检索结果-内蒙古大学图书馆

IBV-NSP16通过调控STAT3/IL-6/SOCS3信号通路促进病毒复制

中国兽医科学 2023年第11期53卷 1424-1430页

作者：雷尧王真方守国长江大学农学院湖北荆州434025 长江大学医学部湖北荆州434025

冠状病毒编码的非结构蛋白16(NSP16)在结构和功能上相对保守。NSP16具有2’-O-MTase活性,类似真核宿主的mRNA加帽体系,可使病毒RNA的5’-端形成帽子结构,起到稳定病毒mRNA和实现免疫逃逸的作用。为了研究IBV编码的NSP16的生物学功能,我... 详细信息

冠状病毒编码的非结构蛋白16(NSP16)在结构和功能上相对保守。NSP16具有2’-O-MTase活性,类似真核宿主的mRNA加帽体系,可使病毒RNA的5’-端形成帽子结构,起到稳定病毒mRNA和实现免疫逃逸的作用。为了研究IBV编码的NSP16的生物学功能,我们利用反向遗传学方法,构建并获得了丧失甲基转移酶活性的突变体rIBV-D128A,发现其致病力和复制速率比野生型rIBV弱。随后运用qRT-PCR和Western-blot等分子生物学方法,通过检测rIBV和rIBV-D128A感染H1299细胞中天然免疫反应相关基因的差异表达,以明确NSP16的生物学功能。研究结果显示,相比于rIBV,rIBV-D128A感染增强了细胞中STAT3的磷酸化水平,显著上调了SOCS3蛋白和炎症因子IL-6的表达。这些结果表明,IBV-NSP16可通过调控STAT3/SOCS3/IL-6信号通路,创造出有利于IBV复制的细胞环境。研究结果为进一步明确IBV nsp16生物学功能提供了理论依据。

关键词：禽传染性支气管炎病毒非结构蛋白16 病毒复制 H1299细胞

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IBV S蛋白共有核酸序列免疫原功能验证及其重组乳酸菌口服DNA疫苗研究

IBV S蛋白共有核酸序列免疫原功能验证及其重组乳酸菌口服DNA疫苗...

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作者：左磊四川大学

学位级别：博士

禽传染性支气管炎（infectious bronchitis,IB）是由冠状病毒代表种之一的禽传染性支气管炎病毒（infectious bronchitis virus,IBV）引起的一种高度接触性传染病,给禽养殖业造成了极大经济损失。疫苗免疫是预防IBV感染最有效的方式,但... 详细信息

