检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：侯昆东南大学

学位级别：博士

随着纳米银在生物医学领域的应用越来越广泛,纳米银的神经毒性已引起了极大的关注。已有的研究报道表明,纳米银对神经元的毒性,主要采取传统细胞生物学方法进行研究神经元细胞学特性的改变。然而,神经元不但具有普通细胞的细胞学特性,... 详细信息

随着纳米银在生物医学领域的应用越来越广泛,纳米银的神经毒性已引起了极大的关注。已有的研究报道表明,纳米银对神经元的毒性,主要采取传统细胞生物学方法进行研究神经元细胞学特性的改变。然而,神经元不但具有普通细胞的细胞学特性,还具有电生理特性,并且其功能的发挥高度依赖其电生理特性的变化。因此,在评价纳米银对神经元的毒性作用时,不仅要考虑细胞学特性的变化,研究纳米银对电生理特性的影响也至关重要。所以单独使用细胞实验评估生物材料对神经元的毒性作用是不全面的,在对神经元的相关研究中电生理学方法评估也是不可或缺的重要研究手段。只有把两者结合起来联合研究,才能深入理解纳米银对神经元毒性作用的机理。目前,尚未见纳米银对海马神经元网络电兴奋性影响的报道,更未见联合电生理与细胞学方法研究纳米银对海马神经元毒性的报道。本课题组已经进行了有关纳米银细胞毒性的一系列研究,并且采用电生理学方法研究了外界因素和药物等对神经网络电兴奋性的影响。本论文首先采用基于微电极阵列(Micro-Electrode Array,MEA)的电压阈值测定法(Voltage Threshold Measurement Method,VTMM)研究纳米银对海马神经元网络和大鼠海马脑切片电兴奋性的影响,并研究NMDA受体在纳米银对海马神经元网络电兴奋性影响中的作用及其机制。接着,研究纳米银对大鼠海马神经元ROS含量、ATP含量、细胞凋亡率和细胞突起长度等细胞/分子学水平指标的影响。最后,联合分析研究纳米银对大鼠海马神经元的细胞学和电生理特性的毒性作用,并探讨纳米银对神经元毒性的可能细胞分子学机理,从而加深人们对纳米银对中枢神经毒性作用的认识。本论文的具体内容如下: 1)采用硼氢化钠还原硝酸银的方法制备纳米银,采用透射电镜和分光光度计表征结果显示制备的纳米银粒径较为均一,无大规模团聚现象,粒径约20nm。从孕期18天的SD大鼠的胎鼠大脑海马提取了细胞,培养2周后对提取的细胞进行了鉴定。结果显示从海马区提取的细胞多数为神经元细胞。通过纳米银的细胞内摄取实验发现纳米银可以进入海马神经元中,这可能是产生神经毒性的原因。采用MTT法分析了不同浓度纳米银对海马神经元细胞活力的影响,分别选择了无细胞毒性的5μM和有细胞毒性的100μM两种浓度的纳米银对海马神经元的影响进行研究。 2)基于VTMM研究了无细胞毒性5μM和有细胞毒性100μM纳米银对海马神经元网络和海马脑切片电兴奋性的影响。结果表明,5μM纳米银对海马神经元网络4-72h是兴奋性的;而100μM纳米银作用海马神经元网络4-24h为兴奋作用,随着时间延长,其兴奋性逐渐减弱,48h开始具有抑制作用,并随着时间延长,抑制性逐渐增强。对比海马神经元和海马脑切片两种神经网络的电压阈值测试结果,研究发现5μM和100μM纳米银作用两种神经网络4h都表现为兴奋性作用。 3)为了探索NMDA受体在纳米银对海马神经元网络电兴奋性影响中的作用及其机制,首先采用VTMM方法研究了纳米银和NMDA拮抗剂MK-801共同作用后海马神经元网络的电兴奋性;接着研究了纳米银对海马神经元NMDA受体数量以及神经元内Ca2+含量的影响,并探讨其与神经元电兴奋性变化的关系。结果表明,NMDA受体在纳米银对神经元网络电兴奋性影响中发挥重要作用,NMDA受体的激活介导纳米银对海马神经元的毒性作用。 4)为了深入理解纳米银对神经元细胞毒性影响的机理,本论文研究了无细胞毒性5μM纳米银和有细胞毒性100μM纳米银对神经元ROS含量、ATP含量、细胞凋亡率和突起长度等细胞分子学指标的影响。结果表明,无细胞毒性浓度5μM纳米银会导致ROS含量轻度增加,但除此之外没有造成海马神经元其他细胞/分子水平指标显著变化。有细胞毒性浓度100μM纳米银导致的导致了 ROS含量升高、ATP含量降低、细胞凋亡和神经元突起长度缩短。 5)联合分析纳米银对海马神经元的细胞学特性与电生理特性的影响,探讨了纳米银对神经元的细胞毒性机制。结果表明:无细胞毒性5μM纳米银主要引起海马神经元网络的电兴奋性作用,会触发Ca2+与NMDA受体数量间的负反馈调节机制。随着毒性增加,有细胞毒性100μM纳米银短时间(4-24h)作用对神经元网络也起兴奋作用。但随着作用时间延长(48-72h),100μM纳米银对海马神经元的细胞毒性不断增强,导致Ca2+含量升高、ROS生成增加、细胞凋亡增加、ATP含量降低和细胞突起长度缩短,这最终导致电兴奋性持续下降。通过细胞分子指标的变化尝试解释了电兴奋性变化的细胞分子机理,在现有研究基础上进一步加深了对纳米银对中枢神经系统毒性作用机制的理解。

