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66 篇 期刊文献
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3 篇 医学
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主题

155 篇 禽传染性支气管炎...
17 篇 s1基因
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机构

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34 篇 四川大学
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7 篇 浙江大学
5 篇 华南农业大学
5 篇 广西大学
5 篇 四川大学生命科学...
4 篇 河南科技大学
4 篇 中国动物卫生与流...
3 篇 河北科技师范学院
3 篇 南京农业大学
3 篇 河南科技学院
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3 篇 中山大学
3 篇 华中农业大学
2 篇 中国农业科学院家...
2 篇 黑龙江八一农垦大...

作者

60 篇 王红宁
27 篇 周生
17 篇 柳萍
17 篇 黄勇
15 篇 杨鑫
15 篇 唐梦君
11 篇 张毅
10 篇 胡慧琼
10 篇 周英顺
10 篇 阳泰
9 篇 李玉玲
8 篇 汪雪
8 篇 余祖华
8 篇 周泷
7 篇 周继勇
7 篇 郭自成
7 篇 方守国
7 篇 杨帆
7 篇 廖娟
7 篇 李晓英

语言

190 篇 中文

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禽传染性支气管炎病毒S1基因在毕赤酵母中表达的研究

禽传染性支气管炎病毒S1基因在毕赤酵母中表达的研究

引用

中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛

作者：余祖华王红宁丁轲河南科技大学动物科技学院河南洛阳 471003 四川农业大学大学动物科技学院四川雅安 625014 四川大学生命科学学院四川大学动物疾病防控生物工程研究中心四川成都 610064

本试验根据GeneBank已公布的IBV株S1基因序列及pPIC9K表达载体序列,设计一对IBVS1基因表达片段的PCR引物,用RT-PCR方法扩增出长度为1566bp,5'端不含信号肽序列,3'端添加了终止密码子的IBV S1基因表达片段。用限制性内切酶SnaB ... 详细信息

本试验根据GeneBank已公布的IBV株S1基因序列及pPIC9K表达载体序列,设计一对IBVS1基因表达片段的PCR引物,用RT-PCR方法扩增出长度为1566bp,5'端不含信号肽序列,3'端添加了终止密码子的IBV S1基因表达片段。用限制性内切酶SnaB Ⅰ和Not Ⅰ将S1基因和裁体pPIC9K酶切回收后连接,构建了重组表达载体pPIC9K-S1。用限制性内切酶Bgl Ⅱ将表达质粒pPIC9K-S1线性化,然后用电转化的方法导入毕赤酵母GS115,在MD平板上生长的转化子经过PCR鉴定和表型筛选后,获得了整合型阳性重组菌株GS115/pPIC9K-S1 His+Muts。将重组菌株在1％的甲醇中进行诱导分泌表达,并对表达产物进行SDS-PAGE、Western blot分析,结果表明,IBV S1基因在毕赤酵母中成功获得了表达,表达蛋白的分子量约为76KD,能与IBV阳性血清特异性结合,表达的蛋白占上清中总蛋白量的12.5％。本研究表达的IBV S1蛋白可作为制备IB诊断抗原、基因工程疫苗的基础材料,对IB的诊断防治有重要的学术价值和应用价值。

关键词：禽传染性支气管炎病毒毕赤酵母分泌表达基因序列

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禽传染性支气管炎病毒RT-LAMP检测方法的建立和应用

禽传染性支气管炎病毒RT-LAMP检测方法的建立和应用

引用

中国畜牧兽医学会2011学术年会

作者：罗鸿斌薛春宜陈峰覃健萍毕英佐曹永长中山大学生命科学学院有害生物控制与资源利用国家重点实验室广东广州 510006 华南农业大学动物科学学院广东广州 510642 广东温氏食品集团有限公司广东新兴 527400

本研究建立了敏感、特异、简便的RT-LAMP检测IBV病毒的方法，并且将简并引物引入其中以增强检测的特异性。RT-LAMP还是漏检了病毒分离鉴定为阳性的1份样品，通过测序发现病毒基因组在引物位置没有发生突变，分析可能是由于样品中病毒含... 详细信息

