检索结果-内蒙古大学图书馆

中华神经外科杂志 2019年第2期35卷 193-196页

作者：裴培崔小岱张霆王珊首都儿科研究所北京100020

目的通过低叶酸饲喂联合二氢叶酸还原酶竞争性抑制剂甲氨蝶呤对小鼠胚胎神经管发育产生影响,建立小鼠神经管畸形的动物模型。方法实验采用C57BL/6J小鼠,通过随机数字表法,分为正常饲喂组(以正常鼠粮饲喂)、低叶酸组以及低叶酸+甲氨... 详细信息

目的通过低叶酸饲喂联合二氢叶酸还原酶竞争性抑制剂甲氨蝶呤对小鼠胚胎神经管发育产生影响,建立小鼠神经管畸形的动物模型。方法实验采用C57BL/6J小鼠,通过随机数字表法,分为正常饲喂组(以正常鼠粮饲喂)、低叶酸组以及低叶酸+甲氨蝶呤组。低叶酸+甲氨蝶呤组在孕7.5 d给予不同剂量的甲氨蝶呤(分别为1.00 mg/kg、1.25 mg/kg、1.50 mg/kg、2.50 mg/kg、3.50 mg/kg、4.50 mg/kg)腹腔注射,低叶酸组则给予等体积的生理盐水。于孕13.5 d收集3组小鼠胚胎,观察胚胎的表型,记录正常胎与畸形胎的数量、胎鼠顶臀长、胎鼠体质量以及胎盘的重量。结果低叶酸组小鼠可见发育迟缓,未见小鼠胚胎神经管畸形的发生;低叶酸+甲氨蝶呤组小鼠的神经管畸形比率最高为36.5%,且甲氨蝶呤应用剂量为1.50 mg/kg时,小鼠的畸形率最高,神经管畸形表型多为脊柱裂。结论低叶酸饲喂联合甲氨蝶呤可诱导小鼠胚胎神经管畸形的发生。

关键词：神经管畸形甲氨蝶呤模型,动物小鼠抗叶酸代谢药物

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

aFGF在高温致神经管畸形中作用的免疫组织化学研究

引用

解剖学杂志 1998年第1期21卷 37-40页

作者：高英茂马金龙管英俊山东医科大学组织胚胎学教研室济南250012 潍坊医学院组胚教研室

在已建立的高温致神经管畸形的动物模型上,用免疫组织化学方法,对高温处理后的孕鼠之不同发育阶段的胚胎进行酸性成纤维细胞生长因子免疫组织化学染色,观察其在各期胚胎的神经上皮及其周围间充质、内界膜和脊索中的分布和变化.结果:在... 详细信息

在已建立的高温致神经管畸形的动物模型上,用免疫组织化学方法,对高温处理后的孕鼠之不同发育阶段的胚胎进行酸性成纤维细胞生长因子免疫组织化学染色,观察其在各期胚胎的神经上皮及其周围间充质、内界膜和脊索中的分布和变化.结果:在高温处理后的各期胚胎的上述结构中,酸性成纤维细胞生长因子的免疫组织化学染色均明显减弱,甚至呈阴性着色,不同发育阶段及不同结构的着色强度也不同,说明酸性成纤维细胞生长因子在高温致神经管畸形中有重要作用.

关键词：神经管畸形胚胎 aFGF 高温动物模型

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

过量维甲酸致小鼠神经管畸形及牛磺酸干预中Pax3的特异时相表达

引用

中华神经外科杂志 2013年第3期29卷 303-307页

作者：王涛张庆华张莉廖勇仕梁日初石巧玲孙涛南华大学附属第二医院神经外科衡阳421001 宁夏医科大学附属总医院

目的探讨小鼠胚胎神经管畸形（NTDs）中过量维甲酸（RA）致畸及牛磺酸干预的作用，分析Pax3与NTDs的关系及其特异性时相表达。方法采用孕鼠服用过量RA及牛磺酸，建立胎鼠NTDs及干预动物模型；用免疫组化及逆转录聚合酶链式反应方法，分... 详细信息

