检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：陈策蚌埠医学院

学位级别：硕士

研究背景：结核分枝杆菌（ mycobacterium tuberculosis, Mtb）引起的结核病（tuberculosis, TB）仍是是目前严重危害人类健康的三大感染性疾病之一。如何快速、准确的诊断结核病，是结核病防治的关键。然而，目前对结核病诊断的免疫学... 详细信息

研究背景：结核分枝杆菌（ mycobacterium tuberculosis, Mtb）引起的结核病（tuberculosis, TB）仍是是目前严重危害人类健康的三大感染性疾病之一。如何快速、准确的诊断结核病，是结核病防治的关键。然而，目前对结核病诊断的免疫学指标尚缺乏满意的方法。临床诊断结核病的传统方法如结核菌素皮肤试验、痰抗酸杆菌涂片、痰结核杆菌培养等均存在缺点。近年来，利用酶联斑点免疫试验(enzyme linked immunospot，ELISPOT)检测结核菌特异抗原T淋巴细胞的方法，为结核病快速诊断开辟了一条新的思路。目前临床中使用的检测结核杆菌感染试剂盒(T-SPOT-TB)，通过ELISPOT技术，选用结核杆菌特异性抗原ESAT6和CFP10刺激外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)，检测其中能与抗原发生特异性免疫反应并分泌IFN-γ的T淋巴细胞，以此判断是否感染Mtb。但这种试剂盒不能区分隐匿性Mtb感染者（以下简称隐感者）与TB患者。目前缺乏鉴别MTB隐感者和活动性TB免疫状态的方法。国内外研究证实唑来磷酸（zoledronate，ZOL）、帕米膦酸（pamidronate，PAM）、异戊烯焦磷酸盐（isopentenyl pyrophosphate，IPP）等磷酸类抗原可体外优势扩增γδT细胞。本实验室前期研究初步表明结核病患者γδT细胞受磷酸类抗原一羟基二甲基二烯基四双磷酸铵盐［( E)1-Hydroxy-2-Methyl-but-2-enyl4-Diphosphate ammonium salt，HDMAPP］刺激后产生IFN-γ的比例显著低于健康者及隐感者。　　目的：用磷酸类抗原刺激健康人、隐感者和TB患者的外周血单个核细胞，比较γδT细胞产生IFN-γ和TNF-α的差异。以阐明健康人、隐感者和TB患者之间γδT细胞免疫功能的差异，为进一步开发新的临床结核病检测试剂盒奠定基础。　　方法：1.流式细胞术检测磷酸类抗原刺激γδT细胞产生IFN-γ和TNF-α　　1.1采集3例健康人外周血，分离PBMC后，分别加入不同浓度的IPP、二甲基丙烯焦磷酸盐（Dimethylallyl pyrophosphate，DMPP）、HDMAPP、ZOL，刺激培养14小时，再加莫能霉素（Monensin）继续培养6小时后收集细胞。加荧光标记抗体进行表面分子和胞内染色，在流式细胞仪上检测γδT细胞中表达IFN-γ和TNF-α的比例。　　1.2采集健康人、隐感者和TB患者的外周血，分离PBMC，用磷酸类抗原刺激培养14小时，再加莫能霉素（Monensin）继续培养6小时后收集细胞。加荧光标记抗体进行表面分子和胞内染色，在流式细胞仪上检测各T细胞亚群产生IFN-γ和TNF-α的比例。　　2. ELISPOT检测健康人、隐感者和TB患者的外周血PBMC中产生IFN-γ的细胞数　　运用结核分支杆菌抗原特异性T细胞ELISPOT诊断试剂盒，从健康人人群中筛选出隐感者。采集健康人、隐感者和TB患者的外周血，分离出PBMC并调整细胞浓度（细胞浓度250万/ml），按试剂盒设计每孔加入100μl细胞悬液，再加入磷酸类抗原（IPP、ZOL）刺激，将EISPOT培养板放置在37℃培养箱内培养20小时，进行显色，最后用ELISPOT计数仪进行斑点计数，计算每25万个细胞中产生IFN-γ的细胞数量。　　3.流式细胞术检测ZOL诱导健康人和结核患者的γδT细胞扩增情况　　采集健康人和结核患者的外周血，分离PBMC，调整细胞浓度（100-150万细胞/ml），加入ZOL刺激，用含10％血清的RPMI-1640培养液进行培养。培养12天后，收集培养的细胞，用流式细胞仪检测γδT细胞占细胞的比例。比较健康人和结核患者在ZOL诱导前后γδT细胞占细胞的比例的变化。　　结果:1、不同浓度磷酸类抗原刺激健康人PBMC，用流式细胞术检测γδT细胞产生IFN-γ和TNF-α的百分比。　　1.1不同浓度ZOL（终浓度：10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L）刺激健康人的PBMC，γδT细胞产生IFN-γ的百分比分别是6.88±0.37、7.38±0.17、10.59±0.36、9.66±1.04，产生TNF-α的百分比分别是12.18±1.02、13.81±0.002、17.69±0.39、16.48±0.58。　　1.2不同浓度HDMAPP（终浓度：10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L）刺激刺激健康人的PBMC，γδT细胞产生IFN-γ的百分比分别是7.21±0.74、9.65±0.01、15.18±0.42、14.58±0.63，产

关键词：结核分枝杆菌磷酸类抗原 γδT细胞免疫功能临床检测

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磷酸类抗原刺激人外周血PBMC后T细胞亚群产生IFN-γ的比较

