检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：潘伟吉林大学

学位级别：硕士

鸡痘是由鸡痘病毒（Fowlpox virus，FPV）引起的一种接触性传染病，广泛发生于鸡和火鸡，临床上主要分为皮肤型、黏膜型和混合型三种。皮肤型鸡痘特征性病变表现为局灶性上皮组织增生；黏膜型又称“白喉型”，以口腔和咽喉黏膜发生纤维... 详细信息

鸡痘是由鸡痘病毒（Fowlpox virus，FPV）引起的一种接触性传染病，广泛发生于鸡和火鸡，临床上主要分为皮肤型、黏膜型和混合型三种。皮肤型鸡痘特征性病变表现为局灶性上皮组织增生；黏膜型又称“白喉型”，以口腔和咽喉黏膜发生纤维素性坏死性炎症为主要特征，由于该型病鸡常发生窒息死亡而导致此病变在临床上不常见；混合型则兼有以上两种类型的病理变化。FPV感染可引起母鸡产蛋量下降、育肥鸡生长迟缓，甚至出现继发感染而导致病鸡死亡，因此该病的发生对世界养禽业造成严重的经济损失。近半个世纪以来，在鸡痘流行区域，主要使用鸡痘和鸽痘病毒疫苗进行免疫预防，虽然因普遍采用疫苗免疫接种使鸡痘疫情报道明显减少，但由于病毒变异而导致免疫失败引发鸡痘的病例时有发生。近年来，在我国的FPV疫苗毒和野毒株中不断有REV的污染和基因整合的报道，REV基因片段甚至完整的基因组整合在FPV基因组中的现象比较普遍。 2009年，本实验室从吉林省公主岭市某爆发鸡痘的大型鸡场中分离到了一株高致病性鸡痘病毒，通过鸡胚进行克隆纯化，并将其命名为FPV JL09C2。对FPV JL09C2株进行全基因组测序发现，其基因组中整合了接近全长禽网状内皮组织增生病病毒（REV）的基因片段，仅在两端LTR分别缺失了29bp和322bp大小的片段。有关REV整合入FPV基因组现象只有在两种病毒同时感染宿主的情况下才能发生，且这种重组的频率较低，但是在前期研究中我们在没有外来选择压力的情况下即分离获得了FPV重组病毒而且其能在鸡胚上形成明显的痘斑，这表明该整合方式能够促进病毒的复制。我们推测主要是由于以下两方面原因：（1）REV的插入导致FPV基因发生改变；（2）插入的REV基因能够抑制宿主免疫系统以利于FPV复制。为了证实上述设想，本研究原核表达获得REV gag和gp90蛋白，以此作为抗原，利用ELISA、Western blot等免疫学方法对该重组鸡痘病毒自然状态下感染宿主后REV基因片段的表达情况进行验证分析，结果显示，在FPV JL09C2毒株感染鸡血清中检测出REV gag和gp90蛋白的抗体；通过构建了REV gag、env和FPV ORF202真核表达载体，转染细胞后进行间接免疫荧光检测，也检测出REV gag和gp90蛋白的抗体，但没有检测到FPV ORF202的抗体。上述结果表明，尽管REV基因组两端有缺失，但并不影响gag、env基因的表达。然而，利用制备的REV gag和gp90蛋白多抗检测不到重组病毒中的REV gag和gp90蛋白，该结果表明REV gag和gp90蛋白虽然能够表达但并未整合入鸡痘病毒中。此外，本实验成功制备出针对REV gp90的单克隆抗体，将为临床上REV重组鸡痘病毒免疫学检测方法及其致病机制的研究奠定基础。

关键词：鸡痘病毒禽网状内皮组织增生病病毒单克隆抗体蛋白表达重组病毒

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REV感染对雏鸡血液主要类型细胞及CyclinD1、p27 mRNA表达的影响

REV感染对雏鸡血液主要类型细胞及CyclinD1、p27 mRNA表达的影响

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作者：刘文超东北农业大学

学位级别：硕士

禽网状内皮组织增生病(reticuloendotheliosis,RE)是由禽网状内皮组织增生病病毒(retieuloendotheliosis virus,REV)引起的以免疫抑制为主的肿瘤性疾病。本试验以1日龄SPF雏鸡为研究对象,通过瑞氏染色法、酯酶染色法、MTT法、ELISA、荧... 详细信息

