检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：曾瑜虹四川农业大学

学位级别：硕士

禽传染性支气管炎（Avian Infectious Bronchitis,IB）是由禽传染性支气管炎病毒（Avian Infectious Bronchitis Virus IBV）引起鸡的一种急性、高度接触性的传染病。核蛋白（N蛋白）是IBV病毒内部核衣壳的组成蛋白,在细胞免疫和体液免... 详细信息

禽传染性支气管炎（Avian Infectious Bronchitis,IB）是由禽传染性支气管炎病毒（Avian Infectious Bronchitis Virus IBV）引起鸡的一种急性、高度接触性的传染病。核蛋白（N蛋白）是IBV病毒内部核衣壳的组成蛋白,在细胞免疫和体液免疫中起重要作用。减毒沙门氏菌X4550株是目前常用的口服疫苗载体细菌,能携带可致免疫反应的异源抗原进入动物细胞内进行转录并最后表达出编码的外源抗原。因其染色体中cya和crp毒力基因被删除,且使用非抗性筛选宿主-载体平衡致死系统,疫苗株有可靠的安全性。本实验根据禽传染性支气管炎病毒（IBV）的四川分离株SAIBk株的全基因组序列（序列登录号为:DQ288927）设计一对特异性引物,利用RT-PCR技术从SAIBk基因组中扩增出N基因。将N基因插入质粒表达载体PYA3342的多克隆位点,经鉴定成功构建了重组表达质粒PYA3342-N。将此重组质粒转化入减毒鼠伤寒沙门氏菌X4550中,成功构建禽传染性支气管炎病毒N基因减毒沙门氏菌X4550疫苗。构建携带荧光GFP报告基因的重组减毒沙门氏菌X4550（PYA3342-GFP）,将该重组减毒沙门氏菌口服饲喂鸡。饲喂后取材制作组织冰冻切片,通过荧光显微镜观察重组减毒沙门氏菌在鸡体内分布规律。表明重组减毒沙门氏菌进入鸡体后能够在小肠,肝脏,脾脏,肾脏,肺脏和心脏成功定植。雏鸡口服1×10～9CFU,5×10～9CFU,1×1010CFU不同剂量减毒沙门氏菌疫苗X4550（PYA3342-N）,无不良反应和眼观病变。表明重组疫苗具有良好的安全性。免疫后6周用菌落PCR方法可从免疫鸡肺和肾脏组织匀浆中扩增出N基因,表明重组菌能够在体内稳定存在。免疫后两周血清中可以检测到特异性IgG,与PVAX1-N疫苗组比较差异显著（P＜0.05）。同时可在鸡肠道检测到粘膜抗体IgA的分泌,且疫苗组X4550（PYA3342-N）粘膜抗体水平显著高于PVAX1-N疫苗组,且差异极显著（P＜0.01）。疫苗组X4550（PYA3342-N）产生的外周血CD4+、CD8+T淋巴细胞亚群数量均高于PVAX1-N疫苗组和H120弱毒苗组,差异显著（P＜0.05）。X4550（PYA3342-N）疫苗组,H120弱毒苗组,PVAX1-N疫苗组对强毒的攻击保护率分别为73%,80%和67%。本研究为进一步研制IBV重组减毒沙门氏菌疫苗提供了基础材料。

关键词：禽传染性支气管炎病毒减毒沙门氏菌疫苗荧光GFP 免疫原性

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禽传染性支气管炎病毒类木瓜蛋白酶1C端保守区功能分析

禽传染性支气管炎病毒类木瓜蛋白酶1C端保守区功能分析

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作者：贾艺泉长江大学

学位级别：硕士

禽传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)属于γ冠状病毒属,是具有囊膜、非分段的正单链RNA病毒。其基因组编码2个多聚蛋白、4个结构蛋白和多个辅助蛋白。冠状病毒非结构蛋白3(Non-structural protein3,Nsp3)是由病毒自... 详细信息

