检索结果-内蒙古大学图书馆

禽腺病毒i群和禽腺病毒4型双重TaqMan探针荧光定量PCR检测方法的建立与应用

中国预防兽医学报 2025年第2期47卷 152-158,184页

作者：薛晓岩张振兴杨钦鸿王位张伟李素华宋建领西南林业大学生命科学学院云南昆明650224 云南省畜牧兽医科学院云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室云南昆明650224 西双版纳州动物疫病预防制中心云南西双版纳650224

为建立能快速检测禽腺病毒i群(FAd V-i)和禽腺病毒4型(FAd V-4)的双重Taq Man探针荧光定量PCR(qPCR)方法,本研究根据禽腺病毒(FAd V)的Hexon基因,设计针对FAd V-i和FAd V-4的通用型与特异型引物与探针。采用上述引物经PCR扩增靶基因并... 详细信息

为建立能快速检测禽腺病毒i群(FAd V-i)和禽腺病毒4型(FAd V-4)的双重Taq Man探针荧光定量PCR(qPCR)方法,本研究根据禽腺病毒(FAd V)的Hexon基因,设计针对FAd V-i和FAd V-4的通用型与特异型引物与探针。采用上述引物经PCR扩增靶基因并克隆至p MD19-T载体中,构建重组质粒标准品p MD19-T-FAd V-i和p MD19-T-FAd V-4,并均经PCR和测序鉴定。将两种重组质粒标准品分别10倍倍比稀释后等体积混合作为模板,采用棋盘法对反应体系和反应条件进行优化,建立了能检测上述病原的双重Taq Man探针q PCR方法,同时对该方法的特异性、敏感性、重复性及对临床样品的适用性进行评价。结果显示,两种重组质粒标准品标准曲线的相关系数(R2)均大于0.996,表明两种质粒标准品混合物的拷贝数与其Ct值具有良好的线性关系;该方法能够特异性检测和区分FAd V-i和FAd V-4,与其他禽类传染病病原核酸不发生交叉反应,具有较强的特异性;该方法对FAd V-i和FAd V-4重组质粒标准品的检测限分别为4.6×10~2拷贝/μL和2.01×10~2拷贝/μL,比常规PCR方法敏感性高10倍,具有较高的敏感性;批内和批间重复性试验的变异系数均小于1.0%,具有较好的重复性和稳定性。采用该方法和常规PCR法对32份疑似感染FAd V-i的家禽组织样品、8份疑似感染FAd V-4的家禽粪便样品进行检测,结果显示二者检测结果的符合率均为100%。结果表明,本研究建立的FAd V-i/FAd V-4双重Taq Man探针q PCR检测方法特异性强、敏感性高、准确性好,为快速诊断FAd V-i的同时鉴别FAd V-4提供了技术支持。

关键词：禽腺病毒i群禽腺病毒4型 Hexon TaqMan探针荧光定量PCR

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Ⅰ群禽腺病毒penton蛋白单克隆抗体的制备和鉴定

引用

中国兽医学报 2022年第1期42卷 41-46页

作者：侯力丹陈晓春薛麒邓永孔冬妮杨承槐刘丹李俊平中国兽医药品监察所北京100081 中国农业大学动物医学院北京100193

在同源性分析基础上,确定了12个血清型penton蛋白同源性最高的2段基因并通过linker进行连接,以该串联基因原核表达蛋白为抗原免疫小鼠,通过杂交瘤技术制备并筛选到2株可分泌FAdV-Ⅰpenton蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞系(Mab-penton-6#和M... 详细信息

在同源性分析基础上,确定了12个血清型penton蛋白同源性最高的2段基因并通过linker进行连接,以该串联基因原核表达蛋白为抗原免疫小鼠,通过杂交瘤技术制备并筛选到2株可分泌FAdV-Ⅰpenton蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞系(Mab-penton-6#和Mab-penton-9#)。2株单克隆抗体小鼠腹水经间接免疫荧光等鉴定,可识别FAdV-Ⅰ的所有血清型代表毒株,与鸡减蛋综合征病毒、禽白血病病毒、鸡传染性喉气管炎病毒、禽呼肠孤病毒等均不发生反应,特异性良好,效价分别为1∶8000和1∶4000,最终选取Mab-penton-6#大量制备单克隆抗体。本试验成功研制出FAdV-i的penton蛋白单克隆抗体,为FAdV-Ⅰ检测方法的建立奠定了良好基础。

关键词：禽腺病毒i群单克隆抗体 penton蛋白

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