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中国人兽共患病杂志 2003年第6期19卷 29-31,41页

作者：孙素霞王红王勇向前吴爱军俞守义第一军医大学热卫系分子流行病学实验室广州510515

目的　构建福氏志贺氏菌毒力基因ipaC与质粒pET32a的重组质粒 ,转入大肠杆菌中表达 ,并检测表达产物的活性。方法　PCR扩增福氏志贺氏菌毒力质粒中ipaC基因 ,克隆到质粒 pET32aT7启动子下游 ,转化感受态大肠杆菌BL2 1(λDE3) ,IPTG诱导... 详细信息

目的　构建福氏志贺氏菌毒力基因ipaC与质粒pET32a的重组质粒 ,转入大肠杆菌中表达 ,并检测表达产物的活性。方法　PCR扩增福氏志贺氏菌毒力质粒中ipaC基因 ,克隆到质粒 pET32aT7启动子下游 ,转化感受态大肠杆菌BL2 1(λDE3) ,IPTG诱导表达 ,SDS -PAGE以及Western -Blot分析。结果　获得pET32a -ipaC重组表达质粒 ,SDS -PAGE以及Western -Blot显示重组质粒表达产物的分子量约为 6 3kDa,并具有一定的免疫活性。结论　福氏志贺氏菌毒力基因ipaC可在大肠杆菌中表达 ,且表达产物具有一定的免疫活性。

关键词：福氏志贺氏菌毒力基因 ipaC 大肠杆菌基因表达细菌性痢疾

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福氏志贺氏菌2a、3a型变异的研究

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解放军预防医学杂志 1990年第1期8卷 34-39页

作者：孙长柱冯培军涂贵兰济南军区后勤部军事医学研究所

本实验用紫外线诱变福氏志贺氏菌2a、3a型,使其发生了生化突变,耐药性突变和抗原性变异等现象。福氏2a菌对鼠李糖和蕈糖不发酵,经诱变后变为发酵株,对红霉素耐药变为敏感菌株。福氏3a菌株在各种糖培养基中可发生型抗原和群抗原丢失现象... 详细信息

本实验用紫外线诱变福氏志贺氏菌2a、3a型,使其发生了生化突变,耐药性突变和抗原性变异等现象。福氏2a菌对鼠李糖和蕈糖不发酵,经诱变后变为发酵株,对红霉素耐药变为敏感菌株。福氏3a菌株在各种糖培养基中可发生型抗原和群抗原丢失现象。诱变后的福氏2a-A_2菌在伊红美兰培养基上传代连续三次分化出福氏3a型菌。这种突变仅发生在极少数营养缺陷型菌株中。本实验选育出一株福氏3a-A_2 met^-(甲硫氨酸缺陷型)无毒株,免疫家免后的抗体血清效价比原始株高10倍,其免疫保护率为100％,此菌株可用于制作痢疾杆菌活菌苗。

关键词：福氏志贺氏菌变异痢疾治菌苗

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福氏志贺氏菌可溶性蛋白复合物研究

福氏志贺氏菌可溶性蛋白复合物研究

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作者：牛畅浙江大学

学位级别：博士

福氏志贺氏菌是最常见的引起细菌性痢疾的病原菌,它与大肠杆菌在基因组水平上有着高度的同源性和相似性,它们的区别主要在于毒力大质粒的有无。所以有观点认为,志贺氏菌是由大肠杆菌获得毒力大质粒进化而来的。同时,志贺氏菌也是一个质... 详细信息