禽传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)属于γ冠状病毒属,是具有囊膜、非分段的正单链RNA病毒。其基因组编码2个多聚蛋白、4个结构蛋白和多个辅助蛋白。冠状病毒非结构蛋白3(Non-structural protein3,Nsp3)是由病毒自身编码的类木瓜蛋白酶(Papain-like protease,PLpro)切割多聚蛋白而产生的,含包括1或2个PLpro在内的多个功能保守的结构域,在病毒复制以及病毒宿主互作中发挥重要作用。其中,类木瓜蛋白酶2(PL2pro)存在于所有冠状病毒中,而PL1pro仅存在于α冠状病毒、β冠状病毒A亚群及IBV中。IBV虽然保留了PL1pro结构域,但由于缺失对蛋白水解活性至关重要的催化残基和锌指基序,因此失去了将病毒多聚蛋白进行切割的蛋白酶活性。我们的前期研究发现,IBVPL1pro并非病毒复制所必需,但其缺失会导致IBV复制水平的显著降低和致病力的减弱。多序列比对显示,不同致病型IBV-PL1pro的N端和C端区域(PL1pro C)分别含有64个和12个高度保守的氨基酸残基,两者间为高变异区,说明这些保守的氨基酸残基可能会影响IBV复制。为了研究PL1pro C的生物学功能,本研究以IBV-P65为遗传背景,利用IBV反向遗传学技术获得野生型重组病毒rIBV和缺失了PL1pro C端12个氨基酸残基(3505-3540 nt)的重组病毒IBV-Δ3505-3540。通过噬斑分析、生长曲线测定、病毒RNA及蛋白表达水平检测,比较分析两种重组病毒的生物学特性,明确PL1pro C在IBV复制过程中的作用。此外,为探究PL1pro C在IBV与细胞互作中的作用,我们对IBV-Δ3505-3540和rIBV分别感染H1299细胞24 h后的RNA样品进行了转录组测序、分析和验证。主要研究结果如下: ***-Δ3505-3540的生物学特性 (1)噬斑分析显示,rIBV噬斑直径平均值为1.21±0.22 mm,IBV-Δ3505-3540噬斑直径平均值为0.94±0.09 mm,相差0.27 mm,说明3505-3540 nt的缺失导致了IBV致病力的下降; (2)rIBV与IBV-Δ3505-3540分别感染H1299细胞和Vero细胞0 h-48 h内生长曲线变化趋势相同。相同测定时间点IBV-Δ3505-3540的TCID50均低于rIBV;24 h时,两种病毒TCID50均达峰值,但前者的TCID50值约为后者的1/10,表明3505-3540 nt的缺失显著减低了IBV的生长速率; (3)两种病毒分别感染H1299细胞24 h后提取RNA,使用RT-PCR检测IBV N的RNA表达量,与rIBV相比,IBV-Δ3505-3540感染后IBV N的RNA表达量下降; (4)Western blot检测两种病毒分别感染H1299细胞12 h、16 h、20 h后IBV N的蛋白表达量,与rIBV相比,IBV-Δ3505-3540感染后三个时间点IBV N的蛋白表达量均下降; (5)Western blot检测rIBV与IBV-Δ3505-3540感染H1299细胞12 h、16 h、20 h后IFN-β蛋白的表达量,在相同感染条件下,IBV-Δ3505-3540感染后细胞中的IFN-β蛋白表达量与rIBV感染后细胞中IFN-β蛋白表达量相比无明显差异。以上研究结果表明,IBV类木瓜蛋白酶1 C端保守区序列并非病毒复制所必需,但PL1pro C的缺失会导致病毒复制水平下降,PL1pro C的存在有利于病毒复制。PL1pro C缺失导致的病毒复制减弱与β干扰素介导的先天免疫反应无明显相关性。 2.转录组数据分析及验证 (1)IBV-Δ3505-3540和rIBV感染H1299细胞24 h后,共1851个基因有差异表达,其中上调的基因个数为907,下调的基因个数为944; (2)差异表达基因在KEGG数据中得到注释的有638个,涉及参与细胞过程、环境信息处理、人类疾病、有机系统、遗传信息处理5大网络的通路共23条; (3)选择差异倍数较大的基因,通过qPCR在mRNA水平上进行检测。结果显示,感染IBV-Δ3505-3540 24 h后,H1299细胞中RNA降解相关基因SKIV2L(SKI2 subunit of superkiller complex)、ZCCHC7(Zinc finger CCHC-type containing7)、EXOSC1(Exosome component 1)和PARN(Poly(A)-specific ribonuclease)的mRNA表达量分别是rIBV感染后细胞中表达量的2.103、2

