检索结果-内蒙古大学图书馆

中国生物医学工程学报 2007年第1期26卷 110-115页

作者：张怀勤肖刚峰孙成超杨德业徐力辛黄伟剑林捷温州医学院附属第一医院心脏中心温州325000 宁波市第二医院宁波315000

目的探讨利用外周血内皮祖细胞(EPCs)制备组织工程瓣膜的可行性。方法分离人外周血EPCs,采用酶-去垢剂法去除新鲜猪主动脉瓣细胞制备去细胞瓣膜支架,将培养的人外周血EPCs接种到去细胞瓣膜上。结果经酶-去垢剂法去除新鲜猪主动脉瓣细胞... 详细信息

目的探讨利用外周血内皮祖细胞(EPCs)制备组织工程瓣膜的可行性。方法分离人外周血EPCs,采用酶-去垢剂法去除新鲜猪主动脉瓣细胞制备去细胞瓣膜支架,将培养的人外周血EPCs接种到去细胞瓣膜上。结果经酶-去垢剂法去除新鲜猪主动脉瓣细胞后,细胞成分全部去除,纤维支架保存完好。去细胞处理后瓣膜无明显细胞毒性。人外周血EPCs与去细胞瓣膜共孵育2周后,细胞紧贴瓣膜表面生长形成一层连续的单细胞层,初步生物力学测定示去细胞前与再内皮化后,瓣膜力学特性无明显改变。结论外周血分离培养扩增得到的EPCs能够再内皮化去细胞猪主动脉瓣构建组织工程瓣膜,外周血EPCs是组织工程瓣膜内皮种子细胞的新的来源。

关键词：细胞培养内皮祖细胞组织工程瓣膜

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聚乙二醇在猪组织工程瓣膜制备中的应用

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中国组织工程研究与临床康复 2007年第26期11卷 5094-5096页

作者：徐鹏蒋雄刚杨华静韩啸张凯伦华中科技大学同济医学院附属协和医院心血管外科湖北省武汉市430022 华中科技大学同济医学院附属同济医院神经内科湖北省武汉市430030

目的:观察聚乙二醇法在组织工程瓣膜准备中的应用价值,比较聚乙二醇去细胞前后组织工程瓣膜的物理特性。方法:实验于2005-10/2006-03在华中科技大学同济医学院基础医学院生物化学系实验室完成。①实验分组:取猪10只,由于猪主动脉瓣为三... 详细信息

目的:观察聚乙二醇法在组织工程瓣膜准备中的应用价值,比较聚乙二醇去细胞前后组织工程瓣膜的物理特性。方法:实验于2005-10/2006-03在华中科技大学同济医学院基础医学院生物化学系实验室完成。①实验分组:取猪10只,由于猪主动脉瓣为三叶瓣结构,共取得瓣叶组织30个,麻醉后宰杀取其心脏动脉瓣膜,分为去细胞组和对照组,每组各15个。②实验方法:去细胞组用聚乙二醇和DNase I处理;瓣叶组织放入1kg/L聚乙二醇,室温下浸泡30～45min,振荡器加以振荡;含抗生素磷酸盐缓冲液浸泡24h,反复3次洗脱;以5×104U/L DNase I液浸泡处理1h;对照组仅以含抗生素磷酸盐缓冲液浸泡24h,反复3次洗脱。③实验评估:苏木精-伊红染色、扫描电镜观察去细胞情况,吸光度(A)值,计算去细胞率(%)=(对照组A值-去细胞组A值)/对照组A值×100%。猪去细胞瓣膜条置于力学测试仪测定最大负荷、最大应力、最大应变和弹性模量。结果:纳入猪10只,均进入结果分析。①去细胞组织形态学观察:去细胞组猪瓣膜组织中看不到细胞成分,且细胞外基质结构保存完整,胶原纤维排列整齐,无明显断裂,仍呈波浪状平行排列,结构紧凑,弹性纤维结构清晰,组织无明显水肿。②DNA含量分析:聚乙二醇处理后去细胞百分率为95.32%。③生物力学检测:与对照组比较,去细胞组瓣膜组织最大负荷[(12.586±1.693),(10.242±1.435)N,P>0.05]、最大应力[(2.346±0.342),(1.877±0.572)N/mm,P>0.05]、弹性模量(15.152±1.579,14.549±0.678,P>0.05)、最大应变[(31.685±7.533),(28.118±6.045)mm/N,>0.05]等均无显著差异。P结论:聚乙二醇法去除细胞完全,细胞外基质保存完整,对组织机械性能无明显影响,适于构建组织工程瓣膜。

