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中国畜牧兽医学会2014年学术年会

作者：孔祥伟王世新王丹王海明孙淑红山东农业大学动物医学院

引言近年来,禽网状内皮组织增生病病毒（REV）基因片段或全基因整合进禽痘病毒（FPV）已成为关注的焦点。国内外陆续报道了FPV整合有REV前病毒基因序列,疫苗中整合有REV的长末端重复序列（LTR）片段或全基因序列,但近年来对其深入研究... 详细信息

引言近年来,禽网状内皮组织增生病病毒（REV）基因片段或全基因整合进禽痘病毒（FPV）已成为关注的焦点。国内外陆续报道了FPV整合有REV前病毒基因序列,疫苗中整合有REV的长末端重复序列（LTR）片段或全基因序列,但近年来对其深入研究及跟踪报道较少。本研究通过对2012-2014年国内外12个FPV疫苗株、3个火鸡痘及1个鸡痘野毒株中整合REV进行分离鉴定及其序列比较,以

关键词：禽网状内皮组织增生病病毒禽痘病毒疫苗株 FPV 痘病毒疫苗野毒株

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野鸭源禽网状内皮组织增生症病毒的分离与鉴定

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畜牧兽医学报 2013年第8期44卷 1277-1282页

作者：姜莉莉祁小乐高玉龙邓小芸柴洪亮张礼洲贠炳岭秦立廷王永强高宏雷王笑梅华育平中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室哈尔滨150001 东北林业大学野生动物资源学院哈尔滨150040 辽宁医学院畜牧兽医学院锦州121001

利用扩增禽网状内皮组织增生症病毒(REV)长末端重复序列(LTR)的特异性引物作为检测引物,对采集于吉林省某地健康野鸭的脏器样品进行PCR检测。阳性样品经DF1培养增殖,进行病毒的分离,经PCR和间接免疫荧光(IFA)方法鉴定,确定分离到2株REV... 详细信息

利用扩增禽网状内皮组织增生症病毒(REV)长末端重复序列(LTR)的特异性引物作为检测引物,对采集于吉林省某地健康野鸭的脏器样品进行PCR检测。阳性样品经DF1培养增殖,进行病毒的分离,经PCR和间接免疫荧光(IFA)方法鉴定,确定分离到2株REV,分别来自于针尾鸭和绿头鸭,将分离病毒分别命名为DBYR1101和DBYR1102。克隆2个病毒株的主要保护性抗原基因gp90,并进行序列分析。结果显示,2个分离株gp90基因氨基酸相似性为99.5%;DBYR1101 gp90基因与REV 3个型的代表株170A、SNV和CSV的氨基酸相似性分别为95.7%、94.2%和98.2%;DBYR1102 gp90基因与REV 3个型的代表株170A、SNV和CSV的氨基酸相似性分别为95.2%、93.7%和97.7%;与中国早期南方分离株HA9901的氨基酸序列相似性分别为94.7%和94.2%;与中国北方分离株氨基酸序列相似性为99.2%～100%。核苷酸遗传进化分析表明,2个野鸟源REV分离株与现有的东北分离株亲缘关系较近,趋于形成1个北方分离群;与SNV株亲缘关系最远;与170A株亲缘关系较远;与美国和中国台湾地区的某些分离株相似性较高。该研究首次自野鸭体内分离到REV,丰富了REV流行病学资料,同时提醒我们重视野生鸟类迁徙在疾病传播中所扮演的角色,为深入研究REV致病机制、免疫抑制机制等奠定基础。

关键词：野鸟禽网状内皮组织增生病病毒分离鉴定

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我国北方地区野鸭源禽网状内皮组织增生症病毒的分离与鉴定

我国北方地区野鸭源禽网状内皮组织增生症病毒的分离与鉴定

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中国畜牧兽医学会信息技术分会第十二届学术研讨会

作者：姜莉莉樊兆斌蒋培红孔娜菏泽学院药物科学与技术系

本研究对采集于我国某地健康野鸭的脏器样品进行禽网状内皮组织增生症病毒(REV)PCR检测。阳性样品经DF1培养增殖,进行病毒的分离,经PCR和间接免疫荧光(IFA)方法鉴定,确定分离到2株野鸟源REV,命名为DBYR1101和DBYR1102。克隆两个病毒株... 详细信息

