆

真核表达载体pcdna3.1／VEGF-B-EGFP的构建及其在骨髓间质干细胞中的表达

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中华实验外科杂志 2012年第2期29卷 343-343页

作者：杨哲张勇王胜梁家立王惠粱爽济南军区总医院心血管外科济南250031 济南军区总医院超声诊断科济南250031 山东省军区门诊部美国肯塔基州路易维尔大学医学院

我们应用脱氧核糖核酸（DNA）重组技术构建可表达人VEGF—B的真核细胞表达质粒，并将其转染于传代培养的骨髓间质干细胞（MSCs）中，探讨采用VEGF—B联合细胞移植治疗心肌缺血可行性。

关键词：骨髓间质干细胞真核表达载体pcdna3.1 真核细胞表达质粒脱氧核糖核酸 VEGF 重组技术传代培养心肌缺血

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人pcdna3.1-TPX2真核表达载体的构建与表达

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郑州大学学报（医学版） 2012年第2期47卷 144-147页

作者：刘红春刘海波王秀林寇洁刘玉含郑州大学第一附属医院检验科郑州450052 郑州大学郑州450001 河南省人民医院心血管内科郑州450003 郑州人民医院检验科郑州450012

目的:构建TPX2的真核表达载体pcdna3.1-TPX2,并观察其在食管癌EC9706细胞中的表达。方法:在pQE-70-TPX2原核表达载体基础上,根据GenBank上提供的TPX2基因序列及测序结果,采用Primer Premier 5.0软件设计扩增TPX2基因编码区的引物序列,经... 详细信息

目的:构建TPX2的真核表达载体pcdna3.1-TPX2,并观察其在食管癌EC9706细胞中的表达。方法:在pQE-70-TPX2原核表达载体基础上,根据GenBank上提供的TPX2基因序列及测序结果,采用Primer Premier 5.0软件设计扩增TPX2基因编码区的引物序列,经HindⅢ和BamHⅠ双酶切,与真核表达载体pcdna3.1连接后转化感受态大肠杆菌JM109,并进行酶切分析和序列测定。将构建的质粒pcdna3.1-TPX2体外转染EC9706细胞,进行稳定筛选。用Western blot鉴定基因的表达。结果:DNA测序和BLAST比对表明克隆的人TPX2基因序列正确,进一步酶切分析显示,成功构建了真核表达载体pcdna3.1-TPX2,并在EC9706细胞中获得稳定表达。结论:TPX2基因真核表达载体的成功构建为后续研究TPX2基因在肿瘤细胞中的功能奠定了基础。

关键词： TPX2基因原核表达载体pQE-70 真核表达载体pcdna3.1 EC9706细胞

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小鼠Foxc2质粒载体的构建及功能鉴定

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西北农业学报 2012年第5期21卷 26-31页

作者：赵霞景旭斌刘静赵涛涛杨海丽孙超西北农林科技大学动物科技学院陕西杨凌712100

构建pcdna3.1-Foxc2真核表达载体,并以脂质体转染3T3-L1前体脂肪细胞,探究Foxc2对脂代谢的影响。取孕后15d小鼠腹部脂肪组织提取总RNA,用PCR扩增Foxc2全长序列并连接至pMD18-T载体,测序正确后克隆至pcdna3.1(+)真核表达载体,成功构建pcD... 详细信息

构建pcdna3.1-Foxc2真核表达载体,并以脂质体转染3T3-L1前体脂肪细胞,探究Foxc2对脂代谢的影响。取孕后15d小鼠腹部脂肪组织提取总RNA,用PCR扩增Foxc2全长序列并连接至pMD18-T载体,测序正确后克隆至pcdna3.1(+)真核表达载体,成功构建pcdna3.1-Foxc2重组质粒载体。重组质粒转染3T3-L1前体脂肪细胞系,以未转染和空载体转染作为对照,通过RT-PCR和Western blotting法检测Foxc2核酸及蛋白表达,同时检测3T3-L1前体脂肪细胞中脂代谢相关基因FAS、ATGL、HSL及PPARγ的表达。结果显示,重组质粒转染组细胞中Foxc2的核酸和蛋白水平均显著高于对照组。同时发现超表达Foxc2显著降低FAS表达,显著升高HSL及PPARγ的表达,但是对ATGL的表达无显著影响,表明Foxc2具有抑制脂肪沉积的功能。

