检索结果-内蒙古大学图书馆

农业生物技术学报 2023年第12期31卷 2654-2664页

作者：俞瑶程华陈素梅陈发棣蒋甲福南京农业大学作物遗传与种质创新国家重点实验室/农业农村部景观农业重点实验室/华东地区花卉生物学国家林业和草原局重点实验室/园艺学院

菊花(Chrysanthemum morifolium)多是六倍体，遗传背景复杂，稳定遗传转化效率低。本研究旨在优化菊花中的瞬时表达系统，提高瞬转效率、目的基因表达活性，为开展菊花相关基因的功能研究提供有效手段。利用真空渗透法对'神马'(... 详细信息

菊花(Chrysanthemum morifolium)多是六倍体，遗传背景复杂，稳定遗传转化效率低。本研究旨在优化菊花中的瞬时表达系统，提高瞬转效率、目的基因表达活性，为开展菊花相关基因的功能研究提供有效手段。利用真空渗透法对'神马'('Jinba')菊花插穗进行瞬时转化，通过选择不同种类的悬浮液、不同悬浮液pH、是否添加乙酰丁香酮、不同悬浮终浓度、农杆菌(Agrobacterium)菌液暗培养时间以及植物暗培养温度6个方面进行研究，对所得侵染效率进行统计分析，同时通过测定分析荧光素酶(luciferase, LUC)平均荧光强度进一步判断表达效率，探索这6种条件对菊花瞬时转化效率及目标基因表达活性的影响程度。结果表明，侵染菊花时，2-(N-吗啡啉)乙磺酸(2-(N-morpholino) ethanesulfonic acid hydrate, MES)缓冲液为最适宜的悬浮液；且悬浮液pH=6.0时，荧光值表达水平最高；其次，加入乙酰丁香酮(100μmol/L)能够提高瞬时侵染的转化效率和荧光值的表达水平；当悬浮菌液的OD600值为1.8时，荧光值表达量显著上升(P<0.05)；菌液悬浮后置于28℃暗培养4 h更有利于荧光值的表达；另外，10℃低温暗培养植物时侵染效率和荧光值表达量均有所提升。本研究通过更改悬浮液的成分、悬浮菌液的浓度、悬浮菌液和瞬时转化后植株的培养条件显著提高了菊花荧光值表达量，在较短的实验周期内做到了有效的瞬时表达，可为菊花基因功能研究提供有效手段。

关键词：菊花根癌农杆菌瞬时表达系统荧光值

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

基于瞬时表达系统的水稻miRNA靶基因快速验证系统的建立

引用

生物技术通报 2019年第10期35卷 57-63页

作者：胡积祥曹雅倩朱秀梅余超田芳杨凤环陈华民何晨阳中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室

旨在建立一种准确且快速的基于瞬时表达系统的水稻miRNA靶基因验证系统,为研究水稻miRNAs的生物学功能奠定基础。已有研究证实osa-miR169o剪切靶基因OsNF-YA4(LOC_Os03g48970.1)的mRNA,以此为参照,在烟草和水稻原生质体瞬时表达系统中将... 详细信息

旨在建立一种准确且快速的基于瞬时表达系统的水稻miRNA靶基因验证系统,为研究水稻miRNAs的生物学功能奠定基础。已有研究证实osa-miR169o剪切靶基因OsNF-YA4(LOC_Os03g48970.1)的mRNA,以此为参照,在烟草和水稻原生质体瞬时表达系统中将miR169o前体基因分别与LUC表达载体、LUC-48970和LUC-48970m3融合表达载体瞬时共表达,通过CCD活体成像和Luminometor分析了共表达后LUC活性的动态变化。利用茎环qRT-PCR对miR169o的表达水平进行分析,获得靶基因验证的适合体系。在水稻原生质体体系中,LUC活性和miR169o表达水平在原生质体转化后逐渐增高;24 h时LUC活性最高,相应miR169o表达水平上升10倍左右。综合分析,在原生质体转化后24 h-36 h为适宜检测时间段。在烟草瞬时表达体系中,农杆菌注射72 h后LUC活性最强,而miR169o的表达在48 h后即可上调20倍。因此,农杆菌注射后48 h-72 h为适宜检测时间段。本系统为水稻miRNA靶基因的验证提供了一种简便、快速,且更接近于体内真实情况的实验方法。

