检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2011年第3期33卷 173-176页

作者：耿合员孙元韩宗玺邵昱昊仇华吉孔宪刚刘胜旺中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为构建表达鸡传染性支气管炎病毒(IBV)主要免疫原S1蛋白的重组腺病毒,本研究以复制缺陷型人5型腺病毒为载体,以IBVCK/CH/LHLJ/04V株S1基因为外源插入靶基因,通过细菌内同源重组法构建了一株稳定表达IBVS1蛋白(90ku)的重组腺病毒,命名为r... 详细信息

为构建表达鸡传染性支气管炎病毒(IBV)主要免疫原S1蛋白的重组腺病毒,本研究以复制缺陷型人5型腺病毒为载体,以IBVCK/CH/LHLJ/04V株S1基因为外源插入靶基因,通过细菌内同源重组法构建了一株稳定表达IBVS1蛋白(90ku)的重组腺病毒,命名为rAdV-S1。通过PCR鉴定、间接免疫荧光及western blot检测证实S1蛋白在重组腺病毒中获得表达。对构建的重组腺病毒和亲本腺病毒的生长动力学分析表明,该重组病毒的毒价为108.25TCID50/mL,并且两者在生长动力学方面无显著差异。本研究为动物试验和该重组腺病毒免疫特性的研究奠定基础。

关键词：禽传染性支气管炎病毒 S1基因重组腺病毒

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鸡传染性支气管炎病毒S1基因与猪IgGFc基因在HeLa细胞中的融合表达

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中国兽医学报 2008年第10期28卷 1145-1149页

作者：张明富陈汉阳彭博佟铁俦陈焕春郭爱珍华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 华中农业大学湖北省预防兽医学重点实验室湖北武汉430070

根据GenBank中发表的猪的IgG Fc段基因及鸡传染性支气管炎病毒(IBV)S1基因序列,设计并合成引物。以猪肝组织总RNA为模板扩增出猪IgG Fc基因,以含全长IBV M41S基因的质粒为模板扩增出IBVS1基因,分别克隆至T载体。DNA测序表明,所获得的IBV... 详细信息

根据GenBank中发表的猪的IgG Fc段基因及鸡传染性支气管炎病毒(IBV)S1基因序列,设计并合成引物。以猪肝组织总RNA为模板扩增出猪IgG Fc基因,以含全长IBV M41S基因的质粒为模板扩增出IBVS1基因,分别克隆至T载体。DNA测序表明,所获得的IBV S1基因大小为1.5kb,IgG Fc大小为1kb,序列正确。将IBVS1与IgG Fc基因串连,插入含有人组织型纤维蛋白溶酶原激活物分泌信号肽序列(tPA)的真核表达载体pcD-NA3.1-tPA上,在HeLa细胞上进行瞬时融合表达。经免疫光和斑点杂交检测,表达产物同时具有IBV S1蛋白和IgG Fc活性。

关键词：禽传染性支气管炎病毒 S1基因猪IgG Fc基因真核表达融合表达

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传染性支气管炎病毒诱导Vero细胞发生自噬促进病毒的复制

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中国兽医科学 2024年第8期54卷 1019-1026页

作者：杨雪晴孙军峰李慧昕韩宗玺刘胜旺黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室禽呼吸道传染病创新团队黑龙江哈尔滨150069

为探究禽传染性支气管炎病毒(infectious bronchitis virus,IBV)能否诱导细胞自噬及其对病毒复制的影响,本研究利用IBV细胞适应株CEA接种DF-1和Vero细胞,通过Western-blot、透射电镜和激光共聚焦显微镜检测自噬通路关键蛋白LC3和P62的... 详细信息