禽传染性支气管炎（infectious bronchitis,IB）是由冠状病毒代表种之一的禽传染性支气管炎病毒（infectious bronchitis virus,IBV）引起的一种高度接触性传染病,给禽养殖业造成了极大经济损失。疫苗免疫是预防IBV感染最有效的方式,但现有商品化疫苗（减毒和灭活疫苗）及其他新型疫苗（病毒载体、亚单位和DNA疫苗）均无法为不断出现的IBV新毒株提供充足的保护。因此,现有免疫原的优化以及寻找新的优秀的免疫原是IBV疫苗研究永恒的主题。另外,为了适应禽养殖业集约化、规模化的现状,可以大规模免疫的疫苗（如口服疫苗）也是IBV疫苗研究的重要方向。基于共有（氨基酸）序列（consensus sequence）的免疫原在1型人免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus type 1,HIV-1）、甲型流感病毒（influenza A virus,IAV）、基孔肯亚病毒（Chikungunya virus,CHIKV）、丙型肝炎病毒（hepatitis C virus,HCV）、登革热病毒（dengue virus,DENV）及中东呼吸综合症冠状病毒（Middle East respiratory syndrome coronavirus,MERS-Co V）等多种病毒中显示出良好的免疫原性。但最近有研究表明,密码子优化涉及的同义突变会影响蛋白的结构,全基因组共有核酸序列（consensus nucleotide sequence）形成的2型猪繁殖与呼吸综合症病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV）毒株体外、体内复制效率与野毒株无差异且可以提供不同毒株保护。基于共有核酸序列的免疫原在IBV等冠状病毒中免疫原性如何有待研究。重组乳酸菌DNA疫苗以乳酸菌为载体递送DNA疫苗,抗原在宿主细胞中表达,具有翻译后修饰,结构和免疫原性与天然抗原相当,并可以同时诱导体液免疫、细胞免疫和粘膜免疫反应,是一种很适合口服免疫的疫苗。但乳酸菌不易被宿主细胞摄取,DNA疫苗递送效率较低,因而重组乳酸菌DNA疫苗通常还使用DNA疫苗质粒之外的原核表达载体表达辅助蛋白来提高疫苗递送效率。类似双表达载体,能同时实现DNA递送和原核表达的双功能质粒会极大降低重组乳酸菌DNA疫苗制备难度,但目前还未见相关报道。基于上述背景,本研究设计并验证了基于IBV纤突（spike,S）蛋白共有核酸序列的免疫原S＿con,构建并鉴定了乳酸菌DNA递送和原核表达双功能质粒p PElac,制备并评价了基于植物乳杆菌NC8的重组乳酸菌口服IBV DNA疫苗NC8（p PElac-S＿con+M＿D＿pep）。具体研究内容和结果如下: （1）IBV S蛋白共有核酸序列免疫原功能验证。本研究通过MAFFT软件分析Gen Bank中257条IBV全基因组序列（包括中国分离株和疫苗株）,确定IBV S蛋白共有核酸序列S-CON并连接至p VAX1质粒,构建DNA疫苗p V-S＿con质粒;通过间接荧光免疫试验（indirect fluorescence immunoassay test,IFA）和Western Blot检测p V-S＿con质粒在HD11细胞中的表达情况;以p V-S＿con质粒（50μg）免疫BALB/c小鼠,以Vero细胞和Beaudette株测定血清中和抗体效价（p VAX1质粒免疫血清和PBS作对照）;p V-S＿con质粒（100μg）免疫SPF鸡,通过ELISA测定血清中IBV特异性抗体、IL-4和IFN-γ,以M41株(105.3 EID50)滴鼻进行攻毒保护评价（p VAX1质粒和H120疫苗作对照）。结果显示:S-CON处于所有出发序列的中心位置,基因分型属于中国主要分离基因型GI-19型;p V-S＿con质粒在HD11细胞中表达得到的S＿con蛋白经历了正确的翻译后修饰（糖基化和弗林蛋白酶切割）;p V-S＿con质粒免疫小鼠的血清具有中和GI-1型毒株Beaudette的能力,滴度为6.3log2,而对照组不具备对Beaudette株的中和能力;p V-S＿con质粒免疫SPF鸡有效诱导机体产生IBV特异性抗体,并提高机体细胞因子IL-4和IFN-γ的表达水平;p V-S＿con质粒免疫可以有效降低机体在GI-1型毒株M41攻毒后的排毒水平,并明显抑制组织（气管、肾和盲肠扁桃体）中病毒的复制,其保护效果与GI-1型疫苗H120相当。本研究首次获得IBV S蛋白共有核酸序列,并证明DNA疫苗p V-S＿con质粒在BALB/c小鼠和SPF鸡中均具有良好的免疫原性,为IBV疫苗研究提供了新的免疫原。（2）乳酸菌

关键词：禽传染性支气管炎病毒纤突蛋白共有核酸序列免疫原验证双功能质粒重组乳酸菌口服DNA疫苗

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黄芩苷体外抗IBV QX株的作用研究

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黑龙江畜牧兽医 2024年第1期 96-102页

作者：郭霄慧李伟欣冯婉莹赵鸿洁李卫晴王转转陈光明韩振兴王冬喜贾青辉河北科技师范学院河北省预防兽医学重点实验室河北秦皇岛066604 河北牧安动物药业有限公司石家庄050000 河北省肉鸡养殖与加工技术创新中心河北承德067000 河北滦平华都食品有限公司河北承德067000

为研究黄芩苷体外抗禽传染性支气管炎病毒(Avian infectious bronchitis virus,IBV)QX株的效果,试验对IBV进行复壮与扩繁,制备原代鸡胚肾(CEK)细胞,并测定IBV对CEK细胞的TCID50和黄芩苷对CEK细胞的最大无毒浓度(MNTC);在MNTC基础上采用... 详细信息