关键词：叉头框C2(Foxc2) 真核表达载体pcdna3.1 细胞转染脂肪沉积

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白细胞介素-4修饰骨肉瘤SAOS-2细胞在SCID小鼠体内基因免疫治疗的研究

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中华实验外科杂志 2009年第9期26卷 1229-1229页

作者：孙永明王海斌胥正泉田康松苏州大学附属第二医院骨科 215004

骨肉瘤是青少年最常见的恶性骨肿瘤，其恶性度高，转移快，疗效低，是骨科的棘手难题。白细胞介素（IL）-4是一种具有多种生物学调节功能的细胞因子，它对几乎所有从造血干细胞分化衍生来的细胞都有作用。我们应用体外基因重建构建负载... 详细信息

骨肉瘤是青少年最常见的恶性骨肿瘤，其恶性度高，转移快，疗效低，是骨科的棘手难题。白细胞介素（IL）-4是一种具有多种生物学调节功能的细胞因子，它对几乎所有从造血干细胞分化衍生来的细胞都有作用。我们应用体外基因重建构建负载IL4的真核表达载体pcdna3.1，转染骨肉瘤细胞SAOS-2，接种SCID小鼠，观测其对骨肉瘤的成瘤影响。

关键词： SAOS-2细胞白细胞介素-4 骨肉瘤细胞 SCID小鼠基因免疫治疗真核表达载体pcdna3.1 体内修饰

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EndoA基因真核表达载体构建及其对皮肤表皮细胞的作用

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中华实验外科杂志 2006年第4期23卷 627-627页

作者：唐胜建王小柯刘霞林立新孙文娟潍坊医学院整形外科研究所 261042 潍坊医学院分子生物学教研室

瘢痕组织是人体创伤修复过程中的一种自然产物。然而，胚胎皮肤却具有创伤后无瘢痕愈合的能力。近年来研究发现无瘢痕愈合是胚胎皮肤固有的特性。我们通过构建真核表达载体pcdna3.1／EndoA,并转染小鼠皮肤表皮细胞，研究EndoA对成鼠皮... 详细信息

瘢痕组织是人体创伤修复过程中的一种自然产物。然而，胚胎皮肤却具有创伤后无瘢痕愈合的能力。近年来研究发现无瘢痕愈合是胚胎皮肤固有的特性。我们通过构建真核表达载体pcdna3.1／EndoA,并转染小鼠皮肤表皮细胞，研究EndoA对成鼠皮肤表皮细胞的作用。

关键词：皮肤表皮细胞真核表达载体构建真核表达载体pcdna3.1 A基因无瘢痕愈合胚胎皮肤修复过程瘢痕组织研究发现创伤后

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重组白细胞介素-4增强日本血吸虫组织蛋白酶B核酸疫苗诱导小鼠的保护力

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2005年第2期23卷 65-68页

作者：陈欲晓王林纤唐连飞张顺科章洁曾宪芳易新元中南大学湘雅医学院免疫学教研室长沙410078 中南大学湘雅医学院寄生虫学教研室长沙410078

目的探讨重组白细胞介素-4(IL-4)真核表达质粒增强日本血吸虫组织蛋白酶BDNA疫苗对小鼠的免疫保护效果。方法将小鼠IL-4基因克隆至真核表达载体pcdna3.1以构建小鼠重组IL-4表达质粒,并联合日本血吸虫组织蛋白酶B的表达质粒DNA(VR1012-Sj... 详细信息

目的探讨重组白细胞介素-4(IL-4)真核表达质粒增强日本血吸虫组织蛋白酶BDNA疫苗对小鼠的免疫保护效果。方法将小鼠IL-4基因克隆至真核表达载体pcdna3.1以构建小鼠重组IL-4表达质粒,并联合日本血吸虫组织蛋白酶B的表达质粒DNA(VR1012-Sj31)肌注免疫小鼠,设重组IL-4表达质粒、组织蛋白酶B表达质粒和2种空载体质粒对照组。免疫组化检测IL-4和组织蛋白酶B在小鼠肌细胞内的表达,末次免疫3周后攻击感染,用减虫率及减卵率表示保护力。结果重组IL-4和组织蛋白酶BDNA均在小鼠肌细胞表达,重组IL-4和组织蛋白酶BDNA联合免疫小鼠,产生43.2%的减虫率和76.6%的减卵率,与组织蛋白酶BDNA单独免疫相比差异有显著性(P<0.01,P<0.05)。结论重组IL-4能提高日本血吸虫组织蛋白酶B核酸疫苗的抗血吸虫保护力作用,具有佐剂的免疫效应。