禽网状内皮组织增生病(reticuloendotheliosis,RE)是由禽网状内皮组织增生病病毒(retieuloendotheliosis virus,REV)引起的以免疫抑制为主的肿瘤性疾病。本试验以1日龄SPF雏鸡为研究对象,通过瑞氏染色法、酯酶染色法、MTT法、ELISA、荧光定量PCR技术,较全面系统的检测了雏鸡外周血白细胞,异嗜性粒细胞数量、T淋巴细胞及其对Con A的增殖功能、B淋巴细胞及其对LPS的增殖功能、免疫球蛋白(Ig G、IgA、Ig M)含量及Cyclin D1和p27 mRNA表达的动态变化,旨在进一步揭示REV感染SPF雏鸡后,其对机体外周血免疫能力与Cyclin D1和p27 mRNA表达变化的影响,为更好地防治RE提供重要的科学依据。主要研究结果如下:(1)1日龄SPF雏鸡感染REV后,其外周血白细胞总数、异嗜性粒细胞、T淋巴细胞数量及其对Con A的增殖功能在REV感染后1～42天,均不同程度低于相应对照雏鸡;其中,异嗜性细胞和TANAE+细胞数量均在病毒感染后14～42天,极显著(P<0.01)低于对照雏鸡;而白细胞总数在REV感染后7～42d,与对照雏鸡相比极显著(P<0.01)下降;T淋巴细胞对Con A的增殖能力,在病毒感染后14～21d和42d,与对照雏鸡相比显著下降(P<0.01或P<0.05)。表明SPF雏鸡感染REV后,外周血细胞免疫能力明显受损。(2)1日龄SPF雏鸡感染REV后,其外周血B淋巴细胞对LPS的增殖能力和免疫球蛋白IgG、Ig A、Ig M含量在REV感染后1～42d,均不同程度低于相应对照雏鸡;其中,Ig G、Ig A、Ig M含量在REV感染后14～28天、21～42d和42d,均显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)低于相应对照雏鸡。表明SPF雏鸡感染REV后,外周血体液免疫能力受到严重抑制。(3)1日龄SPF雏鸡感染REV后,其外周血Cyclin D1和p27 m RNA表达在病毒感染后7～42d,均高于相应对照雏鸡,其中Cycling D1 mRNA表达极显著(P<0.01)高于相应对照组;表明Cyclin D1与p27 m RNA过表达和REV所致的细胞增殖密切相关。

关键词：禽网状内皮组织增生病病毒 SPF雏鸡外周血液 Cyclin D1 mRNA p27 mRNA

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SPF雏鸡感染REV后免疫器官氧化—抗氧化功能的变化

SPF雏鸡感染REV后免疫器官氧化—抗氧化功能的变化

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作者：张美曦东北农业大学

学位级别：硕士

禽网状内皮组织增生病(Reticuloendotheliosis,RE)是由禽网状内皮组织增生病病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)引起的免疫抑制性肿瘤病,该病严重危害养禽业的发展。本试验以1日龄SPF雏鸡为研究对象,应用间接ELISA及实时荧光定量PC... 详细信息

禽网状内皮组织增生病(Reticuloendotheliosis,RE)是由禽网状内皮组织增生病病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)引起的免疫抑制性肿瘤病,该病严重危害养禽业的发展。本试验以1日龄SPF雏鸡为研究对象,应用间接ELISA及实时荧光定量PCR方法检测了REV感染雏鸡免疫器官(胸腺、脾脏、法氏囊)过氧化氢(H2O2)、丙二醛(Malondialdehyde,MDA)含量,总抗氧化能力(Total-antioxidante capacity,T-AOC),超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)活力,过氧化氢酶(Catalase,CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶1(Glutathione peroxidase 1,GPx1)含量及其mRNA表达的动态变化,旨在从病毒感染后氧化-抗氧化功能变化的角度阐述REV致病机制,为RE的防治提供科学依据。试验结果发现:(1)感染REV后,SPF雏鸡免疫器官H2O2、MDA含量不同程度高于对照雏鸡。其中,胸腺、脾脏、法氏囊H2O2含量分别于感染后第35 d、第28 d、第21 d显著高于对照雏鸡(P<0.05);MDA含量分别于感染后第28 d、7 d-28 d、第21 d显著或极显著高于对照雏鸡(P<0.05或P<0.01)。表明REV感染可导致SPF雏鸡免疫器官氧化物质增多,脂质过氧化反应增强,机体处于氧化应激。(2)感染REV后,SPF雏鸡免疫器官T-AOC、SOD活力不同程度低于对照雏鸡。其中,胸腺、脾脏、法氏囊T-AOC分别于感染后21 d-35 d、28 d-35 d、第35 d显著或极显著低于对照雏鸡(P<0.05或P<0.01);SOD活力分别于感染后14 d-28 d、14 d-21 d、21 d-35 d显著或极显著低于对照雏鸡(P<0.05或P<0.01)。表明REV感染可使SPF雏鸡免疫器官抗氧化功能显著降低。(3)感染REV后,SPF雏鸡免疫器官CAT、GPx1含量及基因表达水平不同程度低于对照雏鸡。其中,胸腺、脾脏、法氏囊CAT含量分别于感染后14 d-28 d、28 d-35 d、第21 d显著或极显著低于对照雏鸡(P<0.05或P<0.01);胸腺、脾脏、法氏囊GPx1含量分别于感染后第28 d、14 d-21 d、第14 d显著或极显著低于对照雏鸡(P<0.05或P<0.01);胸腺、脾脏CAT mRNA含量分别于感染后21 d-28 d显著或极显著低于对照雏鸡(P<0.05或P<0.01);胸腺、脾脏、法氏囊GPx1 mRNA含量分别于感染后28 d-35 d、第35 d、第28 d显著低于对照雏鸡(P<0.05)。表明REV感染可导致免疫器官CAT、GPx1基因及蛋白表达下降,清除过氧化物能力降低,机体抗氧化酶含量减少,抗氧化功能减弱。(4)感染REV后,SPF雏鸡胸腺、脾脏、法氏囊器官指数于28 d-35 d显著或极显著低于对照雏鸡(P<0.05或P<0.01)。表明REV感染可使免疫器官器官指数下降,免疫器官萎缩,机体发生免疫抑制。