关键词：组织工程聚乙二醇组织工程瓣膜去细胞化组织构建

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间充质干细胞构建组织工程瓣膜的生物力学性能研究

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华中科技大学学报（医学版） 2009年第2期38卷 220-223页

作者：洪昊苏伟董念国史嘉玮华中科技大学同济医学院附属协和医院心血管外科武汉430022

目的采用碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)联合间充质干细胞(mesenchy-mal stemcells,MSCs)构建组织工程心脏瓣膜(tissue engineered heart valve,TEHV),并对其生物力学性能进行研究。方法分离培养大鼠MSCs,进行细胞鉴定后种植于去细胞瓣叶支架上。将瓣叶置于含5 ng/ml bFGF的培养液中,分别培养7 d和14 d作为实验组A和实验组B。实验组C除培养液中不添加bFGF外,其余同实验组B。对照组为大鼠肌成纤维细胞构建的TEHV。对各组TEHV进行形态学观察,生化检测和生物力学测试。结果MSCs表达CD29(94.82%)和CD44(93.59%)。各组TEHV具有相似的形态结构,DNA和羟脯氨酸含量、最大负荷、最大应力、最大应变和弹性模量的差异无统计学意义(P>0.05)。结论采用MSCs和肌成纤维细胞构建的TEHV具有相同的生物力学性能,而采用bFGF联合MSCs体外构建TEHV能在更短的时间内获得相同的生物力学性能。

关键词：碱性成纤维细胞生长因子间充质干细胞组织工程瓣膜生物力学

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碱性成纤维细胞生长因子联合间充质干细胞构建组织工程瓣膜的研究

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临床心血管病杂志 2009年第11期25卷 849-852页

作者：洪昊苏伟董念国史嘉玮华中科技大学协和医院心外科华中科技大学同济医学院心血管病研究所武汉430022

目的:探讨采用碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)联合间充质干细胞(MSCs)体外构建组织工程瓣膜(TEHV)过程中,MSCs表型特性和基质金属蛋白酶及其抑制物的表达情况。方法:分离培养大鼠MSCs,进行细胞鉴定后种植于去细胞瓣叶支架上。将瓣叶置于... 详细信息

目的:探讨采用碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)联合间充质干细胞(MSCs)体外构建组织工程瓣膜(TEHV)过程中,MSCs表型特性和基质金属蛋白酶及其抑制物的表达情况。方法:分离培养大鼠MSCs,进行细胞鉴定后种植于去细胞瓣叶支架上。将瓣叶置于含5ng/mlbFGF的培养液中,培养14d构建的TEHV作为A组;B组除培养液中不添加bFGF外,其余同A组;C组为大鼠肌成纤维细胞构建TEHV的对照组。RT-PCR检测各组TEHV中α-SMA、MMP-13和TIMP-1mRNA的表达。结果:MSCs表达CD29(94.82%)和CD44(93.59%)。A组与C组α-SMA、MMP-13和TIMP-1mRNA表达比较均差异无统计学意义(P>0.05),但均高于B组(P<0.05)。结论:采用bFGF联合MSCs体外构建TEHV过程中,通过bFGF的调控作用,可以使MSCs的表型特性和基质金属蛋白酶及其抑制物表达与肌成纤维细胞相当。

关键词：间充质干细胞碱性成纤维细胞生长因子组织工程瓣膜基质金属蛋白酶

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碱性成纤维细胞生长因子联合骨髓间充质干细胞构建组织工程瓣膜的研究