福氏志贺氏菌是最常见的引起细菌性痢疾的病原菌,它与大肠杆菌在基因组水平上有着高度的同源性和相似性,它们的区别主要在于毒力大质粒的有无。所以有观点认为,志贺氏菌是由大肠杆菌获得毒力大质粒进化而来的。同时,志贺氏菌也是一个质粒毒力基因和染色体各类基因协同进化、相互适应的典型范例。由于一个蛋白并不是独立地完成某个生物学功能,而是要与其他蛋白结合并相互调节形成蛋白复合物来行使其功能,因此仅对单个蛋白进行定性和功能分析已不能满足我们从整体水平深入了解志贺氏菌的需求。于是,我们实验室首次开展了对志贺氏菌全菌可溶性蛋白复合物的研究,用BN/SDS-PAGE2-D电泳的方法共分离并鉴定到福氏2a型志贺氏菌2457T中的53个同源多聚体蛋白复合物和9个异源多聚体蛋白复合物。在这些同源多聚体蛋白复合物中,50个是已在大肠杆菌中报道过的,还有3个是以前未被报道过的。通过进一步研究希望能够揭示细胞生理状态的本质、对外界环境刺激的反应途径以及细胞调控的机理。在本研究中,我们比较了在37℃和30℃培养条件下福氏志贺氏菌蛋白复合物的表达情况,发现在不同的培养温度下3个蛋白复合物(PyrB/PyrI、GlmS和MglB)表达丰度的改变与细菌脂多糖(lipopolysaccharides, LPS)的合成有关。已有许多研究表明,LPS的合成对于福氏志贺氏菌毒力的发挥是必不可少的。同时,通过对比福氏志贺氏菌野生株与毒力大质粒缺失突变株以及大肠杆菌野生株与毒力大质粒导入突变株在蛋白复合物表达上的差异,我们发现福氏志贺氏菌毒力大质粒通过调控谷氨酸脱羧酶及ATP合成酶的表达,从而调节菌株的抗酸性。志贺氏菌作为肠道致病菌,要在胃酸和肠道内产生的不稳定的脂肪酸中生存,抗酸性是非常重要的表型,有研究认为强抗酸能力可能是志贺氏菌超低感染剂量的一个重要因素,而上述结果更为清晰地展示了志贺氏菌在进化过程中形成的独特的抗酸机制。综上所述,福氏志贺氏菌可溶性蛋白复合物表达谱的构建,扩展了对福氏志贺氏菌生理学特性的了解;不同培养温度下蛋白复合物表达变化的结果,为全面深入分析志贺氏菌致病的分子机制提供了极其重要的线索。此外目前已经明确,除了毒力大质粒上的核心毒力基因编码区外,许多染色体上的基因也参与了志贺氏菌的致病过程。因此,要更好地研究志贺氏菌的致病机理,还需要阐明毒力大质粒与致病菌基因组(染色体)之间的调控关系。本文构建缺失毒力大质粒突变株、大肠杆菌毒力大质粒导入突变株与野生株进行对比的研究设计开辟了筛选毒力相关蛋白的新思路;复合物研究中所采用的技术改进以及获得的宝贵经验也为深入开展蛋白质复合物研究奠定了坚实的基础。

关键词：福氏志贺氏菌蛋白复合物 BN-PAGE LPS合成谷氨酸脱羧酶 ATP合成酶抗酸性

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福氏志贺氏菌(shigella flexneri)O抗原多糖(O-PS)的提取及其致病性的研究

福氏志贺氏菌(shigella flexneri)O抗原多糖(O-PS)的提取及其致病...

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作者：钟启平天津大学

学位级别：硕士

志贺氏菌外膜的脂多糖(LPS)在致病和诱导免疫保护中都起了重要作用.为探讨LPS分子外侧O抗原多糖(O-PS)的特异性致病作用,该实验初步建立了酶解--凝胶色谱分离程序及254nm波长监测方法,提取和纯化福氏志贺氏菌5型M90T的LPS和O抗原多糖,... 详细信息

志贺氏菌外膜的脂多糖(LPS)在致病和诱导免疫保护中都起了重要作用.为探讨LPS分子外侧O抗原多糖(O-PS)的特异性致病作用,该实验初步建立了酶解--凝胶色谱分离程序及254nm波长监测方法,提取和纯化福氏志贺氏菌5型M90T的LPS和O抗原多糖,并利用电泳、紫外/可见光扫描、红外光扫描等手段对提取物质进行分析,获得纯化LPS及抗原多糖长链分子.通过体外和体内实验,发现M90T的O抗原多糖单独对HeLa细胞有毒性作用,对兔回肠袢粘膜有致炎和肠腔积液作用,而Re核心糖脂(ReLPS)不能引起积液.提示O抗原多糖可能是造成腹的特异性因素之一,而不同于LPS的内毒素反应.O抗原多糖与牛血清白蛋白(BSA)交联,可增强多糖对家兔的免疫原性,可产生较高滴度抗O抗原多糖抗体(O-PSAb).此抗体在HeLa细胞侵袭实验中的保护效果与抗脂多糖抗体(LPSAb)和抗M90T全菌抗体(M90TAb)的保护效果,统计学分析无显著差异.