关键词：禽网状内皮组织增生病病毒 SPF雏鸡氧化抗氧化

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Skp2对REV感染SPF CEFs细胞周期的调控及其机制

Skp2对REV感染SPF CEFs细胞周期的调控及其机制

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作者：吴乐东北农业大学

学位级别：硕士

禽网状内皮组织增生病（RE）是由禽网状内皮组织增生病病毒（REV）感染引起的以免疫抑制为主的禽类肿瘤性疾病,普遍存在于国内外养殖业,该病的大规模流行给家禽养殖业造成较大损失。由于目前对该病的研究较为局限,尤其对其肿瘤发生机制... 详细信息

禽网状内皮组织增生病（RE）是由禽网状内皮组织增生病病毒（REV）感染引起的以免疫抑制为主的禽类肿瘤性疾病,普遍存在于国内外养殖业,该病的大规模流行给家禽养殖业造成较大损失。由于目前对该病的研究较为局限,尤其对其肿瘤发生机制的研究不够全面,为了有效降低RE对养殖业的危害,迫切需要了解其发病的详细机制。S期激酶相关蛋白2（Skp2）作为泛素连接酶复合物（SCF）的识别底物,与细胞的异常增殖密切相关,在肿瘤研究中引起广泛关注。作为当前医学界、生物学界,尤其是动物医学界研究热点之一,纵观国内外对Skp2基因已有的相关研究报道,其主要在哺乳动物中,特别是在人类某些疾病中的研究较为深入,而关于禽类Skp2基因与REV造成的细胞周期异常的关系,迄今未见报道。本研究在成功构建了短发卡RNA（sh RNA）介导Skp2沉默质粒载体,并转染至REV感染的SPF鸡胚成纤维细胞（CEFs）中的基础上,进一步在转录和蛋白水平上分别应用RT-PCR和Western Blot技术较系统的研究了REV感染SPF CEFs后,其Skp2,p27,Cyclin D1 mRNA表达和蛋白含量的变化;应用流式细胞术结合PI单染方法对REV感染SPF CEFs细胞周期的变化进行了检测;使用CCK-8 Kit检测试剂盒对REV感染SPF CEFs的细胞增殖活力做了较全面系统的研究。这项研究有助于进一步了解由REV造成的细胞周期异常机制,为RE的综合防治（制）寻找新的分子靶点,主要研究结果如下:（1）本研究成功建立了鸡Skp2基因实时荧光定量PCR检测方法,该方法最优反应体系20.0μL:包含Real-time PCR Master mix（2×）10.0μL,上、下游引物（10μmol/L）各1.0μL,c DNA 2.0μL,dd H2O 6.0μL;最佳反应条件为95℃预变性10 s,95℃变性5 s,60℃退火/延伸34s,30个循环。（2）SPF CEFs感染REV后6h、12h、24h、48h、72h、96h和120h,其Skp2 mRNA表达量均不同程度高于病毒未感染的对照组,其中24h、48h和72h极显著（P<0.001）增高。（3）与未感染REV的对照相比,REV感染SPF CEFs后12h、24h和48h,CEFs细胞增殖活力均显著（P<0.05或P<0.01）增加。与REV感染CEFs组相比,转染sh RNA-358和sh RNA-141后的CEFs细胞增殖活力显著（P<0.01）降低;V-sh RNA-NC组CEFs增殖活力未见统计学差异（P>0.05）。（4）在成功构建的shRNA-908、sh RNA-358、sh RNA-225和sh RNA-141四个Skp2表达抑制质粒中,sh RNA-358和sh RNA-141对Skp2的抑制作用在转染后24h、48h及72h极显著（P<0.001）升高。（5）与空白对照组相比,REV感染SPF CEFs,其p27 mRNA表达量极显著（P<0.001）降低;Cyclin D1 mRNA表达量极显著（P<0.001）升高。与REV感染CEFs组相比,转染sh RNA-358和sh RNA-141后的CEFs,其Skp2和Cyclin D1 mRNA表达量极显著（P<0.001或P<0.01）下降;而p27 mRNA表达量无显著（P>0.05）变化。转染质粒sh RNA-NC作用于CEFs后,上述被检指标的mRNA表达量均未见统计学差异（P>0.05）。（6）与空白对照组相比,REV感染SPF CEFs后,其Skp2和Cyclin D1蛋白表达量均显著（P<0.01）增加,p27蛋白表达量极显著（P<0.001）减少。与REV感染CEFs组相比,转染sh RNA-358和sh RNA-141后的CEFs,其Skp2和Cyclin D1蛋白表达量显著（P<0.01或P<0.001）降低;p27蛋白表达量显著（P<0.05）升高。转染质粒sh RNA-NC作用于CEFs后,上述被检指标的蛋白表达量均未见统计学差异（P>0.05）。（7）CEFs感染REV后,其G0/G1期细胞数较对照组极显著（P<0.01）减少,G2/M期细胞数显著（P<0.01）增多,S期细胞数未见统计学差异（P>0.05）;与REV感染组相比,V-sh RNA-358组和V-sh RNA-141组G0/G1期细胞数较对照组极显著（P<0.01）增多,G2/M期细胞数显著（P<0.01）减少,S期细胞数未见统计学差异（P>0.05）;而V-sh RNA-NC组各期细胞数均无显著变化（P>0.05）。上述研究结果为进一步阐明REV感染对CEF细胞增殖和周期的影响以及Skp2在其中所扮演的角色提供了重要的科学实验依据。也为进一步在分子调节