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临床心血管病杂志 2009年第4期25卷 259-262页

作者：洪昊苏伟董念国史嘉玮华中科技大学协和医院心外科、华中科技大学同济医学院心血管病研究所武汉430022

目的:探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)联合骨髓间充质干细胞(MSCs)构建组织工程瓣膜(TEHV),能否在保证生物学性能不变的前提下,缩短MSCs体外构建TEHV的时间。方法:分离培养大鼠MSCs,进行细胞鉴定后种植于去细胞猪主动脉瓣膜支架上,再... 详细信息

目的:探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)联合骨髓间充质干细胞(MSCs)构建组织工程瓣膜(TEHV),能否在保证生物学性能不变的前提下,缩短MSCs体外构建TEHV的时间。方法:分离培养大鼠MSCs,进行细胞鉴定后种植于去细胞猪主动脉瓣膜支架上,再进行分组于体外构建TEHV。在培养基中加入5μg/L的bFGF分别培养7 d、14 d做为实验组A和实验组B,实验组C除培养液中不添加bFGF外,其余同实验组B。对照组为大鼠肌成纤维细胞构建的TEHV。各组TEHV进行形态学观察,DNA和羟脯氨酸含量检测。结果:MSCs表达CD29(94.82%)和CD44(93.59%),a-SMA和Vi mentin染色阳性,各组TEHV具有相似的形态学结构,DNA和羟脯氨酸含量的差异无统计学意义。结论:采用bFGF联合MSCs能在更短的时间内构建具有相同生物学性能的TEHV,从而缩短TEHV体外构建时间。

关键词：骨髓间充质干细胞碱性成纤维细胞生长因子组织工程瓣膜生物学性能

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RGD肽联合转化生长因子-β_1对组织工程瓣膜构建的影响

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中华医学杂志 2006年第29期86卷 2074-2077页

作者：史嘉玮董念国孙宗全仇玉明华中科技大学附属协和医院心血管外科武汉430022

细胞对支架的黏附和生长是构建组织工程心脏瓣膜（tissue engineering heart valve，TEHV）的关键环节。去细胞瓣被认为是一种较理想的TEHV支架，本实验率先采用RGD肽（精-甘-天冬氨酸，Arg-Gly-Asp）表面修饰以促进细胞黏附，联合种植... 详细信息

细胞对支架的黏附和生长是构建组织工程心脏瓣膜（tissue engineering heart valve，TEHV）的关键环节。去细胞瓣被认为是一种较理想的TEHV支架，本实验率先采用RGD肽（精-甘-天冬氨酸，Arg-Gly-Asp）表面修饰以促进细胞黏附，联合种植转化生长因子-β1（TGF-β1）基因转染细胞以促进细胞及细胞外基质（ECM）增生，观察两种生物活性分子对去细胞瓣体外构建TEHV的影响。

关键词：转化生长因子-β1(TGF-β1) RGD肽联合种植组织工程瓣膜细胞外基质(ECM) 组织工程心脏瓣膜基因转染细胞生物活性分子 HV支架细胞黏附

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聚乙二醇-海藻酸钠水凝胶构建新型组织工程瓣膜支架

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华中科技大学学报（医学版） 2022年第2期51卷 203-206页

作者：徐旭洪昊乔韡华史嘉玮董念国华中科技大学同济医学院附属协和医院心脏大血管外科武汉430022

目的利用聚乙二醇-海藻酸钠水凝胶交联去细胞瓣膜构建组织工程瓣膜支架,并研究其生物学和生物力学性能。方法由聚乙二醇-海藻酸钠水凝胶交联去细胞瓣膜制备复合支架瓣膜,由戊二醛与瓣膜交联制备戊二醛交联瓣膜,通过组织学染色,扫描电镜... 详细信息