关键词：禽传染性支气管炎病毒反向遗传学类木瓜蛋白酶1 病毒复制转录组分析

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禽传染性支气管炎病毒B、T细胞抗原表位EpiW-GST多肽疫苗研究

禽传染性支气管炎病毒B、T细胞抗原表位EpiW-GST多肽疫苗研究

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作者：汪雪四川农业大学

学位级别：硕士

禽传染性支气管炎是危害养禽业的重大传染病之一,它是由冠状病毒科冠状病毒属的禽传染性支气管炎病毒(IBV)引起的一种急性高度接触性传染病,IBV在复制过程中很容易发生变异,血清型多,且各型之间交叉保护力弱,所以传统的灭活疫苗和弱毒... 详细信息

禽传染性支气管炎是危害养禽业的重大传染病之一,它是由冠状病毒科冠状病毒属的禽传染性支气管炎病毒(IBV)引起的一种急性高度接触性传染病,IBV在复制过程中很容易发生变异,血清型多,且各型之间交叉保护力弱,所以传统的灭活疫苗和弱毒疫苗还需改进。表位肽疫苗是一种纯粹抗原性疫苗,它安全、稳定,对多种血清型有交叉保护,已成为未来疫苗发展的重要途径之一。本研究采用本实验室前期设计的EpiW序列即包含了IBVB,T细胞抗原表位的一段基因序列为基础材料,对EpiW多肽进行生物信息学的验证分析,结果表明:目的片段保持了较高的同源性;其亲水性、抗原指数性和表面可能性较高;表位之间的连接序列(linker)不会干扰表位的独立性,可被切割成预计大小片段,保证了表位加工和递呈;表位肽主要位于重组蛋白结构表面,便于和抗原呈递分子结合,从理论上保证实验设计的准确性。将EpiW序列片段经过PCR定向克隆至原核表达载体pGEX-4T-1,构建含IBVB,T细胞抗原表位序列EpiW的原核表达载体pGEX-EpiW,并经过PCR和酶切鉴定基因克隆正确后转化大肠杆菌感受态细胞BL21,筛选出阳性克隆,诱导表达并取产物进行分析。结果表明,EpiW基因片段获得了融合表达。利用GST谷胱甘肽凝胶,纯化了相应的抗原表位多肽EpiW-GST,并将其作为包被抗原,检测IBV标准阳性血清,初步研究表明抗原表位多肽能和阳性血清产生免疫反应;进一步采用Western blot分析表明,该蛋白能与标准阳性血清发生特异性反应,证明该蛋白具有生物学活性。为了评价多肽疫苗的免疫效果,将纯化的抗原表位融合多肽EpiW-GST配以弗氏佐剂进行动物免疫试验,并以灭活苗、GST和PBS为试验对照组,细胞免疫采用流式细胞仪(FACS)对免疫鸡外周血中CD4+、CD8+T淋巴细胞数进行检测,IBV特异性抗体采用ELISA法进行检测,并进行攻毒试验。结果表明:EpiW-GST能有效激发鸡体特异性体液和细胞免疫,EpiW-GST多肽组检测到特异性抗体,与对照组差异显著(P＜0.05)。EpiW-GST多肽疫苗免疫后能刺激CD4+、CD8+T淋巴细胞亚类水平增高,与对照组差异显著(P＜0.05)。攻毒试验表明,EpiW-GST多肽保护效果较好,略低于灭活苗。本研究进行了IBV多肽疫苗免疫原性的研究,为传染性支气管炎的多肽疫苗和血清学抗体诊断的研制提供了一种基础材料。

关键词：禽传染性支气管炎病毒 B,T细胞抗原表位多肽疫苗免疫原性

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禽传染性支气管炎病毒多基因串联表位抗原的构建表达与ELISA方法初探

禽传染性支气管炎病毒多基因串联表位抗原的构建表达与ELISA方法...

