检索结果-内蒙古大学图书馆

畜牧兽医学报 2011年第9期42卷 1289-1294页

作者：石星明张晶赵妍王玫魏秀英胡顺磊全炎铭闫帅崔红玉王云峰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室哈尔滨150001

为获得分泌抗禽网状内皮增生症病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞,通过表达pET32a-gp90重组蛋白,以纯化的gp90蛋白为抗原,免疫BALB/c鼠,筛选分泌抗REV McAb的杂交瘤细胞株.经过细胞的融合及筛选,共获得能稳定分泌抗REV gp90的McAb细胞系2株,... 详细信息

为获得分泌抗禽网状内皮增生症病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞,通过表达pET32a-gp90重组蛋白,以纯化的gp90蛋白为抗原,免疫BALB/c鼠,筛选分泌抗REV McAb的杂交瘤细胞株.经过细胞的融合及筛选,共获得能稳定分泌抗REV gp90的McAb细胞系2株,分别命名为A9E8和B3F8.2株细胞培养上清的效价均在1:4×102以上,腹水效价均在1∶8×103以上.亚型鉴定结果表明,2株皆为IgG型,轻链均为k链;Western blot及间接免疫荧光结果显示,这2株杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体均能识别REV全病毒抗原,与其发生特异性反应,并且不与禽类其他病毒发生反应;病毒中和试验结果表明,获得的单克隆抗体均能REV临床分离株发生中和反应,具有较好的中和活性.利用制备的单克隆抗体建立了REV的间接免疫荧光检测方法,临床病料检测结果表明,该方法与病毒分离及PCR的检测结果基本一致,阴、阳性符合率分别为100％和90％.作者制备了针对REV gp90的McAb,为REV的快速诊断及抗原表位分析与鉴定等奠定了基础.

关键词：禽网状内皮增生症病毒 gp90基因单克隆抗体

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J亚群禽白血病病毒与禽网状内皮增生症病毒共感染对肉鸡生长和免疫功能的抑制作用

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兽医大学学报 2003年第3期23卷 211-213页

作者：王建新崔治中张纪元王增福陈本龙王锡乐山东农业大学动物科技学院山东泰安271018

1日龄肉鸡感染 J亚群禽白血病病毒 (AL V- J)以及共感染禽网状内皮增生症病毒 (REV)后 ,肉鸡生长发育明显受阻 ,体重增重明显下降 (P<0 .0 5 ) ,法氏囊、胸腺明显萎缩 (P<0 .0 5 ) ,在用新城疫疫苗免疫后 ,感染组血清中新城疫抗... 详细信息

1日龄肉鸡感染 J亚群禽白血病病毒 (AL V- J)以及共感染禽网状内皮增生症病毒 (REV)后 ,肉鸡生长发育明显受阻 ,体重增重明显下降 (P<0 .0 5 ) ,法氏囊、胸腺明显萎缩 (P<0 .0 5 ) ,在用新城疫疫苗免疫后 ,感染组血清中新城疫抗体效价显著低于对照组 (P<0 .0 5 ) ;在 AL V- J和 REV共感染后 ,这种抑制作用更为明显 (P<0 .0 1 )。AL V- J单独感染后 ,鸡对传染性法氏囊病病毒 (IBDV)弱毒疫苗免疫后的抗体反应与对照组没有明显差别 ,但 AL V- J与 REV的共感染可明显延缓鸡对

关键词： J亚群禽白血病病毒禽网状内皮增生症病毒共感染免疫抑制鸡

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禽网状内皮增生症病毒gp90基因真核表达及ELISA检测方法的建立

禽网状内皮增生症病毒gp90基因真核表达及ELISA检测方法的建立

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第八次学术研讨会

作者：石星明张晶魏秀英王玫赵妍胡顺磊蒿连微闫帅王云峰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

禽网状内皮增生症(Rctiiculoendoetheliosis,RE)是由禽网状内皮增生症病毒(Reticuloendoeheliosisvirus,REV)引起的一组综合症,该病主要侵害机体的免疫系统,导致机体免疫力下降而继发其他疾病,也能导致生物制品污染,给养禽业造成严重的... 详细信息

禽网状内皮增生症(Rctiiculoendoetheliosis,RE)是由禽网状内皮增生症病毒(Reticuloendoeheliosisvirus,REV)引起的一组综合症,该病主要侵害机体的免疫系统,导致机体免疫力下降而继发其他疾病,也能导致生物制品污染,给养禽业造成严重的经济损失。因此REV的危害已不容忽视,迫切需要RE的快速诊断方法。目前RE的诊断方法均具有一

