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眼镜蛇神经毒素对豚鼠颈上神经节烟碱传递的易化作用(英文)

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中国药理学与毒理学杂志 1989年第3期3卷 192-196页

作者：莫宁汤圣希广西医学院药理教研室南宁530027

本研究用离休豚鼠颈上神经节细胞内生物电记录技术,对眼镜蛇毒神经毒素对交感神经节突触传递影响进行探讨。研究首次表明,眼镜蛇神经毒素对交感神经突触前ACh的释放有易化作用。

关键词：眼镜蛇神经毒素烟碱样传递颈上神经节自主神经节

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眼镜蛇神经毒素配伍咖啡因镇痛作用研究

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中国医院药学杂志 2010年第7期30卷 565-567页

作者：郝永龙陈美荣刘启萍俞丽霞山东中医药大学第二附属医院药剂科山东济南250001 山东中医药大学附属医院眼科山东济南250011 浙江中医药大学浙江杭州310053

目的:研究眼镜蛇神经毒素(α-CNT)配伍咖啡因(CAF)镇痛效果。方法:小鼠扭体镇痛试验:各组动物给药30min后,立即注射0.6%醋酸0.2mL/只,记录15min内各组动物扭体次数;小鼠热板镇痛试验:分别测定各组动物给药后15,30min、1,2,3,4,5,6,8,10h... 详细信息

目的:研究眼镜蛇神经毒素(α-CNT)配伍咖啡因(CAF)镇痛效果。方法:小鼠扭体镇痛试验:各组动物给药30min后,立即注射0.6%醋酸0.2mL/只,记录15min内各组动物扭体次数;小鼠热板镇痛试验:分别测定各组动物给药后15,30min、1,2,3,4,5,6,8,10h,在55℃热板上痛反应时间,以小鼠舔足、跳跃、抬足为指标,记录各组动物痛反应时间。结果:眼镜蛇神经毒素配伍咖啡因能明显抑制化学刺激引起小鼠的痛反应;能明显延长小鼠热刺激引起的痛反应时间。结论:眼镜蛇神经毒素配伍咖啡因[(α-CNT-CAF(眼镜蛇神经毒素配伍咖啡因)]对疼痛动物模型有明显的镇痛效果。

关键词：眼镜蛇神经毒素咖啡因镇痛

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眼镜蛇神经毒素粉末剂的鼻黏膜纤毛毒性考察

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中国医院药学杂志 2006年第1期26卷 1-3页

作者：李范珠俞丽霞徐莲英浙江中医学院药学系药剂教研室浙江杭州310053 上海中医药大学中药学院药剂教研室上海201203

目的：考察浙江产眼镜蛇神经毒素鼻用粉末剂（神经毒素粉剂）的鼻黏膜纤毛毒性。方法：以在体蟾蜍上腭模型，观察神经毒素粉剂对鼻纤毛摆动的影响；运用组织病理学方法，在给于家兔神经毒素粉剂后1，3，5，7d时，取鼻中隔黏膜进行光学... 详细信息

目的：考察浙江产眼镜蛇神经毒素鼻用粉末剂（神经毒素粉剂）的鼻黏膜纤毛毒性。方法：以在体蟾蜍上腭模型，观察神经毒素粉剂对鼻纤毛摆动的影响；运用组织病理学方法，在给于家兔神经毒素粉剂后1，3，5，7d时，取鼻中隔黏膜进行光学显微镜观察。结果：神经毒素粉剂抑制鼻纤毛摆动强度，但停止用药后8～9h纤毛摆动可完全恢复，且纤毛形态无明显改变；家兔给予神经毒素粉剂后1，3，5d，其鼻中隔黏膜与空白对照组差异无显著性。第7天，黏膜上皮松化，黏膜轻度充血，但基底膜完整。结论：神经毒素粉剂无急性不可逆性鼻黏膜纤毛毒性。

关键词：眼镜蛇神经毒素鼻用粉末剂鼻腔给药鼻黏膜纤毛毒性

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白藜芦醇二聚体与眼镜蛇神经毒素的作用机制

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华南理工大学学报（自然科学版） 2014年第2期42卷 21-26,32页