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作者：鲁丹四川农业大学

学位级别：硕士

禽传染性支气管炎(Avian Infectious Bronchitis,IB)是由禽传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)引起的鸡的一种急性、高度接触性的传染病。IBV主要免疫原是三种结构蛋白：纤突蛋白S1、膜蛋白M和核蛋白N,常用于IBV抗体... 详细信息

禽传染性支气管炎(Avian Infectious Bronchitis,IB)是由禽传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)引起的鸡的一种急性、高度接触性的传染病。IBV主要免疫原是三种结构蛋白：纤突蛋白S1、膜蛋白M和核蛋白N,常用于IBV抗体检测。IBV抗体检测方法很多,主要有血凝抑制试验(HI)、中和试验(NT)、对流免疫试验(CIE)、琼脂扩散试验(AGP)、酶联免疫吸附试验(ELISA)。由于IBV血清型的多样性与变异性,再加上病毒提纯难度大,使得现在的IBV抗体检测方法不是灵敏度低就是成本高,本课题设计了IBV多表位抗原,通过构建、鉴定与原核表达,初步建立了以多表位蛋白为抗原的IBV间接ELISA检测方法。 1、利用生物信息学软件分析了IBV M41毒株S1、M、N结构蛋白的二级结构、亲水性、抗原性、表面可能性,以及不同毒株间的同源性。综合考虑以上各方面因素,结合文献报道,共筛选出IBV抗原表位4段D1-D4 (S1:221-356,M:165-200,N:118-270,913-1200)。利用柔性肽将4个片段依次串联成多表位抗原D。分析表明,设计的IBV多表位抗原基因D具有有良好的亲水性、柔性及抗原性等。并成功构建了IBV多表位抗原基因,经PCR、酶切、测序鉴定正确。 2、IBV多表位抗原在大肠杆菌中的表达,将IBV多表位抗原基因用BamHI和XhoI双酶切后克隆入原核表达载体pGEX-4T-1,转化*** BL21,采用IPTG进行诱导,SDS-PAGE鉴定表明,多表位抗原大部分在上清中融合表达,同时也存在包涵体形式,分子量大小约为63KD,通过优化重组质粒的表达条件,多表位蛋白表达的最佳IPTG诱导物浓度为0.5mmol/L,诱导时间为5h,诱导温度为37℃,表达蛋白占上清中总蛋白量的12%。Western-blots显示,该融合蛋白能与抗IBV阳性血清发生特异性反应。 3、以纯化的原核表达的多表位抗原蛋白为抗原包被酶标板,筛选出多表位抗原包被浓度为20μg/mL,抗体稀释度1：40,酶标二抗(HRP标记兔抗鸡IgG),稀释度1：2000,血清样品阴阳性临界值为0.084。初步建立了以多表位蛋白为抗原的IBV间接ELISA检测方法。

关键词：禽传染性支气管炎病毒多表位抗原原核表达、ELISA检测

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禽传染性支气管炎病毒核衣蛋白SR区域精氨酸残基对病毒复制的影响

禽传染性支气管炎病毒核衣蛋白SR区域精氨酸残基对病毒复制的影响

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作者：李杨长江大学

学位级别：硕士

禽传染性支气管炎病毒(Avian infectious bronchitis virus,IBV)引起鸡的一种急性、高度接触性呼吸道传染病,给全球的养禽业带来重大经济损失。IBV属于冠状病毒科gamma冠状病毒属,其基因组为正单链RNA,编码纤突蛋白(Spike glycoprotein... 详细信息