关键词：水稻 miRNA 荧光素酶靶基因验证瞬时表达系统

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

橡胶树叶肉细胞原生质体的制备及瞬时表达系统对植物免疫反应的检测

橡胶树叶肉细胞原生质体的制备及瞬时表达系统对植物免疫反应的检...

引用

作者：王凉洁海南大学

学位级别：硕士

天然橡胶是重要的战略物资,各种橡胶树病害的发生严重影响了天然橡胶的产量。由于橡胶树遗传转化体系存在诸多困难,橡胶树分子生物学尤其是橡胶树功能基因组方面的研究明显滞后,也严重阻碍了橡胶树分子病理学的研究进度。植物PAMPs(Path... 详细信息

天然橡胶是重要的战略物资,各种橡胶树病害的发生严重影响了天然橡胶的产量。由于橡胶树遗传转化体系存在诸多困难,橡胶树分子生物学尤其是橡胶树功能基因组方面的研究明显滞后,也严重阻碍了橡胶树分子病理学的研究进度。植物PAMPs(Pathogen-associated molecular patterns)触发的免疫(PAMPs-triggered immunit,PTI)由于具有广谱的特点,越来越受到人们的重视。目前橡胶树中的关于PTI的研究还很少,相关的研究体系还没有建立。本研究旨在建立一个稳定的橡胶树原生质体瞬时表达系统的前提下,分析已有的抗病相关基因***3. ***5对不同PAMPs的应答情况,利用双荧光素酶报告系统建立一个能够快速灵敏地检测橡胶树PTI反应的体系,为研究橡胶树抗病相关基因的功能,分析病原菌效应蛋白对橡胶树细胞免疫反应的影响以及橡胶树抗病信号途径组分提供有效的研究工具和手段。主要的研究结果如下： 1.研究不同酶解时间、不同叶龄叶片以及原生质体培养过程中不同培养液对原生质体制备和培养的影响。结果表明,选取浅绿期叶片,酶解时间5h制备原生质体的得率最高,状态最好,原生质体活力可到达97%以上；WI培养液优于W5培养液。 2.通过绿色荧光蛋白GFP和Western blot技术分析了橡胶树叶肉细胞原生质体的转化率和表达情况。结果表明,PEG介导法的橡胶树叶肉原生质体细胞瞬时表达的转化率为50%左右,转化后4h可以检测到目标蛋白的表达,到22h后目标蛋白的表达逐渐减少,6-18h之间的表达量比较稳定。 3.本研究在橡胶树转录组数据库中进行同源搜索获得FER的部分序列片段,利用RT-PCR和RACE技术克隆了橡胶树同源基因的全长cDNA,命名为HbFER,并进行了相应的生物信息学分析。 4.利用半定量RT-PCR技术研究了不同PAMPs处理橡胶树原生质体细胞后对已知抗病相关基因HbFER、HbMPK3、HbMPK6、HbPR1、HbPR5的表达影响。结果表明,细菌鞭毛蛋白(flg22)能够除了能够抑制HbFER基因的表达外,还能够诱导HbPR1和HbPR5基因的表达；几丁质(Chitin)对HbFER基因具有下调作用,但能够诱导HbPR1的表达；在被检测的几个基因中,细胞壁提取物(CWE)只对HbPR1基因的表达起上调作用；HbMPK3和HbMPK6对参试的三个三种PAMP都没有应答。这些结果暗示,HbFER、HbPR1、HbPR5与了橡胶树的PTI反应有关,但参与的信号途径不尽相同。 5.利用双荧光素酶报告系统,将HbFER、HbPR1和HbPR5等基因的启动子与LUC报告基因融合,通过LUC活性检测不同PAMPs对这些基因表达的影响。结果表明,HbFER::LUC活性被flg22显著抑制；HbPR5::LUC活性能够被flg22和chitin显著诱导。HbPR1::LUC活性能够被CWE显著诱导。表明HbFER、HbPR1和HbPR5可以作为不同PAMPs信号途径激发橡胶树先天免疫反应的标签基因。