作者：叶勇邢海婷郭亚华南理工大学化学与化工学院广东广州510640

通过Discovery Studio软件模拟白藜芦醇不同结构二聚体与眼镜蛇神经毒素(NT)的相互作用,采用波长365nm的光诱导白藜芦醇二聚体的形成,通过紫外-可见光谱分析和荧光光谱分析得到不同白藜芦醇浓度和不同光照时间下NT的紫外-可见光谱和荧... 详细信息

通过Discovery Studio软件模拟白藜芦醇不同结构二聚体与眼镜蛇神经毒素(NT)的相互作用,采用波长365nm的光诱导白藜芦醇二聚体的形成,通过紫外-可见光谱分析和荧光光谱分析得到不同白藜芦醇浓度和不同光照时间下NT的紫外-可见光谱和荧光光谱,并对结合能及作用参数进行了运算.结果表明:相比于单体,白藜芦醇二聚物对NT的结合能更大、作用更强;波长365nm的光照射白藜芦醇后,NT光谱发生了变化,紫外光吸收增强,吸收峰红移,荧光猝灭,有新发射峰生成;荧光猝灭速率常数为5.62×1012L/(mol·s),猝灭机制属于静态猝灭;白藜芦醇二聚物和NT的结合常数为5.12×105L/mol,结合位点数为1,结合距离为3.40nm,易发生非辐射能量转移;同步荧光光谱显示白藜芦醇二聚体可与NT的酪氨酸和色氨酸残基作用,羟基氢键导致其亲水性提高;白藜芦醇二聚体与NT的主要作用位点在色氨酸残基.

关键词：白藜芦醇二聚体眼镜蛇神经毒素相互作用结合能紫外-可见光谱荧光光谱

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眼镜蛇神经毒素对人肺腺癌A549细胞生长抑制作用研究

眼镜蛇神经毒素对人肺腺癌A549细胞生长抑制作用研究

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作者：申健苏州大学

学位级别：硕士

第一部分眼镜蛇神经毒素对人肺腺癌A549细胞生长抑制作用研究目的观察眼睛蛇神经毒素(cobrotoxin)体外抗肿瘤作用，并探讨其相关机制。方法以人肺腺癌A549细胞(野生型P53，wild-typeP53，wtP53)为实验对象。通过四氮唑盐还原法（MTT）... 详细信息

第一部分眼镜蛇神经毒素对人肺腺癌A549细胞生长抑制作用研究目的观察眼睛蛇神经毒素(cobrotoxin)体外抗肿瘤作用，并探讨其相关机制。方法以人肺腺癌A549细胞(野生型P53，wild-typeP53，wtP53)为实验对象。通过四氮唑盐还原法（MTT）检测眼镜蛇神经毒素（cobrotoxin）对人肺腺癌A549细胞和HFL1人肺成纤维细胞的生长抑制率；应用细胞集落平板克隆实验检测cobrotoxin对A549细胞的集落形成的影响；应用透射电镜观察cobrotoxin作用后自噬的发生；蛋白免疫印迹法（Western blot）测定单独cobrotoxin作用、cobrotoxin分别联合3-MA（3-methyladenine,3-甲基腺嘌呤，自噬抑制剂)抑制自噬和SB203580(吡啶咪唑化合物，P38信号转导通路特异性抑制剂）抑制P38-MAPK通路活性后A549细胞内Beclin-1、LC3、P62、P38及pP38等蛋白表达水平。结果MTT结果显示不同浓度cobrotoxin对A549细胞的生长均有明显抑制作用，对HFL1人肺成纤维细胞无显著抑制作用；不同浓度cobrotoxin可明显抑制A549细胞的集落形成；cobrotoxin作用后透射电镜可观察到cobrotoxin组较对照组自噬小体明显增多，3-MA、SB203580分别干预后自噬小体有所减少；cobrotoxin作用后Beclin-1、pP38、Ⅱ型LC3蛋白表达水平明显提高，P62表达明显降低，并有浓度依赖性，3-MA抑制自噬后Beclin-1、Ⅱ型LC3蛋白表达水平降低，P62表达增高，SB203580抑制P38-MAPK通路后Beclin-1、pP38、Ⅱ型LC3蛋白表达水平降低, P62表达增高结论cobrotoxin对人肺癌A549细胞体外生长有抑制作用，其作用与诱导自噬有关，其中诱导自噬作用可能和活化P38-MAPK通路有关。第二部分眼镜蛇神经毒素对人肺腺癌A549细胞裸鼠移植瘤生长抑制作用目的观察眼睛蛇神经毒素(cobrotoxin)对人肺腺癌A549细胞(wtP53)裸鼠移植瘤生长抑制作用，及探讨自噬对cobrotoxin的肿瘤抑制作用的影响。方法接种人肺腺癌A549细胞建立裸鼠移植瘤模型，分40ug/kg cobrotoxin组、40ug/kg cobrotoxin+10mmol/kg3MA组、40ug/kg cobrotoxin+5mg/kg SB203580组和阴性对照组4组，按以上规定剂量在移植瘤周围皮下注射cobrotoxin，隔日注射一次，共注射10次，同时阴性对照组动物移植瘤周皮下注射等量生理盐水。给药4周后，比较移植瘤瘤重，计算抑瘤率。结果cobrotoxin对人肺癌A549细胞裸鼠移植瘤生长有抑制作用，抑瘤率为35.7%（cobrotoxin40μg/kg组），3-MA（10mmol/kg）、SB203580（5mg/kg）干预后抑瘤率有显著下降。结论cobrotoxin对人肺腺癌A549细胞裸鼠移植瘤有生长抑制作用，其抑制作用可能与诱导自噬和活化P38-MAPK通路有关。

