检索结果-内蒙古大学图书馆

北方牧业 2022年第18期 28-28页

作者：邓小芸黑龙江职业学院农牧工程学院黑龙江哈尔滨150111

禽网状内皮组织增生症(RE)是由禽网状内皮组织增生症病毒(REV)引起鸡的一种病理综合征,其主要特征包括急性网状细胞肿瘤形成、淋巴组织慢性肿瘤、矮小综合征。除了引起肿瘤,REV还可导致感染鸡胸腺等免疫器官萎缩,导致免疫抑制,极易并发... 详细信息

禽网状内皮组织增生症(RE)是由禽网状内皮组织增生症病毒(REV)引起鸡的一种病理综合征,其主要特征包括急性网状细胞肿瘤形成、淋巴组织慢性肿瘤、矮小综合征。除了引起肿瘤,REV还可导致感染鸡胸腺等免疫器官萎缩,导致免疫抑制,极易并发或继发感染其他疫病。作为逆转录病毒,REV基因组容易整合到马立克病病毒、禽痘病毒等的基因组中,还能通过鸡胚污染相关疫苗。

关键词：禽网状内皮组织增生症病毒继发感染马立克病病毒禽痘病毒感染鸡淋巴组织网状细胞免疫抑制

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基于p30-gp90融合蛋白的禽网状内皮组织增生症病毒抗体间接ELISA方法的建立

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中国动物检疫 2021年第10期38卷 107-114页

作者：栾晓宁郭龙宗马广斌李玉燕王一新巩新民山东农业大学动物科技学院山东泰安271018 山东益生种畜禽股份有限公司山东烟台265509 山东信得科技股份有限公司山东青岛266071

禽网状内皮组织增生症病毒(reticuloendotheliosis virus,REV)既可以诱发禽的肿瘤性疾病,又能引起感染禽群免疫抑制,给养禽业带来重大经济损失。REV抗体监测对于该病的诊断、预防和控制具有重要意义。本试验首先通过大肠杆菌表达系统表... 详细信息

禽网状内皮组织增生症病毒(reticuloendotheliosis virus,REV)既可以诱发禽的肿瘤性疾病,又能引起感染禽群免疫抑制,给养禽业带来重大经济损失。REV抗体监测对于该病的诊断、预防和控制具有重要意义。本试验首先通过大肠杆菌表达系统表达了重组REV p30-gp90融合蛋白,随后建立了基于该融合蛋白的REV抗体间接酶联免疫吸附试验(ELISA),并对反应条件进行了优化。结果显示,p30-gp90间接ELISA的灵敏度(1:51200)是间接免疫荧光法(IFA)(1:6400)的8倍,与其他常见禽类病毒无交叉反应,且具有良好的批内和批间重复性。对从山东省部分地区养殖场采集的690份血清样品,同时利用p30-gp90间接ELISA和IFA进行检测,发现20.87%的血清样品经间接ELISA检测为阳性,间接ELISA和IFA的总体符合率为96.96%。结果表明,本研究建立的间接ELISA检测方法具有特异性强、敏感性高和重复性好的优势,为REV的快速诊断、流行病学调查和血清学监测提供了技术支持。

关键词：禽网状内皮组织增生症病毒 p30-gp90融合蛋白间接ELISA 抗体

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禽网状内皮组织增生症病毒抗原快速检测试纸条的研制及应用

禽网状内皮组织增生症病毒抗原快速检测试纸条的研制及应用

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作者：李书剑扬州大学

学位级别：硕士

禽网状内皮组织增生症(Reticuloendotheliosis)是由C型逆转录病毒禽网状内皮组织增生症病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)引起的一系列症状的总称,主要包括矮小综合征、急性网状细胞瘤和慢性组织肿瘤;其病原是目前己知的家禽中第... 详细信息