关键词：巴西橡胶树叶肉细胞原生质体瞬时表达系统 PTI

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

利用玉米原生质体瞬时表达系统进行CK2α亚基的功能研究

利用玉米原生质体瞬时表达系统进行CK2α亚基的功能研究

引用

作者：武鹏中国农业大学

学位级别：硕士

玉米是主要农作物之一。青枯病是危害玉米根和茎基部的一类重要土传真菌病害。玉米青枯病病原菌主要为肿囊腐酶。本课题组对玉米接种肿囊腐酶前、后取材进行了cDNA—AFLP分析，得到的差显片段中包括CK2α亚基基因。\n 为了进一步确认... 详细信息

玉米是主要农作物之一。青枯病是危害玉米根和茎基部的一类重要土传真菌病害。玉米青枯病病原菌主要为肿囊腐酶。本课题组对玉米接种肿囊腐酶前、后取材进行了cDNA—AFLP分析，得到的差显片段中包括CK2α亚基基因。\n 为了进一步确认CK2α亚基是否参与玉米的抗病进程，本实验用Northem和玉米原生质体瞬时表达系统对CK2α亚基在玉米抗病进程中的作用进行了初步探讨。\n CK2是一个在真核细胞中普遍存在的蛋白激酶，它在植物的不同生长阶段均有表达。以前的研究已经发现CK2在肿瘤生成、HIV-1活性、细胞凋亡、细胞周期等生理生化过程中发挥作用。Northern结果表明，在肿囊腐霉侵染玉米后，CK2α亚基基因表现出被诱导的表达模式，这说明CK2α基参与了玉米的抗病反应过程。本研究利用玉米原生质体瞬时表达系统对CK2α亚基转入玉米后抗病相关基因的表达进行了检测，发现CK2α亚基的过表达诱导了RPR1基因的表达，初步证明CK2α亚基在玉米的抗病反应中发挥作用。\n 为了进一步了解CK2α亚基在植物抗病进程中的作用，我们对拟南芥的CK2α亚基突变体进行了研究。实验证明，在ABA、IAA、SA、MJA、甘露醇等激素的不同浓度处理下，突变体的表型和野生型对照相比并无明显差异。以SA处理后的突变体植株为材料提取RNA，反转录为cDNA后作为模板，以PRl和ERFl基因作为MARK基因设计引物，进行RT-PCR检测。实验结果显示在没有用SA处理时，突变体中的PRl表达被明显抑制；而在SA处理后，突变体中的PRl表达得到一定程度的恢复，但仍然比WT中的表达量要低。说明CK2α亚基的缺失能够部分阻断SA诱导的抗病信号传导。\n 除此之外，我们已经将CK2α亚基转入到玉米和拟南芥中，下一步将对转基因植株的表型进行观察，进一步研究CK2α亚基对玉米抗病机制的影响。

关键词： CK2α亚基青枯病蛋白激酶玉米原生质体玉米抗病机制瞬时表达系统

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

黄毛草莓原生质体分离、融合及瞬时表达系统的构建

黄毛草莓原生质体分离、融合及瞬时表达系统的构建

引用

作者：张一晨云南大学

学位级别：硕士

黄毛草莓（Fragaria nilgerrensis *** Gay）,是我国西南地区广布的野生草莓资源,拥有独特的果色、果香,植株健壮且抽生能力和抗逆性强,是栽培草莓遗传改良的重要野生资源;但由于二者倍性不同,且遗传差异较大,故在常规杂交育种中选择效... 详细信息

