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生物医学工程研究 2011年第3期30卷 164-166页

作者：李克罗娟娟杨浩李文哲秦明新南昌大学第一附属医院肿瘤科南昌330006 第四军医大学生物医学工程系电子学教研室西安710032

在宽频范围（100~10 MHz）内,测量正常和水肿神经细胞模型的电导率与介电系数的频谱图,比较水肿前后神经细胞的电导率与介电系数的区别。采用SD大鼠脑皮质的神经细胞建立正常神经细胞模型,对其缺氧处理后建立水肿神经细胞模型,应用Agile... 详细信息

在宽频范围（100~10 MHz）内,测量正常和水肿神经细胞模型的电导率与介电系数的频谱图,比较水肿前后神经细胞的电导率与介电系数的区别。采用SD大鼠脑皮质的神经细胞建立正常神经细胞模型,对其缺氧处理后建立水肿神经细胞模型,应用Agilent4294A阻抗分析仪分别对10组对照组模型、正常神经细胞模型和水肿神经模型的电特性进行检测。三种模型的电导率存在显著差异。水肿神经细胞模型的电导率大于其他两种模型的电导率,而正常神经细胞模型的电导率大于对照组模型的电导率。本实验有效地检测出正常神经细胞模型与水肿神经细胞模型的电导率差别,为应用脑磁感应成像对脑水肿相位差的检测提供了依据。

关键词：脑水肿神经细胞模型介电特性电导率介电系数

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一种利用转分化技术诱导体细胞重编程至神经细胞模型的方法

一种利用转分化技术诱导体细胞重编程至神经细胞模型的方法

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作者：樊晋宇池金鹏赵亚琪程雪张诗薇 253000 山东省德州市经济技术开发区东方红东路6596号

本发明提供了一种利用转分化技术诱导体细胞重编程至神经细胞模型的方法，具体为，通过神经细胞发育关键转录因子组合将精神分裂症患者的皮肤成纤维细胞直接转分化为神经细胞。本发明的优点在于能从将体细胞成功转分化为神经细胞，且转... 详细信息

标准号: CN111876443A

本发明提供了一种利用转分化技术诱导体细胞重编程至神经细胞模型的方法，具体为，通过神经细胞发育关键转录因子组合将精神分裂症患者的皮肤成纤维细胞直接转分化为神经细胞。本发明的优点在于能从将体细胞成功转分化为神经细胞，且转分化效率高，可以建立较为精准的细胞模型且可以模拟精神分裂症的神经发育过程，为进一步研究精神分裂症的发病机制提供一种新的可能性。

关键词：精神分裂症神经细胞体细胞分化皮肤成纤维细胞神经细胞发育神经细胞模型发病机制分化技术神经发育细胞模型转录因子重编程诱导成功研究

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抑制人BI-1基因表达shRNA重组慢病毒表达载体的构建(英文)

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中国组织工程研究与临床康复 2009年第50期13卷 9992-9996页

作者：吴丹王师尧王佩蓉金巍娜北京大学医学部基础医学院医学遗传学系北京市100191

背景:慢病毒介导的RNAi技术以其专一性、抑制效率高、作用持久等优点已广泛应用于基因功能研究中。该技术病毒包装、转染、以及shRNA序列设计都会对抑制效率产生影响。因此实验以人的Bax抑制子1(BI-1)为目的基因进行RNA干扰实验来探讨... 详细信息

背景:慢病毒介导的RNAi技术以其专一性、抑制效率高、作用持久等优点已广泛应用于基因功能研究中。该技术病毒包装、转染、以及shRNA序列设计都会对抑制效率产生影响。因此实验以人的Bax抑制子1(BI-1)为目的基因进行RNA干扰实验来探讨其影响因素。目的:为了利用慢病毒Lentivirus介导的RNAi技术寻找抑制人BI-1基因表达的siRNA。设计、时间及地点:单一样本观察,于2007-09/2008-12在北京大学医学部基础医学院医学遗传学系完成。材料:293T细胞、SH-SY5Y细胞为实验室保存;用Ambion公司(***)提供的网络在线工具设计了4个shRNA。方法:构建带有绿色荧光蛋白(EGFP)标签的、针对人BI-1基因不同区域设计的shRNA重组表达载体,然后与包装蛋白表达载体共转染293T细胞以包装成4种shRNA病毒粒子。通过流式细胞仪检测GFP的表达情况来摸索最佳包装条件。Real-timePCR以β-肌动蛋白mRNA被用作内参,将4种重组病毒和对照组病毒上清液侵染SH-SY5Y,检测内源性BI-1基因的敲低效率,筛选到最佳RNAi有效序列。主要观察指标:被不同包装病毒侵染的细胞内GFP的表达率。结果:pLentiLox3.7、rev、vsvg、rre等4质粒包装系统的最佳包装比例为2:1:1:1,包装48h收获的病毒粒子的感染效率最高,并且在包装后的24h之后换液会提高包装效率。靶定到人BI-1基因-2-17核苷酸(起始编码区域)的shRNARNA干扰效率最高。能够抑制40%正常基因表达。结论:实验摸索出Lentivirus介导的RNAi技术病毒包装的重要影响因素。为建立稳定的人BI-1基因表达敲低的神经细胞模型和研究BI-1异常表达参与的神经元凋亡疾病的病理研究打下基础。