关键词：福氏志贺氏菌脂多糖 O抗原多糖致病作用

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福氏志贺氏菌2a 301株效应蛋白IpaH9.8功能研究

福氏志贺氏菌2a 301株效应蛋白IpaH9.8功能研究

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作者：赵江丽吉林大学

学位级别：硕士

志贺氏菌属(Shigella spp.)又称为痢疾杆菌,是一类不形成芽孢的革兰氏阴性致病菌,临床上可引起细菌性痢疾。志贺氏菌属共有四个种48个血清型,包括痢疾志贺氏菌(Shigella dysenteriae)、福氏志贺氏菌(Shigella flexneri)、宋内氏志贺氏菌... 详细信息

志贺氏菌属(Shigella spp.)又称为痢疾杆菌,是一类不形成芽孢的革兰氏阴性致病菌,临床上可引起细菌性痢疾。志贺氏菌属共有四个种48个血清型,包括痢疾志贺氏菌(Shigella dysenteriae)、福氏志贺氏菌(Shigella flexneri)、宋内氏志贺氏菌(Shigella sonnei)和鲍氏志贺氏菌(Shigella boydii)。世界各地都有菌痢流行,全球每年的发病人数达到1.6亿,其中95%以上的死亡病例发生在发展中国家,我国每年菌痢的发病人数在40万以上,仅次于肝炎和结核。其中,福氏志贺氏菌是发展中国家尤其是我国引起细菌性痢疾的主要志贺氏菌种。细菌性痢疾在卫生条件较好的发达国家也时有爆发,在战时和有自然灾害的情况下发病率更高,严重影响作战部队的战斗力,也会对灾难救援工作产生极大不利影响。痢疾虽有药物治疗,但易转为慢性或长期带菌,且抗药性日趋严重。目前痢疾的治疗主要是依靠抗生素,然而耐药和多重耐药菌株的不断出现,增加了痢疾防治的难度,因此开展对志贺氏菌的遗传机制和致病机理研究,对开发研制有效的疫苗和新药具有重要价值。志贺氏菌感染人的肠道引起细菌性痢疾,其致病性依赖于Ⅲ型分泌系统(T3SS)。志贺氏菌与宿主上皮细胞接触后,激活Ⅲ型分泌系统,将毒力蛋白直接注入宿主细胞内,这些蛋白可影响细胞的功能,如使细胞皱膜、改变肌动蛋白骨架、激活宿主细胞信号通路、诱导巨噬细胞凋亡等。Ⅲ型分泌系统分泌的蛋白往往可使细菌在宿主细胞内存活又不过分伤及宿主,由此可见细菌与宿主在进化的过程中,细菌致病机制和宿主细胞存活之间具有一定的协调性。目前对志贺氏菌Ⅲ型分泌系统(T3SS)及效应子蛋白功能的研究已成为其致病性研究的热点。志贺氏菌的IpaH家族蛋白作为Ⅲ型分泌系统的效应子,其基因存在于染色体和毒力大质粒上。在福氏2a301株的毒力大质粒上存在5个ipaH基因的拷贝,分别是ipaH1.4、ipaH2.5、ipaH4.5、ipaH7.8、ipaH9.8。