关键词：禽网状内皮增生症病毒检测方法 ELISA 真核表达

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鸡传染性贫血病毒、网状内皮增生症病毒与禽白血病病毒基因芯片检测方法的建立

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华北农学报 2015年第6期30卷 91-96页

作者：苏霞朱瑞豪陈小玲杨丽聪周宏专徐福洲杨兵北京市农林科学院畜牧兽医研究所畜禽疫病防控技术北京市重点实验室北京100097

基于多重PCR技术,建立鸡传染性贫血病病毒(CAV)、禽网状内皮增生症病毒(REV)、禽白血病病毒禽(ALV)A、C、D亚群的基因芯检测方法。根据NCBI收录的鸡传染性贫血病毒(CIAV)、禽网状内皮增生症病毒(REV)与禽白血病病毒(ALV)A、C、D亚群参... 详细信息

基于多重PCR技术,建立鸡传染性贫血病病毒(CAV)、禽网状内皮增生症病毒(REV)、禽白血病病毒禽(ALV)A、C、D亚群的基因芯检测方法。根据NCBI收录的鸡传染性贫血病毒(CIAV)、禽网状内皮增生症病毒(REV)与禽白血病病毒(ALV)A、C、D亚群参考毒株的序列,设计合成特异性扩增引物及探针,将下游引物进行Cy3荧光标记,制备基因芯片;分别提取几种病毒的基因组DNA,进行PCR扩增后与探针进行杂交,荧光检测仪扫描并分析结果。结果表明:制备的芯片能够同时检测CIAV、REV与ALV A、C、D亚群,该方法对病毒的最低检测限为106copies/m L,特异性试验结果表明,该方法与NDV、MDV和IBDV均无交叉反应,可快速鉴别ALV、REV、CIAV。为今后在临床应用中快速鉴别诊断CIAV、REV与ALV A、C、D亚群提供了可行性。

关键词：鸡传染性贫血病毒禽网状内皮增生症病毒禽白血病病毒基因芯片

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禽网状内皮组织增殖病病毒PCR及RT-PCR检测方法的研究和p30主要抗原域的原核表达

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中国预防兽医学报 2006年第4期28卷 441-445页

作者：葛兆宏陆广富江苏畜牧兽医职业技术学院江苏泰州225300

根据***发表的一对引物,5'-CATACTGGAGCCAATGGTGTAAAGGGCAGA-3'(上游引物),5'-AATGTTGTAGCGAAGTACT-3'(下游引物),上游引物位于REV-SNV毒株LTR序列上游237bp到267bp,下游引物在499bp到517bp之间,扩增产物总长为281bp。以REV-T株感染的鸡胚成纤维细胞DNA作为PCR扩增模板,进行PCR扩增,提取病毒RNA进行RT-PCR,这两种方法均获得了禽网状内皮增生症T株的部分LTR序列,将其克隆入pGEM-TEasy克隆载体中,经测序,证实为禽网状内皮增生症T株的部分LTR序列,初步建立了REV的PCR和RT-PCR检测方法。人工合成了REVp30的主要抗原域,用构建成功的表达禽网状内皮增生症p30主要抗原域的原核表达载体pET-p30,转化大肠杆菌BL21,挑取阳性克隆培养,IPTG诱导后裂解菌体作SDS-PAGE分析,出现大小约25Ku的表达产物即融合蛋白TrxA-p30主要抗原域,经Westernblot验证融合蛋白具有REV特异的反应原性。采用常规表达条件:LB培养基,37℃培养,待菌生长至OD600为0.4h～0.6h,用终浓度为0.2mmol/L～0.8mmol/L的IPTG进行诱导,于37℃振荡培养4h～5h,均能高效表达。本研究为建立REV抗体的ELISA检测方法打下基础。

关键词：禽网状内皮增生症病毒 p30蛋白主要抗原域原核表达系统 Western blot

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禽网状内皮组织增殖病病毒PCR及RT-PCR检测方法的研究和p30主要抗原域的原核表达

禽网状内皮组织增殖病病毒PCR及RT-PCR检测方法的研究和p30主要抗...