禽网状内皮组织增生症(Reticuloendotheliosis)是由C型逆转录病毒禽网状内皮组织增生症病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)引起的一系列症状的总称,主要包括矮小综合征、急性网状细胞瘤和慢性组织肿瘤;其病原是目前己知的家禽中第三种肿瘤病病原。目前用于REV检测的方法虽然灵敏度高、准确性强,但耗时长,需要专业人员和专业设备,基层推广条件不理想。为此,需要一种简便快捷的检测方法来检测REV。本论文设计研制了一种以检测REV主要免疫原性蛋白p30的两种单抗,REVp30-2C8、REVp30-5G6为基础的免疫胶体金层析试纸条,具有良好的特异性,灵敏度和ELISA试剂盒相当,且快速、灵敏、准确,5-15min即可出结果;检测样本涵盖肛拭子、喉拭子等,采样方便,不需专业设备;成本低廉且具有良好的基层推广价值,在生产实际中将产生重要作用。1.两种单克隆抗体与胶体金结合条件的选择本研究参考Frens控制还原剂量以控制胶体金粒径大小的方法,成功制备了粒径为15nm、30nm、40nm的胶体金,通过肉眼观察,透射电镜,胶体金试验的方法鉴定其适用性。而后,使用本实验室制备的两株检测REVp30蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞,经由balb/C小鼠制备腹水,Protein G纯化柱纯化两株单克隆抗体REVp30-5G6、REVp30-2C8,进行这两种单克隆抗体与特定粒径胶体金颗粒结合最佳条件如最佳结合pH,最佳结合蛋白量的选择。经电镜鉴定,并结合蛋白使用效率和实验结果,选择了 30nm胶体金颗粒作为结合颗粒。2.网状内皮组织增生症病毒抗原快速检测试纸条的研制及优化本研究研制了免疫胶体金层析试纸条,并优化制备了适应临床环境中的应用得试纸条。首先设计免疫胶体金试纸条,纯化C线IgG多抗,制备待检抗原;再对试纸条多种工艺指标进行优化,如胶体金试纸条中胶体金-抗体复合物最佳喷量,NC膜T线C线的处理等;最后检测制成的胶体金试纸条的灵敏度、特异性、重复性、保存期。最终选用以REVp30-5G6为金标抗体,REVp30-2C8为T线抗体的试纸条为最终产品,其REV最低检测限为195TCID50,灵敏度可以达到ELISA试剂盒检测的标准,与ALV、CAV、REV、MDV、IBDV无交叉反应,特异性、批间批内重复性良好。本试纸条不耐高热,需低湿度4℃环境保存。此条件下本试纸条可以保持最少12个月,该试纸条的灵敏度、特异性等性能无变化。***抗原快速检测免疫胶体金层析试纸条的初步应用实验室条件下模拟SPF鸡感染REV病毒,对从感染病鸡采集的喉拭子、肛拭子等样本对其使用ELISA、CGIA、PCR和传统的病毒分离间接免疫荧光方法进行同步检测,结果相互印证,以验证本实验的临床应用前景。试验结果证明,本实验制备的免疫胶体金层析试纸条能准确、简便、快速的检测REV抗原,5-15分钟即可出结果,不需要专业的设备和技术,适用于基层兽医部门、家禽育种公司、疫苗生产企业以及出入境部门对禽网状内皮组织增生症病毒的快速检测,且成本低廉,经济效益良好。

关键词：禽网状内皮组织增生症病毒 p30 抗原免疫胶体金层析技术体外诊断

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检测禽网状内皮组织增生症病毒的RPA特异性引物对及其应用

检测禽网状内皮组织增生症病毒的RPA特异性引物对及其应用

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作者：徐晴晴姚永秀维诺·奈尔沈志强 256600 山东省滨州市黄河二路169号绿都生物高科技园区

本发明公开了检测禽网状内皮组织增生症病毒的RPA特异性引物对及其应用。本发明可以在37℃恒温条件下对目的核酸gp90基因进行RPA扩增，对仪器设备要求低，扩增的目的片段转录为RNA后被特异性的crRNA识别，进而被Cas13a切割，Cas13a的“... 详细信息

标准号: CN113249527A

本发明公开了检测禽网状内皮组织增生症病毒的RPA特异性引物对及其应用。本发明可以在37℃恒温条件下对目的核酸gp90基因进行RPA扩增，对仪器设备要求低，扩增的目的片段转录为RNA后被特异性的crRNA识别，进而被Cas13a切割，Cas13a的“附带切割”活性可以切割体系中的RNA报告分子，本发明的RPA反应时间在30 min左右，SHERLOCK反应时间在40 min左右，总体的检测时间低于2h；本发明配合侧流层析试纸条的应用将检测结果可视化能实现REV的快速检测和鉴别诊断。

关键词：切割扩增禽网状内皮组织增生症病毒层析试纸条特异性引物转录报告分子恒温条件检测结果鉴别诊断快速检测目的片段仪器设备可视化检测核酸侧流附带应用配合

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禽网状内皮组织增生症病毒gp90基因原核表达产物在检测和预防REV中的应用

禽网状内皮组织增生症病毒gp90基因原核表达产物在检测和预防REV...