目的利用聚乙二醇-海藻酸钠水凝胶交联去细胞瓣膜构建组织工程瓣膜支架,并研究其生物学和生物力学性能。方法由聚乙二醇-海藻酸钠水凝胶交联去细胞瓣膜制备复合支架瓣膜,由戊二醛与瓣膜交联制备戊二醛交联瓣膜,通过组织学染色,扫描电镜,细胞增殖实验,生物力学测试研究复合支架瓣膜的生物学以及生物力学性能,并与戊二醛交联瓣膜进行比较。结果组织学染色显示去细胞瓣膜表面能够紧密结合聚乙二醇-海藻酸钠水凝胶。大体观察结果显示聚乙二醇-海藻酸钠水凝胶不会对去细胞瓣膜的外观产生明显变化。扫描电镜结果显示复合支架瓣膜比戊二醛交联瓣膜表面具有更多粗糙的微结构。细胞增殖实验表明复合支架比戊二醛更有利于细胞的生长和增殖。力学性能试验表明复合支架瓣膜的最大应变较戊二醛交联瓣膜显著增大。结论聚乙二醇-海藻酸钠水凝胶交联去细胞瓣膜构建的复合组织工程瓣膜具有良好的生物学和生物力学性能,比目前临床上使用的戊二醛交联瓣膜生物学性能更好,具有成为下一代瓣膜替代物的潜力。

关键词：组织工程瓣膜去细胞瓣膜戊二醛瓣膜聚乙二醇-海藻酸钠水凝胶

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应用内皮祖细胞构建组织工程瓣膜的研究

应用内皮祖细胞构建组织工程瓣膜的研究

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作者：肖刚峰温州医学院

学位级别：硕士

目的：探索建立一套可靠稳定的体外培养扩增鉴定脐血和外周血内皮祖细胞(EPCs)的方法，观察比较脐血和外周血EPCs形态学及生物学特性，并探讨利用EPCs进行体外再内皮化去细胞生物瓣膜构建组织工程瓣膜的可行性。\n 方法：采用密度梯... 详细信息

目的：探索建立一套可靠稳定的体外培养扩增鉴定脐血和外周血内皮祖细胞(EPCs)的方法，观察比较脐血和外周血EPCs形态学及生物学特性，并探讨利用EPCs进行体外再内皮化去细胞生物瓣膜构建组织工程瓣膜的可行性。\n 方法：采用密度梯度离心法分离人脐血和外周血单个核细胞，以3×106／cm2密度接种细胞到事先包被纤维连接蛋白的培养孔，加入含20％胎牛血清的M199培养液并添加血管内皮生长因子(Ⅶ郇)和内皮细胞生长添加剂(ECGS)(终浓度分别为10ng/ml及150ug/ml)。培养三天后，以培养液洗去悬浮细胞，贴壁细胞继续原条件培养。分别采用流式细胞术分析培养细胞CD34、***曲erin、VEGFR-2及CDl33的表达，DiI-ac-LDL吞噬试验、Ⅷ因子相关抗原免疫组化以及RT—PCR观察细胞eNOS和ET．1的表达证实培养细胞的干细胞和内皮属性。\n 倒置相差显微镜下观察培养脐血和外周血EPCs的形态特征，比较其集落形成能力。M开法测试脐血和外周血EPCs的增殖能力，重贴壁法比较脐血和外周血EPCs的黏附能力。\n 采用酶一去垢剂法去除新鲜猪主动脉瓣细胞制备去细胞瓣膜支架，采用常规组织切片HE、M弱son染色及扫描电镜评价去细胞效果及纤维支架完整性，MTT法评价去细胞瓣膜细胞毒性。将培养的人外周血EPCs均匀接种到去细胞瓣膜并共孵育两周以实现再内皮化。采用常规组织切片HE染色及扫描电镜检查证实再内皮化，并初步评价其生物力学特性。\n 结果：人脐血单个核细胞培养3天后，形成典型EPCs样集落，6天后流式细胞仪分析示CD34阳性细胞比例为(65．09±¨．89)％，***阳性细胞比例为(44．69±9．74)％，VEGFR-2阳性细胞比例为(3046±9．23)％，CDl33阳性细胞比例为(19．68±0．8D％，CD34、***曲edn双阳性细胞比例为(41．67±10．18)％，VEGFR-2、***双阳性细胞比例为(28．19±14．85)％，CD34、CDl33双阳性细胞比例为(18．67±1．27)％，VEGFR-2、CDl33双阳性细胞比例为(15.