本研究建立了敏感、特异、简便的RT-LAMP检测IBV病毒的方法，并且将简并引物引入其中以增强检测的特异性。RT-LAMP还是漏检了病毒分离鉴定为阳性的1份样品，通过测序发现病毒基因组在引物位置没有发生突变，分析可能是由于样品中病毒含量低于检测极限。Pre-N-RTLAMP漏检了3株IBV毒株，出现假阴性，这是很大的缺陷。经过基因序列分析，这3株毒株的核苷酸位点发生了点突变，与引物Blc (BIP=Blc+B2)错配。总之，本研究建立的RT-LAMP方法，适用于简易实验室和田间检测。

关键词：禽传染性支气管炎病毒病毒检测 RT-LAMP法临床应用

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禽传染性支气管炎病毒H120与Beau-p65株全基因组序列分析

禽传染性支气管炎病毒H120与Beau-p65株全基因组序列分析

引用

中国畜牧兽医学会2016年学术年会、中国畜牧兽医学会禽病学分会第十八次学术研讨会

作者：周泷王红宁左磊杨鑫四川大学

引言传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)属于冠状病毒科、尼多病毒目,全基因组约为27.6 Kb不分节段、单股正链的RNA病毒,目前,IB没有有效的治疗药物,疫苗接种是控制该病的主要方法。IBV H120是世界上广泛使用的弱毒... 详细信息

引言传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)属于冠状病毒科、尼多病毒目,全基因组约为27.6 Kb不分节段、单股正链的RNA病毒,目前,IB没有有效的治疗药物,疫苗接种是控制该病的主要方法。IBV H120是世界上广泛使用的弱毒活疫苗,然而H120只能通过鸡胚培养。Beau-p65是IBV毒株在Vero细胞连续传代形成细胞适应毒株,比较H120与Beau-p65株全基因组序列,分析Beau-p65株适应细胞机理有重要意义。材料和方法将H120 (GenBank:GU393335.1)和Beau-p65 (GenBank:DQ001339.1)进行全基因组序列比对,

关键词：全基因组序列分析禽传染性支气管炎病毒 Beau-p65

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禽传染性支气管炎病毒RT-PCR检测试剂盒的研制与应用

禽传染性支气管炎病毒RT-PCR检测试剂盒的研制与应用

引用

中国畜牧兽医学会禽病分会第十三次学术研讨会

作者：潘盛王红宁周生胡慧琼黄勇白天李晓英唐梦君张毅四川农业大学动物科技学院四川雅安625014 四川农业大学动物科技学院四川雅安625014 四川大学"985工程"西南资源环境与灾害防治科技创新平台成都610065

本研究根据Genbank上禽传染性支气管炎病毒的3abc基因设计、合成一对引物,建立IBV一步法RT-PCR检测IBV,并在此基础上组装成试剂盒,用于IBV的检测.实验结果表明该试剂盒对不同IBV参考株和国内分离株均能特异性地扩增出的条带,而对鸡其他... 详细信息

本研究根据Genbank上禽传染性支气管炎病毒的3abc基因设计、合成一对引物,建立IBV一步法RT-PCR检测IBV,并在此基础上组装成试剂盒,用于IBV的检测.实验结果表明该试剂盒对不同IBV参考株和国内分离株均能特异性地扩增出的条带,而对鸡其他相关病原体的扩增结果均为阴性;该试剂盒最低能检测出10-3ng/μl的IBV RNA模板;重复性实验结果表明,该试剂盒具有较好的重复性;保存期结果表明在规定条件下保存至6个月时,其敏感性仍未降低;对人工感染病料的检测结果表明,该试剂盒有着较高的检出率.

关键词：禽传染性支气管炎病毒 RT-PCR检测试剂盒

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禽传染性支气管炎病毒M基因在毕赤酵母中表达与蛋白反应活性检测

禽传染性支气管炎病毒M基因在毕赤酵母中表达与蛋白反应活性检测

引用

中国畜牧兽医学会禽病学分会第十四次学术研讨会

作者：廖娟王红宁田浪阳泰张毅四川农业大学动物医学院四川省自贡市畜牧局四川大学生命科学学院四川大学动物疾病防控生物工程研究中心四川大学“985工程”西南资源环境与灾害防治科技创新平台

前言:IBV的M蛋白比较保守,在病毒粒子中所占的比例较大,同时具有膜蛋白的典型特点,是重要的免疫原基因,这些特性为M蛋白作为IB的诊断抗原提供了重要的分子生物学及免疫学依据。毕赤酵母表达系统是一类能以甲醇为唯一碳源和能量来源的酵... 详细信息