黄毛草莓（Fragaria nilgerrensis *** Gay）,是我国西南地区广布的野生草莓资源,拥有独特的果色、果香,植株健壮且抽生能力和抗逆性强,是栽培草莓遗传改良的重要野生资源;但由于二者倍性不同,且遗传差异较大,故在常规杂交育种中选择效率低,子代优良性状难以集中。而基于植物原生质体分离和培养的体细胞杂交技术可实现科属种间杂交,并且原生质体也是遗传转化的理想工具。因此,本研究建立品质优良的低倍性野生二倍体黄毛草莓原生质体分离体系,在此基础上,进行栽培草莓与野生黄毛草莓的体细胞融合探究,以克服杂交中出现的障碍以获得种间杂种,从而扩大无性系变异谱及突变体筛选来选育优良和特色品种;同时利用果实相关基因Fn MYB1构建黄毛草莓原生质体瞬时表达体系,为草莓后续深入开展细胞和分子生物学及其他基因组学研究提供理论和技术依据,也为开发利用我国野生草莓资源提供一条新途径。主要研究结果如下:1.草莓胚性愈伤组织诱导培养体系:适宜黄毛草莓茎尖诱导愈伤组织的培养基为MS+0.2 mg/L NAA+0.3 mg/L 2,4-D+0.4 mg/L TDZ+0.2 mg/L 6-BA,叶片诱导愈伤组织培养基为MS+0.6 mg/L NAA+0.3 mg/L 2,4-D+0.2 mg/L TDZ+0.6mg/L 6-BA,最佳暗处理时间为12 d;诱导出的愈伤组织能培养改造为胚性愈伤组织。三种栽培草莓花药愈伤组织诱导的最适预处理条件为4℃低温暗处理2 d,培养基为MS+1.0 mg/L 2,4-D+2.0 mg/L 6-BA,诱导叶片和匍匐茎段愈伤组织的培养基为0.2 mg/L NAA+1.0 mg/L 6-BA;花药和叶片诱导的愈伤组织能培养改造为胚性愈伤组织。2.黄毛草莓原生质体分离纯化体系:无菌叶片经预处理CPW 3M浸泡40min,使用1.2%Cellulase R-10+0.1%Pectolyase Y-23+0.6%Macerozyme R-10+0.5 M D-甘露醇或1.2%Cellulase R-10+0.15%Pectolyase Y-23+0.45%Macerozyme R-10+0.45 M D-甘露醇酶解液组合,黑暗条件35 rpm匀速酶解13h,1200 r/min纯化洗涤4 min,能得到数量和质量最佳的黄毛草莓叶肉原生质体;胚性愈伤组织经60 min低温预处理,使用1.1%Cellulase R-10+0.15%Pectolyase Y-23+0.45%Macerozyme R-10+0.45 M D-甘露醇酶解液组合,35 rpm黑暗酶解12 h,800 r/min纯化离心4 min能得到数量和质量最佳的黄毛草莓胚性愈伤组织原生质体。3.草莓原生质体融合:采用PEG结合高Ga2+高p H法,使用30%PEG 6000融合液和高Ga2+稀释液各作用25 min时,黄毛草莓和桃熏草莓叶肉原生质体融合率最高,为8.76%;使用30%PEG 6000和高Ga2+稀释液各处理15 min时,黄毛草莓胚性愈伤组织原生质体与桃熏草莓叶肉原生质体融合率最高,为9.89%。4.草莓原生质体培养:使用液体浅层培养法诱导出黄毛草莓叶肉原生质体愈伤组织,使用培养基为0.5 mg/L 2,4-D+1.0 mg/L 6-BA+0.3 M葡萄糖,植板率最高为10.09%。5.黄毛草莓原生质体瞬时表达系统:选用黄毛草莓Fn MYB1基因,亚细胞定位该基因于细胞核上,与预测结果相同,成功构建原生质体瞬时表达体系。