为研究黄芩苷体外抗禽传染性支气管炎病毒(Avian infectious bronchitis virus,IBV)QX株的效果,试验对IBV进行复壮与扩繁,制备原代鸡胚肾(CEK)细胞,并测定IBV对CEK细胞的TCID50和黄芩苷对CEK细胞的最大无毒浓度(MNTC);在MNTC基础上采用CCK法测定不同浓度黄芩苷对IBV的有效抑制率,观察不同浓度黄芩苷对IBV导致的CEK细胞的细胞病变效应(CPE)的抑制情况,并采用qPCR法测定不同浓度黄芩苷对IBV N基因相对表达量的影响。结果表明:成功复壮并扩繁了IBV,其未被其他病毒污染,对CEK细胞的TCID50为1×10^(-4.75)/0.1 mL;黄芩苷对CEK细胞的MNTC为9.75 mg/L;该浓度黄芩苷对IBV的有效抑制率最高,为64.03%,能有效减轻IBV对CEK细胞的CPE;各浓度黄芩苷均可以极显著降低CEK细胞中IBV N基因相对表达量(P<0.01)。说明黄芩苷对CEK细胞的MNTC为9.75 mg/L,该浓度黄芩苷具有较好的体外抗IBV QX株的作用。

关键词：黄芩苷禽传染性支气管炎病毒鸡胚肾(CEK)细胞最大无毒浓度有效抑制率

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HSP90AB1与IBV S1蛋白互作调节病毒吸附的研究

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中国兽医科学 2023年第8期53卷 983-990页

作者：张焕东方承秀林翠董伟仁周继勇廖敏浙江大学农业农村部动物病毒学重点实验室浙江杭州310058

前期的免疫沉淀和质谱鉴定分析表明,HSP90AB1是禽传染性支气管炎病毒(IBV)S1蛋白的潜在互作宿主蛋白。本研究在此基础上探讨HSP90AB1与IBV S1蛋白的相互作用及其对IBV吸附宿主细胞的影响。免疫共沉淀试验显示,宿主HSP90AB1蛋白可与多种... 详细信息

前期的免疫沉淀和质谱鉴定分析表明,HSP90AB1是禽传染性支气管炎病毒(IBV)S1蛋白的潜在互作宿主蛋白。本研究在此基础上探讨HSP90AB1与IBV S1蛋白的相互作用及其对IBV吸附宿主细胞的影响。免疫共沉淀试验显示,宿主HSP90AB1蛋白可与多种IBV毒株的S1蛋白发生互作,Gst-pull-down试验证明,HSP90AB1与M41株S1蛋白的互作属于直接互作。进一步的免疫沉淀试验表明,细胞膜HSP90AB1与内源性S1蛋白同样具有互作关系。进一步研究发现过表达HSP90AB1会促进IBV Beaudette对Vero细胞的吸附,而敲低HSP90AB1则抑制病毒吸附H1299细胞;使用商品化的HSP90AB1家兔单克隆抗体预处理Vero细胞则抑制了病毒的吸附;用HSP90AB1蛋白阻断结合位点使病毒吸附细胞的能力显著降低。以上结果表明,HSP90AB1对IBV吸附细胞具有正调节作用,其可能是IBV入侵细胞的一个关键宿主因子。

关键词：禽传染性支气管炎病毒热休克蛋白HSP90AB1 S1蛋白病毒吸附

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肾型传支发病鸡群传支抗体变化规律的研究

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养禽与禽病防治 2007年第3期 12-13页

作者：陈庆华吴孔兴郭磊张秀丽肇庆学院生物系广东肇庆526061 广东温氏食品集团生产部

鸡肾型传染性支气管炎是由冠状病毒属的禽传染性支气管炎病毒（IBV）引起的一种以侵害鸡肾脏为主的急性、高度接触性传染病，对呼吸道和泌尿生殖道造成损伤。由于本病无特异治疗方法，给养鸡业造成极大损失。为了监测肾型传支发病鸡群... 详细信息