前言:IBV的M蛋白比较保守,在病毒粒子中所占的比例较大,同时具有膜蛋白的典型特点,是重要的免疫原基因,这些特性为M蛋白作为IB的诊断抗原提供了重要的分子生物学及免疫学依据。毕赤酵母表达系统是一类能以甲醇为唯一碳源和能量来源的酵母菌,具有发酵工艺成熟、易于扩大工业化、培养基成本低廉、可对外源蛋白进行翻译后修饰加工等优点,目前许多诊断用的抗原及治疗用的疫苗都采用该系统进行表达。本研究探讨了IBV M基因在毕赤酵母表达系统中分泌表达的可行性。

关键词：禽传染性支气管炎病毒毕赤酵母重组菌株活性检测

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禽传染性支气管炎病毒多表位核酸疫苗的设计与构建

禽传染性支气管炎病毒多表位核酸疫苗的设计与构建

引用

第三届全国核酸疫苗学术研讨会

作者：阳泰王红宁汪雪曾瑜红张有峰张鹏举李玉玲四川大学生命科学学院，四川大学动物疾病防控生物工程研究中心，四川成610064 四川大学生命科学学院，四川大学动物疾病防控生物工程研究中心，四川成都610064 四川农业大学动物医学院四川雅安 625014

位核酸疫苗能被多种遗传背景的MHC分子识别、结合，从而得到高效的递呈;在细胞免疫方面具有独特的优势;可以有效应对病原微生物的变异和免疫反应中的诸多不利因素，多表位核酸疫苗可能成为疫苗研究的突破口，为了探讨多表位核酸疫苗防... 详细信息

位核酸疫苗能被多种遗传背景的MHC分子识别、结合，从而得到高效的递呈;在细胞免疫方面具有独特的优势;可以有效应对病原微生物的变异和免疫反应中的诸多不利因素，多表位核酸疫苗可能成为疫苗研究的突破口，为了探讨多表位核酸疫苗防治禽传染性支气管炎病(IB)的可能性，本研究以本实验室鸡传染性支气管炎SAIBK株全基因组序列为材料，采用Lasergene软件对IBV结构蛋白进行二级结构分析，抗原表位分析采用Kyte-Doolittle法分析氨基酸序列亲水性、Emini法预测特定区域位于蛋白质表面的可能性、Jameson-Wolf法预测各结构蛋白的抗原指数，综合分预测结果，有针对性的选择能获得最佳免疫保护目的表位：采用Sl糖基化B细胞表位保守序列E1和能有效产生保护性抗体滴S2 N端保守B细胞表位E2;以及能诱导CTL效应N核蛋白C端120残基，表位之间连接采用“AAY”氨基酸序列以提高表位被切割的效率，并通过Lasergene软件分析确保各表位之间独立和完整，将设计好多表位基因序列由上海旭冠生物合成，经过酶切定向克隆pVA×1核酸疫苗载体。并将多表位基因克隆至原核表达载体pGEX4T-1，经过IPTG诱导、超声破碎细胞、GST谷胱甘肽凝胶纯化上清成功获得了多表位纯化蛋白，将多表位纯化蛋白包被ELISA板，用IBV阳性多价血清检测其免疫原性，试验结果初步表明多表位纯化蛋白具有免疫原性，能和多价血清发生交叉反应。综合以上结果，我们初步构建了禽传染性支气管炎病毒多表位核酸疫苗，为研制高效、安全的IBV多表位核酸疫苗提供理论依据和基础材料。

关键词：禽传染性支气管炎病毒多表位核酸疫苗细胞免疫抗原指数

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禽传染性支气管炎病毒S1基因聚类分析及快速检测方法

禽传染性支气管炎病毒S1基因聚类分析及快速检测方法

引用

中国畜牧兽医学会家畜传染病分会第八次全国会员代表大会暨第15次学术研讨会

作者：张志坤王红宁周英顺姬高升四川大学生命科学学院动物疫病防控与食品安全四川省重点实验室生物资源与生态环境教育部重点实验室“985工程”西南资源环境与灾害防治科技创新平台四川成都望江路29号610064

本研究对genbank上登录的1154条禽传染性支气管炎病毒(IBV) S1基因全长聚类分析，分析结果表明，国内的分离株可分为三种基因型:mass型(w93、H120、Ma5为主要使用的疫苗株)、Ark型(jilin、JAAS),野生型(QXIBV、491、SAIBK、TW97-2)。分... 详细信息

