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果树学报 2024年第2期41卷 314-324页

作者：李晓倩史冰柯王卓妮覃艮红王丽涂洪涛袁洪波侯珲中国农业科学院郑州果树研究所郑州450009 中国农业科学院中原研究中心河南新乡453004

【目的】探究内生真菌砖红镰刀菌(Fusarium lateritium)菌株Pa2对草莓黑斑病菌(Alternaria alternata)的抑制效果,为开发草莓黑斑病生防菌剂奠定理论基础。【方法】以草莓黑斑病为防治对象,通过菌丝生长速率法、孢子萌发法以及SYTOX绿... 详细信息

【目的】探究内生真菌砖红镰刀菌(Fusarium lateritium)菌株Pa2对草莓黑斑病菌(Alternaria alternata)的抑制效果,为开发草莓黑斑病生防菌剂奠定理论基础。【方法】以草莓黑斑病为防治对象,通过菌丝生长速率法、孢子萌发法以及SYTOX绿菁染色法分析菌株Pa2对草莓黑斑病菌的菌丝生长、孢子萌发、细胞膜通透性的影响,通过离体果实与叶片测定砖红镰刀菌菌株Pa2对草莓黑斑病菌的防治效果,初步探讨砖红镰刀菌Pa2对草莓黑斑病的抑制活性与防效。【结果】平板对峙试验表明,菌株Pa2对草莓黑斑病菌生长抑制效果达80.96%。菌株Pa2上清液不仅可以破坏菌丝细胞膜,而且对病菌菌丝生长以及孢子萌发的抑制能力随上清液浓度的升高而增强。同时,菌株Pa2能够显著抑制草莓黑斑病菌在果实与叶片上的侵染能力。【结论】砖红镰刀菌菌株Pa2对草莓黑斑病菌具有很好的抑制作用,在草莓黑斑病的生物防治方面具有潜在的应用价值。

关键词：草莓黑斑病砖红镰刀菌抑制活性防治效果

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砖红镰刀菌菌株Pa2对草莓灰霉病的抑制作用

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中国生物防治学报 2024年第1期40卷 137-145页

作者：史冰柯李晓倩王卓妮覃艮红范洋洋王丽涂洪涛袁洪波侯珲中国农业科学院郑州果树研究所郑州450009 中国农业科学院中原研究中心新乡453004

由灰葡萄孢菌Botrytis cinerea引起的草莓灰霉病是草莓栽培中最具破坏性的病害之一,严重降低食用以及经济价值。本研究以“红颜”草莓为试验材料,测定砖红镰刀菌Fusarium lateritium Pa2对草莓灰霉病菌的抑菌活性、防治效果以及草莓病... 详细信息

由灰葡萄孢菌Botrytis cinerea引起的草莓灰霉病是草莓栽培中最具破坏性的病害之一,严重降低食用以及经济价值。本研究以“红颜”草莓为试验材料,测定砖红镰刀菌Fusarium lateritium Pa2对草莓灰霉病菌的抑菌活性、防治效果以及草莓病程相关基因表达水平的影响。结果表明,菌株Pa2对草莓灰霉病菌具有显著的抑菌活性,其上清液可以破坏草莓灰霉病菌菌丝细胞膜,导致细胞内容物泄露。离体接种试验结果表明菌株Pa2对草莓叶片灰霉病、草莓果实灰霉病防治效果分别为79.13%、54.29%。经菌株Pa2上清液处理24h后草莓果实病程相关基因FaPR1、FaPR4、FaGR分别上升19.05、24.64、3.69倍。综上所述,砖红镰刀菌菌株Pa2是一种防治草莓灰霉病的新型生防菌资源。

关键词：草莓灰霉病砖红镰刀菌病程相关基因防治效果

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对马铃薯具促生抗病作用的砖红镰刀菌及其遗传转化体系构建

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菌物学报 2021年第8期40卷 2008-2023页

作者：汪健康肖青查兴平何张江康冀川贵州大学西南特色药用生物资源开发利用教育部工程研究中心贵州贵阳550025 贵州大学生命科学学院贵州贵阳550025

本研究从药用植物马比木Nothapodytes pittosporoides的花瓣中分离获得了1株真菌,经形态学与ITS分子共同鉴定为砖红镰刀菌Fusarium lateritium。使用该菌处理马铃薯后发现,显著增强了马铃薯对晚疫病菌的耐受性,处理组植株感染率为37.5%... 详细信息