禽传染性支气管炎病毒(Avian infectious bronchitis virus,IBV)引起鸡的一种急性、高度接触性呼吸道传染病,给全球的养禽业带来重大经济损失。IBV属于冠状病毒科gamma冠状病毒属,其基因组为正单链RNA,编码纤突蛋白(Spike glycoprotein,S)、包膜蛋白(Envelope protein,E)、膜蛋白(Membrane protein,M)、核衣壳蛋白(Nucleocapsid protein,N)4种主要结构蛋白。其中,N蛋白由409个氨基酸组成,是一种高碱性磷酸化蛋白,在病毒RNA复制、蛋白翻译、粒子形成、免疫调控等过程中发挥重要作用。结构上,IBV-N蛋白包含N和C端两个功能域,在它们之间存在一段富含丝氨酸(S)和精氨酸(R)的序列(161-217氨基酸),被称为SR区。据报道,SR区域参与SARS-Co V N蛋白的多聚化,在鼠肝炎病毒(MHV)中与非结构蛋白3互作,但其在IBV复制过程中的作用未明。本研究利用突变和反向遗传学技术,对SR区中精氨酸残基影响IBV复制的作用进行了研究。主要研究结果如下:(1)IBV反向遗传学研究结果显示,整个和部分SR区域的缺失(Δ161-217aa,Δ193-217aa和Δ209-217aa)不能拯救出病毒,说明IBV-SR区为IBV复制所必需。(2)为了研究SR区域精氨酸残基对病毒复制的影响,将精氨酸(R)突变为丙氨酸(A),分别构建了含1、2、4个点突变的突变体,取名为R162A、R164A、R167A、M-2R/A(R178A/R182A)、R-4R/A(R182A/R186A/R188A/R189A)。另外,用SARS-Co V的SR区取代IBV-SR区(161-191氨基酸),构建相应的突变体。通过IBV反向遗传学研究,发现均可获得病毒。结果表明,这些精氨酸残基并非IBV复制所必需,SARS-Co V的SR区可替代IBV-SR区行使其功能。(3)噬斑分析结果显示,r IBV、R162A、R164A、和R167A形成噬斑的平均直径无明显差异,表明SR区域162、164、167精氨酸残基的改变对病毒的致病性不产生明显影响或影响不大。但突变体M-2R/A形成的噬斑直径明显小于r IBV,说明同时突变第178和182位精氨酸残基显著降低了IBV致病性;同时突变R182、R186、R188和R189也影响IBV的致病性。另外,用SARSCo V的SR区取代IBV-SR区导致噬斑变小,表明IBV-N蛋白的SR区域功能相对保守,能够被SARS的SR区域取代。(4)为了探究SR区域精氨酸残基对病毒复制与转录的影响,RT-q PCR检测病毒Vero感染细胞中基因组负链RNA和S蛋白的亚基因组(sgm)RNA的合成量,结果发现,感染20 h之后的细胞中,突变体R-4R/A和M-2R/A的负链RNA合成量分别为r IBV感染的0.49和0.12倍,S蛋白sgm RNA合成量分别为0.44倍和0.07倍,而突变体SARS-SR的负链RNA和S蛋白的sgm RNA合成量分别为r IBV的1.77和1.09倍。这些结果表明,4个位点的精氨酸残基的突变(R182A/R186A/R188A/R189A)和2个位点的精氨酸残基的突变(R178A/R182A)均能导致IBV基因组RNA和sgm RNA的合成量减少,但后者对IBV复制的抑制作用更强;与之相反,用SARS-Co V的SR区31个氨基酸取代IBV-SR区161-191位氨基酸能增加IBV基因组RNA和sgm RNA的合成量,促进IBV的复制。(5)Western blot检测病毒感染不同时间段N和S蛋白的表达量,结果表明,在感染12、16和20小时,突变体R-4R/A感染细胞中的N蛋白的表达量分别为r IBV感染细胞中的0.28、0.48和0.41倍;M-2R/A感染细胞中的N蛋白的表达量分别为r IBV感染细胞中的0.17、0.07和0.24倍;而突变体SARSSR感染细胞中的N蛋白表达量分别为r IBV感染细胞中的7.68、1.95和0.96倍。同样地,Western blot检测病毒S蛋白的表达量,发现在感染16和20小时时,突变体R-4R/A和M-2R/A感染细胞中的S蛋白表达量均减少,但M-2R/A的影响更显著。在感染16时,突变体SARS-SR感染细胞中的S蛋白显著高于r IBV感染细胞中的表达量。这些结果表明,4个位点的精氨酸残基的突变(R182A/R186A/R188A/R189A)和2个位点的精氨酸残基的突变(R178A/R182A)均能导致IBV-N和S蛋白的表达量减少,但后者对IBVN和S蛋白合成的抑制作用更强;与之相反,用SARS-Co V的SR区31个氨基酸取代IBV-SR区