关键词：内皮祖细胞细胞培养再内皮化组织工程瓣膜种子细胞

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组织工程瓣膜种子细胞的筛选

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心脏杂志 2004年第6期16卷 564-566页

作者：郑奇军刘维永蔡振杰第四军医大学西京医院心脏外科陕西西安710032

构建组织工程瓣膜 (TEHV)的先决条件是种植类似天然瓣膜的种子细胞 ,种子细胞的获取是构建组织工程瓣膜的核心问题。由于异体细胞表达一定的抗原性 ,特别是内皮细胞具有强烈的免疫原性 ,因此 ,组织工程一般主张取受体自身的细胞作为种... 详细信息

构建组织工程瓣膜 (TEHV)的先决条件是种植类似天然瓣膜的种子细胞 ,种子细胞的获取是构建组织工程瓣膜的核心问题。由于异体细胞表达一定的抗原性 ,特别是内皮细胞具有强烈的免疫原性 ,因此 ,组织工程一般主张取受体自身的细胞作为种子细胞的来源。近年来 ,随着干细胞研究的不断深入 ,以自体骨髓间质干细胞和内皮祖细胞作为种子细胞受到广泛关注。本文综述了TEHV种子细胞的研究进展。

关键词：组织工程瓣膜骨髓间质干细胞内皮祖细胞

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环氧氯丙烷处理组织工程瓣膜的实验研究

环氧氯丙烷处理组织工程瓣膜的实验研究

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作者：易蔚第四军医大学

学位级别：硕士

目的:目前,组织工程心脏瓣膜(TEHV)研究是瓣膜外科的热点之一,生物支架材料仍存在的钙化及衰坏等缺陷,获取具有相应功能的活性种子细胞是急待解决的问题。环氧氯丙烷(EC)是西京医院筛选的生物瓣膜防钙化剂,应用其处理的猪主动脉瓣防钙... 详细信息