关键词：黄毛草莓原生质体分离体细胞融合瞬时表达系统

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

农杆菌介导的甘蓝型油菜子叶瞬时表达系统的建立

农杆菌介导的甘蓝型油菜子叶瞬时表达系统的建立

引用

作者：李冠英江苏大学

学位级别：硕士

瞬时表达是一种将外源基因导入宿主细胞后短时间内过量表达目的基因的研究方法，其主要应用于蛋白质亚细胞定位、基因互作和基因的高通量表达等方面。目前应用于植物中的瞬时表达系统根据据操作方法可分为PEG法，基因枪法，农杆菌介导... 详细信息

瞬时表达是一种将外源基因导入宿主细胞后短时间内过量表达目的基因的研究方法，其主要应用于蛋白质亚细胞定位、基因互作和基因的高通量表达等方面。目前应用于植物中的瞬时表达系统根据据操作方法可分为PEG法，基因枪法，农杆菌介导法和病毒介导法等，其中农杆菌介导法因其能够操作方便和转化效率较高而被广泛研究。目前在拟南芥和烟草中的瞬时表达系统研究的较为成熟，但是在油菜中的研究较少，主要是因为没有一个能够简便高效的瞬时表达系统被建立起来。通常建立一个高效的转化体系在确定了基本的技术参数指标后，需要逐步优化包括菌种的选择、菌液浓度、诱导条件和表达时间等影响因子，而本研究为了能够获得在科研生产上应用的高效油菜瞬时表达系统，便系统的对这些影响因子进行了研究并对已经构建好的系统进行了充分的验证，取得了以下结果:\n 1.选用甘蓝型油菜子叶作为转化的受体，并对其进行GUS染色分析，未检测到油菜子叶中有本地水平的GUS的表达，从而确定了GUS基因在油菜子叶中可以作为进行农杆菌介导法的报告基因;将携带载体pCAMBIA2301(携带GUS基因)的农杆菌GUS染色分析，也为检测到GUS表达的信号，从而确定了载体pCAMBIA2301可用于瞬时转化，为后续工作奠定了基础。\n 2.选用农杆菌GV3101，LBA4404和EHA105对油菜子叶的侵染能力进行比较，发现GV3101注射过的油菜子叶GUS活性最强，是LBA4404的6.5倍，是EHA105的13倍，从而证明了农杆菌菌株GV3101较适合油菜子叶的转化。\n 3.对影响农杆菌转化效率的农杆菌侵染浓度和瞬时表达的孵育时间进行分析，确定了在GV3101侵染液浓度OD600为0.8的条件下转化效率最高，在第4天时目的基因的瞬时表达量最高。\n 4.成功的应用这一瞬时表达系统在油菜中进行了EGFP和DsRED的亚细胞定位研究和蛋白FGL和PR的蛋白互作研究，证明了本实验室所构建的油菜子叶瞬时表达系统的可行性，为进一步研究油菜的各种基因功能打下了坚实的基础，同时对外源基因的瞬时表达研究提供了有力的工具系统。

关键词：甘蓝型油菜农杆菌瞬时表达系统技术参数诱导条件子叶结构

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

水稻miRNAs靶基因验证瞬时表达系统的构建及应用

水稻miRNAs靶基因验证瞬时表达系统的构建及应用

引用

作者：曹雅倩中国农业科学院

学位级别：硕士

MiRNAs是一类内源性非编码小分子RNA,通过剪切靶基因mRNA或抑制蛋白的翻译调控真核生物的基因表达。在植物体内,miRNAs主要参与了生长发育、逆境胁迫反应等多种生物进程。随着测序技术的飞速发展,发现了大量新的miRNAs,miRNA database... 详细信息