关键词：禽传染性支气管炎病毒 SR区域反向遗传学精氨酸病毒复制

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禽传染性支气管炎病毒N蛋白的T细胞抗原表位多肽及其应用

禽传染性支气管炎病毒N蛋白的T细胞抗原表位多肽及其应用

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作者：张国中覃一峰赵静赵烨杨慧明 100193 北京市海淀区圆明园西路2号

本发明提供禽传染性支气管炎病毒N蛋白的T细胞抗原表位多肽及其应用，属于表位多肽疫苗制备技术领域。本发明根据IBV的N蛋白氨基酸序列，设计一系列覆盖全长氨基酸序列的重叠肽段，将这些重叠多肽分别刺激淋巴细胞，检测IBV特异性T细胞... 详细信息

标准号: CN113105531A

本发明提供禽传染性支气管炎病毒N蛋白的T细胞抗原表位多肽及其应用，属于表位多肽疫苗制备技术领域。本发明根据IBV的N蛋白氨基酸序列，设计一系列覆盖全长氨基酸序列的重叠肽段，将这些重叠多肽分别刺激淋巴细胞，检测IBV特异性T细胞受多肽刺激后分泌IFN‑γ的水平，初步筛选出功能性T细胞抗原表位多肽，将该功能性T细胞抗原表位多肽分别刺激免疫鸡脾脏淋巴细胞，通过IFN‑γ胞内细胞因子染色试验获得能有效诱导CD8⁺T淋巴细胞分泌IFN‑γ的肽段。本发明获得的抗原表位多肽具有强免疫原性，可用于制备IBV多表位疫苗，安全性高，特异性好，在IBV的防控工作中具有潜在的应用价值。

关键词：多肽分泌刺激禽传染性支气管炎病毒淋巴细胞全长氨基酸序列抗原表位多肽脾脏淋巴细胞疫苗制备技术氨基酸序列多表位疫苗强免疫原性表位多肽初步筛选染色试验细胞因子免疫鸡潜在的重叠肽可用制备肽段应用诱导检测覆盖

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禽传染性支气管炎病毒N蛋白的T细胞抗原表位多肽及其应用

禽传染性支气管炎病毒N蛋白的T细胞抗原表位多肽及其应用

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作者：张国中覃一峰赵静赵烨杨慧明 100193 北京市海淀区圆明园西路2号

标准号: CN113105531B

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北京地区禽传染性支气管炎病毒分子变异机制研究

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中国农业科学 1999年第4期32卷 75-80页

作者：李华杨汉春中国农业大学动物医学院

从北京地区传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）肾病变分离株ＢＪ１、ＢＪ２、ＢＪ３株中利用ＲＴ－ＰＣＲ成功扩增出１０５４ｂｐ纤突蛋白Ｓ１基因高变区。将３段Ｓ１基因分别克隆到ｐＵＣ１９质粒中，对３个重组阳性质粒进行双向测序，获得... 详细信息

从北京地区传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）肾病变分离株ＢＪ１、ＢＪ２、ＢＪ３株中利用ＲＴ－ＰＣＲ成功扩增出１０５４ｂｐ纤突蛋白Ｓ１基因高变区。将３段Ｓ１基因分别克隆到ｐＵＣ１９质粒中，对３个重组阳性质粒进行双向测序，获得３个分离株Ｓ１基因高变区的序列。将得到的序列与标准株Ｍ４１、Ｂｅａｕｄｅｔｅ株和疫苗株Ｈ１２０及广东地方分离株Ｄ４１株进行核苷酸和氨基酸同源性比较分析，并进一步推导它们的蛋白二级结构进行比较。结果表明，３株分离株与Ｍ４１株的核酸碱基序列和氨基酸序列同源性比与Ｈ１２０株和Ｂｅａｎｄｅｔｅ株的高，而蛋白二级结构却与Ｈ１２０疫苗株最为相近，暗示核酸碱基序列差异与病毒抗原决定簇的二级结构变化进而导致血清型变化三者之间的复杂关系。