本研究从药用植物马比木Nothapodytes pittosporoides的花瓣中分离获得了1株真菌,经形态学与ITS分子共同鉴定为砖红镰刀菌Fusarium lateritium。使用该菌处理马铃薯后发现,显著增强了马铃薯对晚疫病菌的耐受性,处理组植株感染率为37.5%,相较对照组87.5%的感染率显著降低;植株生长测定发现,处理组的马铃薯生物量、株高、根系生物量和主根数相较于对照组分别提高了1.25、1.19、2.3、1.47倍,表明该真菌对马铃薯还具有促生作用。为探究砖红镰刀菌促生抗病的分子机理,检测了植物生长素合成和免疫防御相关基因的表达模式,结果表明处理组植株生长素合成相关基因(StYUC5)显著上调,而免疫相关激素茉莉酸和水杨酸合成相关基因(StPI-I、StPAL和StPR1A)也不同程度上调。由此推测,砖红镰刀菌通过调控植物激素相关基因的表达介导马铃薯的促生和抗病。为了进一步探究砖红镰刀菌对马铃薯促生抗病的分子基础,构建了其遗传转化体系,并进行了优化,获得了GFP标记菌株。

关键词：内生真菌砖红镰刀菌抗病促生长遗传转化

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砖红镰刀菌拮抗细菌的筛选与鉴定

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河南农业科学 2010年第12期39卷 66-70页

作者：陈琼珍陈士华商谢谢闫秀云吴兴泉河南工业大学生物工程学院河南郑州450001

采用稀释涂布平板法,从尚未发病的玉米田和小麦田土壤里分离得到104株细菌,通过平板拮抗试验获得了5株对砖红镰刀菌具有明显拮抗作用的细菌。通过16S rDNA序列测定、传统形态学和生理生化特性研究,确定这5株细菌均为枯草芽孢杆菌(Bacill... 详细信息

采用稀释涂布平板法,从尚未发病的玉米田和小麦田土壤里分离得到104株细菌,通过平板拮抗试验获得了5株对砖红镰刀菌具有明显拮抗作用的细菌。通过16S rDNA序列测定、传统形态学和生理生化特性研究,确定这5株细菌均为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。研究发现,5株细菌的发酵液对砖红镰刀菌均具有拮抗作用,其中,命名为BS-02的菌株拮抗活性最高,达到61.29%。

关键词：砖红镰刀菌拮抗作用菌的筛选鉴定细菌枯草芽孢杆菌序列测定特性研究生理生化平板法拮抗试验拮抗活性玉米田形态学小麦田发酵液稀释土壤涂布命名

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内生砖红镰刀菌对番茄生长和抗病的影响

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华中农业大学学报 2022年第3期41卷 173-180页

作者：肖青李永杰汪健康查兴平黄建明何张江康冀川贵州大学西南特色药用生物资源开发利用教育部工程研究中心贵阳550025 贵州大学生命科学学院贵阳550025

为探究内生真菌砖红镰刀菌在番茄生长及抗病过程中的作用,使用1×10^(7) CFU/mL砖红镰刀菌芽生孢子悬液浸根处理发芽的番茄,结果显示:处理50 d后番茄株高较对照组增加了1.15倍;叶绿素a、叶绿素b含量较对照组分别增加1.16倍和1.47倍... 详细信息