为探究禽传染性支气管炎病毒(infectious bronchitis virus,IBV)能否诱导细胞自噬及其对病毒复制的影响,本研究利用IBV细胞适应株CEA接种DF-1和Vero细胞,通过Western-blot、透射电镜和激光共聚焦显微镜检测自噬通路关键蛋白LC3和P62的表达和分布以及自噬小体的形成情况,并通过自噬抑制剂和诱导剂处理评估了自噬对IBV复制的影响。结果显示,IBV不能在DF-1细胞中诱导LC3的转化,但能够诱导Vero细胞中LC3-II和P62的水平升高,并能在Vero细胞中诱导形成自噬小体以及LC3-II向自噬体中的聚集,表明IBV能够诱导Vero细胞发生完整自噬。用自噬抑制剂渥曼青霉素和氯喹处理细胞能够抑制IBV诱导的自噬以及病毒的复制,而用自噬激活剂雷帕霉素处理则能够促进病毒的复制。综上所述,IBV能够在Vero细胞中诱导自噬的发生,从而促进病毒的复制。

关键词：禽传染性支气管炎病毒自噬病毒复制

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S2亚基对鸡传染性支气管炎病毒致病性和肾嗜性的影响研究

S2亚基对鸡传染性支气管炎病毒致病性和肾嗜性的影响研究

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作者：李淑芸四川农业大学

学位级别：博士

鸡传染性支气管炎病毒（Infectious bronchitis virus,IBV）感染引起的鸡传染性支气管炎（Avian infectious bronchitis,IB）是一种主要危害鸡和其他一些禽类的具有高度传染性的疾病。IB临床表型主要为呼吸型和肾型,也可侵害生殖系统,... 详细信息

鸡传染性支气管炎病毒（Infectious bronchitis virus,IBV）感染引起的鸡传染性支气管炎（Avian infectious bronchitis,IB）是一种主要危害鸡和其他一些禽类的具有高度传染性的疾病。IB临床表型主要为呼吸型和肾型,也可侵害生殖系统,使得生产上蛋鸡的产蛋率和蛋品质下降。不同IBV毒株的组织嗜性有差异,导致呼吸型、肾型等不同的临床表现,所有的IBV毒株感染都是从呼吸道开始,但对肾脏具有高致病性的一些毒株会在雏鸡中引起高达50%死亡率。来源于肾组织的原代细胞-鸡胚肾细胞（CEKs）是IBV的易感细胞,但不同毒株对其适应性也存在差异。探究IBV的致病性差异和肾组织嗜性差异机制将为IB的防控提供参考。IBV纤突蛋白（Spike,S）包含S1和S2亚基,后者由融合肽（fusion peptide,FP）、两个七肽重复区（heptad repeat regions,HR）HR1和HR2、不同属间保守的跨膜结构域（transmembrane domains,TMD）、以及C-末端的胞质尾区（cytoplasmic tail,CT）几部份组成。在膜融合过程中,FP暴露后插入到细胞膜,同时HR1和HR2相互作用形成六个-螺旋束（six-helix bundle,6-HB）,拉动病毒包膜-细胞膜接近进而发生膜融合。冠状病毒的S2亚基在病毒适应靶细胞、拓宽组织嗜性和宿主嗜性方面起到了重要作用,本论文主要探究IBV S2亚基对IBV的致病性差异和肾组织嗜性差异的影响,主要内容如下:***-type Sczy C30株反向遗传平台的构建IBV Sczy C30株（zy30）是由IBV QX-type强毒株Sczy3（zy3）在CEKs传代30次后得到,本论文是基于zy30株构建反向遗传平台。第一:将zy30全基因组划分成500-5,726 bp的7个片段（IBV-1–IBV-7）;同时人工合成HB序列,该序列包含丁型肝炎病毒核酶序列（hepatitis delta virus ribozyme,Rz）和BGH聚腺苷酸化信号序列（BGH termination and polyadenylation sequences,BGH）。第二:以p Belo BAC11质粒作为克隆载体,利用在zy30基因组不存在且在p Belo BAC11载体单一的Bam HI限制性内切酶位点作为多克隆位点,使用同源臂克隆方法将IBV-1–IBV-7片段依次插入克隆载体,然后在基因组3′末端克隆入HB序列,5′末端克隆入CMV增强子和启动子序列,构建出zy30的感染性c DNA克隆BAC-zy30。第三:将质粒BAC-zy30与质粒pc DNA3.1-N共转染BHK-21细胞,于转染后36-48 h收集培养物并感染CEKs,通过观察细胞病变（cytopathic effect,CPE）和PCR扩增zy30的N基因确认重组IBV（recombinant IBV,r IBV）rzy30被拯救,通过测序确认了rzy30株包含突变标记。第四:通过TCID50滴度、复制曲线、致病性实验观察到了rzy30株的体内和体外生物学特点与亲本株zy30相似。***30株S2亚基上决定毒力致弱的关键位点的筛选和鉴定第一:弱毒株Sczy C100株（zy100）由zy3强毒株在CEKs传代100次后得到,与zy30株的S2亚基氨基酸序列比较,存在HR2区域的N1038S突变和C-末端胞内区1154EQTRPKKSV1162缺失。第二:将BAC-zy30质粒进行Avr II和Pme I酶切,并与IBV-8片段进行无缝克隆,得到S基因缺失的转录载体BAC-zy30-S?。第三:以N1038S突变和1154EQTRPKKSV1162缺失为突变靶点,首先构建三个zy30的S基因突变质粒,分别包含N1038S突变、1154EQTRPKKSV1162缺失和双突变;然后将三个S基因突变片段克隆入BAC-zy30-S?获得三个重组的感染性c DNA克隆并成功拯救出对应的三个r IBV:rzy30S2-N1038S株、rzy30S2-CT9?株、rzy30S2-N1038S-CT9?株。第四:通过TCID50滴度、复制曲线、致病性实验观察三个r IBV的表型改变,结果表明N1038S突变和1154EQTRPKKSV1162缺失可以协同的增强对CEKs和肾脏的感染效率;N1038S突变和1154EQTRPKKSV1162缺失均可以降低致病性,1154EQTRPKKSV1162缺失致弱能力最强。***30株S2亚基上决定肾嗜性的关键位点的筛选与鉴定第一:IBV TW-type毒株CN不能感染CEKs,将CN株的S2亚基氨基酸序列与不同基因型的5个CEKs适应株进行比较,并