MiRNAs是一类内源性非编码小分子RNA,通过剪切靶基因mRNA或抑制蛋白的翻译调控真核生物的基因表达。在植物体内,miRNAs主要参与了生长发育、逆境胁迫反应等多种生物进程。随着测序技术的飞速发展,发现了大量新的miRNAs,miRNA database已经收录了38589个miRNAs,然而大多数miRNA的生物功能及其靶基因仍需要进行进一步的验证。研究miRNA的作用,关键是研究miRNA对靶基因的调控。MiRNAs靶基因的验证常用方法包括Northern Blot,Western Blot,降解组测序（Degradome sequencing）,MirTrap,RACE（Rapid amplification of cDNA ends）和荧光素酶报告系统。利用生物信息学预测miRNAs靶基因,采用不同的方法和不同的参数条件都可能会得到不同的靶基因,预测结果存在假阳性和假阴性,因此,对预测的靶基因进行实验验证也是必需的。鉴于miRNA靶基因的实验验证过程较为复杂、耗时,因此,建立一种准确且快速地预测和验证miRNA靶基因的方法对研究miRNA的生物学功能具有非常重要的意义。利用瞬时表达结合荧光素酶报告基因建立的检测系统是靶基因验证的一种快速、简便的方法。本文利用农杆菌所介导的烟草瞬时表达,结合水稻原生质体的瞬时表达,系统研究了不同体系下miRNAs的动态表达,以及靶基因验证的最佳体系。主要结果如下:（1）构建了适用于水稻原生质体瞬时表达的载体,将miR169o过表达载体分别与LUC空白载体,靶基因LOCOs03g48970.1与LUC的融合载体（后称作LUC-48970）以及LUC-48970m3（及48970突变载体）共转化到水稻原生质体中,miR169o和LUC-48970共转化后的LUC活性显著弱于miR169o和空白融合载体（LUC）共转化,miR169o和LUC-48970m3（即48970的突变）共转化后的LUC活性,表明miR169o可以抑制靶基因LOCOs03g48970.1的转录表达,而水稻原生质体系统可以用于miRNAs靶基因的检测。（2）在原生质体转化后12h,18h,24h,36h分别检测LUC活性,发现在24h时,LUC的活性最高,表明24h可能是最适宜观察荧光的时期。此外,还利用qRT-PCR检测了这四个时间点成熟miR169o的表达量,整体来看,miR169o的表达量与转化时间具有正相关性,12h表达量最低,在24h表达量上调至十倍。当将miR169o与靶基因融合载体共转化水稻原生质体后,在不同的处理中miR169o的表达具有一定的差异。综合miRNAs表达水平及LUC活性的检测结果,建议在miRNAs靶基因的验证中,水稻原生质体转化后24h-36h作为后续最适宜的检测时间。（3）构建了适用于烟草瞬时表达的载体,将携带miR169o过表达载体与LUC空白载体,LUC-48970融合载体,LUC-48970m3载体的农杆菌分别共注射到烟草叶片中,检测LUC活性,发现miR169o与LUC-48970共表达中的LUC活性明显弱于miR169o与LUC共表达,miR169o与LUC-48970m3共表达中的LUC活性,表明烟草瞬时表达系统可以用于水稻miRNAs的靶基因验证。注射烟草48h,72h,96h检测LUC活性,发现72h LUC活性达到高峰后,又有所降低,表明72h是农杆菌注射后最适宜的检测点。此外,利用qRT-PCR检测了注射后24h,36h,48h,72h成熟miR169o表达量,24h表达量最低,48h时表达量已显著上调,且上调倍数达到近二十倍。综合这两方面的检测结果,建议在miRNAs靶基因验证体系中,烟草注射菌后48h-72h作为后续最适宜的检测时间。（4）利用构建的水稻原生质体瞬时表达系统和烟草瞬时表达系统,检测了mi R812g与其预测靶基因LOCOs02g07960.4和LOCOs04g47140.1,miR5076与其预测靶基因LOCOs02g27594.2,miR818a与其预测靶基因LOCOs09g36320.1,miR169o与其预测靶基因之间LOCOs02g53620.1的对应关系,发现除了53620是miR169o的靶基因,其他miRNAs与其预测的靶基因可能不存在剪切或抑制关系。本文通过对miRNAs及荧光素酶报告基因的表达动态分析,建立了水稻miRNAs靶基因的瞬时验证系统,该系统为水稻miRNAs靶基因验证提供了一种简便、快速,且更接近于体内实验的方法,进而为研究miRNAs生物学功能奠定了基础。