关键词：纳米银神经网络微电极阵列神经细胞毒性电压阈值法电兴奋性细胞毒性评价联合分析

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Na^(+)通道在锰神经细胞毒性中的作用

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海南医学 2024年第1期35卷 1-5页

作者：赵红艳王长勇阮雨晴赵安志欧超燕桂林医学院公共卫生学院广西桂林541199

目的初步探讨Na^(+)通道在锰神经细胞毒性中对γ-氨基丁酸(GABA)的作用。方法SH-SY5Y细胞建立锰暴露模型,并分为空白对照组、0.25 mmol/L MnCl_(2)、0.50 mmol/L MnCl_(2)、1.00 mmol/L MnCl_(2)。河豚毒素(tetrodotoxin,TTX)0.10μmol/L、0.20μmol/L进行干预,MTT法测其细胞存活率、光学显微镜进行形态学观察、蛋白质印迹法检测Na^(+)通道中Nav1.1通道蛋白和GABA的标记酶谷氨酸脱羧酶65(GAD65)蛋白的表达水平。结果MnCl_(2)可抑制细胞增殖,0.25 mmol/L MnCl_(2)、0.50 mmol/L MnCl_(2)、1.00 mmol/L MnCl_(2)均可显著降低细胞存活率,差异均具有统计学意义(P<0.05);TTX可改善锰暴露所致的神经元损伤,提高细胞存活率,差异具有统计学意义(P<0.05);锰暴露可上调神经元GAD65蛋白表达水平,差异具有统计学意义(P<0.05),但锰暴露未改变神经元细胞Nav1.1蛋白的表达水平,差异无统计学意义(P>0.05)。结论锰暴露所致神经元损伤及GABA能损伤可能与其Nav1.1蛋白表达无关。

关键词： Na^(+)通道锰神经细胞毒性 Nav1.1 γ-氨基丁酸

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食品接触包装材料粘合剂中BaP和PFOS的神经细胞毒性效应研究

食品接触包装材料粘合剂中BaP和PFOS的神经细胞毒性效应研究

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作者：贺晓蓉西安理工大学

学位级别：硕士

食品包装材料与食品安全密切相关,食品接触材料(Food Contact Materials,FCMs)粘合剂在加工生产过程中不可避免引入一些有害添加剂。迁移实验也表明,全氟和多氟烷基化合物(Perfluorinated Alkylated Substances,PFAS)和多环芳烃(Polycyc... 详细信息