关键词： BI-1基因 RNA干扰神经细胞模型

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PLA2G4A基因拷贝数变异与精神分裂症易感性的关联及其机制研究

PLA2G4A基因拷贝数变异与精神分裂症易感性的关联及其机制研究

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作者：高孜博吉林大学

学位级别：博士

精神分裂症是一种严重的精神障碍,给患者家庭及社会造成了巨大的医疗与经济负担。精神分裂症是一种多基因遗传的复杂疾病,涉及多种类型的遗传变异,其中拷贝数变异被认为是精神分裂复杂遗传变异的一个重要来源。然而拷贝数变异在不同人... 详细信息

精神分裂症是一种严重的精神障碍,给患者家庭及社会造成了巨大的医疗与经济负担。精神分裂症是一种多基因遗传的复杂疾病,涉及多种类型的遗传变异,其中拷贝数变异被认为是精神分裂复杂遗传变异的一个重要来源。然而拷贝数变异在不同人群中具有较大异质性,目前仅有少量易感基因拷贝数变异被认为与精神分裂症有明确关联。磷脂酶A2(PLA2)基因家族被认为可能通过影响神经细胞膜磷脂稳态和细胞膜可塑性参与精神分裂症的发病机制,本课题组前期研究也发现PLA2基因变异及其表达调控异常可能是精神分裂症的重要病因线索,然而PLA2家族的拷贝数变异在精神分裂症患者中的作用未见报道。目的: 本研究拟将PLA2家族基因的靶向位点拷贝数变异筛查与公开数据库全基因组拷贝数变异分析相结合,筛选出精神分裂症相关的PLA2家族拷贝数变异关键基因,并进一步扩大样本量,探究关键基因拷贝数变异与精神分裂症的易感性及临床表型之间的关系。同时利用神经细胞模型,探讨关键基因拷贝数变异参与精神分裂症疾病发生发展的潜在生物学机制,为进一步揭示精神分裂症的发病机制及其靶向治疗提供理论依据。方法: 1.使用CNVplex技术对100例精神分裂症患者和100例对照者的9个PLA2家族基因的拷贝数进行检测,初步筛查与精神分裂症可能相关的PLA2基因拷贝数变异。 2.下载GEO数据库和SRA数据库中两个精神分裂症公开数据集。对GEO数据集提取基因分型数据和等位基因信号值后,使用Penn CNV软件进行拷贝数变异检测和基因注释;对SRA数据集进行过滤、压缩、比对后,使用controlFREEC软件检测拷贝数变异,ANNOVAR软件进行注释。两组拷贝数变异结果取交集,得到精神分裂症相关的拷贝数变异基因集,对该基因集进行富集分析。 3.将CNVplex检测结果与两组数据集分析结果取交集,经过DGV数据库频率验证与致病性质判定后,筛选出PLA2拷贝数变异关键基因。 4.扩大人群,使用q PCR方法对关键基因拷贝数变异情况进行验证,分析关键基因拷贝数变异分布与精神分裂症患者易感性及临床表型的关联;使用ELISA实验检测关键基因的不同拷贝数变异类型对外周血c PLA2水平的影响。 5.使用小干扰RNA(si RNA)分别转染SH-SY5Y细胞和C17.2细胞,构建关键PLA2基因沉默表达模型。通过CCK-8细胞增殖实验检测两种神经细胞模型增殖活性、使用流式细胞术检测凋亡和细胞周期分布;使用ELISA实验检测细胞分泌炎症因子的水平变化。通过转录组测序分析关键PLA2基因对SHSY5Y细胞转录组的影响。 6.在低血清培养基中添加维甲酸和/或脑源性神经营养因子(BDNF)分别诱导SH-SY5Y和C17.2细胞,构建神经细胞分化模型;通过Western Blot实验和q PCR实验探究关键PLA2基因在神经细胞诱导分化过程中的水平变化;通过形态学观察探究关键PLA2基因沉默表达对神经细胞诱导分化能力的影响。结果: ***2家族拷贝数变异关键基因的筛选 CNVplex检测结果表明,PLA2G3(OR=6.905,P=0.013)、PLA2G4A(OR=8.357,P=0.048)、PLA2G4F(OR=6.261,P=0.020)、PLA2G12A(OR=5.175,P=0.038)基因的拷贝数缺失以及PLA2G6(OR=11.580,P<0.001)基因的拷贝数重复在两组间分布差异均具有统计学意义;GSE23201数据集分析后共得到5740个有效拷贝数变异,其中精神分裂症组拷贝数变异区域覆盖到PLA2家族的有:PLA2G4A拷贝数缺失、PLA2G4B拷贝数重复、PLA2G6拷贝数缺失、PNPLA2拷贝数缺失和重复,对照组拷贝数变异区域覆盖到PNPLA2拷贝数缺失和重复。SRP000544数据集分析后得到14499个拷贝数变异区域,覆盖到PLA2家族的有PLA2G4A拷贝数缺失,PLA2G1B拷贝数重复、PNPLA2拷贝数重复。PLA2G4A基因拷贝数缺失与精神分裂症的关系在三组结果中得到相互印证;本研究的病例组人群PLA2G4A拷贝数缺失频率高于DGV数据库;两个全基因组数据集检出的拷贝数变异区域分别判定为“致病变异”和“可能致病变异”,因此选择PLA2G4A基因作为PLA2家族拷贝数变异关键基因。 2.扩大人群样本验证PLA2G4A基因拷贝数变异对404例精神分裂症患者和402例对照者基因组DNA样本使用q PCR法进行PLA2G4A基因拷贝数变异验证发现:精神分裂症患者携带PLA2G4A基因拷贝数缺失的比例明显高于对照者(OR=9.060,P<0.001),将发现阶段和验证阶段人群合并分析,结果一致(OR=8.981,P<0.001)。在两阶段合并人群中分析发现PLA2G4A拷贝数缺失与精神分裂症患者的钟