本研究对采集于我国某地健康野鸭的脏器样品进行禽网状内皮组织增生症病毒(REV)PCR检测。阳性样品经DF1培养增殖,进行病毒的分离,经PCR和间接免疫荧光(IFA)方法鉴定,确定分离到2株野鸟源REV,命名为DBYR1101和DBYR1102。克隆两个病毒株的主要保护性抗原基因gp90,并进行序列分析。结果显示,两个分离株gp90基因氨基酸同源性为99.5%;DBYR1101gp90基因与REV3个型的代表株170A、SNV和CSV的氨基酸同源性分别为95.7%,94.2%和98.2%;DBYR1102 gp90基因与REV3个型的代表株170A、SNV和CSV的氨基酸同源性分别为95.2%,93.7%和97.7%;与我国早期南方分离株HA9901的氨基酸序列同源性分别为94.7%和94.2%;与我国北方分离株氨基酸序列同源性为99.2%-100%。核苷酸遗传进化分析表明,2个野鸟源REV分离株与现有的东北分离株亲缘关系较近,趋于形成一个北方分离群;与SNV株亲缘关系最远;与170A株亲缘关系较远;与美国和中国台湾地区的某些分离株同源性较高。该研究首次自野鸭体内分离到REV,丰富了REV流行病学资料,同时提醒我们重视野生鸟类迁徙在疾病传播中所扮演的角色,为深入研究REV致病机制、免疫抑制机制等奠定了基础。

关键词：野鸟禽网状内皮组织增生病病毒分离鉴定

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禽网状内皮增生病病毒对不同日龄SPF鸡的致病性比较

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畜牧兽医学报 2010年第6期41卷 774-777页

作者：孙淑红赵鹏刘绍琼崔治中山东农业大学动物科技学院泰安271018

本研究拟通过禽网状内皮增生病病毒(REV)分子克隆化病毒REV-C99株对1、8日龄SPF鸡的致病性比较,探讨REV的致病性与感染日龄的关系。在1、8日龄SPF鸡,分别腹腔注射REV-C99株1000个TCID50.只-1,以新城疫病毒(NDV)灭活疫苗免疫后HI抗体滴... 详细信息

本研究拟通过禽网状内皮增生病病毒(REV)分子克隆化病毒REV-C99株对1、8日龄SPF鸡的致病性比较,探讨REV的致病性与感染日龄的关系。在1、8日龄SPF鸡,分别腹腔注射REV-C99株1000个TCID50.只-1,以新城疫病毒(NDV)灭活疫苗免疫后HI抗体滴度的测定结果为指标,比较了REV对不同日龄SPF鸡的致病性。结果表明,与对照组相比,1日龄SPF鸡感染REV后,即使经过NDV灭活疫苗的二次、三次免疫,对NDV的HI抗体滴度仍然差异显著(P<0.05);而8日龄SPF鸡感染REV后则随着感染时间的延长以及NDV灭活疫苗的二次、三次免疫,对NDV的HI抗体滴度差异不显著(P>0.05)。本研究表明,REV感染1日龄SPF鸡可显著抑制对NDV灭活疫苗免疫后的体液免疫反应,并且这种免疫抑制作用可持续至4个月;而8日龄SPF鸡感染REV后更多表现为一过性的致病作用。显然,REV的致病性对雏鸡感染日龄具有很强的依赖性,从而揭示出控制REV早期感染的重要性并具有现实意义。

关键词：禽网状内皮组织增生病病毒 HI 感染日龄致病性

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禽网状内皮增生病病毒RT-PCR检测方法的建立及其应用

禽网状内皮增生病病毒RT-PCR检测方法的建立及其应用

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作者：赵靓东北农业大学

学位级别：硕士

本研究应用现代分子生物技术,以1日龄SPF雏鸡为研究对象,利用被网状内皮组织增生病病毒感染雏鸡的cDNA为模板,选取相对保守的LTR序列,设计并合成出特异性引物,建立了RT-PCR检测方法,并对该检测方法进行优化。在此基础上,又结合生物学检... 详细信息

本研究应用现代分子生物技术,以1日龄SPF雏鸡为研究对象,利用被网状内皮组织增生病病毒感染雏鸡的cDNA为模板,选取相对保守的LTR序列,设计并合成出特异性引物,建立了RT-PCR检测方法,并对该检测方法进行优化。在此基础上,又结合生物学检测技术,对试验中感染REV的SPF雏鸡心脏、脾脏、肝脏、肺脏、肾脏、胸腺和法氏囊进行检测,同时又对来自东北某省养殖场选取的50份现地临诊血液样品进行检测。本实验旨在建立REV的快速、高效检测方法,为日后疾病的防治提供重要的科学基础和依据。主要研究结果如下:(1)成功建立了检测网状内皮组织增生病病毒的RT-PCR方法,该检测方法能够有效地扩增出目的片段,可在4个小时内完成对样品的检测;(2)该检测方法的最佳优化条件为:退火温度53℃、引物浓度为0.3μmol/L、Mg2浓度为2.5μmol/L;(3)该方法敏感性高,能特异性检测REV样品。对样品的反复多次检测,检测结果高度一致,该方法具有较高的重复性和稳定性;(4)应用上述建立的RT-PCR检测方法,对试验中感染REV的SPF雏鸡的各个主要器官进行检测,结果表明SPF雏鸡各个主要器官均受到感染。对东北某省50份现地临诊血液样品进行检测,结果显示,阳性率高达92%。