食品包装材料与食品安全密切相关,食品接触材料(Food Contact Materials,FCMs)粘合剂在加工生产过程中不可避免引入一些有害添加剂。迁移实验也表明,全氟和多氟烷基化合物(Perfluorinated Alkylated Substances,PFAS)和多环芳烃(Polycyclic Aromatic Hydrocarbons,PAHs)暴露后具有潜在的神经毒性作用。我国尚未针对包装材料中上述物质建立最大残留限量。因此,急需开展针对FCMs粘合剂中有害添加剂的毒性效应研究,尤其是共同暴露下的联合毒性效应以及产生毒性的可能机制,为FCMs粘合剂中的有害添加剂限量标准的制定提供科学依据。本文选择苯并 a 芘(Benzoapyrene,BaP)、全氟辛烷磺酸(Perfluorooctane Sulfonates,PFOS)作为研究对象,基于大鼠神经胶质瘤细胞C6开展0.5-5 mg/L浓度范围内单独及联合染毒实验。染毒48 h后CCK-8(Cell Counting Kit-8)测定分析结果显示,BaP对C6细胞的毒性作用强于PFOS,半数效应浓度(EC50)值分别是1.88 mg/L、3.36 mg/L。在实验浓度范围内,单独及联合暴露对细胞活力的抑制效应呈现浓度依赖性,即随浓度的增大毒性效应也逐渐增强。其次,基于等效应浓度混合的方式进行联合暴露并探究毒性作用类型,拟合结果显示,较 CA(Concentration Addition)、IA(Independent Action)模型,CI(Combined Index)模型能够更好拟合BaP和PFOS对C6细胞的联合毒性效应。进一步通过CI模型计算,结果显示,在0.33-1.31 mg/L范围内BaP、PFOS联合暴露表现为协同作用,联合作用方式在联合效应为51.7%时由协同转为拮抗,并呈现随联合毒性效应降低协同效应逐渐增强的趋势。实际低剂量下BaP、PFOS二元联合暴露表现出不同于单一暴露的协同效应。基于Harmony高内涵和FlowSight流式细胞仪,分析BaP、PFOS单独及联合暴露下细胞内活性氧(ROS)含量,新DNA合成,细胞凋亡情况。与细胞活力实验结果相一致,BaP-PFOS联合暴露组引起胞内ROS上升量大于BaP、PFOS单独暴露组;联合暴露对细胞内新DNA合成阻滞作用显著强于单独暴露;联合暴露诱导细胞凋亡主要以早期凋亡为主,其诱导凋亡的能力强于单独暴露。上述实验结果表明,BaP-PFOS联合暴露在诱导氧化应激、DNA合成阻滞、促进细胞凋亡方面表现出更强的毒性作用。基于转录组学分析以1/4EC50的浓度单独及联合染毒C6细胞后基因表达的变化,以p值<0.05且|log2FC|≥1为条件筛选差异表达基因(DEGs)。GO富集分析发现,在BaP-PFOS联合暴露组中,富集度最高的主要有甾醇、胆固醇、类固醇等生物合成过程,富集的差异基因数目最多的条目都与膜有关。KEGG富集发现,联合染毒及BaP单独染毒后的差异基因主要与类固醇生物合成、萜类骨架生物合成、细胞色素P450对外源物质的代谢作用这3条通路显著相关。PFOS单独染毒后的差异基因主要与DNA复制通路显著相关,表明BaP、PFOS是以不同的毒性作用机制发挥毒性作用的。BaP-PFOS混合暴露与BaP、PFOS单独暴露的差异主要体现在富集差异基因数目最多的路径是代谢通路,表明BaP、PFOS联合毒性效应表现为协同作用与代谢通路密切相关,尤其是其中的类固醇激素生物合成通路。其中,Cyp1a1、Rnaseh2a等基因可以作为BaP、PFOS单独及联合暴露的潜在生物标志物。最终,基于逆转录实时荧光定量PCR技术验证了差异基因的准确性。BaP、PFOS单独及联合暴露均产生大量的ROS,一方面BaP单独和BaP-PFOS联合染毒通过显著上调Acat2、Hmgcs1、Mvd、Nsdh1、Dhcr7等基因调控增加胆固醇的合成和摄取,从而改变细胞中的脂质;通过上调Cyp1a1等基因促进稳定的DNA加合物生成,对细胞产生毒性效应;PFOS通过上调Rnaseh2a基因激活DNA复制。另一方面,细胞中脂质改变增加了氧化应激,加剧DNA损伤,导致C6细胞的新DNA合成受阻,修复机制作用不足,还触发了细胞凋亡的进程,导致细胞活力降低。细胞中增加的胆固醇能够促进类固醇激素的生物合成,激素代谢产物增多,影响激素及其代谢产物的传递进程,造成潜在致癌代谢物的积累,加剧C6神经细胞损伤,表现为增殖抑制的神经细胞毒性。本研究基于C6细胞开展了 FCMs粘合剂中BaP和PFOS的神经细胞毒性效应研究,获得了单独及联合染毒的浓度-效应关系曲线,联合暴露作用类型;明确了关键调控基因和路径;结合分子生物学技术、转录组学技术等多方面技术阐释了

关键词：食品包装材料神经细胞毒性转录组学 RT-qPCR C6

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夹脊电针联合甲基强的松龙对急性脊髓损伤大鼠神经细胞毒性相关蛋白影响的实验研究

夹脊电针联合甲基强的松龙对急性脊髓损伤大鼠神经细胞毒性相关蛋...