关键词：组织蛋白酶B 日本血吸虫保护力重组真核表达载体pcdna3.1 白细胞介素-4(IL-4) 疫苗诱导免疫保护效果 BDNA疫苗真核表达质粒免疫组化检测免疫小鼠基因克隆载体质粒肌细胞内攻击感染细胞表达单独免疫免疫效应

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Smac基因的克隆及其对Burkitt′s淋巴瘤

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中华儿科杂志 2005年第7期43卷 503-506页

作者：陆超吴升华陈吉庆赵非池霞潘晓勤费莉郭梅黄松明郭锡熔陈荣华南京医科大学第一附属医院儿科 210029 南京市儿童医院肾科南京医科大学儿科研究所

目的克隆人促凋亡基因(secondmitochondriaderivedactivatorofcaspases,Smac),研究Smac基因转染对Burkitt′s淋巴瘤Raji细胞的促凋亡作用。方法从人胚肾293细胞中扩增人Smac基因全长的cDNA;构建含Smac基因全长cDNA的真核表达载体pcdna3.1/Smac,并转染人Burkitt′s淋巴瘤Raji细胞;用Westernblot测定外源基因的表达;Hoechest33258和碘化丙锭双荧光染色,结合激光共聚焦显微镜观察细胞凋亡形态;流式细胞仪分析细胞凋亡百分率;比色法测定caspase3酶活性。结果成功克隆人Smac基因全长cDNA,并构建真核表达载体pcdna3.1/Smac;转染人Smac基因全长cDNA的真核表达载体24h,可显著诱导Burkitt′s淋巴瘤Raji细胞的凋亡,凋亡百分率达(43.7±2.5)%;转染人Smac基因全长cDNA的真核表达载体24h,可显著诱导Raji细胞中caspase3酶活性上调,吸光度为0.936±0.041,与正常对照组(0.138±0.026)及空载体转染对照组(0.136±0.036)相比,P<0.05。结论转染并表达外源性Smac基因,可显著诱导人Burkitt′s淋巴瘤Raji细胞凋亡。其机制可能与caspase3酶活性上调有关。

关键词： Burkitt Smac基因促凋亡作用 caspase-3酶活性淋巴瘤细胞真核表达载体pcdna3.1 真核表达载体pcdna3.1 Raji细胞全长cDNA activator caspases 人胚肾293细胞 Western 流式细胞仪分析细胞凋亡促凋亡基因激光共聚焦

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人RhoC基因正、反义真核表达载体的构建及对肿瘤增殖的影响

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中华实验外科杂志 2005年第11期22卷 1289-1291页

作者：石铮王家兴何庆良曾金华福建医科大学附属第一医院普外科福州350005

目的构建人RhoC基因正、反义真核表达载体,研究RhoC基因对胆管癌QBC939细胞株增殖的影响。方法应用分子克隆技术,用KpnⅠ和BamHⅠ双限制性内切酶从RhoC基因切下所需目的片段,然后将该片段正、反向定向克隆到真核表达载体pcdna 3.1/Hyg(+... 详细信息

目的构建人RhoC基因正、反义真核表达载体,研究RhoC基因对胆管癌QBC939细胞株增殖的影响。方法应用分子克隆技术,用KpnⅠ和BamHⅠ双限制性内切酶从RhoC基因切下所需目的片段,然后将该片段正、反向定向克隆到真核表达载体pcdna 3.1/Hyg(+)上,构建正、反义RhoC cDNA真核表达载体,以脂质体转染人胆管癌QBC939细胞,检测细胞生长曲线。结果经测序鉴定,将正、反义目的片段成功的连接到pcdna 3.1/Hyg(+)载体上。结果序列测定证实RhoC基因正、反义真核表达载体成功构建,反义RhoC基因抑制QBC939细胞增殖,正义RhoC基因促进QBC939细胞增殖。结论成功地将RhoC目的片段正、反向插入到pcdna 3.1/Hyg(+)中,构建了人RhoC正、反义表达真核载体,RhoC基因调控QBC939细胞增殖。