关键词：精神分裂症精神障碍流行病学拷贝数变异 PLA2G4A 神经细胞模型

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HCMV感染T98G的特性研究与潜伏感染模型建立

HCMV感染T98G的特性研究与潜伏感染模型建立

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作者：段莹亮中国科学院大学

学位级别：博士

人巨细胞病毒(Human cytomegalovirus，HCMV)属于疱疹病毒科β亚科，人群感染率高（HCMV抗体阳性率约50～90％），原发感染后即建立潜伏感染，终身携带病毒。HCMV感染在免疫力健全人群体内常处于潜伏状态，不产生疾病和无临床症状，但... 详细信息

人巨细胞病毒(Human cytomegalovirus，HCMV)属于疱疹病毒科β亚科，人群感染率高（HCMV抗体阳性率约50～90％），原发感染后即建立潜伏感染，终身携带病毒。HCMV感染在免疫力健全人群体内常处于潜伏状态，不产生疾病和无临床症状，但对于免疫功能尚未成熟的胎儿、免疫系统受损的AIDS病人、免疫力被人为抑制的器官移植病人，HCMV感染常威胁健康甚至危及生命。潜伏感染是巨细胞病毒的重要特性，但由于HCMV感染具有严格的种属特异性（即只感染人和人源组织/细胞），所以建立合适的人源细胞感染模型并深入研究其特性，将为阐明HCMV潜伏感染机制提供条件。\n 本实验室前期研究了神经类细胞系SY5Y、CCF、A172、T98G对HCMV感染的容许性，发现其中的胶质母细胞瘤细胞T98G是一种具有半容许性特征的细胞系，可作为HCMV潜伏感染模型的候选细胞。本研究主要目的是:在前期研究基础上，对T98G展开更全面的感染特性研究，并与目前公认的潜伏感染THP-1细胞模型进行比较;为进一步研究潜伏感染机制、HCMV与胶质母细胞瘤形成关系、HCMV（先天性）感染诊断与治疗等奠定基础。\n 免疫荧光（Immunofluorescence assay，IFA）是研究HCMV及其它病毒的重要方法之一。本研究首先建立了追踪HCMV感染过程与感染进度的经济快速的免疫荧光方法(f-IFA)。与传统方法相比，在保证染色质量的同时缩短染色时间(45 min)与节省抗体使用量（抗体用量可低至传统方法的1/60）。并应用该方法来监测HCMV感染中病毒基因表达。\n 本论文应用快速免疫荧光法、聚合酶链式反应、荧光原位杂交、蛋白质印迹等技术比较分析了HCMV感染的混合T98G细胞、经FACS纯化的抗原阳性（IE2+T98G）和抗原阴性(IE2-T98G)细胞群、HCMV感染的THP-1/d-THP-1细胞IE基因表达及病毒DNA水平，并通过检测病毒受体表达谱及T98G细胞培养上清中分泌性分子对病毒复制的作用，对HCMV在T98G细胞内的潜伏机制进行初步研究。结果发现:(1)T98G是一种方便培养且成本低的实验细胞系;(2)与公认的HCMV潜伏感染的单核细胞系THP-1相比，胞内的HCMV拷贝数更高，高拷贝数的HCMV基因组持续存在于细胞中，持续存留时间更长(至少持续至40 d);(3)T98G属于神经类细胞，不仅可用于HCMV潜伏感染机制研究还可用于研究HCMV感染与胶质瘤疾病的关系。对HCMV感染T98G后潜伏机制的初步研究表明，HCMV感染T98G后其主要立即早期启动子（MIEP）活性被抑制及进入潜伏周期的决定性因素在于细胞内在的分子机制，而与细胞表面的病毒受体谱及细胞分泌的因子无明显相关。因此，T98G可以作为HCMV潜伏感染神经细胞模型。