关键词：眼镜蛇神经毒素人肺腺癌A549细胞自噬 P38-MAPK 移植瘤

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双修饰眼镜蛇神经毒素脂质体的制备及其经鼻黏膜给药后在大鼠脑内药动学研究

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中国药学杂志 2016年第10期51卷 815-820页

作者：朱潇冉柳琳钱丽梅杨慧张幸国浙江中医药大学药学院杭州310053 浙江大学医学院附属第一医院药剂科杭州310003

目的研究双修饰眼镜蛇神经毒素脂质体[(Pep2(Pep1)-αCT-LP)]鼻黏膜给药后药物在大鼠脑中的药动学行为。方法通过Michael加成反应合成二硬脂酰甘油磷脂乙醇胺-聚乙二醇-Pep1及二硬脂酰甘油磷脂乙醇胺-聚乙二醇-Pep2,通过核磁共振氢谱(~1... 详细信息

目的研究双修饰眼镜蛇神经毒素脂质体[(Pep2(Pep1)-αCT-LP)]鼻黏膜给药后药物在大鼠脑中的药动学行为。方法通过Michael加成反应合成二硬脂酰甘油磷脂乙醇胺-聚乙二醇-Pep1及二硬脂酰甘油磷脂乙醇胺-聚乙二醇-Pep2,通过核磁共振氢谱(~1H-NMR)和红外光谱(FTIR)验证产物结构。采用薄膜分散-后插入法制备双修饰眼镜蛇神经毒素脂质体,制得的脂质体考察形态、粒径、Zeta电位;采用超滤离心法测定脂质体包封率。应用大鼠脑微透析技术测定鼻黏膜给药后大鼠脑中枢中脑导水管周围灰质(periaqueductal gray,PAG)部位未修饰、单修饰以及双修饰眼睛蛇神经毒素脂质体药物浓度经时变化,用PKSolver软件处理药动学参数。结果核磁共振氢谱和红外光谱证实二硬脂酰甘油磷脂乙醇胺-聚乙二醇-Pep1及二硬脂酰甘油磷脂乙醇胺-聚乙二醇-Pep2结构。制备的双修饰眼镜蛇神经毒素脂质体为球形或近球形,大小均一,粒径较小(115.8±1.86)nm,Zeta电位为(-13.77±0.75)m V,包封率为(32.75±1.12)%。在中脑导水管周围灰质部位,双修饰眼镜蛇神经毒素脂质体最大药物浓度(ρ_(max))显著高于其他各组脂质体(P<0.05),ρ_(max)、t_(max)、AUC_(0→∞)分别为(244.72±3.15)ng·mL^(-1)、(88.01±4.19)min、(89 199.02±1 922.99)ng·min·mL^(-1)。结论双修饰眼镜蛇神经毒素脂质体可以显著提高药物在中脑导水管周围灰质部位浓度,该结果为研究蛋白多肽类药物经鼻黏膜给药的脑靶向制剂的开发提供了参考。