为探究内生真菌砖红镰刀菌在番茄生长及抗病过程中的作用,使用1×10^(7) CFU/mL砖红镰刀菌芽生孢子悬液浸根处理发芽的番茄,结果显示:处理50 d后番茄株高较对照组增加了1.15倍;叶绿素a、叶绿素b含量较对照组分别增加1.16倍和1.47倍;根系生物量较对照增加1.38倍;砖红镰刀菌处理组对番茄枯萎病的病情指数(45.16%)较对照组(74.15%)下降;浸根处理20 d时植物生长素合成关键基因SlYUC5、水杨酸合成关键基因SlICS1表达水平与未处理对照组相比无显著差异;处理30及40 d后,SlYUC5表达水平较对照组相比表达显著上升,SlICS1表达水平较对照组显著降低;茉莉酸合成途径关键基因SlLOXD在20 d时表达水平较对照组显著下调38.73%(P<0.01),而在30 d时其表达量与对照组无显著差异,40 d后,其表达量较对照组显著上调(2.33倍,P<0.01);试验组中植物抗性相关蛋白基因SlPR1a在20、30和40 d的表达量被显著上调了7.89倍、5.77倍和1.8倍(P<0.01)。进一步用GFP标记菌株进行荧光定殖观察并通过qPCR法计算其定殖率,14 h后在番茄根系观察到镰刀菌菌丝存在,并随处理时间延长定殖率逐渐上升。综上,推测砖红镰刀菌能够通过内生定殖于番茄根系介导植物激素相关基因表达从而影响植株的长生发育和抗病。

关键词：内生真菌砖红镰刀菌番茄促生抗病

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内生砖红镰刀菌坏死因子FlNIS1在番茄免疫过程中的功能

内生砖红镰刀菌坏死因子FlNIS1在番茄免疫过程中的功能

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作者：肖青贵州大学

学位级别：硕士

内生菌介导植物生长、增强植物抗逆及抗病虫害等生物学过程,是成为“植物疫苗”,减少化肥和农药施用的理想材料。本课题组前期研究表明,从黔产马比木植物(Nothapodytes pittosporoides)中分离的一株内生砖红镰刀菌(Fusarium lateritium... 详细信息

内生菌介导植物生长、增强植物抗逆及抗病虫害等生物学过程,是成为“植物疫苗”,减少化肥和农药施用的理想材料。本课题组前期研究表明,从黔产马比木植物(Nothapodytes pittosporoides)中分离的一株内生砖红镰刀菌(Fusarium lateritium)对马铃薯具有促生抗病的作用。本论文以同为茄科模式植物的番茄作为研究载体,旨在探究内生砖红镰刀菌对番茄的生长发育和抗逆病害的作用,并以一个保守的坏死诱导分泌蛋白效应子FlNIS1为切入点,深入开展了对该坏死因子在内生真菌与番茄互作过程中的生物学功能的研究,为揭示内生真菌与植物互作机制奠定理论基础。主要的研究结果如下:1.砖红镰刀菌显著促进“Micro Tom”番茄的生长及其根系发育。生长测定发现,菌株滴根处理50 d后的番茄株高较对照组相比提升1.15倍;叶绿素a、叶绿素b含量分别是照组的1.16倍和1.47倍;根系生物量是对照组的1.38倍;2.砖红镰刀菌增强番茄对枯萎病的抗性。生测结果显示,砖红镰刀菌处理组对番茄枯萎病病情指数(45.16%)较对照组(74.15%)降低了约30%。3.砖红镰刀菌介导番茄植物激素表达。砖红镰刀菌处理后,生长素合成关键基因Sl YUC5、病程相关蛋白Sl PR1a表达较对照组显著上调、水杨酸合成关键基因Sl ICS1表达较对照组显著下调、茉莉酸合成途径关键基因Sl LOXD较对照组呈先下降后上升的趋势。4.砖红镰刀菌可以定殖于番茄根系。用1×10～7CFU/m L含GFP的砖红镰刀菌处理番茄根部,处理14 h后对番茄根系进行观察,在番茄根系发现表达荧光的砖红镰刀菌。***1不影响砖红镰刀菌生长发育和抗逆性,但影响菌株产孢量及早期孢子萌发。对FlNIS1突变体菌株与野生型菌株发酵液颜色、孢子形态、产孢量和各种胁迫条件下的生长情况进行观察。结果发现,FlNIS1不会对砖红镰刀菌色素沉积,孢子形态发育和抗逆性造成影响,但其产孢量及孢子早期萌发率较野生型有显著差异。***1介导砖红镰刀菌对番茄的定殖过程。超量表达及敲除FlNIS1导致互作植物PTI反应显著加强,推测FlNIS1在介导植物-内生真菌互作中发挥功能,且处于一种平衡状态,而打破FlNIS1基因表达的平衡后会加剧植物PTI反应从而抑制真菌定殖。以上结果表明,内生砖红镰刀菌能够定殖于番茄根部并介导番茄促生抗病,且一个效应蛋白FlNIS1能够在砖红镰刀菌与番茄互作中发挥作用。