本研究对genbank上登录的1154条禽传染性支气管炎病毒(IBV) S1基因全长聚类分析，分析结果表明，国内的分离株可分为三种基因型:mass型(w93、H120、Ma5为主要使用的疫苗株)、Ark型(jilin、JAAS),野生型(QXIBV、491、SAIBK、TW97-2)。分析结果显示，mass基因型及其突变株占44％大多为疫苗株;Ark基因型相对较少占16%;野生型占40%存在较多的强毒株如:QXIBV、491、SAIBK、TW97-2且流行较广。同时指出，本研究的检测方法可以对样品中的病毒进行初步分类，有利于对疫苗和感染强毒进行鉴别，还可以对IBV野毒感染的疫苗选择提供依据，因此本方法对IBV的防控有重要作用。

关键词：禽传染性支气管炎病毒基因表达聚类分析检测技术

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禽传染性支气管炎病毒S1、M、N基因真核表达质粒的构建及免疫原性研究

禽传染性支气管炎病毒S1、M、N基因真核表达质粒的构建及免疫原性...

引用

第六届全国会员代表大学暨第11次学术研讨会

作者：王红宁周生黄勇柳萍陈萍李晓英唐梦君潘盛白天四川农业大学动物科技学院动物预防医学生物工程实验室

本研究成功构建了禽传染性支气管炎病毒中国肾型分离株S1、M、N基因的真核表达质粒,并将真核表达质粒经肌肉注射途径免疫雏鸡,免疫后用间接ELISA检测特异性抗体。结果表明IBV S1、M、N基因真核表达质粒单独或混合免疫均可诱导鸡特异性... 详细信息

本研究成功构建了禽传染性支气管炎病毒中国肾型分离株S1、M、N基因的真核表达质粒,并将真核表达质粒经肌肉注射途径免疫雏鸡,免疫后用间接ELISA检测特异性抗体。结果表明IBV S1、M、N基因真核表达质粒单独或混合免疫均可诱导鸡特异性抗体产生。S1、M、N三基因质粒混合免疫比单基因质粒的免疫效果好,三基因质粒混合免疫攻毒保护率高于单基因质粒免疫。

关键词：禽传染性支气管炎病毒真核表达质粒间接ELISA检测免疫原性

来源：评论

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禽传染性支气管炎病毒中国四川株S1基因的克隆与序列分析

禽传染性支气管炎病毒中国四川株S1基因的克隆与序列分析

引用

中国畜牧兽医学会禽病学分会第十一次学术研讨会

作者：王红宁魏甬周生柳萍四川农业大学动物科技学院四川农业大学动物科技学院四川农业大学动物科技学院四川农业大学动物科技学院

本研究根据国际基因库(GenBank)已公布的禽传染性支气管炎病毒标准毒株(IBV M41)的基因组全序列设计了内、外两对引物。用外侧引物对7株IBV进行了S1基因RT-PCR扩增,其中IBV标准株M41、Mas以及四川分离株SAIB4、SAIB14SAIBwj均获得了长约... 详细信息

本研究根据国际基因库(GenBank)已公布的禽传染性支气管炎病毒标准毒株(IBV M41)的基因组全序列设计了内、外两对引物。用外侧引物对7株IBV进行了S1基因RT-PCR扩增,其中IBV标准株M41、Mas以及四川分离株SAIB4、SAIB14SAIBwj均获得了长约1.72 kb特异条带,分离株SAIB6、SAIB9未扩增出特异条带。扩增产物1:1000稀释后用内侧引物进行RT-套式PCR.7个毒株均得到长约1.62kb的特异性扩增条带。结果表明用RT-套式PCR扩增S1基因较RT-PCR具有更高的灵敏性。将SAIB4、SAIB14、SAIBwJ三个分离株的RT-PCR特异扩增产物插入到pUC18质粒.转化大肠杆菌DH5a.对克隆的基因片段进行序列测定。结果表明.SAIB14、SAIB1、SAlBwJ S1基因核苷酸序列与IBV M41标准株S1基因序列同源率分别为98.1%、84.0%、80.4%.相应的氪基酸序列同源率分别为98.1%、82.1%、81.6%。本研究已将从中国四川分离的3株。IBV S1在GenBank中注册,注册号为AF397527、AF397528和AF397529。