鸡肾型传染性支气管炎是由冠状病毒属的禽传染性支气管炎病毒（IBV）引起的一种以侵害鸡肾脏为主的急性、高度接触性传染病，对呼吸道和泌尿生殖道造成损伤。由于本病无特异治疗方法，给养鸡业造成极大损失。为了监测肾型传支发病鸡群的抗体消长情况，笔者用部分分离的肾型传支病毒攻击易感鸡，通过在发病前后测定其IB抗体水平，探索抗体消长规律，为该病的防治提供基础数据。

关键词：发病鸡群肾型传支禽传染性支气管炎病毒鸡肾型传染性支气管炎抗体消长规律接触性传染病冠状病毒属泌尿生殖道

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4种中药乙醇提取物对IBV抑制作用的初步研究

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黑龙江畜牧兽医 2018年第8期 166-168页

作者：安红柳王真梁雄燕付雪娇方守国长江大学农学院

为了确定4种中草药乙醇提取物（简称提取物）对H1299细胞抗IBV的影响,试验用4种中草药乙醇提取物和表达荧光素酶的IBV-3ab-Luc病毒（简称病毒）对H1299细胞进行处理：1）加入中草药乙醇提取物24 h后加入病毒;2）同时加入提取物和病毒;3... 详细信息

为了确定4种中草药乙醇提取物（简称提取物）对H1299细胞抗IBV的影响,试验用4种中草药乙醇提取物和表达荧光素酶的IBV-3ab-Luc病毒（简称病毒）对H1299细胞进行处理：1）加入中草药乙醇提取物24 h后加入病毒;2）同时加入提取物和病毒;3）加入病毒1.5 h后再加入提取物。检测荧光值,并计算荧光素酶活力（N）值,测定提取物对H1299细胞产生抗IBV物质的效果、抑制IBV感染H1299细胞的效果及抵制IBV在H1299细胞内复制效果的影响。结果表明：石菖蒲、七叶一枝花和海风藤乙醇提取物能促进H1299细胞产生抗IBV感染的物质,而板蓝根对其有一定抑制作用;4种提取物均能抑制IBV感染细胞,其中板蓝根、海风藤的抑制效果最显著,N值分别为5.90和4.92;4种提取物均对IBV在细胞内的复制有一定的抑制效果,其中以石菖蒲的效果最好,海风藤的抑制效果最差,但N值均小于1。

关键词：乙醇提取物禽传染性支气管炎病毒 IBV-3ab-Lμc 抗病毒活性 H1299细胞

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鸡肾型传支病毒黑龙江省分离株Mk株、K株和Mg株S1基因的克隆与序列分析

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黑龙江畜牧兽医 2008年第5期 63-64页

作者：宋佰芬曹宏伟马金柱崔玉东朱战波黑龙江八一农垦大学生命科技学院黑龙江大庆163319

鸡传染性支气管炎(IB)是由冠状病毒科(coronavriridae)冠状病毒属(Coronavirus)的禽传染性支气管炎病毒(Avian infectious bronchitis virus,IBV)引起的一种急性、高度接触性传染病,临床上主要呈现呼吸道、生殖道和肾脏病变及腺胃肿大等... 详细信息

鸡传染性支气管炎(IB)是由冠状病毒科(coronavriridae)冠状病毒属(Coronavirus)的禽传染性支气管炎病毒(Avian infectious bronchitis virus,IBV)引起的一种急性、高度接触性传染病,临床上主要呈现呼吸道、生殖道和肾脏病变及腺胃肿大等.以往的研究发现,IBV的S基因容易发生变异,尤其是S1基因的变异导致了IBV出现了多种血清型.

关键词：禽传染性支气管炎病毒鸡传染性支气管炎 S1基因黑龙江省肾型传支序列分析分离株克隆

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医学生物化学

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中国学术期刊文摘 2008年第17期14卷 154-155页

双顺反子真核表达载体pVAX1-IRES的构建与鉴定;禽传染性支气管炎病毒脂质体核酸疫苗的制备

关键词：医学生物化学禽传染性支气管炎病毒真核表达载体双顺反子核酸疫苗脂质体

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IBV DNA疫苗、DNA疫苗—脂质体复合物在鸡体内的分布及安全性研究