关键词：禽传染性支气管炎病毒感染性克隆 S2亚基致病性肾脏嗜性

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禽传染性支气管炎核酸疫苗脂质体的制备及其理化性质的研究

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安徽农业科学 2006年第10期34卷 2134-2135页

作者：李淑梅杨帆刘兴友河南科技学院河南新乡453003 新乡医学院微生物教研室河南新乡453003

采用改良的逆向蒸发法制备了禽传染性支气管炎病毒膜蛋白基因重组质粒pcDNA-M脂质体。电镜观察表明:该脂质体多呈球形的单室结构,脂质体粒径分布均匀,粒径范围在30～400nm,平均粒径120nm,主要粒径分布于50～150nm。重组质粒DNA在脂质体... 详细信息

采用改良的逆向蒸发法制备了禽传染性支气管炎病毒膜蛋白基因重组质粒pcDNA-M脂质体。电镜观察表明:该脂质体多呈球形的单室结构,脂质体粒径分布均匀,粒径范围在30～400nm,平均粒径120nm,主要粒径分布于50～150nm。重组质粒DNA在脂质体的制备过程中保持了稳定性,并能抵抗DNA酶的水解破坏作用。

关键词：禽传染性支气管炎病毒膜蛋白基因脂质体理化性质

来源：评论

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鸭源性传染性支气管炎病毒ZZ2004株全长cDNA感染性克隆的构建