关键词：禽网状内皮组织增生病病毒 SPF鸡胚成纤维细胞 S期激酶相关蛋白2 细胞周期素D1 p27

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REV感染对SPF雏鸡免疫器官TLR3及其相关因子表达的影响

REV感染对SPF雏鸡免疫器官TLR3及其相关因子表达的影响

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作者：王晓燕东北农业大学

学位级别：硕士

以1日龄SPF雏鸡为研究对象,将60只雏鸡随机分为REV感染组(I组)和未感染病毒的对照组(C组)。为探索REV感染对SPF雏鸡免疫器官TLR3及其相关因子IRF3、NF-κBp65和IFN-βmRNA表达及其蛋白含量和病毒滴度动态发展变化,应用WB、实时荧光定量... 详细信息

以1日龄SPF雏鸡为研究对象,将60只雏鸡随机分为REV感染组(I组)和未感染病毒的对照组(C组)。为探索REV感染对SPF雏鸡免疫器官TLR3及其相关因子IRF3、NF-κBp65和IFN-βmRNA表达及其蛋白含量和病毒滴度动态发展变化,应用WB、实时荧光定量PCR、间接ELISA等方法,较全面系统对REV感染SPF雏鸡后,其胸腺、脾脏和法氏囊TLR3介导的抗病毒天然免疫进行研究,主要结果如下:(1)REV感染SPF雏鸡后1-28天,在其胸腺组织中检测到了REV;病毒感染后1-3天,在脾脏组织中检测到了REV;在法氏囊组织中于病毒感染后1-14天检测到病毒,其他被检时间点未发现病毒。表明REV感染SPF雏鸡后,免疫器官不同病毒存在的时间长短也不同。(2)REV感染SPF雏鸡后,其胸腺和法氏囊中TLR3 mRNA表达和蛋白含量于病毒感染后1-7天显著或极显著(P<0.05或P<0.01)高于对照雏鸡;IRF3 mRNA表达和蛋白含量不同程度高于对照雏鸡;NF-κBp65 mRNA表达于病毒感染后1-3天明显(P<0.05或P<0.01)高于对照雏鸡,而21-28天显著或极显著(P<0.05或P<0.01)低于对照雏鸡;IFN-βmRNA表达和蛋白含量于病毒感染后1-7天明显(P<0.05或P<0.01)高于对照雏鸡,其中,IFN-β蛋白含量于病毒感染后21-28天不同程度(P<0.05或P<0.01)低于对照雏鸡。表明REV感染早期能够调节胸腺和法氏囊中天然免疫TLR3及其相关因子的基因和蛋白表达。(3)REV感染SPF雏鸡后,其脾脏中TLR3 mRNA表达和蛋白含量于病毒感染后1-7天显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)高于对照雏鸡;NF-κBp65 mRNA表达量于病毒感染后3-14天不同程度(P<0.05或P<0.01)高于对照雏鸡;IRF3和IFN-βmRNA表达和蛋白含量于病毒感染后3-7天不同程度(P<0.05或P<0.01)高于对照雏鸡。表明脾脏中启动机体天然免疫TLR3及其相关下游通路因子较胸腺晚。(4)REV感染SPF雏鸡后,其胸腺、脾脏和法氏囊器官指数均于病毒感染后21-28天不同程度(P<0.05或P<0.01)低于对照雏鸡。表明REV感染所致的机体免疫器官指数减小与免疫器官免疫功能下降密切相关。在REV感染早期,能够通过激活机体胸腺、脾脏、法氏囊TLR3及其相关因子表达,诱导IFN-β产生,参与病毒的清除。

关键词：禽网状内皮组织增生病病毒 SPF雏鸡免疫器官 TLR3

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泰山松花粉多糖和蜂胶对ALV和REV诱导的免疫抑制鸡的免疫调理作用

泰山松花粉多糖和蜂胶对ALV和REV诱导的免疫抑制鸡的免疫调理作用

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作者：李兵山东农业大学

学位级别：硕士

家禽中存在多种病毒性免疫抑制病,这类疾病不仅能够引起机体原发感染导致死亡,还能侵害家禽的免疫系统,致使机体免疫功能下降,甚至造成疫苗免疫失败。此外,这类疾病易引发其他病毒性和细菌性病原继发感染,因此很难对这些潜伏感染的病原... 详细信息