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2017世界针灸学术大会暨2017中国针灸学会年会

作者：孙忠人李晓宁付豪曾祥新吴磊迟蕾黑龙江中医药大学黑龙江中医药大学附属第二医院

目的:观察夹脊电针联合甲基强的松龙对急性脊髓损伤大鼠脊髓组织NMDA-NR1和cleaved caspase-3蛋白表达的影响。方法:选用健康雌性Wistar大鼠120只,均分为5组,分别为正常组(Normal组)、假手术组(Sham组)、急性脊髓损伤组(ASCl组)、急性... 详细信息

目的:观察夹脊电针联合甲基强的松龙对急性脊髓损伤大鼠脊髓组织NMDA-NR1和cleaved caspase-3蛋白表达的影响。方法:选用健康雌性Wistar大鼠120只,均分为5组,分别为正常组(Normal组)、假手术组(Sham组)、急性脊髓损伤组(ASCl组)、急性脊髓损伤+夹脊电针治疗+甲基强的松龙组(EA+MP组)及急性脊髓损伤+抑制剂组(MDL28170组),每组24只。每组又分别分为1d、3d、7d及14d四个亚组,每组6只。假手术组:仅暴露脊髓,不撞击损伤,手术后常规饲养;其余各组于模型成功后分别进行相应处置,选择BBB评分为1-3分的大鼠入组,手术大鼠单笼饲养。术后1d、3d、7d、14d采用BBB评分法观察大鼠运动功能;采用Weste rn blot法检测脊髓组织NMDA-NR1和cleaved caspase-3蛋白表达。结果:BBB评分结果显示,与正常组和假手术组比较膜型组在各时间点BBB评分显著降低(P<0.05);与模型组比较,术后3d开始,夹脊电针联合甲强龙组和抑制剂组BBB评分显著升高(P<0.05);与抑制剂组比较,术后14d,夹脊电针联合甲强龙组BBB评分显著升高(P<0.05)。Weste rn blot结果可知,与正常组和假手术组比较,模型组在各时间点NMDA-NR1和cleaved caspase-3蛋白表达均显著升高(P<0.05);与模型组比较,术后3d开始,夹脊电针联合甲强龙组和抑制剂组NMDANR1和cleaved caspase-3蛋白表达均显著降低(P<0.05);与抑制剂组比较,术后14d,夹脊电针联合甲强龙组NMDA-NR1和cleaved caspase-3蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论:夹脊电针治疗能够显著改善急性脊髓损伤模型大鼠肢体运动功能,其作用机制可能与下调脊髓组织NMDA-NR1和cleaved caspase-3蛋白表达有关。

关键词：针灸推拿学夹脊电针急性脊髓损伤甲基强的松龙神经细胞毒性

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辣椒素受体阻断剂对利多卡因导致的神经细胞毒性反应有保护作用

辣椒素受体阻断剂对利多卡因导致的神经细胞毒性反应有保护作用

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中国长江医学论坛——2015麻醉学年会暨江苏省第二十次麻醉学学术会议

作者：陈旭辉任全东南大学医学院东南大学附属中大医院

目的：探讨TRPV1受体拮抗剂Capsazepine对于利多卡因导致的背根神经节(DRG)神经元急性细胞毒性的保护作用.方法：①用显微解剖获取足够数量的大鼠乳鼠背根神经节,在体外进行培养及纯化处理,采用神经特异性烯醇酶免疫细胞化学染色法与DAP... 详细信息

目的：探讨TRPV1受体拮抗剂Capsazepine对于利多卡因导致的背根神经节(DRG)神经元急性细胞毒性的保护作用.方法：①用显微解剖获取足够数量的大鼠乳鼠背根神经节,在体外进行培养及纯化处理,采用神经特异性烯醇酶免疫细胞化学染色法与DAPI染核的方法鉴定并测定神经元的纯度;②利用CCK-8细胞毒性检测试剂盒测试Lidocaine对DRG的半数致死浓度(Lethal Concentration 50,LC50);③CCK-8试剂盒检测不同浓度的Capsazepine对LC50的Lidocaine所致DRG细胞死亡率的影响.结果：①获得的背根神经节神经元在体外生长良好,纯度可达91％;②Lidocaine对体外培养状态的DRG神经元LC50≈30mM;③10μM Capsazepine可显著降低LC50利多卡因所致的DRG神经元死亡率至35％,P＜ 0.05.结论：TRPV1受体阻断剂Capsazepine对于利多卡因导致的DRG神经元的急性细胞毒性有保护作用.