关键词：内生真菌砖红镰刀菌效应子促生抗病番茄

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纳他霉素对甜樱桃砖红镰刀菌的抑制作用及机理研究

纳他霉素对甜樱桃砖红镰刀菌的抑制作用及机理研究

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作者：焦明镜山东师范大学

学位级别：硕士

在甜樱桃（Prunus avium L.）的种植、运输、销售过程中,病害是造成经济损失的重要原因,其中细菌引起的穿孔病、根癌病和真菌引起的青霉病、灰霉病等侵染性病害造成的影响更为突出。本研究首次从腐烂甜樱桃上分离鉴定了国内侵染甜樱桃... 详细信息

在甜樱桃（Prunus avium L.）的种植、运输、销售过程中,病害是造成经济损失的重要原因,其中细菌引起的穿孔病、根癌病和真菌引起的青霉病、灰霉病等侵染性病害造成的影响更为突出。本研究首次从腐烂甜樱桃上分离鉴定了国内侵染甜樱桃的新病害——砖红镰刀菌（Fusarium lateritium）,筛选获得了安全、绿色、高效抑制该病原菌的抑菌剂——纳他霉素,确定了其精准应用的量效关系,探究了抑菌机理。（1）利用组织分离法在甜樱桃果实上分离纯化出一株病原菌,基于ITS、TEF1-α基因的同源进化分析,结合显微形态学观察,将该病原菌鉴定为砖红镰刀菌（Fusarium lateritium）。重新将该病原菌回接甜樱桃后,其不仅能在有伤条件下侵染,也能够在无伤条件下侵染。（2）纳他霉素对砖红镰刀菌有较好的抑制作用。在固体PDA培养基中,25 mg/L纳他霉素可完全抑制砖红镰刀菌的生长,计算得出EC50值为5.24 mg/L;4 mg/L的浓度可完全抑制孢子的萌发;菌丝生长受到抑制,与正常菌丝相比,菌丝更加纤细,细胞壁变薄,菌丝干瘪皱缩甚至断裂,细胞内容物外泄;400 mg/L纳他霉素可以完全抑制果实上砖红镰刀菌的生长。（3）纳他霉素破坏了砖红镰刀菌的细胞质膜,导致内容物外流,活性氧、丙二醛含量增大,线粒体相关酶活性降低,线粒体功能受到影响。液体培养砖红镰刀菌过程中,胞外电导率随着处理时间延长和处理浓度的增大,而不断上升;胞外核酸和蛋白泄露量均随着处理时间的增长而提高;细胞完整性测定结果显示,纳他霉素处理后,砖红镰刀菌的细胞质膜被破坏;活性氧测定发现,随着纳他霉素处理浓度的增大,活性氧量增高;通过测定丙二醛含量,发现随着纳他霉素浓度增大和处理时间的延长,丙二醛含量提高;通过测定三羧酸循环中关键酶的活性,发现酶活降低,进而导致细胞的能量代谢过程受到影响,无法进行正常的生理代谢,最终引起细胞的损伤、死亡。（4）通过转录组研究发现,与空白对照组相比,10 mg/L的纳他霉素处理砖红镰刀菌（T-0 VS T-10组）时,筛选出2511个差异基因,其中基因发生上调的有1134个,发生下调的有1377个;20 mg/L纳他霉素处理（T-0 VS T-20组）时,共筛选出3136个差异基因,其中1289个基因发生上调,1847个基因发生下调。GO富集分析结果显示,差异基因的产物部分位于线粒体中,且产物作用于氧化还原酶过程中,其次作用于RNA的加工合成。KEGG富集分析结果显示,差异基因主要富集于脂质代谢途径、中心碳代谢途径、能量代谢途径。