家禽中存在多种病毒性免疫抑制病,这类疾病不仅能够引起机体原发感染导致死亡,还能侵害家禽的免疫系统,致使机体免疫功能下降,甚至造成疫苗免疫失败。此外,这类疾病易引发其他病毒性和细菌性病原继发感染,因此很难对这些潜伏感染的病原进行确诊。这些免疫抑制性病毒在鸡群中常常呈现多种传染性因子和非传染性因子并存的局面,在生产过程中难以控制和根除。J亚群白血病病毒(Avian leukosis virus subgroup J,ALV-J)和禽网状内皮组织增生病病毒(Retieuloendotheliosis virus,REV)同属反转录病毒,两者均能引起禽类不同程度的免疫抑制疾病,是鸡群免疫抑制性病毒的典型代表。养禽业中普遍存在ALV-J和REV混合感染的现象,尤其是近几年,二者共感染现象越发常见。然而,目前尚缺乏安全有效的疫苗对这两种病原进行预防,加之这两种病原诱导产生抗体的水平较低,甚至不诱导抗体,从而造成防控和检测存在困难和疏漏。为了寻找控制ALV-J和REV感染和传播的新方法,本研究用SPF雏鸡建立感染REV和ALV-J的免疫抑制模型,研究两者共感染引发的免疫抑制协同作用;然后选择泰山松花粉多糖(Taishan Pinus massoniana pollen polysaccharide,TPPPS)和蜂胶(Propolis,PP)研究二者对免疫抑制鸡的免疫调理作用,以期为合理有效地防控病毒性免疫抑制疾病提供新的思路。首先建立SPF雏鸡感染ALV-J和REV的免疫抑制模型。将120只健康1日龄SPF雏鸡,随机分成4个组(I-IV),每组30只。I-III组的雏鸡分别腹腔注射REV,ALV-J,REV和ALV-J(1:1混合),建立单独感染及共感染模型;IV组注射等量生理盐水设为健康对照组。于感染后的7、14、21、28、35、42和56 d,每组随机抽取3只,检测相关免疫指标。结果显示病毒单独感染和混合感染均可引起鸡生长发育不良,中枢免疫器官萎缩,免疫器官指数下降,淋巴细胞转化率和CD4+、CD8+T细胞数下降,同时鸡白细胞介素(IL-2)和干扰素(IFN-γ)的分泌量减少,并且在病毒共感染时免疫抑制程度最明显。结果表明ALV-J、REV均能引起鸡的免疫抑制疾病的发生,并且ALV-J与REV之间的确存在一定的协同作用,严重抑制机体免疫器官发育和免疫功能,加重机体的免疫抑制性疾病。然后利用TPPPS和PP对共感染ALV-J和REV的雏鸡进行免疫调理作用。选取健康1日龄SPF雏鸡150只随机分为5个组(I-V),每组30只。I-IV组为雏鸡共感染REV和ALV-J组,在相同条件下饲养,I、II组分别皮下注射TPPPS(50 mg/ml)、PP(50 mg/ml)0.2 ml;III组同时注射TPPPS(50 mg/ml)0.1ml和PP(50 mg/ml)0.1 ml;IV组注射相同含量的生理盐水作为对照;V组设为健康对照组,在9日龄时,每组免疫新城疫疫苗,于感染后7、14、21、28、35、42、56 d,每组随机抽取3羽,检测相关免疫指标。试验结果显示TPPPS和PP均能不同程度的调节感染后免疫抑制鸡免疫系统的生长发育,相比未使用免疫调节剂的免疫抑制组,TPPPS和PP均能有效提高免疫器官指数,淋巴细胞转化和细胞因子分泌,改善对特定疫苗免疫失败的状况,降低免疫器官内载毒量。其中TPPPS组免疫增强作用显著高于PP组,TPPPS和PP联合作用(TPPPS-PP)组免疫增强效果显著高于TPPPS或PP单独使用组。结果表明TPPPS和PP是有效的免疫增强剂,可改善免疫抑制鸡的免疫功能,并且TPPPS和PP之间存在协同作用,增强免疫机能的作用优于TPPPS或PP单一使用组。

关键词：禽白血病病毒禽网状内皮组织增生病病毒免疫抑制病松花粉多糖蜂胶协同免疫调理作用

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REV感染对HD11和DT40细胞凋亡相关因子表达的影响

REV感染对HD11和DT40细胞凋亡相关因子表达的影响

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作者：周放东北农业大学

学位级别：硕士

近年来,随着动物养殖业的快速发展,疾病的防治（制）变得尤为重要。由于REV感染动物所产生的免疫抑制,容易造成其他病原的继发和混发感染,给该病的诊断和防治（制）带来更大的难度。而研究REV感染与免疫细胞的相互作用,有利于了解其免... 详细信息