关键词：辣椒素受体利多卡因背根神经节细胞神经细胞毒性

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脂肪乳对布比卡因致原代培养海马神经元细胞毒性的影响

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宁夏医科大学学报 2020年第5期42卷 463-466,472页

作者：曹红丽摆志霞陈学新宁夏医科大学银川750004 宁夏医科大学总医院肿瘤医院麻醉科银川750004

目的研究脂肪乳对布比卡因致原代海马神经元细胞毒性作用的影响。方法选用原代培养第9天的SD大鼠海马神经元细胞,将细胞分为4组:空白对照组(Control组)不进行任何处理;布比卡因组(BPV组)加入1 mmol·L^-1布比卡因;脂肪乳剂组(LE组)... 详细信息

目的研究脂肪乳对布比卡因致原代海马神经元细胞毒性作用的影响。方法选用原代培养第9天的SD大鼠海马神经元细胞,将细胞分为4组:空白对照组(Control组)不进行任何处理;布比卡因组(BPV组)加入1 mmol·L^-1布比卡因;脂肪乳剂组(LE组)加入1%脂肪乳剂;布比卡因+脂肪乳剂组(BPV+LE组)加入1 mmol·L^-1布比卡因和1%脂肪乳剂。4组细胞均处理24 h后分别采用CCK-8法检测细胞活力和电生理膜片钳技术对各组细胞的动作电位进行检测分析。采用全细胞记录法分别对动作电位幅度、动作电位时程和动作电位幅度对应的峰值进行对比分析。结果与Control组比较,BPV组海马神经元细胞活力减弱(P<0.05)。与BPV组比较,LE组和BPV+LE组海马神经元细胞活力增强(P<0.05)。4组间细胞的动作电位幅度和动作电位幅度对应的峰值差异无统计学意义(P>0.05)。与Control组比较,BPV组细胞的动作电位时程增长(P<0.05)。与BPV组比较,BPV+LE组细胞的动作电位时程缩短(P<0.05)。结论脂肪乳剂可通过增加细胞活力和影响细胞动作电位的时程来减轻布比卡因引起的海马神经细胞毒性。

关键词：脂肪乳布比卡因神经细胞毒性细胞活力动作电位

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新精神活性物质4-甲基乙卡西酮在神经细胞中的毒性机制研究

新精神活性物质4-甲基乙卡西酮在神经细胞中的毒性机制研究

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作者：张微华东理工大学

学位级别：硕士

4-甲基乙卡西酮(4-MEC)属于卡西酮类新精神活性物质,长期滥用会造成神经细胞毒性。已有研究表明金属离子可能参与精神活性物质相关的调控网络,但是关于金属离子如何参与到4-MEC引起的神经细胞毒性机制的研究却鲜有报道。本论文首先通过C... 详细信息

4-甲基乙卡西酮(4-MEC)属于卡西酮类新精神活性物质,长期滥用会造成神经细胞毒性。已有研究表明金属离子可能参与精神活性物质相关的调控网络,但是关于金属离子如何参与到4-MEC引起的神经细胞毒性机制的研究却鲜有报道。本论文首先通过CCK-8检测发现4-MEC会引起人和小鼠神经类细胞SH-SY5Y和HT22的生长抑制。在此基础上,选择人源SH-SY5Y细胞为实验模型,通过荧光显微、流式和Western Blot技术发现4-MEC通过诱导细胞发生自噬和G0/G1期细胞周期阻滞来发挥生长抑制作用。接下来,我们开展了金属组学的研究,通过ICP-AES检测4-MEC对SH-SY5Y细胞中钾、钠、铁、钙、镁、锌和铝七种重要金属离子含量的影响,发现4-MEC处理后显著增加了细胞钙和镁的含量,Q-PCR和Western Blot技术检测了 4-MEC对钙和镁转运相关的基因/蛋白的表达水平的改变。Fluo-3流式检测进一步证实4-MEC处理增加了胞内钙离子水平。钙离子螯合剂EGTA可以减弱4-MEC引起的细胞毒性和胞内钙离子增高,缓解了 4-MEC诱导的细胞自噬和G0/G1周期阻滞,表明4-MEC通过引起钙离子增加造成细胞自噬和G0/G1周期阻滞来发挥细胞毒性。激光共聚焦技术发现4-MEC引起了胞内钙离子存储库线粒体和内质网中钙离子的超载,造成线粒体膜电位紊乱、活性氧增加和内质网应激。EGTA/N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)处理缓解了 4-MEC造成线粒体膜电位紊乱、活性氧增加和内质网应激,说明4-MEC处理增加的胞内钙离子造成了内质网应激和线粒体功能紊乱。NAC减弱了 4-MEC引起的内质网应激,说明4-MEC通过增加的胞内钙离子来诱导的活性氧增加是内质网应激的压力源,而内质网应激抑制剂4-苯基丁酸减弱了 4-MEC引起的自噬,说明内质网应激介导了自噬的发生,以上数据表明Ca2+-ROS-ER stress-Autophagy可能是4-MEC发挥毒性作用的模式之一。最后,利用蛋白质组学技术研究了 4-MEC对SH-SY5Y细胞中蛋白表达的影响,发现4-MEC处理后,8种蛋白表达量发生了明显改变,HSPA5、GAPDH和PGAM1表达量增加,ATP5A1、GSR、TALDO1、MED30和TIMM13的表达量减少。其中HSPA5与内质网应激相关,ATP5A1、MED30和TIMM13与线粒体功能相关,GSR和TALDO1与氧化应激相关,进一步证实了 4-MEC引起的上述神经细胞毒性作用模式。综上,4-MEC通过诱导细胞内钙离子水平升高介导G0/G1期阻滞和ROS-ER stress-Autophagy信号通路发挥神经细胞毒性作用;NAC可能是治疗4-MEC引起细胞毒性的潜在手段。本研究为卡西酮类新精神活性物质的毒性机制及干预提供了分子基础。