关键词：砖红镰刀菌纳他霉素甜樱桃抑菌机理

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内生砖红镰刀菌分泌蛋白FlSce1的功能研究

内生砖红镰刀菌分泌蛋白FlSce1的功能研究

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作者：黄建明贵州大学

学位级别：硕士

效应因子是调控真菌与植物互作的关键因。本论文以课题组前期筛选获得的一株对部分茄科作物具有促生抗病功效的内生砖红镰刀菌(Fusarium lateritium)为研究对像,以效应因子为课题的切入点,通过生物信息学分析预测了砖红镰刀菌的效应因子... 详细信息

效应因子是调控真菌与植物互作的关键因。本论文以课题组前期筛选获得的一株对部分茄科作物具有促生抗病功效的内生砖红镰刀菌(Fusarium lateritium)为研究对像,以效应因子为课题的切入点,通过生物信息学分析预测了砖红镰刀菌的效应因子,并聚焦预测值最高的蛋白FlSce1,探究其在菌植互作过程中的作用。具体研究结果如下:(1)基因组测序与效应因子的预测及验证。内生砖红镰刀菌基因组为46 Mbp,编码14756个基因,利用Signal P4.0、TMHMM、Effector和Protcomp9.0对效应因子进行了预测,砖红镰刀菌含有213个效应因子,其中69个效应因子为未注释蛋白,占总效应因子数量的32.4%。根据已预测到的效应因子,进一步筛选了16个评分最高且符合已道报效应因子特征的蛋白。瞬时表达发现,效应因子7002可引起本氏烟草叶片细胞死亡;效应因子4202、4957、1445可抑制叶片细胞死亡。其中评分最高的编号为1051的蛋白,不引起植物细胞死亡,但可激发植物免疫反应导致活性氧积累。基因编码蛋白含有327个氨基酸,N端含有一个外泌信号结构,其余部分不含已知任何保守结构域且未被注释,为一个典型的未知分泌蛋白,命名为FlSce1。(2)FlSce1不影响砖红镰刀菌的生长发育。敲除FlSce1不引起砖红镰刀菌的菌丝形态、产孢数量、菌液颜色和孢子萌发率。(3)FlSce1负调节砖红镰刀菌的氧化胁迫与高渗胁迫。将野生型、突变体相同浓度的孢悬液接种至含不同胁迫因子的培养基中,发现敲除FlSce1导致菌株对氧化胁迫和高渗胁迫的耐受性显著增强,抑制率分别降低了18%和22%(P<0.01),表明FlSce1负调控砖红镰刀菌氧化和高渗胁迫反应。(4)FlSce1在互作早期高表达,激发植物根系的免疫防御反应,积累活性氧。表达模式分析发现,在真菌接种植物48小时表达上调,推测FlSce1参与真菌与植物早期互作过程。敲除FlSce1导致真菌引发的植物根系ROS积累显著低降,并且PTI标记基因ACRE31、WRKY表达量分别降低18.5倍与4.47倍。由此表明,FlSce1参与了真菌调控的植物免疫防御反应。(5)FlSce1不影响砖红镰刀菌的促生作用,提升烟草对青枯病的抗性。敲除FlSce1不会引起真菌对烟草的株高、生物量和绿叶素a和b含量的影响。但接种FlSce1突变体,则导致烟草对青枯病的抗性显著提升,抗病基因ERF1和PR1a表达显著上调,负调控抗病基因WRY22显著下调,表明FlSce1调控植物对青枯病的抗性。综上所述,内生砖红镰刀菌新型分泌蛋白FlSce1可能作为免疫防御反应的激发子,通过激发植物免疫防御反应产生ROS从而限制真菌的增殖,以平衡内生真菌与植物互作关系。

关键词：内生菌砖红镰刀菌活性氧植物免疫防御青枯病菌

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内生砖红镰刀菌促生长及增强马铃薯对晚疫病抗性的研究

内生砖红镰刀菌促生长及增强马铃薯对晚疫病抗性的研究

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作者：汪健康贵州大学

学位级别：硕士

内生菌与植物长期互利共生,并在植物生长发育、抗逆和病虫害防御等生物学过程中发挥着重要作用,有作为“植物疫苗”的潜力,从而减少化肥和农药施用。然而,内生菌与植物的互作关系尚不明晰,限制了其推广应用。因此,深入研究植物与内生菌... 详细信息