鸭源性传染性支气管炎病毒ZZ2004株全长cDNA感染性克隆的构建

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作者：贺会利河南科技学院

学位级别：硕士

禽传染性支气管炎病毒（IBV）以引起鸡的呼吸道症状，肾脏损害，产蛋量和蛋的品质下降为特征的冠状病毒。鸭源性IBV ZZ2004是分离于以引起免疫抑制和生长抑制为主要症状的鸭群，感染肉仔鸡群也引起同样症状。本研究是在全基因组测序和... 详细信息

禽传染性支气管炎病毒（IBV）以引起鸡的呼吸道症状，肾脏损害，产蛋量和蛋的品质下降为特征的冠状病毒。鸭源性IBV ZZ2004是分离于以引起免疫抑制和生长抑制为主要症状的鸭群，感染肉仔鸡群也引起同样症状。本研究是在全基因组测序和序列分析基础上，构建IBV ZZ2004感染性cDNA克隆。为进一步在分子水平上研究其基因组功能﹑病毒复制机制、分子致病机理以及发展新型疫苗奠定基础。根据IBV ZZ2004毒株的全基因序列，借助DNA Star软件分析，选择全长基因组核苷酸序列中单一限制性酶切位点，设计合成4对引物，利用长距离RT-PCR方法，扩增出4个cDNA重叠片段，N1片段上游引入了T7启动子：N1（1nt5954nt）、N2（5860nt12491nt）、N3（12434nt20930nt）、N4（20717nt27673nt），分别克隆到pGEM-Teasy载体上，通过JM109感受态细胞化学转化，得到了4个不同的重组质粒；4个重组质粒经双酶切鉴定和测序鉴定正确后，获得了一个包括4个cDNA片段的IBV ZZ2004毒株全基因组cDNA文库。再利用限制性内切酶分别对4个不同的重组质粒和pFastBacHTA载体进行双酶切，分别回收，将4个片段中的两两重叠片段与pFastBacHTA载体在22℃水浴锅中过夜连接，通过JM109感受态细胞化学转化，得到了2个不同的重组质粒，形成了只有2个大片段的IBV ZZ2004毒株全基因组cDNA文库。最后利用限制性内切酶分别对2个不同的重组质粒进行双酶切，分别回收，在22℃水浴锅中过夜连接，构建IBV ZZ2004毒株全长cDNA文库。根据IBV ZZ2004全基因序列，在全基因序列的前后两端和中端设计三对特异性引物，用于鉴定全长是否连接成功。前端G1片段的位置:1-476，长度：476nt；中端G2片段的位置：12245-12635，跨越链接位点，长度：391nt；末端G3片段的位置：27018-27673，长度：657nt，经PCR鉴定IBV ZZ2004全长cDNA构建成功。以线性化的IBV ZZ2004全长cDNA为模板通过体外转录试剂盒合成病毒RNA，纯化后，用RT-PCR检测其完整性，将病毒RNA直接接种于9日龄的SPF鸡胚尿囊腔中，37℃人工孵化至72h，收取鸡胚尿囊液连续传3代，用RT-PCR方法检测每一代病毒均为阳性，并测定第3代病毒的EID50为105.5/0.2mL，成功构建了IBV ZZ2004全长cDNA感染性克隆。

关键词：禽传染性支气管炎病毒 cDNA 反向遗传学感染性克隆

来源：评论

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禽传染性运气管炎病毒Sczy3株全基因组序列测定分析

禽传染性运气管炎病毒Sczy3株全基因组序列测定分析

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作者：赵芳芳四川农业大学

学位级别：硕士

鸡传染性支气管炎(IB)是由鸡传染性支气管炎病毒(IBV)引起的一种鸡的急性、高度接触性传染病。现在已经在全球流行蔓延,给世界家禽养殖业带来极大的经济损失。由于禽传染性支气管炎病毒(IBV)频繁的基因点突变和重组,目前已经出现了许多... 详细信息