近年来,随着动物养殖业的快速发展,疾病的防治（制）变得尤为重要。由于REV感染动物所产生的免疫抑制,容易造成其他病原的继发和混发感染,给该病的诊断和防治（制）带来更大的难度。而研究REV感染与免疫细胞的相互作用,有利于了解其免疫抑制及肿瘤形成的原因,阐明其致病机制,为RE的防治（制）提供理论基础。因此,本研究针对REV免疫抑制的特征,选取HD11（鸡巨噬细胞系）和DT40（鸡淋巴瘤细胞）为研究对象,应用分子生物学技术和免疫学方法结合检测试剂盒,通过对REV感染上述细胞后病毒载量、细胞线粒体膜电位和Ca2+含量及细胞凋亡率等进行检测,同时测定了细胞线粒体途径重要凋亡相关因子Caspase-3、Caspase-9、Bax、Bcl-2 mRNA表达和蛋白含量变化,主要研究结果如下:（1）于REV感染的HD11、DT40细胞中均检测到了该病毒,表明REV可在HD11和DT40细胞中复制增殖。且在病毒感染HD11细胞后48 h,病毒载量到达峰值;REV感染DT40细胞后12-72 h,其病毒载量均呈上升趋势。（2）REV感染HD11细胞后24-36 h,其细胞活力极显著（P<0.01）低于对照细胞。REV感染DT40细胞后,其细胞活力在12 h显著（P<0.05）低于对照细胞,在48h极显著（P<0.01）低于对照细胞。（3）REV感染HD11和DT40细胞后,其细胞线粒体膜电位分别在病毒感染后36-48 h、36-72 h显著（P<0.05）或极显著（P<0.01）低于对照细胞。（4）REV感染HD11和DT40细胞后,其细胞内Ca2+含量均在36 h和48 h显著（P<0.05）高于对照细胞;其余时间点虽也高于对照细胞,但无统计学意义（P>0.05）。（5）REV感染HD11细胞后24-36 h和72 h,其细胞凋亡率均极显著（P<0.01）高于未感染病毒的对照细胞,12 h虽然病毒感染细胞凋亡率较对照细胞有所增加,但无统计学差异（P>0.05）;REV感染DT40细胞后12 h、48 h和72 h,DT40细胞凋亡率极显著（P<0.01）高于对照细胞。（6）REV感染HD11细胞后,其Bcl-2 mRNA表达在24-36 h极显著（P<0.01）低于对照细胞,而48-72 h显著（P<0.05）或极显著（P<0.01）高于对照细胞;Bax mRNA表达在24 h显著（P<0.05）低于对照细胞,在48 h和72 h显著（P<0.05）或极显著（P<0.01）高于对照细胞;caspase-3 mRNA表达在36 h和72 h极显著（P<0.01）高于对照细胞;caspase-9mRNA表达在12 h、36 h和72 h显著（P<0.05）或极显著（P<0.01）高于对照细胞。REV感染DT40细胞后,其Bcl-2 mRNA表达在12 h、48-72 h均极显著（P<0.01）高于对照细胞;Bax mRNA在12-72 h期间均未能检测到表达（Ct值≥35）;caspase-3 mRNA表达在24 h极显著（P<0.01）高于对照细胞,在36 h和72 h显著（P<0.05）高于对照细胞;caspase-9 mRNA表达在24-36h极显著（P<0.01）高于对照细胞,在72h显著（P<0.05）高于对照细胞;其他均未见统计学差异（P>0.05）。（7）REV感染HD11细胞后12-72 h,其caspase-3酶活性均极显著（P<0.01）高于对照细胞;Bcl-2蛋白含量在24和72 h极显著（P<0.01）低于对照细胞;caspase-9蛋白含量在12-48h极显著（P<0.01）高于对照细胞。REV感染DT40细胞后,其caspase-3酶活性在36～48 h和72 h均明显（P<0.01或P<0.05）高于对照细胞;Bcl-2蛋白含量在12和48 h极显著（P<0.01）高于对照细胞,而在72 h极显著（P<0.01）低于对照细胞;caspase-9蛋白含量在12-24 h极显著（P<0.01）高于对照细胞,在48 h极显著（P<0.01）低于对照细胞;其余均未见统计学差异（P>0.05）。通过上述各项指标的检测,旨在探究线粒体凋亡途径在REV感染细胞过程中的功能和作用,为深入阐述REV的免疫抑制机制和线粒体凋亡途径在病毒感染所致凋亡中的作用提供新的理论依据。

关键词： HD11和DT40细胞禽网状内皮组织增生病病毒线粒体膜电位 Ca2+含量细胞凋亡

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REV感染对SPF雏鸡免疫器官免疫功能及Cyclin D1表达的影响

REV感染对SPF雏鸡免疫器官免疫功能及Cyclin D1表达的影响

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作者：齐伟东北农业大学

学位级别：硕士

禽网状内皮增生病(RE)是禽类重要的免疫抑制性致瘤性疾病之一,但由于其临诊症状不典型,该病长期以来没有得到足够重视,现今我国养禽业对禽网状内皮增生病(RE)的预防和防控已经逐渐重视起来,该病由禽网状内皮组织增生病病毒(Reticuloendo... 详细信息

