检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医学报 2025年第3期45卷 619-626页

作者：李阳樊爱丽陈吉林董丽娜左宗辉马淑慧徐刚天津农学院、动物科学与动物医学学院、天津市农业动物繁育与健康养殖重点实验室天津300392 恒诺优(天津)生物技术有限公司天津301600

禽传染性支气管炎(infectious bronchitis,IB)是由禽传染性支气管炎病毒(infectious bronchitis virus,IBV)引起鸡的一种急性、高度接触性传染病,IBV变异程度高,现有的免疫手段常无法达到良好的效果,严重影响国内养禽业的发展。通过对IB... 详细信息

禽传染性支气管炎(infectious bronchitis,IB)是由禽传染性支气管炎病毒(infectious bronchitis virus,IBV)引起鸡的一种急性、高度接触性传染病,IBV变异程度高,现有的免疫手段常无法达到良好的效果,严重影响国内养禽业的发展。通过对IBV的非特异性免疫、黏膜免疫以及特异性免疫等3个方面现阶段免疫应答分子机制的综述,以期为IBV免疫机制的研究提供理论参考。

关键词：禽传染性支气管炎病毒免疫应答分子机制

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PI4KB蛋白的多克隆抗体制备及其对禽传染性支气管炎病毒复制的影响

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基因组学与应用生物学 2025年第3期 268-280页

作者：张桃妮张愉晋英浩陈胜婷董轩铭刘玲李杰宁磨美兰广西大学动物科学技术学院广西壮族自治区兽用生物制品工程研究中心广西畜禽繁育与疾病防控重点实验室

许多正链RNA病毒通过劫持宿主细胞的磷脂酰肌醇4-激酶β(phosphatidylinositol 4-kinase beta, PI4KB)来富集磷脂酰肌醇4-磷酸(phosphatidylinositol-4 phosphate, PI4P),进而促进病毒的复制。为探究PI4KB是否影响禽传染性支气管炎病毒(infectious bronchitis virus, IBV)的复制，本研究首次制备针对鸡源PI4KB蛋白的兔多克隆抗体，并通过间接ELISA和Western blot对获得的多克隆抗体进行鉴定；在此基础上，进一步过表达和干扰表达PIKB蛋白，以探究其对IBV复制的影响。结果显示，选择鸡源PI4KB蛋白第473～826位氨基酸作为原核表达序列，成功构建了原核表达质粒pCzn-1-PI4KB,表达出PI4KB蛋白并制备了多克隆抗体，ELISA结果显示制备的PI4KB兔多克隆抗体效价为1∶51 200, Western blot结果验证其具有良好的反应性和特异性，可用于细胞层面研究PI4KB对IBV复制的作用；将包含PI4KB功能结构域的编码区(coding sequence, CDS)作为真核表达序列，成功构建了真核表达质粒pVax-mCherry-PI4KB,并在BHK-21细胞中成功过表达PI4KB蛋白；相较于感染组和空载体感染组，过表达PI4KB后，IBV病毒载量、 N蛋白表达水平以及病毒滴度均显著提高(P<0.05);反之，干扰表达PI4KB后，IBV病毒载量、 N蛋白表达水平以及病毒滴度均显著降低。这表明过表达PI4KB能显著促进IBV的复制，而干扰表达PI4KB则能显著抑制IBV的复制。本研究为深入理解PI4KB的生物学功能以及探究IBV感染和致病新机制奠定了基础，同时为寻找IBV新的抗病毒药物靶点提供了理论依据以及新思路。

关键词：禽传染性支气管炎病毒 PI4KB 多克隆抗体

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禽传染性支气管炎病毒S1基因植物表达载体的构建

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浙江大学学报（农业与生命科学版） 2001年第3期27卷 293-296页

作者：吴建祥周继勇程丽琴沈行燕丁红梅浙江大学动物预防医学研究所浙江杭州310029

:以含传染性支气管炎病毒 ( ZJ971毒株 ) S1基因的质粒 PBS为模板 ,根据其序列设计引物进行PCR扩增 ,得到 1.7kb左右的 S1基因产物 ;用 Xbal I和 Bam HI酶切纯化 ,并在 T4 DNA连接酶的作用下 ,定向克隆到植物表达载体 PBI12 1中 ,PCR及... 详细信息

