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神经母细胞瘤细胞急性缺氧后不协调类33磷蛋白1和缺氧诱导因子-1α蛋白的表达变化

中国危重病急救医学 2010年第10期22卷 614-616页

作者：谭斐刘静赵琛景良郭阳中国医科大学附属盛京医院神经内科辽宁沈阳110004

目的探讨具有神经元特性的神经母细胞瘤细胞在急性缺氧后不协调类33磷蛋白1（Ulip1）与缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）表达水平的变化.方法选择具有神经元特性的神经母细胞瘤细胞株KCNR和BE2,将细胞分别置于正常氧浓度（体积分数为20%O... 详细信息

目的探讨具有神经元特性的神经母细胞瘤细胞在急性缺氧后不协调类33磷蛋白1（Ulip1）与缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）表达水平的变化.方法选择具有神经元特性的神经母细胞瘤细胞株KCNR和BE2,将细胞分别置于正常氧浓度（体积分数为20%O2）和缺氧条件下（1%O2）处理4 h,提取蛋白.采用蛋白质免疫印迹法（Western blotting）定量测定Ulip1和HIF-1α表达.结果在KCNR和BE2细胞急性缺氧4 h后,HIF-1α表达水平均显著升高,Ulip1的两个异构体Ulip1a和Ulip1b表达水平均降低;其中HIF-1α表达水平在KCNR细胞内升高了1.6倍,在BE2细胞内升高了2.9倍;Ulip1a在KCNR细胞内降低了55%,在BE2细胞内降低了20%;Ulip1b在KCNR细胞内降低了44%,在BE2细胞内降低了13%.结论 Ulip1可能通过影响HIF-1α参与了缺氧诱导的神经细胞损伤及之后的修复过程.

关键词：缺氧诱导因子-1α 不协调类33磷蛋白1 神经母细胞瘤细胞

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神经母细胞瘤细胞中ERK5对HIF-1a的调节

神经母细胞瘤细胞中ERK5对HIF-1a的调节

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作者：赵琛中国医科大学

学位级别：硕士

目的： 　　细胞外信号调节激酶5(extracellular signal-regulated kinase5，ERK5，又称BMK1)是丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase，MAPK)家族比较特殊的一员，其分子量约120KDa，是MAPK家族其... 详细信息

目的： 　　细胞外信号调节激酶5(extracellular signal-regulated kinase5，ERK5，又称BMK1)是丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase，MAPK)家族比较特殊的一员，其分子量约120KDa，是MAPK家族其它成员分子量的两倍多(1)。它有一个独特的、由410个氨基酸组成的羧基末端，此羧基端的尾巴不仅能自动磷酸化直接调节底物的转录活性(2)，而且还能截断其与N端的连接，从而增加其N端转录激活区的活性(3)。与经典的MAPK通路一样，ERK5的信号转导也是以三级激酶级联的方式进行，即：MEKK2/3(MAPK/ERK kinase kinase2/3)、MEK5(MAPK/ERK kinase5)，ERK5(4)。MEKK2/3对ERK5的激活存在细胞特异性：在Hela细胞和Rat-1细胞中是MEKK2介导ERK5活化，在COS7和HEK293细胞中则是MEKK3介导ERK5活化(5)。但MEK5是目前确定的ERK5唯一的上游激酶，它对ERK5的激活是高度特异的；即使MEK5过表达，也不会激活MAPK家族的其它成员(6,7)。许多细胞外信号可以激活ERK5，如细胞压力(8)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)(9)、表皮生长因子(epidermalgrowth factor, EGF)(10)等。在神经元中ERK5也能被神经营养因子激活，如脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor, BDNF)、神经生长因子(nerve growthfactor, NGF)(10)等。ERK5广泛存在于许多组织类型中，在脑组织中表达最高(11)。 　　缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α，HIF-1α)是细胞对缺氧反应的关键调节因子，常氧条件下脯氨酸羟化酶(proly1 hydroxylases domain-containingprotein，PHD)使其氧依赖性降解降解区(oxygen-dependent degradationdomain，ODDD)的402位(Pro402)和/或564位脯氨酸(Pro564)发生羟基化，羟基化的HIF-1α被肿瘤抑制蛋白VHL(von Hippel-Lindau turnout suppressorprotein，pVHL)所识别。pVHL能募集elonginB、elonginC、cullin-2及ring-box-1形成E3泛素蛋白酶复合体，使HIF-1α发生泛素蛋白化降解(12)。大脑缺血缺氧时HIF-1α积累，通过输入蛋白的转运进入细胞核，与HIF-1β结合形成HIF-1，后者与辅激活因子一起与靶定DNA上的缺氧反应元件(hypoxic responsiveelement，HRE)结合，激活一系列适应缺氧环境的蛋白表达(13)，从而保护大脑免受缺血缺氧性损伤。Sohn和Pi等研究发现缺血、缺氧也能激活ERK5(14，15），且其在神经元的存活及再生中起着关键作用(16,17)。因此我们推测神经系统中高表达的ERK可能与HIF-1α的表达或激活有关。本文利用与神经元有相似特性的神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)初步探讨在常氧和缺氧条件下ERK5对HIF-1α的调节。 　　方法： 　　 1.常氧或缺氧(5％)条件下SH-SY5Y细胞系在DMEM/F12培养基中培养。 　　 2.瞬时转染：将细胞接种在24孔板中，待其密度达到90％以上时进行转染。每孔使用800ng质粒DNA+1.5ul lipofectamine2000。 　　 *** Blot方法检测在不同条件下T-ERK5、P-ERK5、HIF-1α蛋白表达。 　　 4.双荧光素酶报告基因系统分析在不同条件下ERK5对HIF-1α转录活性的影响。 　　 5.统计学分析：采用SPSS19.0统计软件进行数据处理，P＜0.05为差异有统计学意义。 　　结果： 　　 1.缺氧刺激可以激活ERK5，增加HIF-1α的蛋白表达和转录活性。 　　 2.常氧条件下激活ERK5对内源性HIF-1α的蛋白表达及转录活性均无影响。 　　 3.缺氧条件下激活ERK5可以增加内源性HIF-1α的转录活性，但这种影响可以被DN-ERK5所阻断。 　　 ***5激活可