关键词：眼镜蛇神经毒素双修饰脂质体微透析鼻黏膜给药

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红光响应眼镜蛇神经毒素PEG-PLGA纳米囊的制备与表征

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精细化工 2017年第8期34卷 907-911页

作者：舒洁倩叶勇广东岭南职业技术学院广东广州510663 华南理工大学化学与化工学院广东广州510640

以聚乙二醇-聚乳酸-聚乙醇酸嵌段共聚物(PEG-PLGA)为囊材,添加脱镁叶绿酸作为光敏剂,采用复乳法制备了光响应的眼镜蛇神经毒素纳米囊。以纳米囊的包封率、载药量和粒径为指标,采用单因素法对纳米囊的制备条件进行优化;以差示量热扫描分... 详细信息

以聚乙二醇-聚乳酸-聚乙醇酸嵌段共聚物(PEG-PLGA)为囊材,添加脱镁叶绿酸作为光敏剂,采用复乳法制备了光响应的眼镜蛇神经毒素纳米囊。以纳米囊的包封率、载药量和粒径为指标,采用单因素法对纳米囊的制备条件进行优化;以差示量热扫描分析其热流变性能,并以累积释药量研究其光控释行为。优化的PEGPLGA、眼镜蛇神经毒素及光敏剂脱镁叶绿酸质量配比为40∶12.5∶1,获得的纳米囊包封率为72.3%±3.6%,载药量为15.1%±1.3%,平均粒径为(862±23)nm,电位为(-46.5±3.8)m V,呈紧密球形,光敏剂分布在囊壳;在650 nm半导体激光照射30 min,体外释放明显加快。该纳米囊在不光照时具有增强药物稳定和缓释作用,而红光可促进药物释放,因而可实现光控靶向。

关键词：聚乙二醇-聚乳酸-聚乙醇酸嵌段共聚物眼镜蛇神经毒素光响应纳米囊光控靶向医药与日化原料

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中华眼镜蛇神经毒素微球的制备及镇痛作用研究

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中国药理学通报 2014年第5期30卷 676-679页

作者：郝永龙陈美荣黄铭山东中医药大学第二附属医院药剂科山东济南250001 山东中医药大学附属医院眼科山东济南250001

目的研究中华眼镜蛇神经毒素PLGA微球制备及通过鼻黏膜给药的镇痛作用。方法采用复乳溶剂挥发法制备眼镜蛇神经毒素PLGA微球,采用大鼠甩尾法测定其镇痛效果。结果采用W/O/O方法,成功制备出中华眼镜蛇神经毒素鼻腔给药PLGA微球,微球平均... 详细信息

目的研究中华眼镜蛇神经毒素PLGA微球制备及通过鼻黏膜给药的镇痛作用。方法采用复乳溶剂挥发法制备眼镜蛇神经毒素PLGA微球,采用大鼠甩尾法测定其镇痛效果。结果采用W/O/O方法,成功制备出中华眼镜蛇神经毒素鼻腔给药PLGA微球,微球平均粒径25μm左右,药物包埋率达80%以上。通过大鼠甩尾法显示明显的镇痛效果。结论将中华眼镜蛇神经毒素制成微球制剂鼻腔给药,镇痛作用明显增强。

关键词：眼镜蛇神经毒素 PLGA 微球镇痛大鼠甩尾法鼻黏膜

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自噬在眼镜蛇神经毒素诱导A549细胞死亡中的作用

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中国肺癌杂志 2013年第7期16卷 339-344页

作者：申健何靖康唐兴韩蓉李睿徐澄澄吴亚娟苏州大学附属第一医院苏州215000 苏州大学药学院苏州215123

背景与目的已有的研究表明眼镜蛇神经毒素具有抗肿瘤作用,而其在肺癌中的作用罕有研究。本研究观察cobrotoxin对人肺A549腺癌细胞株的抗肿瘤作用,探讨自噬和P38-MAPK通路在这过程中的作用。方法应用MTT法观察cobrotoxin对A549细胞和HFL... 详细信息