目的探讨小鼠胚胎神经管畸形（NTDs）中过量维甲酸（RA）致畸及牛磺酸干预的作用，分析Pax3与NTDs的关系及其特异性时相表达。方法采用孕鼠服用过量RA及牛磺酸，建立胎鼠NTDs及干预动物模型；用免疫组化及逆转录聚合酶链式反应方法，分析各组胎鼠E9．5、E10．5、E11．5、E12．5中神经管Pax3的表达特异时相性差异。结果致畸组胎鼠畸形率达到71．6％，而干预组畸形率降至55．3％（P〈0．05），两组死胎或吸收胎率分别为11．4％、9．8％（P〉0．05）；Pax3蛋白质阳性反应主要位于胞核，其在神经嵴表达强，而周围间充质表达弱。且在对照组中表达强于两实验组（P〈0．05），于E10．5d出现表达高峰；在两实验组中Pax3表达呈现增强趋势，干预组Pax3表达强于致畸组（P〈0．05）；Pax3基因在两实验组中的表达受抑，与对照组比较明显减弱（P〈0．05），对照组中Pax3基因的表达于E10．5d出现高峰；在两实验组中Pax3随胚胎发育呈现增强趋势无表达高峰，干预组Pax3表达强于致畸组（P〈0．05）。结论RA致畸及牛磺酸干预在胚胎NTDs发生发展中的作用，与Pax3基因表达的时相差异性有关。

关键词：神经管畸形维甲酸牛磺酸 Pax3 昆明小鼠

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

应用银染mRNA差异显示法寻找高温致神经管畸形差异表达基因

引用

解剖学杂志 2002年第2期25卷 123-127页

作者：袁青高英茂李少玲山东大学医学院组织学与胚胎学教研室济南250012

目的 :寻找高温致神经管畸形的差异表达基因。方法 :在高温致神经管畸形的动物模型上 ,分别于高温处理后 2 4、48和 72小时 ,提取鼠胚神经管组织总RNA和正常对照组鼠胚相应时间的神经管组织总RNA ,反转录合成cDNA第一链后进行差异显示PC... 详细信息

目的 :寻找高温致神经管畸形的差异表达基因。方法 :在高温致神经管畸形的动物模型上 ,分别于高温处理后 2 4、48和 72小时 ,提取鼠胚神经管组织总RNA和正常对照组鼠胚相应时间的神经管组织总RNA ,反转录合成cDNA第一链后进行差异显示PCR扩增 ,采用PAGE和银染技术显示差异条带 ,回收差异条带并经PCR二次扩增后 ,用点杂交方法筛除假阳性条带 ,再用Northern印迹杂交进一步鉴定。结果 :在高温致畸的鼠胚神经管组织中筛选到一个特别明显的差示cDNA片段N3 2 ,该片段所在基因在高温致畸的胚胎神经管组织中的表达远低于正常同龄胚的神经管组织。结论 :N3 2片段所在基因的低表达与高温致神经管畸形相关。

关键词：神经管畸形高温 mRNA差异显示差异表达基因

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

中国30个县(市)1993～2000年神经管畸形在出生人群中的患病率及变动趋势分析(英文)

引用

北京大学学报（医学版） 2002年第3期34卷 204-209页

作者：叶荣伟李松郑俊池洪世欣陈新王太梅任爱国王丽娜李竹北京大学生育健康研究所北京100083 北京大学第三医院儿科

目的 :描述中国 30个县 (市 ) 1 993至 2 0 0 0年神经管畸形 (neuraltubedefects ,NTD)在出生人群中的患病率及变动趋势。方法 :资料来源于“中美预防出生缺陷和残疾合作项目”中出生缺陷监测的常规报告。研究对象为1 993～ 2 0 0 0年... 详细信息