IBV DNA疫苗、DNA疫苗—脂质体复合物在鸡体内的分布及安全性研究

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作者：白天四川农业大学

学位级别：硕士

DNA疫苗在机体内的分布和安全性是研究者们普遍关注的问题。本研究为IBV DNA疫苗及脂质体在DNA疫苗中的应用提供了科学依据。为研究本实验室构建的禽传染性支气管炎病毒(IBV)真核表达质粒pIBVS1、pIBVM、pIBVN混合DNA疫苗及DNA疫苗... 详细信息

DNA疫苗在机体内的分布和安全性是研究者们普遍关注的问题。本研究为IBV DNA疫苗及脂质体在DNA疫苗中的应用提供了科学依据。为研究本实验室构建的禽传染性支气管炎病毒(IBV)真核表达质粒pIBVS1、pIBVM、pIBVN混合DNA疫苗及DNA疫苗-脂质体复合物在鸡体内的组织分布和安全性，DNA疫苗经腿部肌肉分点免疫接种7日龄非免疫健康雏鸡，DNA疫苗-脂质体复合物经腿部肌肉及滴鼻、点眼两种免疫途径接种相同日龄的非免疫健康雏鸡，利用PCR方法对疫苗在鸡体内的分布及与鸡细胞基因组的整合进行检测研究。并通过肌肉注射和滴鼻、点眼两种途径对1日龄雏鸡免疫接种DNA疫苗-脂质体复合物；相同剂量连续免疫接种7日龄雏鸡以及5倍常规使用剂量(超大剂量)免疫接种7日龄雏鸡，来对DNA疫苗-脂质体复合物进行免疫毒性实验研究。实验期间对实验鸡进行一般临床表现观察，并分别在免疫后48h和30日龄进行血液学、血液生化学、病理及病理组织学检测。分布实验结果表明：肌注DNA疫苗、肌注及滴鼻、点眼免疫接种的DNA疫苗-脂质体复合物均于免疫接种后24h，在血液和所有检测的组织中检测到质粒pIBVS1，pIBVM，pIBVN的分布，并能持续分布90d；在免疫后120d，疫苗免疫各组在血液中均已检测不到三种质粒的分布，各组织器官中均检测不到质粒pIBVS1的分布，DNA疫苗组仅在心脏、肺脏、肾脏、胸腺及注射部位肌肉检测到质粒pIBVM，pIBVN的分布，DNA疫苗-脂质体复合物肌肉注射组仅在心脏、脾脏、肺脏、肾脏及注射部位肌肉检测到质粒pIBVM，pIBVN的分布，而DNA疫苗-脂质体复合物滴鼻、点眼免疫组除了在心脏和肝脏中检测不到质粒DNA的分布外，其余组织中均能检测到质粒pIBVM，pIBVN的分布。安全性实验表明：纯化后的组织基因组DNA经PCR扩增均呈阴性，未发现整合现象。试验期间，各组动物行为活动未见异常，无死亡。免疫后48h，单剂量肌肉注射及滴鼻、点眼免疫组的红细胞(RBC)数量，红细胞压积(HCT)与对照组相比差异显著(P＜0.05)，血红蛋白(HGB)含量与对照组相比差异极显著(P＜0.01)，但都属于正常波动范围内，恢复期间各组血液学指标与对照组相比无显著性差异(P＞0.05)。免疫后48h，超大剂量组总蛋白(TP)及白蛋白(ALB)含量与对照组相比差异极显著(P＜0.01)，其余各组血液生化指标与对照组相比均无显著性差异(P＞0.05)，恢复期间，所有疫苗免疫组血液生化指标均与对照组无显著性差异(P＞0.05)，超大剂量接种可能因剂量偏高，在免疫初期对雏鸡肝脏的蛋白质合成功能造成影响，但后期得以修复。病理剖解无异常变化，各疫

关键词：禽传染性支气管炎病毒 DNA疫苗 DNA疫苗-脂质体复合物分布安全性整合毒性实验

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中药组方对鸡传染性支气管炎治疗效果的研究

中药组方对鸡传染性支气管炎治疗效果的研究

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作者：李卫晴河北科技师范学院

学位级别：硕士

禽传染性支气管炎（IB）是家禽中对经济影响最大的疾病之一,该病毒主要影响呼吸道,引起气管啰音、打喷嚏、咳嗽,尤其是在肉鸡中。目前,该病的治疗主要依赖于西药,但长期使用西药可能导致药物残留和耐药性等问题。因此,寻求一种安全、有... 详细信息

