[目的]本研究旨在建立快速、灵敏、特异性强的方法以检测宿主细胞中的禽网状内皮组织增生症病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV),并对其在鸡胚成纤维细胞(CEF)上的增殖动态规律进行初步研究.[方法]本研究针对gag、env以及LTR基因的保守序列设计三对引物,利用重组质粒作为模板,完成三种不同基因的标准曲线绘制,以此建立了SYBR Green Ⅰ实时荧光PCR检测方法并利用该方法推算出REV感染后不同时间点的病毒基因拷贝数.[结果]所制备的标准品模板在108拷贝/μl~101拷贝/μl范围内与CT值之间呈现良好的线性关系,且最低检出量为101拷贝/μl.实验结果显示,gag、env以及LTR基因的拷贝数均呈现先减少后增多的变化过程.[结论]通过实时荧光PCR技术,并与间接免疫荧光方法(IFA)相比较,发现RE在CEF上复制的初始阶段受到抑制,此后病毒大量复制,表现出明显的增长趋势.该研究不仅为REV的诊断技术提供了一种新的方法,同时也为深入研究REV的感染机制和致病机理奠定了基础.
为了快速、准确检测禽源生物制品中的禽网状内皮组织增生症病毒,根据GenBank中登录的REV参考毒株LTR基因序列,利用Primer Premier 5.0软件设计合成了1对特异性引物,其扩增产物长度为314bp,建立了PCR法,其特异性和敏感性较好。经与间接...
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为了快速、准确检测禽源生物制品中的禽网状内皮组织增生症病毒,根据GenBank中登录的REV参考毒株LTR基因序列,利用Primer Premier 5.0软件设计合成了1对特异性引物,其扩增产物长度为314bp,建立了PCR法,其特异性和敏感性较好。经与间接免疫荧光法进行同步比较试验,发现结果吻合性较高,且PCR法的结果更为直观,易于判断,样品保存方便,重检也方便,当日即可完成,显示出了较好的可行性。
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