关键词：人巨细胞病毒潜伏感染神经细胞模型胶质母细胞瘤细胞免疫荧光

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MIT低频相位检测单元设计及检测

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第四军医大学学报 2008年第13期29卷 1216-1218页

作者：梁文文秦明新焦明克杨浩王文勇李克胡晓彦周伟第四军医大学生物医学工程系电子学教研室陕西西安710033 第四军医大学全军神经科学研究所陕西西安710033 第四军医大学病理学教研室陕西西安710033

目的：在脑磁感应成像系统中实现低频高精度相位检测功能.方法：设计了一个频率为200kHz的相位检测单元,包括可变增益放大器、窄带带通滤波器,并使用了射频锁定放大器SR844.结果：该检测单元的放大倍数为17.7～61.1dB,相位分辨率为0.02&... 详细信息

目的：在脑磁感应成像系统中实现低频高精度相位检测功能.方法：设计了一个频率为200kHz的相位检测单元,包括可变增益放大器、窄带带通滤波器,并使用了射频锁定放大器SR844.结果：该检测单元的放大倍数为17.7～61.1dB,相位分辨率为0.02°.对脑神经细胞模型进行了相位检测实验.结论：实验结果证明设计的相位检测单元能检测出正常神经细胞模型产生的相位差,为进一步的脑水肿检测打下了良好的基础.

关键词：非接触脑磁感应成像相位检测神经细胞模型锁定放大器

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诱导性多能干细胞技术在精神分裂症研究中的应用

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新乡医学院学报 2015年第7期32卷 596-598页

作者：樊晋宇任佩佩郭鑫鑫林俊堂冯志伟新乡医学院生命科学技术学院河南新乡453003

利用诱导性多能干细胞技术将体细胞诱导形成各种神经细胞,建立神经细胞模型及模拟神经的早期发育,是一种新兴的研究精神分裂症的有力工具。本文简要综述了近几年来该技术在精神分裂症研究中的最新进展,为体外分子细胞水平深入研究该病... 详细信息

利用诱导性多能干细胞技术将体细胞诱导形成各种神经细胞,建立神经细胞模型及模拟神经的早期发育,是一种新兴的研究精神分裂症的有力工具。本文简要综述了近几年来该技术在精神分裂症研究中的最新进展,为体外分子细胞水平深入研究该病的发病机制提供新的思路。

关键词：诱导性多能干细胞精神分裂症神经细胞模型

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单通道BMIT系统中相位差的理论计算与实际检测

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中国医学物理学杂志 2009年第2期26卷 1097-1101页

