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通腑理肺汤通过调控miR-146a抑制THP-1细胞PD-1/PD-L1信号通路的作用机制

中华危重病急救医学 2024年第10期36卷 1038-1043页

作者：吕波李兰黄瑞峰周霞辉韩立鹏贵州中医药大学第一附属医院重症医学科贵阳550001 贵州中医药大学贵阳550001

目的探讨通腑理肺汤(TFL)对脂多糖(LPS)诱导人单核细胞白血病细胞THP-1的保护作用与机制。方法①体外培养THP-1细胞,与1 mg/L LPS共孵育18 h构建体外THP-1细胞炎症模型;另取THP-1细胞作为空白对照组。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测... 详细信息

目的探讨通腑理肺汤(TFL)对脂多糖(LPS)诱导人单核细胞白血病细胞THP-1的保护作用与机制。方法①体外培养THP-1细胞,与1 mg/L LPS共孵育18 h构建体外THP-1细胞炎症模型;另取THP-1细胞作为空白对照组。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞分泌肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)水平。②将THP-1炎症细胞分为7组,分别给予0、0.005、0.01、0.02、0.04、0.08、0.16 mL/mL TFL(每毫升培养液加入不同剂量TFL溶液,生药含量为1 kg/L)干预24 h。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测细胞存活率,筛选出TFL对THP-1炎症细胞无毒性作用的干预剂量。③另取THP-1炎症细胞,依据MTT比色法筛选出的TFL干预剂量,将细胞分为炎症模型组及0.01、0.02、0.04 mL/mL TFL组。各组干预24 h后采用ELISA法测定细胞分泌TNF-α和IL-6水平;采用蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)检测细胞中程序性死亡受体-1/程序性死亡受体配体-1(PD-1/PD-L1)信号通路蛋白表达;采用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞中微小RNA(miR-146a、miR-146b、miR-155)表达。④以TFL对THP-1炎症细胞无毒性作用最大剂量0.04 mL/mL作为干预剂量,将THP-1炎症细胞分为炎症模型组、TFL组、TFL+miR-146a抑制剂组、TFL+miR-146b抑制剂组和TFL+miR-155抑制剂组。炎症模型组不给予任何药物干预;各抑制剂组在0.04 mL/mL TFL干预的基础上,加入相应抑制剂100 nmol/L。各组干预24 h后采用ELISA法测定细胞分泌TNF-α和IL-6水平;采用Western blotting检测细胞中PD-1/PD-L1信号通路蛋白表达。结果①与空白对照组比较,炎症模型组细胞分泌TNF-α和IL-6的水平明显升高,说明体外THP-1炎症细胞模型构建成功。②0~0.04 mL/mL TFL均未对THP-1炎症细胞产生毒性作用,而0.08 mL/mL和0.16 mL/mL TFL组细胞存活率明显低于炎症模型组,说明当TFL剂量超过0.04 mL/mL时对THP-1炎症细胞具有毒性作用。③与炎症模型组比较,0.01 mL/mL TFL对THP-1炎症细胞分泌炎症因子水平无显著影响;而0.02 mL/mL和0.04 mL/mL TFL干预后,细胞分泌TNF-α和IL-6水平均明显降低〔TNF-α(ng/L):95.89±8.55、70.73±11.70比137.10±7.19,IL-6(ng/L):23.03±2.55、16.58±1.72比32.60±2.55,均P<0.01〕。与炎症模型组比较,不同剂量TFL组THP-1炎症细胞中PD-1/PD-L1信号通路蛋白表达呈剂量依赖性降低,0.04 mL/mL TFL组通路蛋白表达均明显低于炎症模型组〔PD-1蛋白(PD-1/β-actin):0.28±0.04比1.00±0.10,PD-L1蛋白(PD-L1/β-actin):0.54±0.05比1.00±0.08,磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)蛋白(PI3K/β-actin):0.28±0.03比1.00±0.08,磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)蛋白(p-Akt/Akt):0.38±0.04比1.00±0.10,均P<0.01〕。与炎症模型组比较,0.01、0.02、0.04 mL/mL TFL组THP-1炎症细胞中miR-146a表达均明显下降(2-ΔΔCt:0.46±0.11、0.31±0.13、0.23±0.14比1.01±0.18,均P<0.01),而miR-146b和miR-155表达无明显变化。④与炎症模型组比较,TFL组THP-1炎症细胞分泌TNF-α和IL-6水平明显降低;而TFL+miR-146a抑制剂可明显逆转TFL对炎症因子的抑制作用,与TFL组比较差异有统计学意义〔TNF-α(ng/L):138.55±10.30比72.33±10.59,IL-6(ng/L):31.35±3.98比15.75±3.76,均P<0.01〕。与炎症模型组比较,TFL组THP-1炎症细胞中PD-1/PD-L1信号通路蛋白表达显著降低;而TFL+miR-146a抑制剂组细胞中通路蛋白表达均较TFL组显著升高〔PD-1蛋白(PD-1/β-actin):0.85±0.09比0.37±0.04,PD-L1蛋白(PD-L1/β-actin):0.83±0.08比0.55±0.06,PI3K蛋白(PI3K/β-actin):0.85±0.09比0.63±0.06,p-A