目的 :描述中国 30个县 (市 ) 1 993至 2 0 0 0年神经管畸形 (neuraltubedefects ,NTD)在出生人群中的患病率及变动趋势。方法 :资料来源于“中美预防出生缺陷和残疾合作项目”中出生缺陷监测的常规报告。研究对象为1 993～ 2 0 0 0年所有孕满 2 0周的总出生人群 (包括活产和死胎、死产 )。利用线性回归分析神经管畸形率按年变动的趋势。结果 :在 1 993～ 2 0 0 0年间 ,共监测到 1 1 891 2 6个活产儿和死胎、死产儿出生 ,其中有明确诊断的神经管畸形儿 1 2 6 4例 ;总出生人群中的神经管畸形率为 1 0 .6 3/ 1 0 0 0 0 ,1 993年的畸形率最高 ( 1 8.99/ 1 0 0 0 0 ) ,1 998年最低 ( 6 .0 5/ 1 0 0 0 0 ) ;无脑儿、脊柱裂和脑膨出在每 1 0 0 0 0个出生儿中的患病率分别为 4 .71、4 .39和 1 .53。在所有神经管畸形病例中 ,无脑儿和脊柱裂占的比例较高 ,分别为 4 4.3%和 4 1 .3% ,而脑膨出仅占 1 4 .4 %。在神经管畸形病例中有 6 9.3%为死胎、死产 ;而死胎、死产在无脑儿、脊柱裂和脑膨出中所占的比例分别为 95.4 %、4 3.7%和6 2 .6 %。线性回归分析结果显示 ,神经管畸形率从 1 993至 2 0 0 0年呈显著下降趋势 (F =1 1 .81 8,β =- 0 .81 4 ,P <0 .0 5) ;而对 3种畸形单独分析发现 ,无脑儿和脊柱裂率也呈显著?

关键词：神经管畸形出生人群变动趋势分析流行病学患病率

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

双亲5，10-亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与子代神经管畸形易感性的关系

引用

中华流行病学杂志 2011年第1期32卷 60-67页

作者：刘铁诚王志萍赵仲堂山东大学公共卫生学院流行病与卫生统计学研究所济南250012

目的定量评价双亲5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）基因C677T多态性与子代神经管畸形（NTDs）发生的关联性及关联强度,为利用双亲MTHFR 677位点基因型预测和评价子代NTDs的发病风险提供依据.方法制定原始文献的纳入和排除标准及检... 详细信息

目的定量评价双亲5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）基因C677T多态性与子代神经管畸形（NTDs）发生的关联性及关联强度,为利用双亲MTHFR 677位点基因型预测和评价子代NTDs的发病风险提供依据.方法制定原始文献的纳入和排除标准及检索策略.检索中外数据库,收集有关亲代MTHFR基因C677T多态性与NTDs相关性的研究报告,按照MTHFR基因677位点基因型分类,分别整理子代患NTDs的双亲基因型频数数据,应用RevMan5.0软件对各文献进行异质性检验和Meta分析,得出合并后的OR值及其95%CI.结果共33篇文献符合纳入标准.数据合并结果显示,母亲MTHFR基因677位点TT/CC、CT/CC基因型频率与子代NTDs易感性之间有统计学意义,OR值（95%CI）分别为1.68（1.32～2.14）、1.20（1.07～1.35）;父亲MTHFR基因677位点TT/CC、CT/CC基因型频率与子代NTDs易感性有统计学意义,OR值（95%CI）分别为1.38（1.08～1.76）、1.32（1.13～1.55）.结论双亲MTHFR基因C677T多态性均是子代NTDs发病的重要危险因素.