关键词： 4-甲基乙卡西酮神经细胞毒性钙离子周期阻滞自噬

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cGAS/STING信号通路介导固有免疫反应在PBDE-47致神经细胞损伤中的作用

cGAS/STING信号通路介导固有免疫反应在PBDE-47致神经细胞损伤中...

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作者：邱海霞华中科技大学

学位级别：硕士

多溴联苯醚(Polybrominated diphenyl ethers,PBDEs)是一类常见的溴系阻燃剂,近年来,PBDEs的神经毒性受到了社会的广泛关注,但其具体机制尚不清楚。研究发现,神经炎症与PBDEs的神经毒性密切相关,但目前大多聚焦于PBDEs对小胶质细胞的直... 详细信息

多溴联苯醚(Polybrominated diphenyl ethers,PBDEs)是一类常见的溴系阻燃剂,近年来,PBDEs的神经毒性受到了社会的广泛关注,但其具体机制尚不清楚。研究发现,神经炎症与PBDEs的神经毒性密切相关,但目前大多聚焦于PBDEs对小胶质细胞的直接影响,而神经细胞在其中扮演的角色尚不明确。环状GMP-AMP合成酶(Cyclic GMP-AMP synthase,cGAS)/干扰素基因刺激因子(Stimulator of interferon genes,STING)信号通路是近年来新发现的一种固有免疫反应通路,研究显示,神经细胞的固有免疫反应与神经炎症密切相关,但cGAS/STING信号通路介导的固有免疫反应是否与PBDEs的神经毒性有关,尚不清楚。目的:研究cGAS/STING信号通路介导的固有免疫反应在2,2',4,4'-四溴联苯醚(2,2',4,4'-tetrabromodiphenyl ether,PBDE-47)致神经细胞损伤中的作用。方法:(1)经前期细胞增殖-毒性检测试剂盒(Cell Counting Kit-8,CCK-8)筛选得到PBDE-47对PC12细胞的染毒剂量。采用20μmol/L PBDE-47处理PC12细胞24 h,提取RNA,进行转录组测序和数据分析。 (2)采用不同剂量PBDE-47(1μmol/L、10μmol/L、20μmol/L)处理PC12细胞24 h,利用Western blot技术检测cGAS/STING信号通路相关蛋白cGAS、STING、干扰素转录因子调节因子3(Interferon transcription factor regulator 3,IRF3)和磷酸化核因子κB(Phospho-nuclear factor kappa-B,p-NF-κB Ser 536)水平;采用实时定量聚合酶链式反应(Real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-q PCR)检测IRF3调控的I型干扰素反应相关细胞因子干扰素α4(Interferonα4,Ifnα4)、干扰素β(Interferonβ,IFNβ)、C-C基序趋化因子配体2(C-C motif chemokine ligand 2,Ccl2)和干扰素刺激基因15(Interferonstimulatedgene15,Isg15),以及NF-κB调控的促炎细胞因子肿瘤坏死因子α(Tumor necrosis factor alpha,TNF-α)、白介素1β(Interleukin-1β,IL-1β)和白介素6(Interleukin-6,IL-6)的mRNA水平。 (3)使用NF-κB抑制剂BAY11-7082处理细胞,以评价NF-κB在PBDE-47所致PC12细胞炎症反应中所发挥的作用。细胞分组为:对照组、PBDE-47处理组、PBDE-47+BAY11-7082联合处理组、BAY11-7082处理组。细胞处理24 h后,RTq PCR技术检测细胞TNF-α、IL-1β、IL-6的mRNA水平;CCK-8法检测细胞存活率的变化。 (4)使用STING抑制剂H-151处理细胞,以明确抑制STING信号对PC12细胞I型干扰素和炎症反应的影响。细胞分组为:对照组、PBDE-47处理组、PBDE-47+H-151联合处理组、H-151处理组。细胞处理24 h后,Western blot技术检测STING、IRF3和p-NF-κB Ser 536蛋白的水平;RT-q PCR技术检测Ifnα4、IFNβ、Ccl2、Isg15、TNF-α、IL-1β和IL-6的mRNA水平;CCK-8法检测细胞存活率变化。 (5)采用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)沉默cGAS(siRNA-cGAS)基因,siRNA阴性对照(siRNA-negative control,siRNA-NC)作为对照,以明确抑制cGAS/STING信号通路对PC12细胞I型干扰素和炎症反应的影响。细胞分组为:siRNA-NC空载组、PBDE-47+siRNA-NC处理组、PBDE-47+siRNA-cGAS处理组、siRNA-cGAS处理组。细胞处理24 h后,Western blot技术检测cGAS、STING、IRF3和p-NF-κB Ser 536蛋白的水平;RT-q PCR技术检测Ifnα4、IFNβ、Ccl2、Isg15、IRF3、TNF-α、IL-1β和IL-6的mRNA水平;CCK-8法检测细胞存活率的变化。结果:(1)转录组结果发现,与对照组相比,20μmol/L PBDE-47处理组细胞中与I型干扰素和固有免疫反应相关的基