研究发现,IpaH9.8能下调宿主细胞内前炎性因子的表达,在志贺氏菌感染时明显抑制炎症反应,但目前其详细的功能及在志贺氏菌中的作用还不清楚。基因敲除是功能基因组学研究中的一个重要技术平台,也是病原微生物致病机理研究中必不可少的手段之一。在本研究中,我们利用λ-Red重组技术将福氏2a301株ipaH9.8基因敲除,然后分析突变株与野生株之间的表型与功能差异,获得与该基因功能相关的一些信息,从而达到阐述该蛋白功能的目的。首先将九噬菌体Red重组系统稍加改进,成功地敲除了志贺氏菌福氏2a301株的ipaH9.8基因,并利用低拷贝质粒构建了回复株,并分别用PCR和RT-PCR进行了验证；然后进一步测定野生株、缺失突变株和回复株生长曲线、生化反应,细胞侵袭实验、豚鼠角膜结膜感染实验、细胞因子检测和小鼠肺感染实验对野生株、缺失突变株和回复株的毒力表型进行比较分析。结果表明：野生株、缺失突变株和回复株的生长曲线基本一致,缺失突变株与野生株的生理生化反应没有明显差异,说明IpaH9.8对志贺氏菌的生长和基本生化代谢无影响。野生株、缺失突变株和回复株均能够侵袭进入Hela细胞和鼠巨噬细胞J774.A.1,使细胞核破裂,造成细胞死亡：细菌侵袭细胞后涂板计数,野生株、缺失突变株与回复株侵袭进入Hela细胞和J774.A.1细胞内的细菌数量无显著性差异,表明野生株、缺失突变株和回复株对Hela细胞和巨噬细胞的侵袭性没有明显区别,说明缺失ipaH9.8基因对志贺氏菌的侵袭能力影响不大。野生株、缺失突变株与回复株均能够引起豚鼠角膜结膜炎症反应,但缺失突变株的炎症反应更加强烈,推测IpaH9.8可能抑制宿主的炎症应答；因此,我们利用ELISA方法检测细菌侵袭细胞后的培养上清中细胞因子TNF-a和IL-1β的分泌情况,结果表明,与缺失突变株相比,野生株和回复株感染鼠巨噬细胞J774.A.1后明显抑制细胞产生TNF-a和IL-1β的能力；通过小鼠肺感染模型进一步证实了IpaH9.8能够抑制宿主的炎症反应。我们利用双向电泳和质谱技术对野生株、缺失突变株和回复株进行了全菌体蛋白的比较蛋白组学研究。在蛋白质组的比较分析中我们发现,共鉴定出43个蛋白点,对应23种蛋白质,与野生株和回复株相比,缺失突变株表达上调的蛋白为10个,表达下调的有15个,并且有1个蛋白对发生了位置的迁移。其中应激蛋白DnaK和GroEL表达下调,蛋白解聚分子伴侣的表达增加。最显著的差异是ipaH9.8基因的缺失引起了很多外膜蛋白的表达变化,包括NmpC、OmpF、OmpA、OmpA前体、OmpMxiD等,这些蛋白的变化都表明了IpaH9.8在一定程度上影响着志贺氏菌的侵袭能力和宿主的免疫反应。此外,还发现Ipa