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作者：葛菲菲南京农业大学

学位级别：硕士

根据MONA ***发表的一对引物，5’-CATACTGGAGCCAATGGTGTAAA GGGCAGA-3’（上游引物），5’-AATGTTGTAGCGAAGTACT-3’（下游引物），上游引物位于REV-SNV毒株LTR序列上游237nt到267nt，下游引物在499nt到517nt之间，扩增产物总长为281bp。以REV-T株感染的鸡胚成纤维细胞DNA作为PCR扩增模板，进行PCR扩增，提取病毒RNA进行RT-PCR，这两种方法均获得了禽网状内皮增生症T株的部分LTR序列，将其克隆入pGEM-T Easy克隆载体中，经测序，证实为禽网状内皮增生症T株的部分LTR序列，初步建立了REV的PCR和RT-PCR检测方法。人工合成了REV的主要抗原域p30，用构建成功的表达禽网状内皮增生症主要原域的原核表达载体pET-p30，转化大肠杆菌BL21，挑取阳性克隆培养，IPTG诱导后裂解菌体作SDS—PAGE分析，出现大小约30KD的表达产物即融合蛋白TrxA—p30，经Western—blot验证融合蛋白具有REV特异的反应原性。采用常规表达条件：LB培养基，37℃培养，待菌生长至OD600为0.4-0.6时，用终浓度为0.2-0.8mmol／L的IPTG进行诱导，于37℃振荡培养4-5h，均能高效表达。为建立REV抗体的ELISA检测方法打下基础。

关键词：禽网状内皮增生症病毒聚合酶链式反应反转录聚合酶链式反应 p30蛋白主要抗原域原核表达系统融合蛋白 Western-blot

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广西部分规模场禽网状内皮增生症流行病学调查

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上海畜牧兽医通讯 2016年第3期 28-29,31页

作者：胡杰骆永泉张步娴尹彦文莫胜兰屈素洁粟艳琼广西动物疫病预防控制中心 530001 贺州市动物预防控制中心

通过ELISA方法对广西6个规模场的874份血清样品进行禽网状内皮病毒抗体检测,结果发现血清抗体阳性率平均为79.63%;用PCR方法对6个规模场的18个批次的鸡痘疫苗和8个批次的禽马立克氏病疫苗进行禽网状内皮增生症病毒检测,结果18个批次的... 详细信息

通过ELISA方法对广西6个规模场的874份血清样品进行禽网状内皮病毒抗体检测,结果发现血清抗体阳性率平均为79.63%;用PCR方法对6个规模场的18个批次的鸡痘疫苗和8个批次的禽马立克氏病疫苗进行禽网状内皮增生症病毒检测,结果18个批次的鸡痘疫苗检测出1个批次为禽网状内皮增生症病毒阳性,8个批次的马立克氏病疫苗均未检测出禽网状内皮增生症病毒。

关键词： ELISA 禽网状内皮病毒抗体 PCR 禽网状内皮增生症病毒

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REV囊膜蛋白的原核表达、抗体制备及鉴定

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江西农业大学学报 2021年第5期43卷 1159-1166页

作者：朱丽霖王后坤陈雪阳高可丽方春梁雄燕杨玉莹长江大学动物科学学院湖北荆州434025

【目的】禽网状内皮增生症病毒(reticuloendothelial virus,REV)囊膜蛋白与细胞表面受体结合启动病毒感染,并在REV的复制、致病过程中具有重要作用。为探索REV囊膜蛋白相关生物学特性,研究获得了高效表达的禽网状内皮增生症病毒囊膜蛋白... 详细信息

【目的】禽网状内皮增生症病毒(reticuloendothelial virus,REV)囊膜蛋白与细胞表面受体结合启动病毒感染,并在REV的复制、致病过程中具有重要作用。为探索REV囊膜蛋白相关生物学特性,研究获得了高效表达的禽网状内皮增生症病毒囊膜蛋白,制备多克隆抗体。【方法】利用原核表达载体pET-28a和pGEX-6p-1表达REV囊膜蛋白gp90,并通过Ni2+亲和层析柱对融合蛋白REV-His-gp90进行纯化,纯化的蛋白免疫Balb/c小鼠,制备了多克隆抗体;纯化的REV-GST-gp90蛋白用于检测多克隆抗体效价。【结果】pET-28a-REV-gp90和pGEX-6p-1-REV-gp90表达质粒构建成功,通过SDS-PAGE验证蛋白能在大肠杆菌BL21菌株中表达;Western-blot检测结果显示制备的多克隆抗体具有良好的反应性和特异性;采用间接ELISA法检测抗血清效价为1∶64000;IFA结果显示,制备的多克隆血清能与REV特异性反应。【结论】研究制备的多克隆抗体效价高、特异性良好,为进一步开展REV囊膜蛋白的生物学特性研究及其特异性抗体应用奠定基础。