关键词：神经管畸形基因多态性 5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶 Meta分析

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

中国人群母亲5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶基因C677T多态性与子代神经管畸形易感性关系的Meta分析

引用

卫生研究 2018年第2期47卷 312-317页

作者：张春红霍军生孙静黄建朴玮殷继永中国疾病预防控制中心营养与健康所北京100050

目的探讨母亲5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因C677T多态性与子代神经管畸形(NTDs)发生的关联性及关联强度。方法制定检索策略和文献纳入排除标准,检索主题词为中英文形式的"MTHFR"和"叶酸代谢通路"和"... 详细信息

目的探讨母亲5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因C677T多态性与子代神经管畸形(NTDs)发生的关联性及关联强度。方法制定检索策略和文献纳入排除标准,检索主题词为中英文形式的"MTHFR"和"叶酸代谢通路"和"基因多态性或SNP"和"神经管畸形/神经管缺陷"并追踪参考文献中的相关研究,纳入可以从文献中直接获得或计算得出OR值及95%CI病例-对照研究的中英文文献。系统检索从建库至2017年7月5日在中国生物医学文献数据库、中国期刊全文数据库、万方数据库、重庆维普中文科技期刊全文数据库、Pub Med数据库和Web of Science发表的有关中国人群母亲MTHFR C677T位点多态性与子代NTDs易感性的病例-对照研究文献、学位论文及引文。提取相应数据并采用Rev Man 5.3软件进行Meta分析。结果 13篇文献纳入分析,包括病例组1500例,对照组1654例。在TT基因型vs CC基因型、TT+CT基因型vs CC基因型、等位基因T vs等位基因C合并OR(95%CI)分别为1.94(1.58~2.39)、1.65(1.39~1.98)和1.39(1.26~1.54)。结果显示,在中国人群母亲MTHFR基因C677T位点多态性与子代NTDs发生之间存在较大的关联性。结论中国人群母亲MTHFR基因C677T位点多态性是子代NTDs发病的重要危险因素之一,基于MTHFR多态性检测的孕期叶酸补充指导和检测将是进一步降低新生儿出生缺陷的重要手段。

关键词：神经管畸形基因多态性 5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶基因 Meta分析

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

多不饱和脂肪酸对神经管畸形和自然流产的影响及机制研究

多不饱和脂肪酸对神经管畸形和自然流产的影响及机制研究

引用

作者：李克磊浙江大学

学位级别：博士

神经管畸形(NTD)及自然流产均为胚胎发育过程中出现的疾病。NTD是胚胎神经管无法完成正常闭合而导致的一种先天畸形。叶酸缺乏所引起的叶酸-同型半胱氨酸Hcy)代谢紊乱是导致NTD发生的最主要原因。此外肌醇代谢通路异常、炎症反应等也是... 详细信息