关键词：细胞外信号调节激酶5 低氧诱导因子-1 神经母细胞瘤细胞缺氧刺激常氧条件调节机制

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神经母细胞瘤细胞提取液诱导脐带间充质干细胞对坐骨神经损伤修复的实验研究

神经母细胞瘤细胞提取液诱导脐带间充质干细胞对坐骨神经损伤修复...

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作者：姬文明新乡医学院

学位级别：硕士

背景和意义神经母细胞瘤细胞(SHSY5Y)是神经系统疾病研究中重要的细胞系,该细胞表达神经营养因子。本实验制备的SHSY5Y提取液是此细胞内的蛋白,对中枢和外周神经系统有营养作用。干细胞疗法是研究组织修复的重要方法。脐带间充质干细胞(... 详细信息

背景和意义神经母细胞瘤细胞(SHSY5Y)是神经系统疾病研究中重要的细胞系,该细胞表达神经营养因子。本实验制备的SHSY5Y提取液是此细胞内的蛋白,对中枢和外周神经系统有营养作用。干细胞疗法是研究组织修复的重要方法。脐带间充质干细胞(UC-MSCs)是一类具有多向分化潜能和自我更新能力的细胞群。UC-MSCs可分泌细胞因子,如神经生长因子(NGF)、脑源性神经营养因子(BDNF)等,在神经损伤后的修复过程中发挥重要作用。研究表明增加损伤部位神经营养因子可促进神经修复。本实验用SHSY5Y提取液处理UC-MSCs,检测处理后细胞分泌NGF和BDNF的变化,观察处理后的干细胞对坐骨神经损伤的促修复作用,为周围神经损伤修复提供一种有益的思路。材料与方法应用超声破碎法得到SHSY5Y提取液,BCA法进行蛋白定量。复苏UC-MSCs,采用无血清培养基接种至6孔板,105/孔。在实验组的UC-MSCs中加入SHSY5Y细胞提取液,浓度为50ul/ml诱导7天。7天后分别检测两组细胞的表面标志物；分别检测目的基因BDNF和NGF在两组细胞中的表达情况。采用大鼠坐骨神经挤压损伤动物模型,36只SD雌性大鼠,随机分成6组(A-F),分别是生理盐水组,SHSY5Y提取液组,MSC组,SHSY5Y提取液和MSC组,诱导后的MSC组和正常对照组。术后观察各组大鼠肢体状况：步态变化,足趾挛缩、肌肉萎缩及恢复情况。参照沈江宁的足迹分析法,采用Brain公式计算坐骨神经功能指数(SFI)。术后3周检测大鼠小腿三头肌萎缩恢复情况,测定肌湿重恢复率(术侧小腿三头肌湿重/正常对照侧×100%),以评价再生神经对靶组织的支配程度。分析靶肌肉和神经病理学HE染色组织切片。结果 1.应用胶原酶消化法分离脐带间充质干细胞,应用超声破碎法得到SHSY5Y提取液； 2.培养对照组和实验组两组细胞,对两组细胞分别进行细胞表型鉴定,实验组MSC的CD29, CD44, CD105和HLA-ABC结果显示仍为阳性； 3.分别提取两组细胞总RNA进行RT-PCR,实验组NGF和BDNF均有一定增加； 4.制作坐骨神经挤压损伤模型,结果显示大鼠肌肉痉挛缓解程度均优于生理盐水对照组； 5.坐骨神功能指数测定结果显示各实验治疗组与生理盐水组之间均有显著差异(P<0.05)； 6.小腿三头肌湿重恢复率测定结果显示各治疗组与生理盐水组间对比有显著差异(P<0.05); 7.术后3w取术侧小腿三头肌及损伤处坐骨神经做横切片HE染色,显示诱导后MSC组肌肉只有极少量的中性粒细胞,相对其他各组其神经髓鞘恢复较好。结论1. SHSY5Y提取液可使UC-MSCs分泌的NGF和BDNF核酸表达量有所增加；2. SHSY5Y提取液诱导的UC-MSCs能够更好地促进坐骨神经损伤后的修复。