关键词：禽网状内皮增生症病毒原核表达囊膜蛋白多克隆抗体

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不同启动子表达载体的构建及其体外活性分析

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中国畜牧兽医 2014年第2期41卷 11-15页

作者：刘正伟李慧敏黄妙容郭凯王建丽李延鹏陈瑞爱华南农业大学广东广州510642 广东大华农动物保健品股份有限公司广东云浮527400

本研究以禽网状内皮增生症病毒(reticuloendotheliosis virus,REV)囊膜糖蛋白(envelope,env)基因作为报告基因,定量检测不同启动子在体外的转录活性,为研发马立克氏病病毒(Marek’s disease virus,MDV)活载体疫苗、选择适宜的启动子提... 详细信息

本研究以禽网状内皮增生症病毒(reticuloendotheliosis virus,REV)囊膜糖蛋白(envelope,env)基因作为报告基因,定量检测不同启动子在体外的转录活性,为研发马立克氏病病毒(Marek’s disease virus,MDV)活载体疫苗、选择适宜的启动子提供依据。本试验构建6个含不同启动子,且能表达env基因的重组质粒,并将构建好的重组质粒转染到鸡胚成纤维细胞中,通过间接免疫荧光试验和实时荧光定量PCR检测不同启动子的表达转录水平。研究证明6种启动子均能使env基因在体外获得表达,且不同启动子的转录活性不同。比较发现MDV自身启动子相对其他组启动子的转录活性较弱,pec启动子的转录活性最强。

关键词：禽网状内皮增生症病毒囊膜糖蛋白基因启动子活性分析

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2010-2012年广西鸡三种肿瘤病病毒的流行病学研究及其在商品马立克活疫苗中污染的检测

2010-2012年广西鸡三种肿瘤病病毒的流行病学研究及其在商品马立...

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作者：曾婷婷广西大学

学位级别：硕士

马立克氏病病毒(MDV)、禽白血病病毒(ALV)和网状内皮增生症病毒(REV)是引起鸡肿瘤的最常见病原。目前,临床中存在肿瘤病毒混合感染比较普遍的情况。通过对2010-2012年间16群主要来自广西的疑似肿瘤病的病鸡进行了剖检、肿瘤组织PCR检测... 详细信息

马立克氏病病毒(MDV)、禽白血病病毒(ALV)和网状内皮增生症病毒(REV)是引起鸡肿瘤的最常见病原。目前,临床中存在肿瘤病毒混合感染比较普遍的情况。通过对2010-2012年间16群主要来自广西的疑似肿瘤病的病鸡进行了剖检、肿瘤组织PCR检测、病毒分离鉴定及部分新鲜活体的可疑肿瘤组织病理组织学观察。PCR检测结果发现,16群可疑病鸡中7群为MDV单一感染(43.75%)、2群为ALV-J单一感染(12.5%)、3群为MDV和ALV-J混合感染(18.75%)、3群为MDV、ALV-J和REV混合感染(18.75%)及1群为MDV和ALV-D混合感染(6.25%)。说明近两年引起肉眼可见肿瘤病变的病原主要是MDV单一感染或MDV和ALV、REV混合感染。应用SPF鸡胚成纤维细胞(CEF)分离培养技术和接种病毒的细胞培养物间接免疫荧光试验(IFA)、分离株基因序列分析方法,获得了6株MDV-1,属超强毒MDV(vvMDV)或特超强毒MDV(vv+MDV)、5株ALV-J、1株初步鉴定为ALV-D和1株REV。其中1株MDV-1混合ALV-J的感染,1株MDV-1混合REV和ALV-J的感染。疑似ALV-D的毒株需要得到更多的序列才能确定含有哪些成分。取部分病料的新鲜活体制作病变组织的石蜡切片,在显微镜下观察到了MDV单一感染引起的淋巴细胞肿瘤和MDV和ALV-J混合感染引起的髓细胞瘤及淋巴细胞和髓细胞混合的肿瘤。由鸡肿瘤病毒引起的肿瘤组织病理变化与由鸡白痢沙门氏菌慢性感染引起的心脏肉芽肿和肝脏坏死组织病理变化存在明显差别。应用PCR方法对17个批次的商品MDV-1活疫苗和9枚SPF鸡胚进行了外源性ALV和REV的检测,结果均没有扩增出目的片段,初步说明所检样品中没有外源性ALV和REV污染。

关键词：鸡马立克氏病病毒禽白血病病毒禽网状内皮增生症病毒混合感染病毒分离鉴定 IFA序列分析组织病理学疫苗检测

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