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作者：任志浩山东农业大学

学位级别：硕士

禽网状内皮组织增生症病毒(Reticuloendosiliosis virus,REV)引起的禽网状内皮组织增生症(Reticuloendotheliosis,RE)是一种重要的禽类免疫抑制性疾病和肿瘤性疾病,REV不仅可以感染鸡,还能够感染野鸡、鸭、火鸡、鹌鹑、鹅等。REV既能够... 详细信息

禽网状内皮组织增生症病毒(Reticuloendosiliosis virus,REV)引起的禽网状内皮组织增生症(Reticuloendotheliosis,RE)是一种重要的禽类免疫抑制性疾病和肿瘤性疾病,REV不仅可以感染鸡,还能够感染野鸡、鸭、火鸡、鹌鹑、鹅等。REV既能够垂直传播,也可以水平传播,除此之外使用了被REV污染的弱毒疫苗也是导致REV广泛流行的重要原因之一。目前,种源净化是彻底解决REV传播的最主要途径,但是迄今为止,还没有哪个国家专门提出针对REV的净化计划。本研究以一株REV疫苗污染毒核酸为模板,成功表达了其gp90蛋白并制备了针对gp90蛋白的单克隆抗体,将该蛋白与免疫佐剂CpG-ODN联合应用成功诱导母鸡产生针对REV的抗体并保护雏鸡抵抗REV感染,为REV的检测和防控提供了新的技术储备。*** gp90蛋白的表达及抗REV间接ELISA方法的建立以REV疫苗污染株IBD-C1605株的前病毒全基因cDNA克隆质粒为模板,通过PCR扩增,扩增出长度为1,200 bp的env-gp90基因片段,成功构建了PET-28a-gp90表达质粒,转化至大肠杆菌BL21中,经IPTG诱导、并通过SDS-PAGE蛋白质电泳检测,显示gp90蛋白获得高效表达。对包涵体蛋白洗涤、溶解,4℃复性后纯化。对该蛋白进行检测分析,结果显示,REV单克隆抗体11B118能够很好地识别gp90重组蛋白,该蛋白具有良好的反应原性。将纯化后的gp90蛋白作为包被抗原,建立了抗REV抗体的间接ELISA检测方法。优化ELISA的最佳工作条件,结果显示为抗原的包被的最佳浓度是10 mg/mL,一抗的最佳稀释度1:500,二抗最佳稀释度1:5000,最佳包被液TBST,最佳显色时间10 min。经过重复性试验、特异性试验、对比试验的结果显示本研究建立的ELISA方法重复性好,标准差均小于15%;特异性强,与马立克氏病毒(Marik’s disease virus,MDV)、禽白血病病毒(Avain leukosis virus,ALV)、新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)、鸡传染性法氏囊病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)、禽痘病毒(Fowlpox virus,FPV)等病毒的阳性抗体均不能产生交叉反应;结果可靠性好,与间接免疫荧光(Indirect immunofluorescence assay,IFA)准确性的吻合率都超过90%。2.抗REV-gp90蛋白单克隆抗体的制备gp90蛋白纯化后,免疫BALB/c小鼠,用PEG2000介导BALB/c小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合。经有限稀释法进行亚克隆,筛选单克隆抗体,4代之后,得到了1株能稳定分泌REV-gp90单克隆抗体的杂交瘤细胞株1A12D。进一步分析表明,gp90蛋白可以被1A12D株杂交瘤细胞所分泌的单克隆抗体特异性的识别,同时也能够特异性地识别REV全病毒。向经石蜡致敏的BALB/c小鼠注射该株杂交瘤细胞,制备腹水,检测小鼠腹水所含抗体效价,结果显示均超过1.2×10～4;建立检测REV间接免疫荧光(IFA)的方法,用该方法对MDV、ALV、FPV、IBDV、NDV等几种常见的鸡病毒进行特异性试验,结果均呈阴性,说明该方法对REV检测具有高度特异性。重复性试验结果显示该方法具有良好的可重复性,稳定性强。3.齐多夫定和单克隆抗体联合应用去除疫苗毒种中REV的污染为了将污染REV的某传染性法氏囊病疫苗的种毒进行纯化,将所制备的单克隆抗体同核苷类逆转录酶抑制剂类药物齐多夫定(Azidothymidine,AZT)分别单独使用及联合应用来去除疫苗毒种中REV的污染。将污染REV的IBDV疫苗毒种接种DF-1细胞后,分别经5μg/mL的AZT,5%的McAb或两者联合应用干预后,毒种中污染的REV复制受到了明显的干扰,特别是经过AZT与McAb联合应用两次干预后,检测REV为完全阴性,经检验传染性法氏囊毒种纯化合格。***90蛋白协同分子佐剂CpG-ODN诱导母源抗体保护雏鸡抵抗REV的感染为进一步观察所表达gp90蛋白的免疫原性,将纯化后的gp90蛋白协同免疫佐剂CpG-ODN使用于开产SPF母鸡10只,连续免疫8周,同时对母鸡血清以及卵黄抗体进行REV抗体水平检测,绘制抗体动态曲线,结果显示在免疫后母鸡血清及卵黄抗体均到达较高水平。将该鸡胚进行人工授精,孵化后检测1日龄雏鸡的母源抗体水平,选取抗体阳性鸡进行人工攻毒试验,以1日龄抗体阴性的SPF雏鸡作为对照组。结果显示,有母源抗体的雏鸡REV病毒血症阳性率从一周龄的50%最后下降至10%,而对照组的病毒血症阳性率从第一周的80%下降到最