禽网状内皮增生病(RE)是禽类重要的免疫抑制性致瘤性疾病之一,但由于其临诊症状不典型,该病长期以来没有得到足够重视,现今我国养禽业对禽网状内皮增生病(RE)的预防和防控已经逐渐重视起来,该病由禽网状内皮组织增生病病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)引起。细胞周期素D1(Cyclin D1)是一类与细胞周期功能状态密切相关的蛋白质家族,通过与特定蛋白激酶结合并激活其活性在调节细胞周期G1期到S期中起关键作用。本研究以1日龄SPF雏鸡为研究对象,在成功制备出兔抗鸡Cyclin D1多克隆抗体的基础上,应用流式细胞术检测其免疫器官中淋巴细胞细胞周期分布及CD4+、CD8+T淋巴细胞数量及比值变化、应用细胞培养结合MTT法检测免疫器官中T、B淋巴细胞增殖功能变化、应用Real Time PCR技术检测免疫器官中Cyclin D1 m RNA表达的变化、应用间接ELISA法检测Cyclin D1蛋白含量变化。通过上述各项被检指标的检测,较全面系统的研究了REV感染对SPF雏鸡免疫器官的免疫功能及Cyclin D1表达的影响,为RE防治提供方向。研究结果如下:(1)1日龄SPF雏鸡感染REV后,其免疫器官胸腺和脾脏中,T淋巴细胞增殖功能于REV感染后第1-49 d均不同程度地低于对照雏鸡,两者于病毒感染后第14-28 d与对照雏鸡比较均极显著降低(P<0.01);法氏囊未见统计学差异。胸腺CD4+T淋巴细胞数量在REV感染后14-28 d与对照雏鸡相比显著(P<0.05)或极显著降低(P<0.01)。CD8+T淋巴细胞数量于REV感染后21-35 d极显著低于对照雏鸡(P<0.01);在脾脏中CD4+T淋巴细胞数量于病毒感染后7-35 d显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)低于对照雏鸡。CD8+T淋巴细胞数量在REV感染后第3 d、第14 d及第28 d与对照雏鸡相比极显著降低(P<0.01);法氏囊CD4+T淋巴细胞数量于病毒感染后3-14 d和第28 d与对照雏鸡相比极显著降低(P<0.01)。CD8+T淋巴细胞数量于病毒感染后第1 d极显著低于对照雏鸡(P<0.01),第7 d显著高于对照雏鸡(P<0.05),35-49 d极显著高于对照雏鸡(P<0.01)。胸腺、脾脏、法氏囊CD4+/CD8+T淋巴细胞比值于病毒感染后与对照雏鸡比较出现不同程度的降低(P<0.01或P<0.05)。表明REV感染1日龄SPF雏鸡后,其主要免疫器官(胸腺、脾脏、法氏囊)细胞免疫功能呈现不同程度的抑制。(2)1日龄SPF雏鸡感染REV后,法氏囊B淋巴细胞增殖功能于病毒感染后14-35 d极显著低于对照雏鸡(P<0.01),其余未见统计学差异(P>0.05)。脾脏B淋巴细胞增殖功能在病毒感染后14-49 d显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)下降,其余未见统计学差异(P<0.05)。表明1日龄SPF雏鸡感染REV后,其法氏囊等免疫器官的体液免疫功能也不同程度下降。(3)REV感染1日龄SPF雏鸡后14-28 d,其胸腺、脾脏、法氏囊淋巴细胞中G0/G1期和S期细胞数占细胞总数的比例与对照雏鸡比较不同程度增高,细胞主要集中在S期中进行DNA复制,G2/M期细胞数比例少。表明REV感染1日龄雏鸡后,其免疫器官中淋巴细胞细胞周期发生变化,S期细胞比例增多,G2/M期的细胞数比例较少,细胞大量停滞于S期,表明细胞增殖受到抑制。(4)REV感染1日龄SPF雏鸡后,其胸腺中Cyclin D1 m RNA表达量不同程度高于对照雏鸡。其中,Cyclin D1 mRNA表达量于REV感染后14-28 d显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)高于对照雏鸡;Cyclin D1蛋白含量在REV感染后第7 d较对照雏鸡极显著降低(P<0.01),第14 d较对照组雏鸡显著降低(P<0.05),在第35 d显著高于对照雏鸡(P<0.05),但未见统计学差异。脾脏中Cyclin D1 m RNA表达量于REV感染后14-21 d极显著(P<0.01)高于对照雏鸡,第28 d显著(P<0.05)高于对照雏鸡,其余未见统计学差异(P>0.05);Cyclin D1蛋白含量在病毒感染后第1 d和第49 d与对照雏鸡相比显著增高(P<0.05),第7 d及第21-35d极显著增高(P<0.01)。法氏囊中Cyclin D1 mRNA表达量于病毒感染后第21-28 d显著高于对照雏鸡(P<0.05);Cyclin D1蛋白含量在病毒感染后第21 d显著增高(P<0.05),第14 d、第28 d及第49 d极显著增高(P<0.01)。表明SPF雏鸡免疫器官Cyclin D1 mRNA表达及其蛋白含量增多与REV的致病过程及细胞周期分布密切

关键词：禽网状内皮组织增生病病毒细胞周期 SPF雏鸡免疫器官 Cyclin D1

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REV感染对SPF雏鸡外周血液T淋巴细胞亚型及其相关细胞因子含量的影响

REV感染对SPF雏鸡外周血液T淋巴细胞亚型及其相关细胞因子含量的...