关键词：神经修复神经营养因子神经母细胞瘤细胞脐带间充质干细胞

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三维微小凹图式的加工及其与人神经母细胞瘤细胞的复合

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传感技术学报 2009年第3期22卷 297-302页

作者：吴泽志 KISAALITA W.S. ZHAO Y.-P. WANG L. 张利光重庆大学生物工程学院教育部、国家外专局生物力学与组织修复学科创新引智基地重庆400044 佐治亚大学工程部细胞生物工程实验室美国佐治亚雅典30602 佐冶亚大学物理学及天文学系美国佐治亚雅典30602

采用紫外光光刻、硅蚀刻及软光刻技术分别制备了阴性光刻胶SU-8和聚乳酸及聚羟基乙酸共聚物(PLGA)微小凹图式。以人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y与三维微结构进行复合,采用扫描电子显微镜、光学显微镜及caicein荧光染色评价所加工图式的结... 详细信息

采用紫外光光刻、硅蚀刻及软光刻技术分别制备了阴性光刻胶SU-8和聚乳酸及聚羟基乙酸共聚物(PLGA)微小凹图式。以人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y与三维微结构进行复合,采用扫描电子显微镜、光学显微镜及caicein荧光染色评价所加工图式的结构形态及细胞的生长行为。实验制备出名义直径约100μm、高纵横比(接近或大于1)并可叠加微通道连接的SU-8及PLGA三维微小凹图式。所加工的图式透明,符合三维细胞生物传感器的光学检测的需要。细胞培养结果表明,该结构尺寸的图式能引导在三维环境神经细胞的排布、神经突起延伸及形态分化。

关键词：微加工 SU-8 聚乳酸及聚羟基乙酸共聚物三维 SH—SY5Y 神经母细胞瘤细胞

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狂犬病病毒HEP-Flury M基因重排后在小鼠神经母细胞瘤细胞中的表型分析

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华南农业大学学报 2020年第2期41卷 33-39页

作者：梅明珠杨先锋龙腾张琼赵静田钦彭娇娇罗均姜贺林颖仪林志雄郭霄峰广州海关技术中心广东广州510623 华南农业大学兽医学院广东广州510642

【目的】探究狂犬病病毒HEP-Flury M基因重排对基因转录和蛋白表达的影响,揭示病毒在小鼠神经母细胞瘤(NA)细胞中的表型变化与M基因重排的相关性。【方法】通过荧光定量PCR、Western blot以及病毒在NA细胞中的生长和扩散试验,对亲本毒株... 详细信息

【目的】探究狂犬病病毒HEP-Flury M基因重排对基因转录和蛋白表达的影响,揭示病毒在小鼠神经母细胞瘤(NA)细胞中的表型变化与M基因重排的相关性。【方法】通过荧光定量PCR、Western blot以及病毒在NA细胞中的生长和扩散试验,对亲本毒株rHEP-Flury和M基因重排毒株M2、M4在NA细胞中的基因转录、表达、生长和扩散进行比较。【结果】狂犬病病毒结构基因的转录和表达主要受病毒基因组RNA合成的影响,但是在一个完整转录过程中单个结构基因的转录比例与其所在位置相关,M基因重排病毒的Leader RNA(LeRNA)和L mRNA的转录比例显著高于亲本毒株rHEP-Flury。M基因重排病毒在NA细胞中的生长和扩散都劣于亲本毒株rHEPFlury。【结论】狂犬病病毒亲本毒株rHEP-Flury具有狂犬病病毒原始的基因组顺序,在NA细胞中的生长和扩散都明显优于M基因重排病毒。结构基因在基因组中的位置主要决定其在一次转录过程中的转录比例,进而影响病毒在NA细胞中的生长和扩散。