关键词：禽网状内皮组织增生症病毒 gp90蛋白原核表达单克隆抗体齐多夫定

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禽网状内皮组织增生症病毒CA蛋白的表达纯化及多克隆抗体制备

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畜牧与兽医 2017年第9期49卷 67-70页

作者：姜莉莉王立成陈强樊兆斌锦州医科大学畜牧兽医学院辽宁锦州121001 菏泽学院药物科学与技术系山东菏泽274015

根据禽网状内皮组织增生症病毒(REV)DBYR1102株的前病毒基因组c DNA序列设计并合成1对引物,以p T-G质粒为模板,通过PCR扩增获得该病毒CA基因片段。将其克隆于pET-30a(+)中,构建原核表达质粒pET30a-CA。重组质粒经双酶切和测序鉴定,转化B... 详细信息

根据禽网状内皮组织增生症病毒(REV)DBYR1102株的前病毒基因组c DNA序列设计并合成1对引物,以p T-G质粒为模板,通过PCR扩增获得该病毒CA基因片段。将其克隆于pET-30a(+)中,构建原核表达质粒pET30a-CA。重组质粒经双酶切和测序鉴定,转化BL21(DE3),经IPTG诱导,SDS-PAGE鉴定蛋白表达情况。利用Ni-NTA His Bind Resin纯化重组蛋白,并经蔗糖浓缩,Western blot法检测重组蛋白的反应原性。纯化后的目的蛋白免疫新西兰白兔,制备兔抗CA多克隆抗体并对其进行鉴定。结果表明构建的重组质粒pET-30a-CA在大肠杆菌BL21中呈可溶性高效表达。经Ni柱纯化和蔗糖浓缩后得到纯度较高的融合蛋白,以纯化的融合蛋白免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,抗体效价达1∶25 600。该研究为REV的检测及CA基因的深入研究奠定了基础。

关键词：禽网状内皮组织增生症病毒 CA 原核表达抗体

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禽网状内皮组织增生症病毒蛋白酶PR酵母双杂交诱饵载体的构建及鉴定

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中国兽医杂志 2017年第5期53卷 27-29,33页

作者：姜莉莉蒋培红温海燕樊兆斌菏泽学院药物科学与技术系山东菏泽274015 锦州医科大学畜牧兽医学院辽宁锦州121001

为研究禽网状内皮组织增生症病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)蛋白酶PR与宿主细胞的相互作用,将REV PR基因克隆入酵母双杂交诱饵载体p GBKT7,构建诱饵载体p GBK-PR,经菌落PCR、酶切鉴定及测序验证正确后,将重组诱饵质粒转化酵母菌... 详细信息

为研究禽网状内皮组织增生症病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)蛋白酶PR与宿主细胞的相互作用,将REV PR基因克隆入酵母双杂交诱饵载体p GBKT7,构建诱饵载体p GBK-PR,经菌落PCR、酶切鉴定及测序验证正确后,将重组诱饵质粒转化酵母菌株Y2H Gold感受态,进行重组诱饵载体在酵母中的自激活活性和毒性检测。结果表明,成功构建诱饵载体p GBK-PR,此载体在酵母细胞Y2H Gold中无自激活活性和毒性。研究结果为进一步利用酵母双杂交技术筛选与REV蛋白酶PR互作的宿主蛋白奠定了基础。

关键词：禽网状内皮组织增生症病毒 PR 酵母双杂交诱饵载体

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禽网状内皮组织增生症病毒感染宿主的早期免疫反应

禽网状内皮组织增生症病毒感染宿主的早期免疫反应

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中国畜牧兽医学会2017年学术年会

作者：孔正茹程晓薇顾晨曦武宗仪钱琨扬州大学江苏省动物预防医学重点实验室教育部禽类预防医学重点实验室

引言禽网状内皮组织増生症病毒(REV)感染后主要引起感染家禽免疫功能抑制和慢性肿瘤,该病的控制对养禽业的健康发展和生物制品质量的提高具有重大影响。家禽感染REV后造成免疫抑制的主要机制有对宿主免疫器官造成实质性的损伤,干扰免疫... 详细信息

