检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：彭春洋华中科技大学

学位级别：硕士

目的:脐带间充质干细胞(UC-MSCs)是存在于脐带华通胶组织中的一种多能成体干细胞,具有自我更新和多向分化能力,还具有重要的免疫调节功能和旁分泌效应。UC-MSCs被广泛用于治疗各种神经系统疾病。大量数据显示,UCMSCs能跨胚层分化为神经... 详细信息

目的:脐带间充质干细胞(UC-MSCs)是存在于脐带华通胶组织中的一种多能成体干细胞,具有自我更新和多向分化能力,还具有重要的免疫调节功能和旁分泌效应。UC-MSCs被广泛用于治疗各种神经系统疾病。大量数据显示,UCMSCs能跨胚层分化为神经元和胶质细胞。然而,至今仍缺乏简单有效的方法诱导UC-MSCs形成神经干细胞(NSCs)。为此,本实验采用神经干细胞标准培养基诱导UC-MSCs成球,并进一步探索这些UC-MSCs来源的神经球的生物学特性。方法:首先分离及培养人脐带来源的间充质干细胞。第二步采用神经干细胞标准培养基(DMEM/F12,EGF,b FGF,B27和N2)诱导UC-MSCs成球。然后利用次级成球实验检测UC-MSCs的自我更新能力。应用免疫荧光染色法检测UC-MSCs来源的神经球的神经分化能力。采用实时荧光定量PCR检测UC-MSCs诱导成球前后相关神经生成基因和干细胞标志基因m RNA的表达情况。接下来应用流式细胞仪检测UC-MSCs诱导成球前后常用细胞表面标志的表达变化。最后通过蛋白芯片检测UC-MSCs诱导成球前后上清液中细胞因子的分泌情况。结果:脐带间充质干细胞能在12-24h之内被神经干细胞标准培养基(DMEM/F12,EGF,b FGF,B27和N2)有效诱导形成神经干细胞球样结构,这些UC-MSCs来源的神经球能够自我更新形成次级神经球,并能被诱导分化为神经元和胶质细胞。实时定量PCR结果显示多种与神经干细胞自我更新和多向分化有关的基因表达上调。流式细胞检测结果显示诱导成球后第3天UC-MSCs常用表面标志CD13,CD44,CD90,CD105表达明显下降。蛋白芯片结果显示诱导成球前后大多数细胞因子的表达水平没有明显变化。结论:我们的数据显示,UC-MSCs能够有效诱导产生NSCs,这些UC-MSCs来源的NSCs将为未来神经替代治疗神经系统疾病提供理想的细胞来源。

关键词：脐带间充质干细胞神经干细胞神经球形成诱导分化细胞因子

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重组人神经调节蛋白-1β在氧和葡萄糖剥夺条件下通过细胞外信号调节激酶信号通路对小鼠神经干细胞增殖的影响

引用

中华地方病学杂志 2016年第10期35卷 736-740页

作者：王铎张雪梅付锦哈尔滨医科大学附属第二医院神经内科哈尔滨150081

目的观察重组人神经调节蛋白（recombinant neuregulin-1beta,rhNRG）-1β在氧和葡萄糖剥夺（oxygen-glucose deprivation,OGD）条件下通过细胞外信号调节激酶（ERK）信号通路对小鼠神经干细胞增殖能力的影响.方法将怀孕14～ 17 d的... 详细信息

目的观察重组人神经调节蛋白（recombinant neuregulin-1beta,rhNRG）-1β在氧和葡萄糖剥夺（oxygen-glucose deprivation,OGD）条件下通过细胞外信号调节激酶（ERK）信号通路对小鼠神经干细胞增殖能力的影响.方法将怀孕14～ 17 d的小鼠处死,分离脑室管膜下区的脑组织,提取神经干细胞.采用体外细胞培养方法进行细胞传代和鉴定.神经干细胞鉴定采用SABC-FITC （POD）双标试剂盒,标记免疫荧光细胞化学法镜下检测巢蛋白（Nestin）表达.空白对照组：取鉴定后的神经干细胞,细胞数为2×107个,放入24孔培养板中,DMEM/F12完全培养液培养3 h;OGD组：取鉴定后神经干细胞,细胞数为2×107个,放入24孔培养板中,加入不含葡萄糖的DMEM/F12培养液,将培养板移入潮湿密闭容器内（37℃恒温培养）,容器内含有氮气（950ml/L）和氧气（50 ml/L）的混合气体,缺糖缺氧培养1h后,再更换完全培养液培养3 h;OGD＋ rhNRG-1β组：在OGD干预前先加入100 μg/L rhNRG-1β,再培养3h.神经球形成：分别取3组干细胞,反复吹打成单细胞,按细胞个数1×106/ml将神经干细胞接种到含多聚赖氨酸盖玻片上的培养板中,培养7d后取出盖玻片,相差镜下观察3组于细胞神经球形成,计算神经干细胞增殖变化;克隆形成：分别取3组于细胞,接种于60 mm培养皿中,细胞个数2×107个,完全培养液培养24 h,相差镜下观察3组细胞克隆形成,计算神经干细胞增殖变化;蛋白免疫印迹法（Western blot）：测定3组干细胞磷酸化ERK（pERK）蛋白的变化,观察rbNRG-1β通过ERK信号通路上调pERK蛋白表达对小鼠神经干细胞增殖能力的影响.结果镜下原代培养的神经干细胞呈单个或成对生长,形态呈圆形;神经干细胞增殖呈团状集落;可见带有黄绿色荧光的特异性Nestin蛋白标记的神经干细胞.神经干细胞神经球数量、平均直径组间比较差异有统计学意义（F=693.66、1 002.09,P均＜0.01）,其中OGD组神经干细胞神经球形成受到显著抑制,形成数量、平均直径[（88.78±7.14）个、（62.12±2.52）μm]明显低于对照组[（246.34土8.67）个、（128.45±2.33）μm]和OGD＋rh-NRG-1β组[（237.87±6.61）个、（118.37±2.71） μm,P均＜0.01].神经干细胞克隆形成率组间比较差异有统计学意义（F=132.03,P＜0.01）,其中OGD组神经干细胞克隆形成受到显著抑制,形成率[（11.65±0.94）％]明显低于对照组[（33.23士2.93）％]和OGD＋ rh-NRG-1β组[（31.42土2.61）％,P均＜0.01].Western blot显示,神经干细胞pERK蛋白表达组间比较差异有统计学意义（F=63.76,P＜0.01）,其中OGD组pERK蛋白的相对表达量（0.487±0.072）明显低于对照组（1.013±0.112）和OGD＋ rh-NRG-1β组（1.752±0.278,P均＜0.01）.结论在OGD条件下,pERK蛋白表达下降,小鼠神经干细胞增殖受到抑制;rhNRG-1β能上调pERK蛋白表达,促进小鼠神经干细胞的增殖.小鼠神经干细胞的增殖能力受ERK信号通路的影响.

关键词：重组神经调节蛋白-1β 氧和葡萄糖剥夺细胞外信号调节激酶神经干细胞神经球形成克隆形成

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