神经管畸形(NTD)及自然流产均为胚胎发育过程中出现的疾病。NTD是胚胎神经管无法完成正常闭合而导致的一种先天畸形。叶酸缺乏所引起的叶酸-同型半胱氨酸Hcy)代谢紊乱是导致NTD发生的最主要原因。此外肌醇代谢通路异常、炎症反应等也是导致NTD发生的原因。自然流产是指非人为地在自然状态下发生的流产,其发病原因主要包括染色体异常,感染、免疫及炎症,内分泌功能紊乱,叶酸—Hcy代谢异常等。多不饱和脂肪酸(PUFA)是神经系统的重要结构组分。PUFA代谢产生的类花生酸TXA2、PGI2(二者的稳定代谢产物分别为TXB2及6-keto-PGF1α)能够参与调控营养物质由母亲经胎盘到胎儿的转运。此外,PUFA对叶酸-Hcy代谢通路及炎症反应也具有调控作用。基于前人的这些研究结果,本文提出假设:PUFA能够通过调控类花生酸代谢、叶酸-Hcy代谢、炎症反应以及弥补机体PUFA的不足而对NTD及自然流产的发生起到一定的预防作用。本论文通过病例对照实验分析PUFA与NTD及自然流产的相关性,进而通过动物实验研究PUFA的摄入对子代NTD及流产发病率的影响及其机制。主要研究结果如下:(1)病例对照实验发现胎盘中C18:2n-6、C18:3n-6、C20:3n-6、C18:3n-3、C20:3n-3、C20:5n-3、C22:5n-3 含量过低及 C20:4n-6/C20:5n-3、TXB2/6-keto-PGF1α的比值过高与胎儿NTD发病风险的升高密切相关,表明这些PUFA的缺乏及类花生酸代谢紊乱是NTD的风险因素。(2)病例对照实验发现,孕早期自然流产妇女胎盘绒毛和蜕膜中必须脂肪酸C18:3n-3、蜕膜中总n-3 PUFA、绒毛中必需脂肪酸C18:2n-6的含量均显著低于健康孕妇,表明这些PUFA的缺乏与孕早期自然流产发生的密切相关。孕早期自然流产妇女绒毛中C20:4n-6/C20-5n-3的比值显著高于健康孕妇,而C20:4n-6代谢产生的类花生酸PGI2及C20:5n-3代谢产生的类花生酸HEPE、LTB5、TXB3的水平显著低于健康孕妇,表明胎盘绒毛中类花生酸代谢紊乱是孕早期自然流产发生的风险因素。此外,胎盘蜕膜和绒毛中溶血磷脂及绒毛中甘油二酯的含量偏低也是孕早期自然流产发生的潜在风险因素。(3)动物实验发现,孕鼠PUFA的摄入对丙戊酸钠(VPA)诱导的NTD及流产的发生具有预防作用,并且n-3 PUFA的效果优于n-6 PUFA。PUFA的摄入有效减轻了 VPA引起的胎盘中类花生酸TXB2及6-keto-PGF1α的过量合成,并且n-3 PUFA的摄入降低了胎盘中TXB2/6-keto-PGF1α的比值,表明PUFA调控胎盘中类花生酸的合成是其预防NTD及流产发生的机制之一。(4)动物实验发现,孕鼠腹腔注射VPA抑制了孕鼠肝脏中叶酸-Hcy的代谢通路关键基因(DHFR、MTRR、CSE、GAMT及CBS)的mRNA和蛋白表达,。与孕鼠肝脏中的结果相反,孕鼠VPA的注射升高了胚胎中叶酸-Hcy代谢通路关键基因(DHFR、MTRR、CSE、GAMT、CBS 及 MTHFR)的 mRNA 及蛋白表达水平。孕鼠 n-3 PUFA 或 n-6 PUFA的摄入均有效减轻了 VPA所引起的孕鼠肝脏及胚胎中叶酸-Hcy代谢紊乱,并且n-3 PUFA的效果优于n-6 PUFA。这很好的阐明了 n-3 PUFA及n-6 PUFA能够降低VPA诱导的NTD及流产发病率并且n-3 PUFA的效果优于n-6 PUFA的机制。此外,孕鼠VPA的注射降低了孕鼠肝脏中C18:2n-6、C20:4n-6及C22:6n-3的含量,而n-3 PUFA及n-6 PUFA的摄入有效的弥补了 VPA所引起的孕鼠肝脏中这三种PUFA的不足,这可能也是PUFA预防NTD及流产发生的机制之一。综上所述,本论文通过人体病例对照实验发现PUFA的缺乏及类花生酸代谢异常均与NTD及自然流产的发生密切相关。动物实验发现孕鼠n-3 PUFA或n-6 PUFA的摄入均能有效预防NTD及流产的发生,并且n-3 PUFA的效果优于n-6 PUFA。动物实验表明,PUFA的摄入能够降低NTD及流产发病率主要是通过调控类花生酸代谢、叶酸-Hcy代谢及弥补机体PUFA的不足而实现。

关键词：多不饱和脂肪酸类花生酸同型半胱氨酸叶酸神经管畸形自然流产

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

RTX诱导神经管畸形动物模型的建立及机制研究

引用

南京医科大学学报（自然科学版） 2016年第4期36卷 420-425页

作者：王莉董艳婷丁晓琛牛玉虎牛勃山西医科大学基础医学院山西太原030001 首都儿科研究所儿童发育营养组学北京市重点实验室北京100020

目的 :通过胸苷酸合成酶(thymidylate synthase,TS)特异性抑制剂———雷替曲塞(RTX)干预孕鼠,建立小鼠神经管畸形(neural tube defects,NTDs)模型,探讨细胞凋亡和增殖、DNA损伤在RTX诱导的NTDs发生中的作用。方法:将孕7.5 d C57BL/6J... 详细信息

