禽网状内皮组织增生症（Reticuloendotheliosis,RE）是由禽网状内皮组织增生症病毒（Reticuloendotheliosis virus,REV）引起的一种综合征,会引起禽类免疫抵抗能力下降,出壳率降低,容易感染其他病毒。卵黄抗体（Immunoglobulin of yolk,...
详细信息
禽网状内皮组织增生症（Reticuloendotheliosis,RE）是由禽网状内皮组织增生症病毒（Reticuloendotheliosis virus,REV）引起的一种综合征,会引起禽类免疫抵抗能力下降,出壳率降低,容易感染其他病毒。卵黄抗体（Immunoglobulin of yolk,Ig Y）,是一种γ球蛋白,存在于鸡的卵黄当中。卵黄抗体制备过程简单,制作成本较低,不用采血,只需采集疫苗免疫后的鸡蛋纯化卵黄即可获得,适合大规模生产。性质稳定,在常温下储存仍可具备一定活性。起效快、治疗效果显著,安全、高效、易吸收、刺激性弱。
目前尚无有效控制RE的方法。该病所造成的损失也越来越严重。产蛋种鸡产生REV卵黄抗体后,不仅可缓解REV的垂直传播,还可为雏鸡提供母源抗体,预防水平传播的发生。在雏鸡的临床治疗中有很大的发展前景。卵黄抗体对各种动物病毒性疾病的作用越来越受到重视,对特定动物疫病的诊断、预防与治疗发挥着越来越重要的作用。在RE发病率高且呈现上升趋势及缺乏有效防控制品的情况下,本研究通过制备与使用卵黄抗体来探索卵黄抗体用于治疗RE的可行性,为临床防控RE提供技术指导。
利用REV建立制备抗RE卵黄抗体的新方法,免疫蛋鸡后,适宜条件下饲养,定期收集鸡蛋,采用聚乙二醇沉淀法提取、过滤、离心、纯化卵黄抗体,并对卵黄抗体进行浓度测定,测得蛋白含量为18.68 mg·L-1,浓度范围在16～22 mg/m L之间。同时,通过SDS-PAGE电泳验证,能够观察到清晰的两条带,分别为重链和轻链,大小分别为65 k Da和25 k Da,证明所制备的卵黄抗体具有较高的纯度,其相对质量与文献中的数据相匹配。中和效价测定结果显示,实验组能够产生较高水平的抗REV的中和抗体,效价为10-3.58/100μL。用ELISA试剂盒检测效价,发现所制备的卵黄抗体具有较高的效价,且随着稀释倍数的增加,效价也随之降低。卵黄抗体性状检验结果显示,该抗体为淡黄色透明澄清的液体,久置后会有少量白色沉淀。卵黄抗体安全性良好,在1日龄雏鸡的腿部肌肉中注射0.5 m L所制备卵黄抗体后观察,未见任何不良反应和副作用。
雏鸡垂直传播模型攻毒治疗试验结果显示,当雏鸡感染REV后,注射卵黄抗体组血液、肛拭子和免疫器官中病毒载量呈下降趋势,未注射组卵黄抗体组病毒拷贝数随时间不断上升,且免疫器官发育指数可看出注射卵黄抗体后抑制了垂直传播后胸腺和法氏囊的萎缩（P<0.01）,说明注射卵黄抗体治疗可缓解REV的侵害。雏鸡同居感染预防试验结果显示,当雏鸡在1日龄腿部肌肉注射卵黄抗体后,血液、肛拭子和免疫器官中均未检测到REV病毒阳性,而未注射卵黄抗体组中出现了阳性鸡,卵黄抗体预防水平传播组中病毒载量极显著低于水平传播组（P<0.0001）,且注射卵黄抗体后抑制了胸腺和法氏囊的萎缩,证明所制备卵黄抗体可以有效预防REV的水平传播。雏鸡预防保护试验结果显示,当雏鸡在1日龄时腿部肌肉注射0.5 m L卵黄抗体后,血液、肛拭子和免疫器官中均无REV阳性,而攻毒组中出现了阳性鸡（P<0.0001）,且通过比较免疫器官发育指数,卵黄抗体预防组的肝脏肿大、法氏囊、胸腺萎缩得到缓解,证明卵黄抗体可以有效预防REV的侵害,预防保护效果良好。
综上所述,用REV作为载体接种白羽母鸡可以有效激活鸡的免疫系统并产生高浓度的中和抗体,这表明成功建立了一种用RE相关病毒产生卵黄抗体的方法。抗RE卵黄抗体的检测和临床研究进一步表明,该方法能获得特异性好、免疫效果好、稳定性好的卵黄抗体。这项研究为生产高效、经济和稳定的抗RE抗体提供了一种新的方法,并研究了抗体的生产方法,用于RE预防和治疗,为RE的防治提供了新思路。
暂无评论