关键词：福氏志贺氏菌 IpaH9.8 基因敲除双间电泳磷酸化

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福氏志贺氏菌噬菌体CT01和CT02生物学特性及初步应用探究

福氏志贺氏菌噬菌体CT01和CT02生物学特性及初步应用探究

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作者：许翠婷吉林大学

学位级别：硕士

志贺氏菌是人类细菌性痢疾的病原菌,福氏志贺氏菌是发展中国家的主要流行血清型,与其他志贺氏菌相比其死亡率更高。志贺氏菌的污染常见于奶制品、鸡肉、水果和面包等食物的污染,其已被列为重点病原菌行列。传统食品灭菌剂已经不能满足... 详细信息

志贺氏菌是人类细菌性痢疾的病原菌,福氏志贺氏菌是发展中国家的主要流行血清型,与其他志贺氏菌相比其死亡率更高。志贺氏菌的污染常见于奶制品、鸡肉、水果和面包等食物的污染,其已被列为重点病原菌行列。传统食品灭菌剂已经不能满足日趋严重的食品安全问题,噬菌体作为安全、有效的杀菌剂正逐渐被接受。本研究以福氏志贺氏菌为宿主菌,从污水中分离出两株裂性噬菌体,分别命名为CT01和CT02。两株噬菌体裂解性强、宿主谱窄、爆发量高、稳定性好。两株噬菌体的透射电镜结果显示它们形态有着差异:噬菌体CT01头部为大且细长的二十面体,可收缩尾,尾部末端呈六边形基板,其上连接长的尾纤维。噬菌体CT02为短尾,具有短尾噬菌体形态。噬菌体CT01和CT02的最佳感染复数为0.001和0.1。噬菌体CT01潜伏期30min,从第30min开始进入裂解期,直至第70分钟后进入平稳期,平均爆发量为82PFU/cell;噬菌体CT02潜伏期15min,裂解期25min,第40min进入平稳期,平均爆发量为165PFU/cell。两株噬菌体对低温不敏感,可在常温下保存,对高温敏感,分别在70℃和80℃失去活性。噬菌体CT01对酸碱的耐性更好,在p H2-12范围内仍有活性,而噬菌体CT02在p H12时已失活。噬菌体CT01和CT02测序后的基因组信息上传至Genbank,登录号分别为OK018184,OP917825。噬菌体CT01为线性双链DNA,168362bp,273个ORF被预测,含有17个t RNA;噬菌体CT02为环状DNA,38876bp,47个ORF被预测,不含t RNA。将两株噬菌体分别进行聚类分析,基因组进化树结果表明噬菌体CT01为Straboviridae科,Tevenvirinae亚科Tequatrovirus属的成员。比较基因组学分析显示噬菌体CT01与其他Tequatrovirus属成员的平均核苷酸同一性>80%。噬菌体CT02为Autographiviridae科Teetrevirus属成员。比较基因组学分析显示噬菌体CT02与其他Teetrevirus属成员的平均核苷酸同一性>80%,<95%,强烈表明噬菌体CT02可能为该属新成员。本研究建立了单一噬菌体对污染鸡胸肉杀菌效果模型,鸡尾酒噬菌体对污染鸡胸肉的处理实验模型以及鸡尾酒噬菌体在鸡胸肉中对福氏志贺氏菌的预防实验模型。结果显示:在单一噬菌体对污染福氏志贺氏菌鸡胸肉的杀菌实验中,噬菌体CT01和噬菌体CT02都表现出较好的杀菌效果;在鸡尾酒噬菌体在鸡胸肉中对福氏志贺氏菌的处理实验中,鸡尾酒噬菌体可以很好地降低福氏志贺氏菌的数量,且对熟鸡胸肉的杀菌效果优于生鸡胸肉;在鸡尾酒噬菌体在鸡胸肉中对福氏志贺氏菌的预防实验中,鸡尾酒噬菌体对福氏志贺氏菌起到了抑制作用,且在熟鸡胸肉中的抑制效果更明显。综上,两株噬菌体CT01和CT02在控制及预防食品中福氏志贺氏菌污染的应用中具有一定的潜力。

关键词：福氏志贺氏菌噬菌体生物学特性基因组分析鸡尾酒法

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药物对福氏志贺氏菌代谢抑制的微量热法研究

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物理化学学报 1995年第1期11卷 79-82页

作者：张洪林刘永军南照东孙海涛徐丽君单庆祝孙秀芳曲阜师范大学化学系山东曲阜273165 山东医科大学药学系 250012 曲阜市卫生防疫站 273100

Bacterial growth thermograms of fungistatic action using a thermal activity monitor have been determined. The growth rate constants at different concentration drugs and the critical growth concentrations of the drug h... 详细信息

关键词：细菌生长福氏志贺氏菌药物抑制微量量热法

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一次性酶免疫传感电极快速检测福氏志贺氏菌的研究

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传感技术学报 2009年第9期22卷 1221-1226页

作者：赵广英詹学佳浙江工商大学食品与生物工程学院浙江省食品安全重点实验室杭州310035

为研究快速检测福氏志贺氏菌的电化学免疫传感电极,将羧基化多壁碳纳米管(MWCNT)与壳聚糖(chitosan)制备成复合物,应用此复合物将辣根过氧化物酶标记的福氏志贺氏菌抗体(***)一步直接固定在四通道丝网印刷碳电极表面,制成快速检测福氏... 详细信息

为研究快速检测福氏志贺氏菌的电化学免疫传感电极,将羧基化多壁碳纳米管(MWCNT)与壳聚糖(chitosan)制备成复合物,应用此复合物将辣根过氧化物酶标记的福氏志贺氏菌抗体(***)一步直接固定在四通道丝网印刷碳电极表面,制成快速检测福氏志贺氏菌的酶免疫传感电极。采用原子力显微镜表征不同修饰电极的表面形态,循环伏安法考察不同电极的电化学特性和监测酶促反应,利用还原峰峰电流的减小来测定福氏志贺氏菌。在优化的测定条件下,免疫电极对福氏志贺氏菌的检测范围为104～1010cfu/mL,检出限为2.3×104cfu/mL(S/N=3)。而且该酶免疫传感电极具有较好的特异性、重现性、稳定性和准确性,该方法还具有快速、简便、易于操作和价格低廉等优点,具有用于福氏志贺氏菌快速筛检的潜力。