磷酸类抗原刺激人外周血PBMC后T细胞亚群产生IFN-γ的比较

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第十届全国免疫学学术大会

作者：陈策唐洁刘震天江京娣李柏青蚌埠医学院免疫学教研室安徽省感染与免疫重点实验室

研究背景:已知磷酸类抗原可直接与γδTCR结合,特征性激活γδT细胞增殖。但不同的磷酸类抗原在刺激人PBMC后,T细胞亚群产生IFN-γ的差异,未见报道。目的 :检测磷酸类抗原(IPP、DMAPP)在刺激人外周血PBMC后,T细胞亚群产生IFN-γ的差异... 详细信息

研究背景:已知磷酸类抗原可直接与γδTCR结合,特征性激活γδT细胞增殖。但不同的磷酸类抗原在刺激人PBMC后,T细胞亚群产生IFN-γ的差异,未见报道。目的 :检测磷酸类抗原(IPP、DMAPP)在刺激人外周血PBMC后,T细胞亚群产生IFN-γ的差异。方法 :采集10例健康人新鲜外周血,分离PBMC置48孔培养板中(5-7.5×105细胞/孔),加IPP或DMAPP(终浓度均为20μmol/L)培养14小时后,加Monensin培养6小时收集细胞。加荧光单抗进行表面分子染色,透膜处理后再加荧光标记抗IFN-γ单抗作胞内染色,在流式细胞仪上检测γδT细胞、αβT细胞、CD4T细胞和CD8T细胞中表达IFN-γ的细胞比例。另设阴性对照组,不加抗原刺激仅加Monensin;以加PHA为阳性对照组。结果:IPP组,γδT细胞、αβT细胞、CD4T细胞和CD8T细胞中IFN-γ+细胞比例为7.568%、0.012%、0.005%和0.029%;DMAPP组分别为3.127%、0.016%、0.007%和0.021%;阴性对照组分别为0.257%、0.031%、0.005%和0.002%;阳性对照组分别为1.882%、0.687%、0.641%和0.773%。IPP组和DMAPP组中,γδT细胞中产生IFN-γ+细胞比例明显高于αβT细胞中的比例,IPP组γδT细胞中产生IFN-γ细胞比例明显高于DMAPP组,以上差异均有统计学意义(P<0.05)。IPP组、DMAPP和阴性对照组之间αβT细胞、CD4T细胞和CD8T细胞中产生IFN-γ细胞比例的差异进行比较,无统计学意义(P>0.05)。结论 :磷酸类抗原刺激人外周血PBMC,可特征性诱导γδT细胞产生IFN-γ,而αβT细胞几乎不产生。IPP诱导γδT细胞产生IFN-γ的活性明显强于DMAPP。

关键词：磷酸类抗原 T细胞亚群 IFN-γ γδT细胞

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磷酸类抗原刺激人外周血PBMC后T细胞亚群产生IFN-γ的比较

磷酸类抗原刺激人外周血PBMC后T细胞亚群产生IFN-γ的比较

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中国免疫学会第十届全国免疫学学术大会

作者：陈策唐洁刘震天江京娣李柏青蚌埠医学院免疫学教研室安徽省感染与免疫重点实验室 233030

研究背景：已知磷酸类抗原可直接与γδTCR结合,特征性激活γδT细胞增殖。但不同的磷酸类抗原在刺激人PBMC后,T细胞亚群产生IFN-γ的差异,未见报道。目的：检测磷酸类抗原(IPP、DMAPP)在刺激人外周血PBMC后,T细胞亚群产生IFN-γ的差异。

关键词：磷酸类抗原 T细胞亚群 IFN-γ γδT细胞

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结核杆菌耐热抗原和磷酸类抗原对人外周血γδ T细胞活化和增殖的比较

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蚌埠医学院学报 2012年第7期37卷 745-747页

作者：丁艳盛玲玲邱晓静徐丹李柏青蚌埠医学院免疫学教研室感染与免疫安徽省重点实验室安徽蚌埠233030

目的:比较结核杆菌耐热抗原(Mtb-HAg)和磷酸类抗原(HDMAPP)刺激正常人外周血γδT细胞活化和增殖的特点。方法:健康成人外周血单个核细胞(PBMC,1×106/ml),分别加Mtb-HAg(5μg/ml)和HDMAPP(2×10-9mol/ml)进行刺激,同时给予IL-2... 详细信息

目的:比较结核杆菌耐热抗原(Mtb-HAg)和磷酸类抗原(HDMAPP)刺激正常人外周血γδT细胞活化和增殖的特点。方法:健康成人外周血单个核细胞(PBMC,1×106/ml),分别加Mtb-HAg(5μg/ml)和HDMAPP(2×10-9mol/ml)进行刺激,同时给予IL-2(50 u/ml)维持细胞增殖,另外设立只加IL-2的对照组。培养10 d后,采用抗CD3-FITC和抗TCRγδ-PE荧光抗体标记细胞,流式细胞术检测γδT细胞的比例。结果:正常人PBMC经Mtb-HAg刺激扩增后γδT细胞在扩增细胞中的比例明显低于HDMAPP组(P<0.01),均明显高于IL-2对照组(P<0.01)。各个体对2种抗原刺激扩增γδT细胞呈线性正相关关系(R2=0.855 1,P<0.01)。结论:Mtb-HAg和HDMAPP均可优势激活人γδT细胞,且后者较前者有更强的活性。

关键词：结核杆菌耐热抗原磷酸类抗原 γδT细胞

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