背景与目的已有的研究表明眼镜蛇神经毒素具有抗肿瘤作用,而其在肺癌中的作用罕有研究。本研究观察cobrotoxin对人肺A549腺癌细胞株的抗肿瘤作用,探讨自噬和P38-MAPK通路在这过程中的作用。方法应用MTT法观察cobrotoxin对A549细胞和HFL1人肺成纤维细胞的生长抑制作用以及用3-MA抑制自噬、SB203580抑制P38-MAPK通路后cobrotoxin对A549细胞的生长抑制作用;应用细胞集落平板克隆实验检测cobrotoxin对A549细胞的集落形成的影响;蛋白免疫印迹法(Western blot)测定单独cobrotoxin作用、cobrotoxin分别联合3-MA抑制自噬和SB203580抑制P38-MAPK通路活性后A549细胞内beclin-1、LC3、P62、P38及pP38等蛋白表达水平。结果不同浓度cobrotoxin对A549细胞的生长有明显抑制作用,对HFL1人肺成纤维细胞无明显抑制作用,3-MA、SB203580作用后cobrotoxin对A549细胞的抑制作用降低;不同浓度cobrotoxin可明显抑制A549细胞的集落形成;cobrotoxin作用后beclin-1、pP38蛋白表达水平明显提高,P62表达明显降低,II型/I型LC3比值增大,并有浓度依赖性,3-MA抑制自噬后beclin-1蛋白表达水平降低,P62表达增高、II型/I型LC3比值减小,SB203580抑制P38-MAPK通路后beclin-1、pP38蛋白表达水平降低,II型/I型LC3比值减小。结论 cobrotoxin对人肺A549腺癌细胞体外生长有抑制作用,可能通过活化P38-MAPK通路激活自噬参与抗肿瘤过程。

关键词：眼镜蛇神经毒素人肺A549腺癌细胞自噬 P38-MAPK

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光诱导白藜芦醇与眼镜蛇神经毒素聚合和协同镇痛作用

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中国医院药学杂志 2014年第4期34卷 260-263页

作者：叶勇陈雪兰郭亚华南理工大学化学与化工学院制药工程系广东广州510640

目的:研究白藜芦醇与眼镜蛇神经毒素在生理pH条件下的经光诱发产生的相互作用及其对镇痛的影响。方法:采用紫外可见光谱和荧光光谱法扫描不同白藜芦醇浓度下眼镜蛇神经毒素(NT)在pH7.4磷酸缓冲液中的光谱,测定365 nm光照射白藜芦醇后的N... 详细信息

目的:研究白藜芦醇与眼镜蛇神经毒素在生理pH条件下的经光诱发产生的相互作用及其对镇痛的影响。方法:采用紫外可见光谱和荧光光谱法扫描不同白藜芦醇浓度下眼镜蛇神经毒素(NT)在pH7.4磷酸缓冲液中的光谱,测定365 nm光照射白藜芦醇后的NT的荧光光谱。采用醋酸扭体法和热板法考察在白藜芦醇和NT联合用药并经尾静脉光照后对小鼠的镇痛效果。结果:紫外可见光谱和荧光光谱峰形发生了变化,紫外可见光吸收增强,荧光猝灭,光照加剧了猝灭效应,说明NT与白藜芦醇产生了聚合作用。其结合常数Ka为5.12×105 L·mol-1,结合位点数n为1,结合距离R为3.40 nm,故易发生非辐射能量转移。白藜芦醇和NT联合给药并光照后,小鼠镇痛效果较单独给药或联合给药但非光照组增强。结论:白藜芦醇在光诱导下活化与NT聚合,产生了协同镇痛作用。

关键词：白藜芦醇眼镜蛇神经毒素协同镇痛

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