关键词：电化学免疫传感电极多壁碳纳米管/壳聚糖复合物循环伏安法福氏志贺氏菌检测

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福氏志贺氏菌蛋白质组SILAC技术的探讨

福氏志贺氏菌蛋白质组SILAC技术的探讨

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作者：李月玥华中农业大学

学位级别：硕士

志贺氏菌（Shigella spp.）是一类无鞭毛，不形成芽胞的革兰氏阴性杆菌，为人类细菌性痢疾的主要病原体。在发展中国家，60%的细菌性痢疾病例是由福氏志贺氏菌（Shigella flexneri）感染所引起的。\n 细胞培养氨基酸稳定同位素标记（... 详细信息

志贺氏菌（Shigella spp.）是一类无鞭毛，不形成芽胞的革兰氏阴性杆菌，为人类细菌性痢疾的主要病原体。在发展中国家，60%的细菌性痢疾病例是由福氏志贺氏菌（Shigella flexneri）感染所引起的。\n 细胞培养氨基酸稳定同位素标记（stable isotope labeling with amino acids in cell culture，SILAC）技术是以质谱为基础，使用轻型（12C、14N和1H）或重型（13C、15N和2H）稳定同位素对不同状态的细胞进行体内标记，从而比较不同样品中蛋白质丰度的一门技术。采用SILAC技术进行比较蛋白质组学研究时，所需的样品量少，不受蛋白性质限制，操作简单，结果精确，重复性好。目前，SILAC技术已经广泛应用于多种生物的相关研究，但对志贺氏菌的研究还未见报道。\n 如果以含有不同稳定同位素的赖氨酸为标记，采用SILAC技术对野生型福氏志贺氏菌进行研究，其自身合成的赖氨酸会对实验结果造成严重影响。为了更好地解决这个问题，本研究构建一株与福氏志贺氏菌野生型菌株其他表型差异不明显的赖氨酸营养缺陷型突变株。由于该突变株的全菌蛋白能够被含有稳定同位素的赖氨酸完全标记，这就为SILAC技术应用于福氏志贺氏菌蛋白质组学分析提供了可能。具体研究结果如下：\n 1.福氏志贺氏菌赖氨酸营养缺陷型菌株的构建\n 已有研究表明，lysA基因编码的二氨基庚二酸脱羧酶催化福氏志贺氏菌赖氨酸生物合成中的最后一步反应。以褔氏2a志贺氏菌301株（Shigella flexneri2a str.301）为出发菌株，卡那霉素抗性为筛选标记，采用λ-Red重组系统，成功构建了lysA基因缺失突变株（301ΔlysA）。根据在不同培养基中301ΔlysA的生长情况，说明该菌株为赖氨酸营养缺陷型菌株。\n 2.突变株与野生株的表型及蛋白表达谱的比较\n 对301ΔlysA突变株和301野生株在不同培养基中的生长曲线进行比较，发现在含有L-赖氨酸的培养基中，两者的生长状态基本一致；生化鉴定试剂条的检测结果表明两者对糖类的利用能力差别不大；豚鼠角膜实验的结果显示突变株与野生株侵袭上皮细胞的能力无明显区别。然而，对突变株和野生株进行比较蛋白质组学研究时发现，有6种蛋白的表达量发生变化，其中3种蛋白（HisD、IlvE和ThrB）与氨基酸代谢有关。由此说明，lysA基因的缺失阻止福氏志贺氏菌赖氨酸的合成，并且可能在一定程度上影响其他氨基酸的代谢。\n 3.福氏志贺氏菌蛋白质组SILAC技术的初步建立\n 将301ΔlysA突变株分别在含有12C6 L-赖氨酸和13C6 L-赖氨酸标记的培养基中进行培养，制备全菌蛋白并进行双向电泳（two-dimensional electrophoresis，2-DE）。从胶图中截取对应位置上的蛋白点，对其进行胰酶酶切及质谱鉴定。从一级质谱图中可以看出，在对应蛋白中，多数肽段的质谱峰呈现6 Da的位置差。串联质谱结果显示所取对应蛋白点为同种蛋白，并且分别只含有12C6 L-赖氨酸或13C6 L-赖氨酸，说明带有稳定同位素标记的赖氨酸能够完全掺入到301ΔlysA新合成的蛋白质中。因此，推测福氏志贺氏菌lysA基因缺失突变株适合进行SILAC分析。\n HtrA（high temperature requirement A），又称周质丝氨酸蛋白酶Do（periplasmic serine endoprotease Do，DegP），是细菌在高温环境中生存所必需的热休克蛋白，具有丝氨酸蛋白酶和分子伴侣活性。为了探索福氏志贺氏菌HtrA蛋白的功能，本研究采用λ-Red重组系统构建福氏5a志贺氏菌M90T株（Shigella flexneri5a str. M90T） htrA基因缺失突变株。豚鼠角膜实验结果表明，htrA基因的缺失导致福氏志贺氏菌丧失了侵袭宿主细胞的能力。对突变株与野生株在30oC和37oC培养条件下的全菌蛋白表达谱进行比较分析，共鉴定到23种表达量有差异的蛋白。这些蛋白与物质的转运与代谢，能量的合成与转换，遗传信息的正确传递，维持细菌生存以及细菌致病力有关。以上结果则为福氏志贺氏菌HtrA蛋白功能的进一步研究提供依据。

