检索结果-内蒙古大学图书馆

中华普通外科杂志 2005年第3期20卷 180-183页

作者：黄庆先孙念峰王国斌华中科技大学同济医学院附属协和医院普外科

目的　探讨反义高迁移率族蛋白1(HMGB1)基因对人胰腺癌细胞的抑制作用。方法　应用分子克隆技术构建反义HMGB1基因真核表达载体pcdna3.1/anti HMGB1,用脂质体法将其导入人胰腺癌细胞PANC 1中,经G4 18筛选获得可稳定表达反义HMGB1的人胰... 详细信息

目的　探讨反义高迁移率族蛋白1(HMGB1)基因对人胰腺癌细胞的抑制作用。方法　应用分子克隆技术构建反义HMGB1基因真核表达载体pcdna3.1/anti HMGB1,用脂质体法将其导入人胰腺癌细胞PANC 1中,经G4 18筛选获得可稳定表达反义HMGB1的人胰腺癌细胞克隆,通过逆转录聚合酶链反应、免疫印迹法和噻唑蓝比色法检测转染4 8h后胰腺癌细胞HMGB1基因表达和体外增殖活性的变化,流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期情况。结果　获得了pcdna3.1/anti HMGB1真核表达质粒,pcdna3.1/anti HMGB1转染可使PANC 1细胞HMGB1mRNA和蛋白表达水平显著降低(P <0 .0 1)、肿瘤细胞增殖能力明显受到抑制(P <0. 0 1) ,并出现细胞周期G1期阻滞、凋亡细胞百分数增加。结论　反义HMGB1基因的表达能有效抑制胰腺癌细胞的体外增殖并促进细胞凋亡。

关键词：高迁移率族蛋白1 癌细胞增殖真核表达载体pcdna3.1 反义基因转染逆转录-聚合酶链反应胰腺癌细胞 PANC-1 流式细胞仪检测 HMGB1 分子克隆技术噻唑蓝比色法真核表达质粒蛋白表达水平细胞增殖能力 B1基因细胞周期细胞凋亡免疫印迹法 G1期阻滞抑制作用

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hVEGF165基因克隆及其在COS-7细胞中的表达

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中国胸心血管外科临床杂志 2005年第3期12卷 185-188页

作者：葛建军周正春陈兵张胜权罗欣徐从贞汪思应安徽医科大学第一附属医院心血管外科合肥230022 安徽医科大学生物化学与分子生物学教研室合肥230022 安徽医科大学病理生理学教研室合肥230022

目的克隆人血管内皮生长因子(hVEGF)基因VEGF165片段,构建pcdna3.1/hVEGF165,观察其在COS-7细胞中的表达,为基因治疗缺血性心脏病的研究奠定基础。方法从合法引产的胎儿心肌组织中提取总核糖核酸(RNA),应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)... 详细信息

目的克隆人血管内皮生长因子(hVEGF)基因VEGF165片段,构建pcdna3.1/hVEGF165,观察其在COS-7细胞中的表达,为基因治疗缺血性心脏病的研究奠定基础。方法从合法引产的胎儿心肌组织中提取总核糖核酸(RNA),应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法获得hVEGF165基因,将其重组入T载体,聚合酶链反应(PCR)法鉴定并测序,双酶切后克隆入真核表达载体pcdna3.1/myc-his-B中,构建pcdna3.1/hVEGF165重组体。用脂质体介导将其转染COS-7细胞,蛋白印迹(Westernblotting)法检测rhVEGF165的表达蛋白。结果用RT-PCR方法从胎儿心肌组织中获得了正确的hVEGF165基因序列,并成功构建pcdna3.1/hVEGF165,且实现转染COS-7细胞的瞬时表达。结论构建的pcdna3.1/hVEGF165转染真核细胞COS-7能够表达rhVEGF蛋白。

关键词： COS-7细胞逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR) 真核表达载体pcdna3.1 基因克隆聚合酶链反应(PCR) 人血管内皮生长因子 VEGF165基因 rhVEGF165 RT-PCR方法 COS7细胞缺血性心脏病 VEGF蛋白心肌组织脂质体介导基因治疗核糖核酸

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HBV转录激活蛋白HBx、MHBs^(t78)MHBs^(t155)真核重组载体构建

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热带医学杂志 2004年第3期4卷 237-239,252页

作者：杨林江元森陈幼明李志刚李刚陈文思姚集鲁中山大学附属第三医院传染科广州510630

目的分别构建人乙型肝炎病毒(HBV)X蛋白、羧基端截断的中分子表面蛋白MHBst78、MHBst155编码基因的真核重组表达载体,以便进一步研究其转录激活功能及对宿主细胞信号传导通路的影响。方法设计合成3对寡核苷酸引物,以adr亚型HBV质粒pHBV... 详细信息

目的分别构建人乙型肝炎病毒(HBV)X蛋白、羧基端截断的中分子表面蛋白MHBst78、MHBst155编码基因的真核重组表达载体,以便进一步研究其转录激活功能及对宿主细胞信号传导通路的影响。方法设计合成3对寡核苷酸引物,以adr亚型HBV质粒pHBVDNA为模板,采用PCR法分别扩增HBVX基因、MHBst78与MHBst155编码基因片段;用HindⅢ,KpnⅠ双酶切HBVⅩ基因;用HindⅢ和BamHⅠ双酶切MHBst78与MHBst155编码基因片段后,分别定向插入到真核表达载体pcdna3.1相应酶切位点,转化宿主菌JM109,提取质粒,分别用上述内切酶酶切及DNA测序鉴定重组质粒。结果酶切重组体显示所切下的片段大小均与预计相符,测序结果与文献报道序列及预计结果一致。结论成功构建了HBVX基因、羧基端截断的HBV中分子表面蛋白MHBst78、MHBst155编码基因的真核重组表达载体,为进一步研究HBV转录激活蛋白HBx、MHBst78MHBst155对宿主细胞信号转导通路的影响奠定基础。

关键词：乙型肝炎病毒 HBV X蛋白羧基端截断的中分子HBV表面蛋白真核表达载体pcdna3.1

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