禽传染性支气管炎（IB）是家禽中对经济影响最大的疾病之一,该病毒主要影响呼吸道,引起气管啰音、打喷嚏、咳嗽,尤其是在肉鸡中。目前,该病的治疗主要依赖于西药,但长期使用西药可能导致药物残留和耐药性等问题。因此,寻求一种安全、有效的中药治疗方法具有重要意义。本研究结合实验室前期体外筛选抗IBV的有效中草药,根据中兽医理论组成中药组方,进行体内外抗IBV研究。方法:首先使用实验室保存的IBV病毒液在CEK细胞上传代,传至第十代测定其TCID50,测定中药组方在CEK细胞上的最大安全浓度以及中药组方对IBV的有效抑制率,选取SPF鸡胚测定第十代IBV病毒液的EID50,以确定后续动物试验的攻毒剂量。按照体重将120只10日龄的SPF雏鸡随机分为6组（每组雏鸡体重均为90 g）,分别是Ⅰ-Ⅲ（高、中、低剂量中药组）、Ⅳ（利巴韦林治疗组）、Ⅴ（病毒组）、Ⅵ（空白对照组）,10日龄时开始接毒,24 h后给药,期间进行临床观察,并测定不同处理组的平均日增重、免疫器官指数、喉头中病毒载量、不同组织器官的带毒情况、治愈率、观察病理变化、测定雏鸡IFN-γ、IL-6、TNF-α含量,评价自拟中药组方对传染性支气管炎的治疗效果,具体研究内容和结果如下: 1.测定病毒的TCID50为10-4.7/100μL,第十代IBV病毒液的EID50为10-4.67/100μL。中药组方1对CEK细胞的最大安全浓度为0.3125 mg/m L,中药组方2对CEK细胞的最大安全浓度为0.625 mg/m L。 2.在药物对IBV的复制阻断作用方式中,中药组方1对IBV的有效抑制率为67.95%,中药组方2对IBV的有效抑制率为81.48%,均高于利巴韦林。 3.病毒组雏鸡法氏囊指数、胸腺指数和脾脏指数与空白对照组比较,差异显著（P<0.05）;与病毒组相比,高、中、低剂量中药组和利巴韦林组的喉头中病毒载量显著降低（P<0.05）;高、中、低剂量中药组和利巴韦林组雏鸡的治愈率分别是85%、75%、60%和70%,表明,高、中剂量中药组方2和阳性药物利巴韦林对鸡传染性支气管炎病具有有效的治疗作用。 4.病理切片结果显示,空白对照组组织器官结构均正常,病毒组组织器官结构损伤严重,高、中、低剂量中药组、利巴韦林组能减轻雏鸡气管、肺脏、肾脏损伤程度。 5.血清中IL-6、IFN-γ和TNF-α含量检测结果显示,攻毒后第3 d、第6 d、第9 d和第13 d,相较于病毒组,高、中、低剂量中药组以及利巴韦林组雏鸡血清中的IL-6和TNF-α含量均显著降低,差异显著（P<0.05）。同时,用药各组雏鸡血清中IFN-γ含量则明显升高,与病毒组相比,差异同样显著（P<0.05）。这些发现进一步证实了自拟中药组方2在治疗鸡传染性支气管炎方面的有效性,为临床应用提供了有力支持。综上所述,体外抗病毒试验表明,中药组方1对IBV的有效抑制率为67.95%,中药组方2对IBV的有效抑制率为81.48%,均高于利巴韦林。因此,选取中药组方2进行体内抗病毒试验。结果表明,高、中、低剂量中药组和利巴韦林组雏鸡的治愈率分别是85%、75%、60%和70%;中药组方2可抑制细胞因子IL-6、TNF-α的分泌,促进IFN-γ的升高,提高其细胞免疫机能。因此,中药组方2对IB具有较好的治疗效果。

关键词：禽传染性支气管炎禽传染性支气管炎病毒治疗中药组方

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