关键词：禽传染性支气管炎病毒纤突蛋白S1基因 RT-PCR 分子变异

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中国禽传染性支气管炎病毒的遗传演化及时空传播分析

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畜牧兽医学报 2023年第6期54卷 2543-2554页

作者：范文胜刘思伽邱深本黄爱芳王艳刘敏芳梅敏敏陈新亮韦平磨美兰广东科贸职业学院动物科技学院广州510430 广西大学动物科学技术学院南宁530004

对从GenBank数据库下载的所有传染性支气管炎病毒(infectious bronchitis virus,IBV)中国分离株之N基因序列进行分析,旨在探索其遗传变异规律和时空传播情况。通过生物信息学软件MEGA 6.0、RDP 4.95、SimPlot 3.5.1、BEAST v1.10.4、jmo... 详细信息

对从GenBank数据库下载的所有传染性支气管炎病毒(infectious bronchitis virus,IBV)中国分离株之N基因序列进行分析,旨在探索其遗传变异规律和时空传播情况。通过生物信息学软件MEGA 6.0、RDP 4.95、SimPlot 3.5.1、BEAST v1.10.4、jmodeltest 2.1.7、Tracer v1.7.1、TempEst v1.5.1、FigTree v1.4.3以及SpreaD3 v0.9.7等对分离株分别进行系统进化树、基因重组、毒株溯源、种群动态和时空传播分析。系统进化树分析显示,国内IBV毒株分为6种基因型,以LX4型为主;重组分析发现,1株四川分离株N基因存在重组现象;贝叶斯最大分支置信树分析显示,中国IBV最可能起源于20世纪30年代初的辽宁省。贝叶斯谱系地理学分析显示,IBV毒株在国内存在多条传播路径并形成了3个流行中心:东北地区(黑龙江、辽宁和吉林)、华北和华东地区(河北、山东和江苏)以及华南地区(广东、广西),其中,山东最可能成为IBV的毒株来源库。本研究揭示了中国IBV的起源及其传播途径,N基因存在基因重组现象,提示有必要加强分离株N基因的分析,持续开展系统的分子流行病学研究。

关键词：禽传染性支气管炎病毒遗传变异基因重组起源时空传播

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禽传染性支气管炎病毒一步法RT-PCR检测方法的建立及应用

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湖北畜牧兽医 2014年第3期35卷 16-17页

作者：潘志刚李军港山东省烟台市莱山区动物卫生监督所山东烟台264000

为建立一种快速检测禽传染性支气管炎病毒(Infectiousbronchitisvirus,IBV)病原的方法,根据GenBank上的禽传染性支气管炎病毒基因组序列,设计1对引物,建立了检测IBV的一步法RT-PCR方法,该方法对20份疑似传染性支气管炎(Infectiousbronch... 详细信息

为建立一种快速检测禽传染性支气管炎病毒(Infectiousbronchitisvirus,IBV)病原的方法,根据GenBank上的禽传染性支气管炎病毒基因组序列,设计1对引物,建立了检测IBV的一步法RT-PCR方法,该方法对20份疑似传染性支气管炎(Infectiousbronchitis,IB)病料、传染性法氏囊病毒(Infectiousbursaldiseasevirus,IBDV)、新城疫病毒(Newcastaldiseasevirus,NDV)进行检测,结果仅IBV为阳性,IBDV、NDV均为阴性。该一步法RT-PCR方法具有良好的特异性、灵敏性和重复性,最低可检测出约4pg的IBVRNA,将为IBV的病原检测及分子流行病学调查等提供早期快速的诊断方法。

关键词：禽传染性支气管炎病毒检测

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