关键词：狂犬病病毒 HEP-Flury 基因重排基质蛋白表型神经母细胞瘤细胞

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抑制IGF-1R可抑制神经母细胞瘤细胞的增殖

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基础医学与临床 2012年第3期32卷 337-339页

作者：蒋蔚姚宁华南通大学附属医院神经内科江苏南通226001 南通大学附属医院临床医学研究中心江苏南通226001

Ⅰ型胰岛素样生长因子受体（type I insulin-like growthfactor receptor，IGF-IR）是细胞生长分化的重要调节因子，可介导丝裂信号、防御各种凋亡损伤，并为一些细胞类型转化所必需。IGF－1R在多种肿瘤包括神经母细胞瘤中被发现异常表... 详细信息

Ⅰ型胰岛素样生长因子受体（type I insulin-like growthfactor receptor，IGF-IR）是细胞生长分化的重要调节因子，可介导丝裂信号、防御各种凋亡损伤，并为一些细胞类型转化所必需。IGF－1R在多种肿瘤包括神经母细胞瘤中被发现异常表达，并被认为是潜在的肿瘤治疗靶点。

关键词：神经母细胞瘤细胞 IGF-1R 胰岛素样生长因子受体 receptor 增殖细胞生长分化 IGF-1R 调节因子

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灯盏乙素对神经母细胞瘤细胞中β-淀粉样蛋白生成的影响

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现代预防医学 2018年第8期45卷 1466-1470页

作者：敖俊文王豫君于燕妮郭莉莉贵州医科大学贵阳市第一人民医院

目的观察灯盏乙素（Scutellarin,Scu）对神经母细胞瘤（SH-SY5Y）细胞中β淀粉样蛋白（β-Amyloid peptide,Aβ）生成的影响,探讨其针对阿尔茨海默病（Alzheimer’s Disease,AD）发挥的防治作用。方法将SH-SY5Y细胞分为对照组、Aβ处理... 详细信息

目的观察灯盏乙素（Scutellarin,Scu）对神经母细胞瘤（SH-SY5Y）细胞中β淀粉样蛋白（β-Amyloid peptide,Aβ）生成的影响,探讨其针对阿尔茨海默病（Alzheimer’s Disease,AD）发挥的防治作用。方法将SH-SY5Y细胞分为对照组、Aβ处理组和Aβ+Scu处理组,用CCK-8试剂盒测定细胞存活率;分别用免疫组织化学法、蛋白质印迹法和实时荧光定量聚合酶链反应法检测各组细胞Aβ;、β-淀粉样前体蛋白（β-amyloid precursor protein,APP）、APP切割酶1（β-Site APP-leavingnzymes1,BACE1）、APP切割酶2（β-Site APP-leavingnzymes2,BACE2）的表达。结果与对照组相比,Aβ处理组的细胞存活率下降,Aβ;、APP、BACE1蛋白和m RNA的表达水平增高,BACE2蛋白和m RNA的表达水平下降,Scu干预后,各检测指标的变化与Aβ处理组的结果正好相反。结论 Scu能够影响Aβ生成相关因子的表达,可能通过减少Aβ的沉积在AD防治中发挥积极作用。

关键词：阿尔茨海默病灯盏乙素 β淀粉样蛋白神经母细胞瘤细胞

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神经生长因子诱导人神经母细胞瘤细胞分化的实验研究

神经生长因子诱导人神经母细胞瘤细胞分化的实验研究

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作者：折晓宁中国协和医科大学

学位级别：博士

神经母细胞瘤(Nb)是儿童期常见的恶性肿瘤之一，组织学上以低分化的小圆细胞为特征；该肿瘤在临床表现及肿瘤生物学行为方面极具多样性，既可以耐受多种治疗手段而呈恶性进展过程，也可能自发分化成为良性的神经节瘤。神经母细胞瘤这种... 详细信息