关键词：禽网状内皮组织增生病病毒 RT-PCR检测方法

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整合进禽网状内皮增生病病毒基因组片段的鸡马立克氏病毒和禽痘病毒的重组野毒株

整合进禽网状内皮增生病病毒基因组片段的鸡马立克氏病毒和禽痘病...

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中国畜牧兽医学会禽病学分会第12次学术研讨会

作者：崔治中张志丁家波孙淑红山东农业大学动物科技学院(泰安)

本研究从我国不同地区的经MDV疫苗免疫后仍有肿瘤高发的鸡群中,分离到12个MDV野毒株.用抗REV的单抗做间接荧光抗体试验证明其中3株有REV的共感染.对其余没有REV的9株MDV感染细胞的基因组DNA做斑点分子杂交及PCR显示,有4株MDV基因组中已... 详细信息

本研究从我国不同地区的经MDV疫苗免疫后仍有肿瘤高发的鸡群中,分离到12个MDV野毒株.用抗REV的单抗做间接荧光抗体试验证明其中3株有REV的共感染.对其余没有REV的9株MDV感染细胞的基因组DNA做斑点分子杂交及PCR显示,有4株MDV基因组中已整合进REV的LTR序列.根据MDV基因组上易插入REV的LTR的高频位点的序列合成7条引物,根据REV的LTR合成4条引物,由此交叉组成28对引物,从广东和广西分离到GD0202和GX0101二个MDV野毒株扩增和克隆已整合进MDV的REV-LTR序列及其相连的MDV序列.测序证明,二株中的REV-LTR插入序列及在MDV基因组中短独特序列(US)上的插入位点完全相同.这表明,这二个毒株很可能是由同一次重组事件在鸡群中形成的流行毒株.将国内5个不同生产厂家来源的禽痘弱毒疫苗株和1株禽痘野毒株在鸡胚成纤维细胞(CEF)上连续传5代,用禽网状内皮增生病病毒(REV)特异性的单克隆抗体,进行间接免疫荧光试验(IFA),均检测不到传染性REV.但是以这6株禽痘病毒(FPV)感染的第2代和第5代细胞基因组提取物为模板,通过PCR均能扩增出REV的长末端重复序列(LTR)和囊膜蛋白(env)基因片段.用特异性核酸探针作分子斑点杂交(Dot-blot),结果显示所扩增的PCR条带为特异的REV-LTR和REV-env基因片段.实验结果表明,我国的一些痘病毒疫苗和野毒株基因组中,已稳定地整合进了REV的基因组成分.这是国内外对从病鸡中分离和鉴定到整合有REV-LTR的重组MDV野毒株的首次报道,也是国内对禽痘病毒天然重组病毒的首次报道.本研究表明,今后应对不同病毒间的天然重组现象在病毒变异中的作用给予高度重视.

关键词：禽网状内皮组织增生病病毒马立克氏病病毒禽痘病毒病毒重组 MDV疫苗免疫鸡群

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SPF雏鸡感染REV后中枢免疫器官细胞凋亡及相关因子的变化

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畜牧兽医学报 2017年第10期48卷 1983-1989页

作者：付礼胜侯宁王晓燕高雪丽刘超男吕晓萍郑世民东北农业大学动物医学学院黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室哈尔滨150030 秦皇岛圣蓝皇家海洋公园秦皇岛066000

为探索禽网状内皮组织增生病病毒(REV)感染对雏鸡中枢免疫器官细胞凋亡及其相关酶活性和基因表达的影响,将70只1日龄SPF雏鸡随机分为REV感染组(I)和对照组(C),应用酶活性检测、荧光定量PCR、ELISA、TUNEL等方法对中枢免疫器官细胞的Casp... 详细信息