目的 :通过胸苷酸合成酶(thymidylate synthase,TS)特异性抑制剂———雷替曲塞(RTX)干预孕鼠,建立小鼠神经管畸形(neural tube defects,NTDs)模型,探讨细胞凋亡和增殖、DNA损伤在RTX诱导的NTDs发生中的作用。方法:将孕7.5 d C57BL/6J小鼠随机分为6组:1组为对照组,5组为RTX干预组。对照组腹腔注射0.9%Na Cl,RTX干预组分别腹腔注射不同剂量的RTX(5.0、10.0、11.5、13.5、15.0 mg/kg),孕11.5 d取胚胎并观察其发育情况。苏木精-伊红(HE)染色观察神经管闭合情况,放射性法测定TS活性,高效液相色谱检测胸苷酸(d TMP)及尿苷酸(d UMP)含量,Western blot分析复制蛋白A2(RPA2)、γ-H2AX和caspase-3表达,免疫组化检测细胞增殖。结果:RTX注射剂量为11.5 mg/kg时,NTDs发生率最高(30.56%);RTX干预后,TS活性较对照组显著降低,dUMP含量显著升高,dTMP含量显著下降;RTX建立的NTDs模型中,RPA2和γ-H2AX磷酸化水平显著升高;caspase-3表达量显著增加,细胞增殖显著减少。结论:通过RTX干预孕鼠可建立小鼠NTDs模型,dTMP合成障碍导致DNA损伤、细胞凋亡与增殖失调可能是NTDs发生的重要机制。

关键词：神经管畸形胸苷酸合成酶雷替曲塞 DNA损伤细胞凋亡与增殖

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

利用iTRAQ技术筛查神经管畸形产前诊断的分子标志物及其在畸形发生过程中作用机制研究

利用iTRAQ技术筛查神经管畸形产前诊断的分子标志物及其在畸形发...

引用

作者：安东中国医科大学

学位级别：博士

目的：　　神经管畸形(neural tube defects，NTDs)是儿童常见的畸形，在中国的发病率较西方国家高，发病率为1‰-5‰[1]。该病由环境因素和遗传因素共同作用所致[2]，其畸形的发病机制并不清楚，治疗效果不佳。虽然口服叶酸可以降低50... 详细信息