:以含传染性支气管炎病毒 ( ZJ971毒株 ) S1基因的质粒 PBS为模板 ,根据其序列设计引物进行PCR扩增 ,得到 1.7kb左右的 S1基因产物 ;用 Xbal I和 Bam HI酶切纯化 ,并在 T4 DNA连接酶的作用下 ,定向克隆到植物表达载体 PBI12 1中 ,PCR及酶切鉴定表明。

关键词：禽传染性支气管炎病毒 S1基因植物表达载体质粒PBS 酚切鉴定三亲交配定向克隆

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禽传染性支气管炎病毒纤突蛋白S_1基因的RFLP与序列比较分析

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中国农业大学学报 1998年第S4期3卷 124-130页

作者：李华杨汉春中国农业大学动物医学院北京100094

利用反转录一套式聚合酶链式反应技术从北京地区禽传染性支气管炎病毒(IBV)分离株 BJ_1、BJ_2、BJ_3株中成功扩增出1054bp 纤突蛋白高变区。利用限制性内切酶 Sin Ⅰ和 Pst Ⅰ的酶切分析证实了RT-nested PCR 的特异性,结合计算机酶切位... 详细信息

利用反转录一套式聚合酶链式反应技术从北京地区禽传染性支气管炎病毒(IBV)分离株 BJ_1、BJ_2、BJ_3株中成功扩增出1054bp 纤突蛋白高变区。利用限制性内切酶 Sin Ⅰ和 Pst Ⅰ的酶切分析证实了RT-nested PCR 的特异性,结合计算机酶切位点分析图谱进行理论 RFLP 分析。将三段 S_1基因分别克隆到pUC19质粒中,获得重组质粒 pUC IBV S_1-BJ_1、pUC IBV S_1-BJ_2、pUC IBV S_1-BJ_3。利用双脱氧链终止法对三个重组质粒进行双向测序,获得三株分离株 S_1基因高变区的序列。将得到的三个序列与标准株 M_(41),Beaudette 株和疫苗株 H_(120)及广东地方分离株 D_(41)株进行核酸序列同源性比较分析。结果表明,三株分离株核酸碱基序列和氨基酸序列与 M_(41)株的同源性比与 H_(120)株和 Beandette 株的同源性高。本研究对于进一步深入探讨禽传染性支气管炎病毒(IBV)分子变异机制研究奠定了良好的基础。

关键词：禽传染性支气管炎病毒 S1基因反转录一套式聚合酶链式反应 RFLP 序列比较分析

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禽传染性支气管炎病毒脂质体核酸疫苗的制备

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中国生物制品学杂志 2008年第3期21卷 212-215页

作者：李淑梅杨帆汤波河南科技学院化学化工学院新乡453003 新乡医学院微生物学教研室新乡453003

目的制备禽传染性支气管炎病毒脂质体核酸疫苗,并优化其制备工艺。方法采用逆向蒸发法制备禽传染性支气管炎病毒脂质体核酸疫苗,通过正交试验进行制备条件的优化,用荧光法测定脂质体的包封率。筛选制备高包封率脂质体核酸疫苗的最佳条件... 详细信息

目的制备禽传染性支气管炎病毒脂质体核酸疫苗,并优化其制备工艺。方法采用逆向蒸发法制备禽传染性支气管炎病毒脂质体核酸疫苗,通过正交试验进行制备条件的优化,用荧光法测定脂质体的包封率。筛选制备高包封率脂质体核酸疫苗的最佳条件,测定脂质体粒径,并对疫苗免疫效果进行检测。结果制备高包封率的禽传染性支气管炎病毒脂质体核酸疫苗的工艺为:卵磷脂、胆固醇的比例为2∶1(摩尔比),转速为150r/min,温度为45℃,包封率可达80.31%。脂质体粒径平均为149nm,脂质体核酸疫苗显著提高了疫苗的免疫效果。结论按本工艺制备的禽传染性支气管炎病毒脂质体核酸疫苗包封率高,脂质体粒径均一,免疫效果良好。