为探索禽网状内皮组织增生病病毒(REV)感染对雏鸡中枢免疫器官细胞凋亡及其相关酶活性和基因表达的影响,将70只1日龄SPF雏鸡随机分为REV感染组(I)和对照组(C),应用酶活性检测、荧光定量PCR、ELISA、TUNEL等方法对中枢免疫器官细胞的Caspase-3和Caspase-9活性、Bcl-2mRNA及其蛋白质表达和凋亡细胞的动态变化进行了检测。结果发现,SPF雏鸡感染REV后,其胸腺中Caspase-3和Caspase-9活性、Bcl-2mRNA及其蛋白质含量、凋亡细胞数量均于7~28d内不同程度(P<0.05或P<0.01)高于对照组雏鸡;法氏囊中上述被检指标均于7~35d内显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)高于对照组雏鸡。研究表明REV感染引起SPF雏鸡中枢免疫器官Caspase-3和Caspase-9活性增强、Bcl-2mRNA及其蛋白质表达上调所致的细胞凋亡与雏鸡免疫器官功能抑制密切相关。

关键词：禽网状内皮组织增生病病毒 Caspase-3 Caspase-9 Bcl-2 细胞凋亡

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整合进禽反转录病毒基因组片段的鸡马立克氏病病毒重组野毒株的发现

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中国科学（C辑） 2004年第4期34卷 317-324页

作者：张志崔治中山东农业大学动物科技学院泰安271018

用对禽网状内皮组织增生病病毒(REV)的单抗从广东和广西分离到的二株马立克氏病病毒(MDV)野毒株做间接荧光抗体试验,用MDV感染细胞的基因组DNA做斑点分子杂交及PCR显示,这二株MDV基因组中已整合进REV的LTR序列.根据:MDV基因组上易插入RE... 详细信息

用对禽网状内皮组织增生病病毒(REV)的单抗从广东和广西分离到的二株马立克氏病病毒(MDV)野毒株做间接荧光抗体试验,用MDV感染细胞的基因组DNA做斑点分子杂交及PCR显示,这二株MDV基因组中已整合进REV的LTR序列.根据:MDV基因组上易插入REV的LTR的高频位点的序列合成7条引物,根据REV的LTR合成4条引物,由此交叉组成28对引物,分别从这二个MDV野毒株扩增和克隆已整合进MDV的REV-LTR序列及其相连的。MDV序列.测序证明,二株中的REV-LTR插入序列及在MDV基因组中短独特序列(US)上的插入位点完全相同.表明这二个毒株很可能是一次重组事件在鸡群中形成的流行毒株.

关键词：禽网状内皮组织增生病病毒马立克氏病病毒病毒重组鸡胚成纤维细胞

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我国近年来马立克氏病病毒野毒株分子流行病学和生物学特性的研究

我国近年来马立克氏病病毒野毒株分子流行病学和生物学特性的研究

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作者：张志山东农业大学

学位级别：博士

为了研究我国近年来鸡群中马立克氏病病毒(Marek’s disease virus, MDV)流行毒株的致病性变异状况及其分子衍化规律,本文采用细胞培养、间接荧光抗体试验、病理组织学检查、斑点杂交和 PCR 扩增的方法从我国各地不同省份的鸡场采集样... 详细信息