关键词：肿瘤反义寡核苷酸类增殖反义真核表达载体 RhoC基因真核表达载体pcdna3.1 QBC939细胞肿瘤增殖 pcdna3.1 分子克隆技术

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组织因子对结直肠癌细胞肺转移作用的研究

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中华胃肠外科杂志 2005年第5期8卷 447-450页

作者：戎龙万远廉刘玉村姚宏伟汪欣吴涛潘义生朱静北京大学第一医院普通外科 100034

目的探讨组织因子表达对结直肠癌细胞血行转移能力的影响。方法利用构建有正义/反义组织因子cDNA(TFcDNA)的真核表达载体pcdna3.1/Zeo,以脂质体法转染LOVO细胞,采用Western印迹分析检测转染成功LOVO细胞的组织因子蛋白表达水平。18只裸... 详细信息

目的探讨组织因子表达对结直肠癌细胞血行转移能力的影响。方法利用构建有正义/反义组织因子cDNA(TFcDNA)的真核表达载体pcdna3.1/Zeo,以脂质体法转染LOVO细胞,采用Western印迹分析检测转染成功LOVO细胞的组织因子蛋白表达水平。18只裸鼠(Babl/cnu/nu)随机分成3组,分别将转染了正义/反义TFcDNA的LOVO细胞及未转染的LOVO细胞通过尾静脉接种至裸鼠体内。8周后观察裸鼠发生肺转移的数目,以肺转移的数目反映LOVO细胞的转移能力。结果转染了正义TFcDNA的LOVO细胞的组织因子表达水平及肺转移数目较未转染的LOVO细胞升高(P<0.05,P<0.01);转染了反义TFcDNA的LOVO细胞的组织因子表达水平及肺转移数目较未转染的LOVO细胞相比则降低(P<0.05,P<0.01)。结论组织因子可以增加人类结直肠癌细胞的体内血行转移能力。

关键词：组织因子结肠直肠肿瘤 LOVO细胞转染肺转移裸鼠结直肠癌细胞真核表达载体pcdna3.1 Western印迹分析蛋白表达水平

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HOGG1特异性锤头状核酶真核表达载体的构建及鉴定

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毒理学杂志 2005年第2期19卷 111-113页

作者：张勤张遵真衡正昌四川大学公共卫生学院环境卫生教研室四川成都610041

目的　设计并合成人8 羟基鸟嘌呤 DNA糖苷酶(HOGG1)特异性的锤头状核酶(hammerheadribozyme)基因并构建其真核表达载体。鉴定含有核酶靶基因HOGG1cDNA保守序列的真核表达载体。方法　运用计算机软件人工设计并合成核酶基因(RZ) ,将核酶... 详细信息

目的　设计并合成人8 羟基鸟嘌呤 DNA糖苷酶(HOGG1)特异性的锤头状核酶(hammerheadribozyme)基因并构建其真核表达载体。鉴定含有核酶靶基因HOGG1cDNA保守序列的真核表达载体。方法　运用计算机软件人工设计并合成核酶基因(RZ) ,将核酶基因克隆到真核表达载体pcdna 3 1中,重组子由BamHI和EcoRI酶切,琼脂糖凝胶电泳鉴定及DNA测序证实。含有HOGG1基因cDNA保守序列的真核表达载体经BamHI和EcoRI酶切电泳鉴定。结果　RZ人工合成后与pcdna 3 1连接,酶切电泳及DNA测序证实合成的核酶基因序列正确并已被准确克隆入pcdna 3 1的BamHI和EcoRI位点之间,命名为pcdna 3 1 RZ。1 3kb的HOGG1基因cDNA保守序列准确克隆于pcdna 3 1的BamHI和EcoRI酶切位点之间,命名为pcdna 3 1 HOGG1。结论　成功合成HOGG1特异性的锤头状核酶基因并构建了该基因的真核表达载体,以及核酶靶基因的真核表达载体。

关键词： G1特异性真核表达载体pcdna3.1 鉴定 HOGG1 基因cDNA 8-羟基鸟嘌呤琼脂糖凝胶电泳锤头状核酶基因 DNA测序保守序列计算机软件基因克隆人工合成基因序列靶基因酶切糖苷酶重组子克隆人设计准确位点

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