神经母细胞瘤(Nb)是儿童期常见的恶性肿瘤之一，组织学上以低分化的小圆细胞为特征；该肿瘤在临床表现及肿瘤生物学行为方面极具多样性，既可以耐受多种治疗手段而呈恶性进展过程，也可能自发分化成为良性的神经节瘤。神经母细胞瘤这种生物学行为的多样性本质上是由其内在的基因表达特性所决定的，目前已发现的与神经母细胞瘤发生、发展有关的细胞遗传学改变包括：1号染色体短臂远端的部分缺失，MYCN基因扩增以及神经营养因子受体的表达缺失。其中，神经营养因子受体的缺失可能是神经母细胞瘤细胞对神经生长因子(NGF)不产生分化反应的主要原因。在我们以往对Nb细胞系IMR-32的诱导分化研究中发现，缺少高和低两种亲和性受体表达的该细胞系对NGF不产生诱导分化反应，即使应用基因重组技术恢复了低亲和性神经生长因子受体的表达之后，转化细胞仍不能在NGF作用下出现形态学上的明显分化，提示低亲和性神经生长因子受体所介导的信号传导体系不足以诱导Nb细胞发生终末分化反应。近年来，随着对NGF另一受体，高亲和性神经生长因子受体基因trkA研究的不断深入，越来越多的实验证据表明，trkA的表达产物—高亲和性神经生长因子受体所介导的信号传导通路在NGF诱导包括Nb在内的多种神经源体外培养细胞分化过程中起到较为重要的作用；此外，已有文献报道，低亲和性神经生长因子受体信号传导通路在Nb细胞中有一定程度开放的同时，其胞内区含有一段与介导细胞程序性死亡有关的结构域，在许多情况下可介导细胞发生凋亡。本研究的目的在于观察高亲和性神经生长因子受

关键词：神经母细胞瘤细胞神经生长因子细胞系 NGF 亲和性

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神经母细胞瘤细胞Boyden小室体外侵袭模型的建立及应用意义

神经母细胞瘤细胞Boyden小室体外侵袭模型的建立及应用意义

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中华医学会第八次全国小儿外科学术会

作者：王莉董蒨鹿洪亭江布先姜忠郝希伟青岛大学医学院附属医院小儿外科

目的神经母细胞瘤是儿童常见的恶性肿瘤之一,侵袭程度高,为了研究神经母细胞瘤的侵袭特性,本实验室建立了神经母细胞瘤的原发瘤细胞系及神经母细胞瘤患者骨髓转移灶细胞系,为研究神经母细胞瘤的生物学特性提供一个良好模型。Boyden小室... 详细信息

目的神经母细胞瘤是儿童常见的恶性肿瘤之一,侵袭程度高,为了研究神经母细胞瘤的侵袭特性,本实验室建立了神经母细胞瘤的原发瘤细胞系及神经母细胞瘤患者骨髓转移灶细胞系,为研究神经母细胞瘤的生物学特性提供一个良好模型。Boyden小室细胞培养模型具有综合判断肿瘤侵袭和转移的能力,侵袭小室呈桶状,底部装有聚碳酸醋微孔滤膜,滤膜表面涂有人工基底膜,侵袭小室和培养板共同构成细胞侵袭的上、

关键词：神经母细胞瘤细胞 Boyden 体外侵袭模型应用意义

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和厚朴酚对过氧化氢诱导的人神经母细胞瘤细胞损伤的保护作用及机制研究

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安徽医科大学学报 2020年第10期55卷 1520-1524页

作者：钱保进王玉安徽医科大学第一附属医院神经内科合肥230022

目的观察和厚朴酚(HNK)对过氧化氢(H2O2)诱导的人来源神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)损伤的保护现象,并探究其可能机制。方法用400μmol/L H2O2处理SH-SY5Y细胞24 h,建立细胞损伤模型。保护组用HNK预孵SH-SY5Y细胞6 h后,加入400μmol/L H2O... 详细信息

目的观察和厚朴酚(HNK)对过氧化氢(H2O2)诱导的人来源神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)损伤的保护现象,并探究其可能机制。方法用400μmol/L H2O2处理SH-SY5Y细胞24 h,建立细胞损伤模型。保护组用HNK预孵SH-SY5Y细胞6 h后,加入400μmol/L H2O2共同作用24 h,探讨HNK的作用。采用CCK-8比色法测定细胞活力;流式细胞术测定细胞凋亡;Western blot法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3表达,以及内质网应激(ERS)相关蛋白BIP、CHOP及Caspase-12表达。结果HNK增加H2O2作用下SH-SY5Y细胞活力(P<0.01),降低细胞凋亡率,增高Bcl-2/Bax比值,降低Caspase-3(P<0.05)、BIP、CHOP及Caspase-12蛋白表达(P<0.01)。结论HNK通过抑制ERS相关的凋亡保护H2O2对SH-SY5Y细胞的损伤作用。

关键词：和厚朴酚神经母细胞瘤细胞内质网应激

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