关键词：禽传染性支气管炎病毒核酸疫苗脂质体包封率免疫效果

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禽传染性支气管炎病毒SAIBk株全基因组的分段克隆、测序及分析

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畜牧兽医学报 2007年第1期38卷 72-77页

作者：周生王红宁唐梦君黄勇柳萍四川农业大学动物科技学院动物预防医学生物工程实验室雅安625014

根据GenBank上公布的IBV基因组序列，经多重比较后设计19对引物，用RT-PCR方法对禽传染性支气管炎病毒致肾病变型分离株SAIBk株的全基因组进行了分段扩增、克隆和序列测定。测序结果表明：SAIBk株基因组序列全长27520 bp，A＋T的含量占6... 详细信息

根据GenBank上公布的IBV基因组序列，经多重比较后设计19对引物，用RT-PCR方法对禽传染性支气管炎病毒致肾病变型分离株SAIBk株的全基因组进行了分段扩增、克隆和序列测定。测序结果表明：SAIBk株基因组序列全长27520 bp，A＋T的含量占61．74％，具有典型的冠状病毒基因组结构。基因组内碱基的插入和缺失主要分布在3 220-3470位、20560-20810位、25310-25600位和27150—27220位。与GenBank上公布的5株IBV基因组序列Beaudette、Mass41、Ca199、BJ、KQ6的同源率分别为87．2％、87．6％、87．2％、85．6％和87．5％。SAIBk株基因组不同区域的同源性分析结果表明，3＇UTR和5＇UTR是基因组中最为保守的区域，同源率在90．9％～97．7％，而S1基因是基因组中变异最大的区域，同源率在74．8％～83．2％。系统进化分析结果表明SAIBk株与国内分离株S14、LX4、BJ的亲缘关系较近。

关键词：禽传染性支气管炎病毒致肾病变型基因组序列分析

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禽传染性支气管炎病毒嗜肾毒株(X株)核衣壳基因的克隆和序列分析

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中国兽医学报 2002年第6期22卷 529-532页

作者：张德勇周继勇陈吉刚丁红梅沈行燕浙江大学动物预防医学研究所

根据已发表的禽传染性支气管炎病毒 (IBV) Beaudette株核衣壳基因序列 ,设计了 1对特异性引物 ,采用 RT-PCR方法 ,克隆了禽传染性支气管炎病毒嗜肾毒株 (X株 )的核衣壳基因 ,并测定了其序列。 X株 IBV与来自 Gen Bank的其他 10株 IBV相... 详细信息

根据已发表的禽传染性支气管炎病毒 (IBV) Beaudette株核衣壳基因序列 ,设计了 1对特异性引物 ,采用 RT-PCR方法 ,克隆了禽传染性支气管炎病毒嗜肾毒株 (X株 )的核衣壳基因 ,并测定了其序列。 X株 IBV与来自 Gen Bank的其他 10株 IBV相比 ,共存在 136个点突变 ,其中有 15处是连续突变区域 ,这些点突变总体呈散在分布。X株与其他毒株的核衣壳蛋白同源性在 90 .2 %～ 99.0 %之间 ,X株 IBV与同为肾型的 N株同源性最高。

关键词：嗜肾霉素序列分析禽传染性支气管炎病毒 X株核衣壳基因基因克隆

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禽传染性支气管炎病毒M基因在毕赤酵母中表达与蛋白反应活性检测

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中国兽医学报 2009年第11期29卷 1373-1376,1381页

作者：廖娟王红宁田浪张毅四川农业大学动物医学院四川雅安625014 四川省自贡市畜牧局四川自贡643000 四川大学生命科学学院动物疾病防控生物工程研究中心四川成都610064

将禽传染性支气管炎病毒(IBV)M基因克隆到毕赤巴斯?表达载体pPIC9K中,构建了重组表达载体pPIC9K-M,电击转化毕赤巴斯?酵母GS115,经MD和MM平板筛选和PCR鉴定后,采用G418抗性梯度筛选得到高拷贝重组菌株GS115/pPIC9K-M His+Mut+,重组菌株... 详细信息