关键词：水稻 miRNAs 靶基因验证瞬时表达系统

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

植物细胞中瞬时表达系统的建立及研究进展

引用

中国农学通报 2013年第24期29卷 151-156页

作者：周丹丹俞嘉宁陕西师范大学生命科学学院西安710062

瞬时表达是近年来发展的一种快速、高效的检测蛋白质表达的方法,并逐渐被应用到生物学各方面的研究中。植物细胞瞬时表达系统的建立为方便、快捷的研究启动子活性、基因功能和蛋白质定位等开辟了新途径。本研究主要归纳了植物瞬时表达... 详细信息

瞬时表达是近年来发展的一种快速、高效的检测蛋白质表达的方法,并逐渐被应用到生物学各方面的研究中。植物细胞瞬时表达系统的建立为方便、快捷的研究启动子活性、基因功能和蛋白质定位等开辟了新途径。本研究主要归纳了植物瞬时表达系统的建立和发展过程,总结了近年来的应用以及对生物学研究的意义,并指出了该系统在当前应用中存在的不足,并针对这些不足提出了合理的建议。最后,结合最新的研究进展,对瞬时表达系统在分子细胞生物学、蛋白质组学、病毒学等方面的研究工作做了展望。

关键词：瞬时表达系统外源基因基因功能分析启动子活性分析

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

鸡输卵管上皮细胞瞬时表达系统

引用

Developmental and Reproductive Biology 2001年第1期10卷 12-19页

作者：刘亚兵余慕贞等中国科学院动物研究所北京100080

在开发利用生物反应器生产特定蛋白的研究中，若先用特异组织作原代培养，建立瞬时表达系统，对特定调控元件和融合基因进行分析，可大大缩短研究进程。本文首次报道用鸡输卵管上皮细胞原代培养，建立瞬时表达系统的方法。输卵管细胞体... 详细信息

在开发利用生物反应器生产特定蛋白的研究中，若先用特异组织作原代培养，建立瞬时表达系统，对特定调控元件和融合基因进行分析，可大大缩短研究进程。本文首次报道用鸡输卵管上皮细胞原代培养，建立瞬时表达系统的方法。输卵管细胞体外培养（Fig.1-3),在二，三周时间内仍然保持分泌卵清蛋白的功能，当分泌功能减弱时，若地培液中添加激素，一般一周后大部分细胞又可恢复分泌功能（Fig.4)，由于卵清蛋白是一种分泌蛋白，通过斑点免疫渗滤法可迅速简便的从培液中检测到（Fig.4)。为验证培养细胞能否表达外源基因，在原代培养细胞中转染绿色荧光蛋白基因，可在细胞浆中显示绿色荧光（Fig.5)。说明这是一个有效而又方便的检测调控元件的瞬时表达系统。

关键词：鸡输卵管上皮细胞瞬时表达系统

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

草莓果实外源基因瞬时表达系统的建立

草莓果实外源基因瞬时表达系统的建立

引用

全国植物分子育种学术研讨会

作者：刘敏滕文静晁慧娟董清华邱德有国家林业局林木培育重点实验室北京农学院植物科学技术系中国林业科学研究院林业研究所

本研究首先以含东北红豆杉紫杉烷13α-羟基化酶(Taxane13α-hydroxylase,简称13OH)基因全长cDNA的pT13OH质粒DNA为模板,通过PCR技术扩增得到东北红豆杉13OH基因的全长cDNA。

关键词：瞬时表达系统外源基因东北红豆杉

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：