关键词： 2,2',4,4'-四溴联苯醚神经细胞毒性 cGAS/STING信号通路固有免疫反应

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中药乳香中1个新的西松烷型二萜

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中国中药杂志 2021年第24期46卷 6417-6421页

作者：陈志超陈芳有黄伟明卞玉婷罗永明江西中医药大学药学院江西南昌330004

运用MCI、硅胶、ODS和Sephadex LH-20柱色谱以及制备型高效液相等方法,从乳香的醇提物中分离得到了5个化合物,通过波谱数据和文献数据对比分别鉴定为(1S,3R,4S,7R,11S,12R)-1:12,4:7-二环氧西松烷-8(19)-烯-3,11-二醇(1)、boscartin A(2... 详细信息

运用MCI、硅胶、ODS和Sephadex LH-20柱色谱以及制备型高效液相等方法,从乳香的醇提物中分离得到了5个化合物,通过波谱数据和文献数据对比分别鉴定为(1S,3R,4S,7R,11S,12R)-1:12,4:7-二环氧西松烷-8(19)-烯-3,11-二醇(1)、boscartin A(2)、(+)-松脂素(3)、(+)-5-hydroxy-3,4-dimethyl-5-pentylfuran-2(5H)-one(4)、acerogenin A(5)。其中化合物1为新化合物,化合物3~5为首次从乳香中分离得到,化合物1的结构通过波谱学分析和X-射线单晶衍射的方法确定。对化合物1和2进行了PC12神经细胞毒性实验,结果显示化合物1和2均是安全性比较好的化合物。

关键词：乳香化学成分西松烷型二萜神经细胞毒性

来源：评论

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TBBPA通过阻碍PINK1-Parkin介导的线粒体自噬导致HT22细胞毒性研究

TBBPA通过阻碍PINK1-Parkin介导的线粒体自噬导致HT22细胞毒性研究

引用

作者：要德智兰州大学

学位级别：硕士

四溴双酚A(TBBPA)是一种广泛应用于电子产品、汽车零部件、建筑材料等领域的溴化阻燃剂。在其生产和加工过程中,TBBPA会释放到环境中并逐渐积累。研究表明,TBBPA可引起细胞氧化应激和线粒体损伤,而线粒体的损伤可能会激活线粒体自噬的过... 详细信息