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作者：葛依阳东北农业大学

学位级别：硕士

禽网状内皮组织增生病病毒(REV)可导致被感染禽类产生严重的免疫抑制,给世界各国家禽养殖业带来了极大经济损失。血液是病毒在机体内到达其靶器官的重要途径,外周血中淋巴细胞的数量虽然较少,但在机体抗病毒感染机制中,T淋巴细胞的作用... 详细信息

禽网状内皮组织增生病病毒(REV)可导致被感染禽类产生严重的免疫抑制,给世界各国家禽养殖业带来了极大经济损失。血液是病毒在机体内到达其靶器官的重要途径,外周血中淋巴细胞的数量虽然较少,但在机体抗病毒感染机制中,T淋巴细胞的作用无可替代。本研究以1日龄SPF雏鸡为研究对象,通过类比方式,于REV感染SPF雏鸡后第1、3、7、14和21天经心脏采血取样,分离血清和淋巴细胞,采用流式细胞检测技术和免疫学检测方法,分别对REV感染SPF雏鸡后,其外周血液的T淋巴细胞亚型(包括:CD、CDT淋巴细胞数量及其比值),血清中IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-4、IL-10和IL-12含量的动态变化进行了检测。旨在通过本项研究阐明SPF雏鸡在感染REV后,其血液免疫相关变化情况,为防治REV提供理论依据。研究主要结果如下:(1)REV感染1日龄SPF雏鸡后,其外周血液中CDT淋巴细胞数量于病毒感染后11天显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)低于对照雏鸡;CDT淋巴细胞数量于病毒感染后第1、3、14、21天显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)低于对照雏鸡,但第7天极显著(P<0.01)高于对照雏鸡;CD/CDT淋巴细胞比值于病毒感染后第3天显著(P<0.05)高于对照雏鸡,第7、14天显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)低于对照雏鸡,其余未见统计学差异(P>0.05)。表明REV感染可降低雏鸡外周血液CD和CDT淋巴细胞亚型数量及两者的比例,进而导致病毒感染雏鸡免疫功能低下。(2)REV感染1日龄SPF雏鸡后第3和第14天,其血清中IFN-γ含量极显著(P<0.01)低于对照雏鸡,第7天极显著(P<0.01)高于对照雏鸡;TNF-α含量于病毒感染后第3天极显著(P<0.01)低于对照雏鸡,第7天显著(P<0.05)高于对照雏鸡,第14天回落,显著(P<0.05)低于对照雏鸡;IL-2含量于病毒感染后14天明显较对照雏鸡降低(P<0.05或P<0.01);IL-12含量仅在病毒感染后第3天极显著(P<0.01)低于对照雏鸡,其余未见统计学差异(P>0.05)。表明REV感染可抑制SPF雏鸡外周血液致炎因子的生物合成及释放。(3)REV感染1日龄SPF雏鸡后第3和第7天,其血清中IL-4含量极显著(P<0.01)高于对照雏鸡;IL-10含量于34天显著(P<0.05)高于对照雏鸡;其余未见统计学差异(P>0.05)。表明REV感染不但可抑制致炎因子的生物合成和释放,而且对抑炎因子也具有一定的促进作用。(4)REV感染1日龄SPF雏鸡后第3和第14天,其外周血中Th1/Th2值较相应对照雏鸡明显(P<0.05或P<0.01)减小,但在第7天显著高于对照雏鸡(P<0.05)。表明REV感染会导致SPF雏鸡外周血免疫类型向体液免疫漂移。通过检测上述各项指标,本研究较全面地阐明了SPF雏鸡在感染REV后,其外周血中T淋巴细胞亚型数量及其相关细胞因子含量的变化,揭示了REV对SPF雏鸡外周血中T淋巴细胞免疫功能的影响,为RE的免疫防治提供了新的思路。

关键词：禽网状内皮组织增生病病毒 SPF雏鸡外周血T淋巴细胞亚型细胞因子

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肉鸡网状内皮细胞增生症的流行趋势及防控措施

引用

今日畜牧兽医 2011年第12期27卷 45-46页

作者：谷风柱山东省农干院山东济南250199

1 状内皮增生症的危害性网状内皮组织增生病是由反转录病毒科禽网状内皮组织增生病病毒引起肉鸡以淋巴一网状组织增生为特征的肿瘤性的病理综合征。本病可以造成鸡群不同程度的三大抑制：免疫抑制、采食抑制、生长抑制，这不仅影响鸡... 详细信息

1 状内皮增生症的危害性网状内皮组织增生病是由反转录病毒科禽网状内皮组织增生病病毒引起肉鸡以淋巴一网状组织增生为特征的肿瘤性的病理综合征。本病可以造成鸡群不同程度的三大抑制：免疫抑制、采食抑制、生长抑制，这不仅影响鸡群的生产性能，更易导致其他不同的细菌性和病毒性的继发性感染，以及对特定疫苗免疫反应的抑制。属于典型的免疫抑制病。

关键词：禽网状内皮组织增生病病毒细胞增生网状组织流行趋势肉鸡免疫抑制病防控反转录病毒科

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