目的:目前,组织工程心脏瓣膜(TEHV)研究是瓣膜外科的热点之一,生物支架材料仍存在的钙化及衰坏等缺陷,获取具有相应功能的活性种子细胞是急待解决的问题。环氧氯丙烷(EC)是西京医院筛选的生物瓣膜防钙化剂,应用其处理的猪主动脉瓣防钙化效果明显。然而EC处理对支架材料的理化性质及血液相容性,仍然研究未明。本研究针对EC处理的TEHV去细胞支架材料的防钙化效果、理化性质及血液相容性予以评价。同时,本课题取材人骨髓,分离得到内皮祖细胞(EPCs)和骨髓间充质干细胞(MSCs),体外培养、扩增、分化,并进行功能鉴定。探讨其作为种子细胞,构建TEHV的可行性和条件,为新型组织工程心脏瓣膜种子细胞的选择提供实验基础。方法: 1.采用改变渗透压和酶消化的方法制备去细胞猪主动脉瓣支架材料,HE染色鉴定其细胞去除情况。分别对EC处理、GA处理、二者联合处理及未经处理的去细胞猪主动脉瓣支架材料行茚三酮实验,胶原酶消化实验,血浆蛋白吸附实验以及血小板黏附实验,以分别探讨EC对去细胞支架材料的胶原交联度及血液相容性的影响。将支架材料植入SD大鼠体内包埋60天后取出行HE染色及免疫组化,观察支架材料钙化程度。 2.取材骨髓,分离得到内皮祖细胞(EPCs)和骨髓间充质干细胞(MSCs),体外培养、扩增、分化。内皮细胞条件培养基培养,纤维粘连蛋白包被培养皿,以EGF、VEGF等生长因子诱导EPCs分化,采用免疫组化CD31、Ⅷ因子相关抗原染色、乙酰化低密度脂蛋白(DiI-Ac-LDL)摄取试验分析评价内皮细胞功能;DMEM培养基培养扩增,以5-Aza诱导MSCs分化,采用α-SMA、Vimentin免疫组化染色鉴定其分化表达,以免疫组化Ⅰ、Ⅲ胶原染色评价其分泌功能,以探讨EPCs和MSCs作为组织工程瓣膜种子细胞的可能。结果: 1.应用胰蛋白酶、去垢剂和改变渗透压的方法处理新鲜猪主动脉瓣,得到去细胞猪主动脉瓣支架材料。HE染色显示其瓣叶、管壁及平滑肌中的细胞成分均被基本去除了,而未经去细胞处理的支架材料瓣叶、管壁及平滑肌中则存在大量细胞成分。体内包埋实验结果显示EC处理的支架材料未见明显钙化灶,少有结缔组织包绕,而GA处理的对照组支架材料组织钙化明显。去细胞猪瓣支架材料经EC或GA处理后,较未处理组茚三酮值均明显下降(p <0.01),GA处理后的去细胞猪瓣支架材料经EC再处理后,较单用GA处理组茚三酮值进一步下降(p <0.01)。单用EC处理瓣膜的交联度小于GA处理胶原蛋白的交联度,但EC处理能使GA处理的瓣膜交联度进一步增加(p <0.01)。去细胞猪瓣支架材料经EC或GA处理后,未消化率较未处理组明显增加(p <0.01),GA处理后的去细胞猪瓣支架材料经EC处理后,未消化率进一步增加(p <0.01),其抗消化能力也进一步增强。去细胞猪瓣支架材料经GA处理后蛋白质吸附率较未处理组明显升高,而再经EC处理后蛋白质吸附率较GA处理组明显下降(p <0.01),同时显著低于未处理组(p <0.01)。单用EC处理组蛋白吸附率较未处理组低,但无显著差异。GA处理的去细胞猪瓣支架材料血小板黏附率较未处理组显著升高(p <0.01),而经EC再处理后血小板黏附率可明显下降(p <0.01)。EC处理组血小板黏附,率较未处理组低,但两者无显著差异。 2.从骨髓中可以分离得到EPCs和MSCs。内皮细胞条件培养的EPCs呈短梭形及多角形,14 d后呈铺路石样生长,表达CD31、Ⅷ因子相关抗原、DiI-Ac-LDL摄取试验阳性。原代培养的MSCs呈多角形或梭形,4-7天后呈集落样生长,其α-SMA、Vimentin、Ⅰ、Ⅲ胶原染色均为阳性,提示可以分化为肌纤维母细胞。结论: 1.本实验针对应用胰蛋白酶、去垢剂和改变渗透压的方法处理得到的去细胞猪主动脉瓣支架材料,行体内包埋实验证明EC处理法能够有效降低支架材料钙化程度。通过茚三酮实验,胶原酶消化实验分析,EC能提高去细胞支架材料的胶原交联度。而血浆蛋白吸附实验和血小板黏附实验则验证了EC处理能够提高去细胞支架材料的血液相容性。EC处理能够进一步改善去细胞猪瓣支架材料的理化性质,有利于提高血液相容性和减缓钙化,同时对于EC处理方法在组织工程瓣膜支架材料研究中的应用提供了重要的理论依据。 2.本实验对可能成为组织工程瓣膜的种子细胞进行了诱导分化和功能检测,其形态与细胞表面标记等与文献报道基本相符,通过表达CD31、Ⅷ因子相关抗原免疫组化,DiI-Ac-LDL摄取试验鉴定,具有分化为内皮样细胞的能力。同时,分离得到MSCs,通过α-SMA、Vimentin以及Ⅰ、Ⅲ胶原免疫组

关键词：环氧氯丙烷组织工程瓣膜去细胞支架种子细胞

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