内生菌与植物长期互利共生,并在植物生长发育、抗逆和病虫害防御等生物学过程中发挥着重要作用,有作为“植物疫苗”的潜力,从而减少化肥和农药施用。然而,内生菌与植物的互作关系尚不明晰,限制了其推广应用。因此,深入研究植物与内生菌的互作关系,将为作物田间营养管理和病虫害的综合防控提供新的思路。本研究旨在从药用植物马比木(Nothapodytes pittosporoides)分离筛选获得的一批具有抗病促生效果的菌株中,选取一株内生砖红镰刀菌(Fusarium lateritium)为研究对象。通过对菌株处理后的马铃薯及其离体叶片接种晚疫病致病疫霉菌(Phytophthora infestans),并对其病情指数、生理指标进行统计,探究菌株对马铃薯的促生长作用及对晚疫病的防治效果。进一步构建菌株的遗传转化体系,获得绿色荧光蛋白(GFP)标记菌株。基于此,通过染色、激光共聚焦显微镜观察真菌与植物互作过程,明确菌株的作用部位;并通过RT-qPCR检测真菌在马铃薯中的相对定殖量,探究真菌对马铃薯生长及防御相关激素基因的表达模式,以及真菌对根系土壤活力的影响,从而共同揭示真菌对马铃薯促生及防病的生理学基础。主要研究结果如下:1.砖红镰刀菌显著促进了马铃薯的生长。其中菌株处理组的株高、总生物量、主根数、根生物量相较于对照清水处理分别提高了1.25、1.19、2.3、1.47倍。2.砖红镰刀菌增强了马铃薯对晚疫病的抗性。其中马铃薯晚疫病生测试验的结果发现,对照清水处理组感病率为87.5%;砖红镰刀菌处理组感病率为37.5%。叶片病情指数分析发现,菌株处理组的叶片病斑、叶片损伤面积比分别为2.24cm和11.22%,均显著低于对照清水处理(4.14 cm和24.94%)。3.砖红镰刀菌介导植物激素相关基因表达。其中处理组植株生长素合成相关基因(StYUC5)显著上调,而免疫相关激素茉莉酸和水杨酸合成相关基因(StPI-I、StPAL和StPR1A)也有不同程度上调。4.构建了载体pK-hyg-gpdA::gfp,获得GFP标记菌株,并对遗传转化条件进行了优化,获得最佳转化条件。5.通过碘化丙啶(PI)和台酚蓝染色、以及RT-qPCR分子定量,共同表明砖红镰刀菌可以在马铃薯根系内生定殖,同时对真菌在植株中生长量进行了相对定量。在根表皮、根皮层细胞发现砖红镰刀菌菌丝的生长,并向上生长到达植物的茎部,进一步明确了菌株的作用部位。6.砖红镰刀菌增强马铃薯根际土壤硫酸酯酶活性,提高了根际土壤的活力。

关键词：植物内生菌砖红镰刀菌促生抗病遗传转化定殖

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国槐溃疡病致病菌砖红镰刀菌毒素的寄主专化性研究

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农业科技与装备 2018年第4期 15-18页

作者：李良壮刘南南袁凤英王桂清聊城大学农学院山东聊城252059

砖红镰刀菌为国槐溃疡病致病菌之一,深入研究砖红镰刀菌的致病机理及其毒素在致病过程中的作用具有重要意义。采用毒素浸种法,考察砖红镰刀菌毒素对国槐和其他19种植物种子萌发及根系生长的影响。结果表明:国槐种子的发芽势和发芽率随... 详细信息

砖红镰刀菌为国槐溃疡病致病菌之一,深入研究砖红镰刀菌的致病机理及其毒素在致病过程中的作用具有重要意义。采用毒素浸种法,考察砖红镰刀菌毒素对国槐和其他19种植物种子萌发及根系生长的影响。结果表明:国槐种子的发芽势和发芽率随毒素浓度的增大而降低,即两者负相关;19种植物种子经毒素处理后,种子萌发和幼苗根系生长或被促进、或被抑制、或不受影响,即表现出多样性,说明砖红镰刀菌毒素为非寄主专化性毒素。该研究为国槐抗病品种选育和病害综合防控提供了新策略。

关键词：国槐溃疡病砖红镰刀菌毒素寄主专化性

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