关键词：脓毒症通腑理肺汤微小RNA-146a 程序性死亡受体-1/程序性死亡受体配体-1信号通路

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桃叶珊瑚苷通过调节PD-1/PD-L1信号通路介导的免疫逃逸对肺癌细胞放疗敏感性的影响

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国际检验医学杂志 2024年第12期45卷 1435-1441页

作者：贺介甫杜钢周福星李星巴彦淖尔市医院放疗科内蒙古巴彦淖尔015000

目的探究桃叶珊瑚苷(Aucubin)通过调节程序性死亡受体-1(PD-1)/程序性死亡受体配体-1(PD-L1)信号通路介导的免疫逃逸对肺癌细胞放疗敏感性的影响及其作用机制。方法0~300μmol/mL的Aucubin处理人肺癌细胞NCI-H1299,MTT检测细胞活力。将... 详细信息

目的探究桃叶珊瑚苷(Aucubin)通过调节程序性死亡受体-1(PD-1)/程序性死亡受体配体-1(PD-L1)信号通路介导的免疫逃逸对肺癌细胞放疗敏感性的影响及其作用机制。方法0~300μmol/mL的Aucubin处理人肺癌细胞NCI-H1299,MTT检测细胞活力。将细胞分为正常对照组(Control组)、放疗组(6 Gy组)、Aucubin组、Aucubin+放疗组(Aucubin+6 Gy组),克隆形成实验和Edu实验检测细胞增殖水平,流式细胞仪检测细胞凋亡,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养液上清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素(IL)-2水平,蛋白质印迹法(Western blot)检测PD-1、PD-L1蛋白表达。建立肺癌小鼠移植瘤模型,分为对照组(Control组)、放疗组(5 Gy组)、Aucubin组和Aucubin+5 Gy组。测量移植瘤体积与质量,ELISA检测TNF-α、IFN-γ、IL-2水平,Western blot检测PD-1、PD-L1蛋白表达。结果与0μmol/mL比较,25~125μmol/mL的Aucubin能降低细胞活力,选择100μmol/mL的Aucubin进行后续实验。与Control组比较,6 Gy组和Aucubin组细胞克隆形成数、Edu阳性率、TNF-α水平及PD-1、PD-L1蛋白表达水平降低(P<0.05),细胞凋亡率及IFN-γ、IL-2水平升高(P<0.05);Aucubin+6 Gy组细胞克隆形成数、Edu阳性率、TNF-α水平及PD-1、PD-L1蛋白表达水平低于6 Gy组和Aucubin组(P<0.05),细胞凋亡率及IFN-γ、IL-2水平高于6 Gy组和Aucubin组(P<0.05)。小鼠移植瘤实验表明,与Control组比较,5 Gy组和Aucubin组小鼠移植瘤体积和质量、TNF-α水平及PD-1、PD-L1蛋白表达水平降低(P<0.05),IFN-γ、IL-2水平升高(P<0.05);Aucubin+5 Gy组小鼠移植瘤体积和质量、TNF-α水平及PD-1、PD-L1蛋白表达水平低于5 Gy组和Aucubin组(P<0.05),IFN-γ、IL-2水平高于5 Gy组和Aucubin组(P<0.05)。结论Aucubin可能通过阻断PD-1/PD-L1信号通路介导的免疫逃逸增强肺癌细胞放疗敏感性。

关键词：桃叶珊瑚苷程序性死亡受体-1/程序性死亡受体配体-1信号通路肺癌免疫逃逸放疗敏感性

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