将禽传染性支气管炎病毒(IBV)M基因克隆到毕赤巴斯?表达载体pPIC9K中,构建了重组表达载体pPIC9K-M,电击转化毕赤巴斯?酵母GS115,经MD和MM平板筛选和PCR鉴定后,采用G418抗性梯度筛选得到高拷贝重组菌株GS115/pPIC9K-M His+Mut+,重组菌株用1%的甲醇诱导分泌表达,并对表达产物进行SDS-PAGE、Western-blot分析。结果表明,IBV M基因在毕赤酵母中成功获得了表达,表达蛋白的相对分子质量约为33 000,能与IBV阳性血清特异性结合。将表达蛋白初步纯化后作为包被抗原,ELISA检测结果显示表达蛋白与特异性抗体反应良好,表明表达的M蛋白生物学活性良好。本研究表达的IBV M蛋白可作为制备IB诊断抗原的基础材料,对IB的防治有重要理论和实用价值。

关键词：禽传染性支气管炎病毒 M基因毕赤酵母分泌表达活性检测

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禽传染性支气管炎病毒S1基因在毕赤酵母中的表达

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中国兽医学报 2007年第6期27卷 799-802页

作者：余祖华王红宁周生黄勇柳萍四川农业大学动物科技学院

根据GenBank已公布的传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)株S1基因序列及pPIC9K表达载体序列,设计1对IBV S1基因表达片段的PCR引物,用RT-PCR方法扩增出长度为1 566 bp IBV S1基因表达片段,5′端不含信号肽序列,3′端... 详细信息

根据GenBank已公布的传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)株S1基因序列及pPIC9K表达载体序列,设计1对IBV S1基因表达片段的PCR引物,用RT-PCR方法扩增出长度为1 566 bp IBV S1基因表达片段,5′端不含信号肽序列,3′端添加了终止密码子。用限制性内切酶SnaB和Not将S1基因和载体pPIC9K酶切回收后连接,构建了重组表达载体pPIC9K-S1。用限制性内切酶Bgl将表达质粒pPIC9K-S1线性化,然后用电转化的方法导入毕赤酵母GS115,在MD平板上生长的转化子经过PCR鉴定和表型筛选后,获得了整合型阳性重组菌株GS115/pPIC9K-S1 His+Muts。将重组菌株在1%甲醇中进行诱导分泌表达,并对表达产物进行SDS-PAGE、Western blot分析。结果显示,IBV S1基因在毕赤酵母中成功获得了表达,表达蛋白的分子量约为76 000,能与IBV阳性血清特异性结合,表达的蛋白占上清中总蛋白量的12.5%。

关键词：禽传染性支气管炎病毒 S1基因毕赤酵母分泌表达

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禽传染性支气管炎病毒鸡胚连续传代后3'端7 kb编码区核酸变异特性

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中国预防兽医学报 2010年第4期32卷 315-318,324页

作者：闫宝龙张晓楠龚利洋韩宗玺邵昱昊孔宪刚刘胜旺中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

CK/CH/LHLJ/04V在鸡胚上连续传代后,其致病力、免疫原性和组织嗜性均发生了改变。为了研究其生物学特性变化的分子特征,通过RT-PCR的方法扩增出4个不同代次(P3、P40、P70、P110)的毒株的3'端7kb区域,克隆于pMD18-T中进行测序。序列... 详细信息

CK/CH/LHLJ/04V在鸡胚上连续传代后,其致病力、免疫原性和组织嗜性均发生了改变。为了研究其生物学特性变化的分子特征,通过RT-PCR的方法扩增出4个不同代次(P3、P40、P70、P110)的毒株的3'端7kb区域,克隆于pMD18-T中进行测序。序列分析表明CK/CH/LHLJ/04V病毒群中含有基因突变的各种亚群。3'端7kb区域的氨基酸替换主要发生在S蛋白。P3和P40中,S1亚基中的氨基酸替换,同样发生在病毒传代过程中的其它亚群中。但是P70和P110中的另一些氨基酸替换却仅发生在某些亚群中。P70和P110的大部分亚群中,3'非编码区出现109bp的缺失,这可能与病毒的复制、转录和致病力有关。病毒3'端7kb区域的变化很可能导致了病毒毒力的减弱、免疫原性的降低和组织嗜性的变化。

关键词：禽传染性支气管炎病毒改变分子特性 3'端7 kb区域

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