目的：　　神经管畸形(neural tube defects，NTDs)是儿童常见的畸形，在中国的发病率较西方国家高，发病率为1‰-5‰[1]。该病由环境因素和遗传因素共同作用所致[2]，其畸形的发病机制并不清楚，治疗效果不佳。虽然口服叶酸可以降低50-70％的发病率，但目前仍然没有完全预防和治愈的方法[3]。70-80％的神经管畸形可能通过产前筛查手段如超声及孕妇血清AFP筛查出来[4]，但目前AFP等产前检查标记物的特异性并不高[5]。因此，特异的标志物的发现可以提高产前诊断，并为神经管的早期治疗提供线索。　　孕期胎儿和孕妇之间存在相互交换，其交换物质包括细胞内、细胞外因子如激素，生长因子和粘附分子，免疫调节因子等[6-8]。母体的生理过程适应胎儿的生长发育，胎儿作为内分泌器官产生大量的蛋白质进入母体和胎儿循环[9，10]。正常妊娠期，在母体循环中可以发现大量的母体和胎儿产生的物质。因此母体胎儿循环标志物的识别有助于产前诊断或预后的标志物发现，并帮助更好的了解潜在的发病机制[11-13]。病理情况下孕早期循环标志物可以在临床症状发展之前作为潜在的诊断标志物，而孕后期标志物的检测可能与疾病的真正表型紧密相关。孕妇血清生化组成成分随怀孕周期不断变化，血清蛋白谱变化能够反应孕妇和胎儿的生理和病理变化。因此研究孕妇血清蛋白谱变化规律对畸形早期发现和研究畸形发生机制具有十分重要的意义。　　本研究应用维甲酸在大鼠神经管闭合的关键期(E10)给药，建立脊柱裂大鼠模型，应用蛋白质组学iTRAQ/质谱分析方法，比较致畸早期孕11、13天正常组孕鼠和显性脊柱裂孕鼠血清蛋白表达谱的变化，并采用ELISA方法、real-timeRT-PCR方法、Western-blot方法、免疫组化方法，在基因水平和蛋白水平观察在不同胚胎发育期脊柱裂组和对照组孕鼠血清、羊水、胎盘、胚胎脊髓中差异蛋白质LIFR、PCSK9的表达情况，揭示LIFR、PCSK9在不同胚胎发育期的时空表达规律，以探讨其在脊柱裂发生过程中的作用，为阐明脊柱裂的发病机制提供理论依据。并在神经管畸形及正常孕妇中检测不同孕周PCSK9的变化，以筛查神经管畸形相关血清标记物。　　方法：　　一、动物模型建立与标本收集　　成熟未孕Wistar大鼠，雌雄比例5∶1午夜合笼，晨8-9时阴道涂片，显微镜下见到精子记为E0，E10时维甲酸致畸组以140mg/kg用量经胃管注入;对照组给予同体积的橄榄油。分别于E11、E12、E13、E15、E17心脏穿刺取血，剖宫取出胎鼠，解剖显微镜下辨认畸形类型。血标本用无抗凝剂的5ml普通采血试管，室温放置2h，使血液凝固析出血清，3000g离心20min，分装，-80℃保存。新鲜的羊水，12000 g离心15分钟，4℃，以去除羊水中不可溶的杂质，分装，-80℃储存。取出胎鼠脊髓、胎盘，-80℃保存或4％多聚甲醛固定。　　NTD孕妇血清及正常孕妇血清、NTD胎儿及正常胎儿组织样本采集自中国医科大学附属盛京医院及沈阳市妇女儿童保健中心，各样本入组均按孕周、孕妇年龄、收集时间匹配。NTD胎儿均经由超声诊断。　　二、iTRAQ分析　　（一）样品的制备　　每个样品精确取出100μ g蛋白。按蛋白∶酶=20∶1的比例加入Trypsin，37℃酶解4h。按上述比例再补加Trypsin一次，37℃继续酶解8h。　　（二）iTRAQ标记　　胰蛋白酶消化后，用真空离心泵抽干肽段。用0.5M TEAB复溶肽段，按照手册进行iTRAQ标记，室温培养2小时。将标记后的各组肽段混合，用SCX柱进行液相分离。　　（三）SCX分离　　采用岛津LC-20AB液相系统、分离柱为4.6×250mm型号的UltremexSCX柱对样品进行液相分离。将标记后抽干的混合肽段用4ml buffer A(25mM NaH2PO4 in25％ACN，pH2.7)复溶。进柱后以1 ml/min的速率进行梯度洗脱:先在5％ buffer B(25mM NaH2PO4，1M KCl in25％ACN，pH2.7)中洗脱7min，紧跟着一个20min的直线梯度使buffer B由5％上升至60％，最后在2min内使buffer B的比例上升至100％并保持1min，然后恢复到5％平衡10min。整个洗脱过程在214nm吸光度下进行监测，经过筛选得到12个组分。每个组分分别用StrataX除盐柱除盐，然后冷冻抽干。　　（四）基于Triple TOF5600的LC-ESI-MSMS分析　　将抽干的每个组分分别用buffer A(5％ ACN，0.1％FA)复溶至约0.5μg/μl的浓度，20000g离心10min，除去不溶物质。每个组分上样5μl（约2.5μ g蛋白），通过岛津公司LC-20AD型号的纳升液相色谱仪进行分离。所用

关键词：胎儿脊柱裂产前诊断蛋白表达谱神经管畸形

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：