四溴双酚A(TBBPA)是一种广泛应用于电子产品、汽车零部件、建筑材料等领域的溴化阻燃剂。在其生产和加工过程中,TBBPA会释放到环境中并逐渐积累。研究表明,TBBPA可引起细胞氧化应激和线粒体损伤,而线粒体的损伤可能会激活线粒体自噬的过程,但TBBPA是否诱导线粒体自噬且线粒体自噬在TBBPA诱导的细胞毒性中的作用尚不清楚。目前已有研究证明TBBPA可以对小鼠海马神经元造成损伤,因此本研究选用小鼠海马神经元HT22细胞作为研究对象,采用实时定量PCR、免疫印迹、荧光染色和流式细胞术等方法与技术检测TBBPA对细胞及线粒体的损伤、线粒体自噬相关基因及蛋白的表达水平以及线粒体自噬过程等方面的影响,并探究线粒体自噬在TBBPA所致HT22细胞毒性中的作用。本论文的研究结果如下:***导致小鼠海马神经元HT22损伤。(1)20-80μM TBBPA处理HT22细胞24 h后可显著降低细胞活力(P<0.01),且细胞活力呈剂量依赖性降低。(2)随着TBBPA(0-80μM)处理浓度的提高,细胞质膨胀,细胞变圆,细胞间隙变大,并且可以观察到明显的凋亡小体,细胞核出现了明显的皱缩和聚集现象。(3)20-80μM TBBPA处理显著升高了细胞内ROS水平(P<0.01)。(4)60、80μM TBBPA处理显著升高了线粒体活性氧(mt ROS)水平(P<0.01)。(5)20μM TBBPA处理使线粒体膜电位(MMP)显著下降(P<0.05),40-80μM TBBPA处理使MMP极显著下降(P<0.01)。(6)随着TBBPA处理浓度的增加,细胞凋亡坏死比率逐渐增加,80μM处理组凋亡率比对照组升高了27.64%,坏死率升高了19.44%。***启动HT22细胞自噬,但阻碍了线粒体自噬。(1)TBBPA诱导了自噬体的形成和自噬标志蛋白LC3-II的增多。60和80μM TBBPA处理组LC3-II蛋白的表达水平显著上升(P<0.01);60μM TBBPA(24 h)联合50μM CCCP(2 h)处理组与CCCP、TBBPA分别单独处理组相比LC3-II蛋白的表达水平显著上升(P<0.05)。(2)TBBPA阻碍了线粒体与溶酶体的融合过程,并阻碍了线粒体与自噬体的融合过程。(3)TBBPA处理后,p62的水平升高,40μM TBBPA处理可以显著提高p62的水平(P<0.05),60μM和80μM TBBPA处理可以显著提高p62的水平(P<0.01);TBBPA和线粒体自噬促进化合物CCCP联合处理与CCCP单独处理相比,可以提高p62的水平(P<0.01)。此外,TBBPA导致了线粒体相关蛋白HSP60和COXⅣ水平的升高,其中80μM TBBPA处理可以极显著提高HSP60和COXⅣ的水平(P<0.01),60μM TBBPA处理可以显著提高HSP60的水平(P<0.05)。同样地,和CCCP单独处理组相比,CCCP与TBBPA联合处理可以使HSP60和COXⅣ水平升高。***通过下调PINK1蛋白的表达水平阻碍线粒体自噬。(1)自噬上游诱导剂Rapamycin不能提高线粒体与自噬体的融合,表明TBBPA造成的线粒体自噬障碍与自噬上游通路无关。(2)60和80μM的TBBPA处理显著降低了PINK1蛋白的表达水平(P<0.01),阳性对照化合物CCCP处理则显著提高了PINK1蛋白的表达水平(P<0.05),且TBBPA能够降低CCCP导致的PINK1表达水平上调。(3)TBBPA下调PINK1蛋白水平后,进一步阻碍了Parkin蛋白从胞浆招募至受损线粒体。(4)TBBPA不影响溶酶体与自噬体的融合过程。(5)TBBPA对溶酶体膜通透性无明显损伤。(6)TBBPA处理能升高溶酶体p H。***通过过表达ATF3蛋白导致PINK1蛋白表达水平的下调。(1)与对照组相比,TBBPA导致了Pink1基因转录水平显著下调(P<0.01)。相反,CCCP导致了Pink1基因转录水平显著上调,且TBBPA能降低CCCP导致的Pink1基因转录水平的上调(P<0.01)。同时,TBBPA导致了Atf3基因转录水平显著上调(P<0.01),而CCCP减少了TBBPA导致的Atf3基因转录水平的上升。(2)60和80μM的TBBPA处理显著提高了ATF3蛋白的表达水平(P<0.01)。CCCP降低了ATF3蛋白的表达水平,且TBBPA升高了CCCP减少的ATF3蛋白表达水平。***造成的HT22细胞毒性与线粒体自噬障碍密切相关。(1)与TBBPA单独处理组相比,β-NMN(PINK1-Parkin途径激动剂)与TBBPA联合处理后可以提高线粒体与溶酶体的融合程度。(2)与TBBPA单独处理组相比,β-NMN与

关键词：四溴双酚A HT22细胞线粒体自噬障碍 PINK1/Parkin途径神经细胞毒性

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