作者：李克秦明新周伟杨浩张辉焦腾李文哲焦明克第四军医大学生物医学工程系电子学教研室陕西西安710032 第四军医大学基础部陕西西安710032

目的:研究单通道脑磁感应成像系统中相位差的理论计算与实际检测的相关性,为系统的优化和实验改进提供理论依据。方法:单通道脑磁感应成像系统是基于高精度射频锁定放大器SR844建立的,该系统的工作频率为1MHz,包括一个激励线圈和一个检... 详细信息

目的:研究单通道脑磁感应成像系统中相位差的理论计算与实际检测的相关性,为系统的优化和实验改进提供理论依据。方法:单通道脑磁感应成像系统是基于高精度射频锁定放大器SR844建立的,该系统的工作频率为1MHz,包括一个激励线圈和一个检测线圈,被测目标置于两线圈之间以检测其相位差;针对该实验系统建立数学模型,推导被测目标靠近检测线圈时相位差计算公式;配制电导率为0S/m～2S/m的琼脂模型进行实验,对理论计算结果进行验证;并以培养的SD大鼠大脑皮质的神经细胞模型为检测对象进行实验。结果:检测结果与理论计算结果的趋势一致,相位差与被测目标的电导率和体积成正比。神经细胞模型引起的相位差为0.421°±0.018°;琼脂糖模型引起的相位差为0.382°±0.013°。结论:该系统能有效地检测出目标相位差,为进一步实现脑磁感应成像打下了良好的基础。

关键词：脑磁感应成像相位差电导率神经细胞模型

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人体诱导多能干细胞技术在精神分裂症研究中的应用现状与展望

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国际精神病学杂志 2020年第6期47卷 1092-1095,1098页

作者：徐书琦万瑾凌王学义王冉河北医科大学第一医院精神卫生中心河北医科大学精神卫生研究所河北省脑老化与认知神经科学实验室石家庄050031

诱导多能干细胞(iPSCs)技术作为现下的一个热门领域,提供了一种用以体外模拟神经系统发育过程的工具。本文中综述了应用精神分裂症(SCZ)患者来源iPSCs模型在精神分裂症领域中的研究进展,通过hiPSCs建立SCZ模型以期阐明这类复杂遗传性精... 详细信息

诱导多能干细胞(iPSCs)技术作为现下的一个热门领域,提供了一种用以体外模拟神经系统发育过程的工具。本文中综述了应用精神分裂症(SCZ)患者来源iPSCs模型在精神分裂症领域中的研究进展,通过hiPSCs建立SCZ模型以期阐明这类复杂遗传性精神疾病的发病机制,并提出i PSCs在诱导产生神经元方面的挑战及对未来研究前景的展望,以期实现疾病的早期干预及个体化治疗。

关键词：诱导多能干细胞精神分裂症神经细胞模型

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四氮唑类衍生物、制备、含其的药物组合物及其应用

四氮唑类衍生物、制备、含其的药物组合物及其应用

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作者：董晓武金一真庄宇昕车金鑫陈斌辉 310027 浙江省杭州市西湖区浙大路38号

本发明公开了一种四氮唑类衍生物，具有通式I所示的结构，其中，R1为H，C1‑C3的烷基链或卤代烷基链。本发明同时公开了含有上述四氮唑类衍生物的组合物以及其在制备预防和抗脑卒中中的应用。本发明发明人通过多次实验证实，本发明化合物... 详细信息

标准号: CN112457265A

本发明公开了一种四氮唑类衍生物，具有通式I所示的结构，其中，R₁为H，C₁‑C₃的烷基链或卤代烷基链。本发明同时公开了含有上述四氮唑类衍生物的组合物以及其在制备预防和抗脑卒中中的应用。本发明发明人通过多次实验证实，本发明化合物对ADP诱导的血小板聚集活性有明显抑制作用,对于OGD/R损伤的原代小鼠神经细胞模型有良好的保护作用以及良好的大鼠口服药代动力学性质。因此，本发明化合物可作为神经保护剂应用于治疗和预防脑卒中的药物中。

关键词：四氮唑类衍生物本发明化合物脑卒中血小板聚集活性神经细胞模型动力学性质卤代烷基链神经保护剂口服药烷基链通式I 大鼠小鼠制备预防应用损伤治疗

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