关键词：禽传染性支气管炎病毒 S1基因 RT-PCR RT-套式PCR 克隆序列分析

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一株禽传染性支气管炎病毒的分离鉴定及其灭活疫苗的初步研究

一株禽传染性支气管炎病毒的分离鉴定及其灭活疫苗的初步研究

引用

作者：金娟南京农业大学

学位级别：硕士

禽传染性支气管炎病毒(Infectious Bronchitis Virus,IBV)是冠状病毒科、冠状病毒属的代表毒株,为单股正链RNA病毒。在疾病流行过程中由于自然环境的压力和基因组的突变、重组等因素,IBV时常出现新的基因型和血清型,且不同基因型和血清... 详细信息

禽传染性支气管炎病毒(Infectious Bronchitis Virus,IBV)是冠状病毒科、冠状病毒属的代表毒株,为单股正链RNA病毒。在疾病流行过程中由于自然环境的压力和基因组的突变、重组等因素,IBV时常出现新的基因型和血清型,且不同基因型和血清型相互交叉,使该病的防控难度增加。目前IBV的防控仍然以疫苗接种为主,主要有弱毒疫苗和灭活疫苗。本课题以临床分离到的IBV野毒株为研究对象,进行了致病力和灭活疫苗效力探究,并对该毒株在受试鸡体内的感染规律进行了分析,以期对IBV的诊断和防控提供实践指导作用。 1.一株QX型IBV的分离鉴定本试验选择国内部分IBV流行严重地区2017年8月至2018年3月送检的22份疑似感染IBV的病料,使用鸡胚法从中分离得到一株病毒,并通过致鸡胚矮小试验、RT-PCR试验、电镜试验、S1基因序列分析和动物回归试验等对分离毒株进行鉴定。致鸡胚矮小试验显示分离毒株可使鸡胚发育不良,呈“侏儒胚”;RT-PCR试验显示分离毒株含有S基因的1700 bp条带和M基因的740 bp条带,证明分离毒株为IBV;电镜试验在分离毒株样品中观察到IBV病毒粒子;S1基因序列分析结果显示分离毒株属于QX型IBV;动物回归试验显示SPF鸡感染分离毒株后出现气管纤毛脱落且内壁出血、“花斑肾”和腺胃乳头消失或糜烂等症状,严重者出现死亡并呈现QX型IBV典型症状,故将其命名为RPVA0408,进而进行后续研究。 ***-PCR检测方法建立及应用为了提高分离毒株RPVA0408的检测效率,本试验针对其S1基因序列建立了 qRT-PCR(TaqMan探针)检测方法。结果显示,试验建立的qRT-PCR检测方法标准曲线为y=-3.387x+43.060,R2=0.999,扩增效率为97.4%,敏感性比普通PCR高1000倍,可检测到模板浓度为42.1 copies/μL,且重复性良好。拷贝数与EID50对应关系的试验结果显示,在稳定保存病毒液的前提下,拷贝数与EID50的线性关系为y=0.2492x+1.341×106(x为拷贝数,y为EID50),R2=0.9564,用拷贝数替代EID50,并将其应用于疫苗中抗原含量的标定,提高了疫苗生产效率。 3.分离毒株RPVA0408灭活疫苗的初步研究为了研究分离毒株RPVA0408的致病力和免疫原性,本试验对该毒株分别进行了致病性研究,病毒在鸡体内的分布和排泄,疫苗安全性研究和效力评价等。分离毒株对SPF鸡致病规律研究试验证明受试鸡感染分离毒株后泄殖腔拭子排毒持续21天,且排毒时间与攻毒剂量呈正相关;同一攻毒剂量条件下,分离毒株对3周龄SPF鸡所致的临床症状持续时间比9周龄SPF鸡更长,且造成的病理损伤更严重。RPVA0408制成灭活疫苗后的效力试验结果显示,不同病毒含量灭活疫苗的免疫效果差异较大;RPVA0408病毒液按水油比1:2制备灭活疫苗,灭活前病毒含量达到106.69EID50/0.1mL以上时,疫苗保护率即可以达到90%,且免疫后受试鸡血清HI抗体在2个月达到10.6log2,并在6个月的观察期内一直维持在较高水平,证明RPVA0408分离毒株具有良好的免疫原性。

关键词：实时荧光定量PCR 灭活疫苗 QX型分离与鉴定禽传染性支气管炎病毒

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