鸡传染性支气管炎(IB)是由鸡传染性支气管炎病毒(IBV)引起的一种鸡的急性、高度接触性传染病。现在已经在全球流行蔓延,给世界家禽养殖业带来极大的经济损失。由于禽传染性支气管炎病毒(IBV)频繁的基因点突变和重组,目前已经出现了许多不同的血清型和基因型毒株,并且它们之间缺乏交叉保护性或交叉保护性低,所以分析某地区流行的IBV的基因组结构特点,有助于IB的防控。先前研究证实,近年来四川IBV分离株基因型主要是LX4即QX-like型。从S1基因进化树分析推出Sczy3分离株属于QX型,但是Sczy3基因组的其他基因片段还未被测序。\n 本研究应用RT-PCR方法对Sczy3分离株基因组全序列进行测定,结果表明Sczy3分离株具有典型的禽状病毒基因序列特征5\'Cap-1a-1b-S-3a-3b-(E)-M-5a-5b-N-3’PolyA。Sczy3分离株基因组长27695bp,含有10个开放阅读框(ORF)。Gene1(复制转录酶)含有两个开放阅读框ORF1a和ORF1b,分别由11856和7959个核苷酸组成,编码3951个和2652个氨基酸;Gene2(纤突蛋白基因,S)含有一个开放阅读框由3498个核苷酸组成,编码1165个氨基酸,其中S1基因编码540个氨基酸。Gene3(辅助蛋白基因)包括三个开放阅读框ORF3a、ORF3b和ORF3c(E),分别编码57、62和108个氨基酸;Gene4(膜蛋白基因,M)一个开放阅读框,由678个核苷酸组成,编码225个氨基酸;Gene5(辅助蛋白基因)含三个开放阅读框ORF5a和ORF5b,分别编码65和82个氨基酸;Gene6(核衣壳蛋白基因,N)由1230个核苷酸组成,编码409个氨基酸。部分相邻基因间有重叠现象。Gene1和Gene2重叠110 nt,Gene2和Gene3重叠32 nt,Gene3和Gene4重叠114 nt,Gene5和Gene6重叠159 nt。\n 核酸序列同源性比较表明:Sczy3与参考毒株基因组序列同源性在86.1%～94.1%之间,与QX-like IBV有核苷酸同源性最高,与Mass型IBV核苷酸同源性最低。S蛋白裂解位点分析表明H-R-R-R-R不是中国分离毒株特有的裂解位点。\n 系统进化树分析显示,与LX4型IBV亲缘关系较近,与:Mass型Conn型IBV毒株亲缘关系很远。重组分析推测,Sczy3是一株嵌合IBV毒株,假定亲本毒株是LX4和H120。\n 综上所述,本实验课题为深入研究IBV在中国的演变特征,以及IBV的反向遗传学提供参考依据,同时也丰富了冠状病毒IBV的生物信息数据库。

关键词：禽传染性支气管炎病毒基因组进化树分析反向遗传学序列测定

来源：评论

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QX型禽传染性支气管炎血凝抗原及其制备方法与应用

QX型禽传染性支气管炎血凝抗原及其制备方法与应用

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作者：姜逸程旭俞燕高明燕范建华张笛张莹 225125 江苏省扬州市邗江区仓颉路58号

本发明提供了一种QX型禽传染性支气管炎血凝抗原及其制备方法与应用，属于生物技术领域。该制备方法包括通过QX型IBV病毒在Vero细胞中的增殖、病毒灭活、浓缩与纯化、磷脂酶C处理、2～6℃静置的步骤制备QX型禽传染性支气管炎病毒的血凝... 详细信息