为了研究我国近年来鸡群中马立克氏病病毒(Marek’s disease virus, MDV)流行毒株的致病性变异状况及其分子衍化规律,本文采用细胞培养、间接荧光抗体试验、病理组织学检查、斑点杂交和 PCR 扩增的方法从我国各地不同省份的鸡场采集样品进行马立克氏病病毒(MDV)的分离和鉴定。从 63 只疑似肿瘤鸡采集的全血接种鸡胚成纤维细胞(CEF)后分离到 19 株 MDV 野毒株。这 19 株 MDV 野毒株的细胞培养中,有 7 株 MDV 感染的细胞不与禽网状内皮组织增生病病毒(Reticuloendotheliosis virus, REV)的单抗 11B154 和 11B118 反应,用聚合酶链式反应(PCR)也扩增不出 REV 的长末端重复序列(LTR);另有 7 株 MDV 感染的细胞既能与 REV 的单抗反应,又可以用 PCR 扩增出 REV 的 LTR,表明这 7 株 MDV 感染的细胞中含有完整的 REV 游离病毒;另有 5 株 MDV 感染的细胞与 REV 核酸标记的探针呈现阳性反应,也能扩增出 REV 的 LTR, 但却不与 REV 的单抗反应,表明这 5 株 MDV 的基因组中可能已整合了 REV 的基因组成分;这些结果表明我国 MDV 野毒株中 REV 的共感染现象十分普遍,并且很可能部分 MDV 毒株的基因组中已经整合了 REV 的基因组成分。为了研究 MDV 和 REV 在对鸡的致肿瘤过程中的相互作用,本文用 REV 和 MDV 共感染 1 日龄雏鸡,结果表明,雏鸡共感染 MDV 和 REV 后 24 天即可发生死亡,到 94 日龄时死亡率已达 63.3%;而单独感染 MDV 和 REV 后的死亡日龄分别出现在感染后 47 日龄和 45 日龄,且 94 日龄时的死亡率分别为 33.3%和 36.7%。共感染 REV 和 MDV 鸡的体重在 21 日龄、38 日龄和 76 日龄时的体重分别为 153、397、920 克;而单独感染 MDV 或 REV 同日龄鸡的体重分别为 200、494、1197 和 173、410、1107 克,表明共感染 REV 和 MDV 后对鸡生长性能的不良影响较单独感染 MDV 或 REV 时更为明显。共感染 MDV 和 REV 死亡鸡的肝脏、脾脏、肾脏和心脏等可以形成两种外观明显不同的散在的大肿瘤结节和弥漫性的小肿瘤结节。取发病鸡的肝脏、脾脏、肾脏、心脏和腺胃等组织样品用石蜡包埋后进行连续切片,HE 染色后发现这些脏器均存在两种不同类型的肿瘤细胞增生。对这些连续切片分别用 MDV 和 REV 的单克隆抗体进行间接荧光试验,在同一份样品同时存在可以与 REV 和 MDV 分别呈现阳性反应的肿瘤细胞团,这说明 REV 和 MDV 可以在感染鸡的体内分别诱发形成肿瘤。在接种后 76 日龄随机采集 3 只鸡的全血分离白细胞进行血液中 MDV 含量的检测,结果表明 MDV 单独感染引起 3 山东农业大学博士学位论文的平均阳性率为 3.4%,而共感染 REV 以后的阳性率仅为 7.67%。将 REV 和 MDV 共感染 CEF 或将 MDV 单独感染的 CEF 比较 REV 对 MDV 体外增殖的影响,连续 4 代以后,单独感染 MDV 的病毒含量为共感染 REV 的 MDV 病毒含量的 5 万倍,表明 MDV 在 REV 感染的 CEF 中的复制能力被显著抑制。根据MDV基因组上易插入REV的LTR的高频位点的序列合成7条引物,根据REV 的 LTR 合成 4 条引物,由此交叉组成 28 对引物,分别从两个 MDV 野毒株 GX0101 和 GD0202 中扩增和克隆到已整合进 MDV 基因组的 REV-LTR 序列及其相连的 MDV 序列。测序证明,二株中的 REV-LTR 插入序列及在 MDV 基因组中短独特序列(US

关键词：马立克氏病病毒禽网状内皮组织增生病病毒病毒重组致病性

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REV对SPF雏鸡细胞凋亡相关miRNA及其靶基因表达的影响

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中国家禽 2018年第18期40卷 13-19页

作者：于志强刘汉伟孙运陈小青马中春郑世民东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 宁波检验检疫科学技术研究院浙江宁波315012

为探究禽网状内皮组织增生病病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)对SPF雏鸡细胞凋亡相关信号通路的影响,通过REV感染1日龄雏鸡后,对其临床症状、大体病理学变化进行观察,并应用高通量测序及实时荧光定量PCR方法,检测并验证其法氏囊... 详细信息

为探究禽网状内皮组织增生病病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)对SPF雏鸡细胞凋亡相关信号通路的影响,通过REV感染1日龄雏鸡后,对其临床症状、大体病理学变化进行观察,并应用高通量测序及实时荧光定量PCR方法,检测并验证其法氏囊中与细胞凋亡信号通路相关的miRNA及其靶基因表达情况。结果显示:SPF雏鸡感染REV后第21天法氏囊萎缩最显著,法氏囊中gga-mir-18a-5p、gga-mir-155和gga-mir-222b-5p表达量显著下调,其靶基因分别为Caspase-6、Caspase-7和p27,上述靶基因表达量显著上调;同时还发现gga-mir-29b-3p表达量上调,其靶基因Mcl-1表达量下调。证明REV通过下调gga-mir-18a-5p、gga-mir-155和gga-mir-222b-5p以及上调gga-mir-29b-3p的表达量,来降低或增加对其靶基因的抑制,从而使促凋亡因子Caspase-6、Caspase-7和p27的表达量显著增加,同时抑凋亡因子Mcl-1表达量显著减少来促进细胞凋亡的发生。研究结果为REV致病机理的相关研究提供了理论依据。

关键词：禽网状内皮组织增生病病毒 SPF鸡细胞凋亡

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