引言禽网状内皮组织増生症病毒(REV)感染后主要引起感染家禽免疫功能抑制和慢性肿瘤,该病的控制对养禽业的健康发展和生物制品质量的提高具有重大影响。家禽感染REV后造成免疫抑制的主要机制有对宿主免疫器官造成实质性的损伤,干扰免疫细胞的活化和増殖,以及抑制固有免疫细胞的活性。然而目前关于REV免疫抑制机理研究报道十分有限,病毒具体致病机制仍不十分清楚。因此本实验着重研究易感宿主体内REV早期感染引起的天然免疫应答情况,主要通过检测免疫器官内相关炎性因子、天然免疫受体、干扰素以及主要组织相容性复合体Ⅰ(MHCⅠ)的变化情况,反应宿主天然免疫应答。实验结果为进一步研究REV的致病机理提供重要的参考依据。

关键词：禽网状内皮组织增生症病毒天然免疫应答免疫反应

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利用核苷类逆转录酶抑制剂去除疫苗毒种中禽网状内皮组织增生症病毒污染

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中国兽医学报 2017年第6期37卷 1012-1017页

作者：苏红芹李思菲任志浩栾怀彪孟凡峰李阳崔治中常爽赵鹏山东农业大学动物医学院山东泰安271018

使用污染有禽网状内皮组织增生症病毒(REV)的弱毒疫苗被认为是REV流行的原因之一,去除疫苗毒种中REV污染是生产合格疫苗的基础环节,本研究试图利用核苷类逆转录酶抑制剂类药物Azidothymidine(LAM)和Lamivudine(AZT)去除疫苗毒种中REV污... 详细信息

使用污染有禽网状内皮组织增生症病毒(REV)的弱毒疫苗被认为是REV流行的原因之一,去除疫苗毒种中REV污染是生产合格疫苗的基础环节,本研究试图利用核苷类逆转录酶抑制剂类药物Azidothymidine(LAM)和Lamivudine(AZT)去除疫苗毒种中REV污染。首先通过在培养液中添加不同质量浓度AZT或LAM连续传代以及利用CCK-8测定细胞活性的方法,证实了在培养液中添加不超过5mg/L的抑制剂类药物对于DF-1细胞复制和活性没有影响。体外试验证实,当在培养液中分别添加5mg/L的AZT或LAM以及两者联合应用时均可以显著抑制REV在DF-1细胞上的复制,通过在新城疫弱毒疫苗中人为添加REV模拟AZT或LAM以及两者联合应用对疫苗毒种中REV污染的净化作用,结果显示经药物干预4代后即将REV去除,并且净化后毒种检验合格。本研究证实了AZT或LAM在体外对REV的抑制作用,并在人工模拟试验中成功净化了疫苗毒种中污染的REV。

关键词：禽网状内皮组织增生症病毒 azidothymidine lamivudine 抑制弱毒疫苗

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禽网状内皮组织增生症病毒LN1201株的全基因组序列分析及其U3区的独特性

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中国预防兽医学报 2016年第11期38卷 855-859页

作者：王一新栾怀彪许书珍李阳常爽崔治中赵鹏山东农业大学动物医学院山东泰安271018

为比较分析近年来禽网状内皮组织增生症病毒(REV)的基因组变异情况,本研究对分离自某父母代肉种鸡场患病鸡的REV LN1201株进行PCR扩增和克隆测序,获得了LN1201株的前病毒全基因组序列,并将其与不同参考株基因组进行了比较分析。结果显示... 详细信息

为比较分析近年来禽网状内皮组织增生症病毒(REV)的基因组变异情况,本研究对分离自某父母代肉种鸡场患病鸡的REV LN1201株进行PCR扩增和克隆测序,获得了LN1201株的前病毒全基因组序列,并将其与不同参考株基因组进行了比较分析。结果显示,LN1201株前病毒基因组全长8 438 bp,具有典型复制完整型逆转录病毒的基因组结构。与参考株相比,LN1201与国内分离株HLJR0901和疫苗污染病毒株MD-2同源性较高,但其U3区与不同病毒株的同源性相对较低,并且在U3区出现了罕见的14 bp碱基插入,显示该病毒株可能为LTR发生重组的病毒。本研究有助于了解我国鸡群中REV的基因组特性,提示有必要继续关注REV诱发的肿瘤及其基因变异。

关键词：禽网状内皮组织增生症病毒全基因组序列分析 U3区

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