标准号: CN117686710A

本发明提供了一种QX型禽传染性支气管炎血凝抗原及其制备方法与应用，属于生物技术领域。该制备方法包括通过QX型IBV病毒在Vero细胞中的增殖、病毒灭活、浓缩与纯化、磷脂酶C处理、2～6℃静置的步骤制备QX型禽传染性支气管炎病毒的血凝抗原。本发明以Vero细胞作为培养基质制备QX型禽传染支气管炎病毒血凝抗原，本发明制备的血凝抗原特异性强，能够有效检测QX型疫苗免疫禽类血清抗体水平，相比于传统的鸡胚扩毒方法，本发明中的抗原制备方法简单、成本低廉。本发明可广泛应用于IBV诊断、QX型疫苗免疫后血清抗体监测中，为IBV的防控提供有效的技术手段。

关键词：制备血凝抗原疫苗免疫禽传染性支气管炎病毒禽传染性支气管炎生物技术领域血清抗体水平支气管炎病毒抗原特异性病毒灭活技术手段抗原制备培养基质血清抗体有效检测磷脂酶C 传统的鸡胚禽类增殖应用传染浓缩病毒诊断监测

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鸡传染性支气管炎病毒S1基因与猪IgG Fc基因在HeLa细胞中的融合表达

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生物技术通报 2008年第S1期24卷 276-281页

作者：张明富陈汉阳彭博佟铁俦陈焕春郭爱珍华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070 华中农业大学动物医学院武汉430070 华中农业大学湖北省预防兽医学重点实验室武汉430070

根据Genbank中发表的猪IgG Fc段基因及IBV S1基因序列,设计并合成引物。以猪肝组织总RNA为模扩增出猪IgG Fc基因,以含全长IBV M41 S基因的质粒为模板扩增出IBV S1基因,分别克隆至T载体。DNA测序表明,所获得的IBV S1基因大小为1.5 kb,IgG... 详细信息

根据Genbank中发表的猪IgG Fc段基因及IBV S1基因序列,设计并合成引物。以猪肝组织总RNA为模扩增出猪IgG Fc基因,以含全长IBV M41 S基因的质粒为模板扩增出IBV S1基因,分别克隆至T载体。DNA测序表明,所获得的IBV S1基因大小为1.5 kb,IgG Fc大小为1kb,序列正确。将IBV S1与IgG Fc基因串连,插入含有人组织型纤维蛋白溶酶原激活物分泌信号肽序列(tPA)真核表达载体pcDNA3.1-tPA上,在HeLa细胞上进行瞬时融合表达。经免疫荧光和斑点杂交检测,表达产物同时具有IBV S1蛋白和IgG Fc活性。

关键词：禽传染性支气管炎病毒 S1基因猪IgG Fc基因真核表达融合表达

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陶氏化学格利特消毒剂GLUTEX GS2对传染性支气管炎病毒杀灭效果的测试

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国外畜牧学（猪与禽） 2014年第1期34卷 39-40页

作者：李亚雄(摘译) 仇正兴(摘译) 毛慧(审校) 上海汉联生物技术有限公司上海市永和路18弄东方环球企业41号楼1004室不详

本研究参照美国国家环境保护局(EPA)关于消毒剂在干燥的非生物表面的抗病毒效果测评方法,评定美国陶氏化学公司的格利特消毒剂GLUTEX GS2对传染性支气管炎病毒的杀毒效力。结果表明:经合成硬水1:256倍稀释的格利特消毒剂GLUTEX GS2,在... 详细信息

本研究参照美国国家环境保护局(EPA)关于消毒剂在干燥的非生物表面的抗病毒效果测评方法,评定美国陶氏化学公司的格利特消毒剂GLUTEX GS2对传染性支气管炎病毒的杀毒效力。结果表明:经合成硬水1:256倍稀释的格利特消毒剂GLUTEX GS2,在与干燥处理的传染性支气管炎病毒膜充分接触10 min后,病毒活性低于0.5个滴度,表明消毒剂对传染性支气管炎病毒具有杀灭效力,可用于此病毒的日常消毒中。

关键词：禽传染性支气管炎病毒抗病毒效果评测 GLUTEX GS2消毒剂

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