关键词：福氏志贺氏菌赖氨酸营养缺陷型突变株双向电泳蛋白质组细菌性痢疾

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一株福氏志贺氏菌噬菌体的分离鉴定及其生物学特性

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微生物学通报 2021年第9期48卷 3165-3175页

作者：何秀邓征宇王峰张棋麟林连兵邓先余昆明理工大学生命科学与技术学院云南昆明650500 云南省高校饲用抗生素替代技术工程研究中心云南昆明650500

【背景】志贺氏菌是一类能引起人和动物腹泻的致病菌,由于抗生素滥用导致其耐药问题日益严重,寻找新的抗菌药物和治疗方法成为目前亟待解决的问题。【目的】检测志贺氏菌对肉鸡的致病性,分离纯化出一株可裂解强致病性志贺氏菌的噬菌体,... 详细信息

【背景】志贺氏菌是一类能引起人和动物腹泻的致病菌,由于抗生素滥用导致其耐药问题日益严重,寻找新的抗菌药物和治疗方法成为目前亟待解决的问题。【目的】检测志贺氏菌对肉鸡的致病性,分离纯化出一株可裂解强致病性志贺氏菌的噬菌体,并对其生物学特性进行研究。【方法】从病鸡肠道黏膜分离志贺氏菌;以健康肉鸡为动物模型进行攻毒,测定强致病性菌株的耐药性;并以此为宿主菌分离噬菌体,聚乙二醇(Polyethylene Glycol,PEG)沉淀法纯化浓缩噬菌体后,用透射电子显微镜观察其形态特征。利用双层平板法测定噬菌体的宿主谱、最佳感染复数、一步生长曲线、pH和热稳定性对噬菌体活性的影响。【结果】分离得到26株志贺氏菌,分别命名为BDS1-BDS26,其中BDS8致病性最强,经鉴定属于福氏志贺氏菌,而且存在多重耐药性,灌喂后的肉鸡出现严重腹泻和血便;解剖病症主要表现为心脏肥大、肠系膜出血明显等。以BDS8为宿主菌,分离得到噬菌体ΦDS8。透射电镜结果显示噬菌体ΦDS8的头部呈二十面体形状,直径61±2 nm,尾长165±2 nm,属长尾噬菌体科。噬菌体ΦDS8在pH 4.0-10.0、50℃以下范围内能保持较高活性,感染周期约为120 min,其中包括75 min的潜伏期和45 min的暴发期,暴发量为52 PFU/cell。【结论】噬菌体ΦDS8具有宿主特异性,在常规环境下具有较好的耐受能力,为噬菌体治疗福氏志贺氏菌病提供理论依据。

关键词：福氏志贺氏菌噬菌体分离鉴定生物学特性

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