检索结果-内蒙古大学图书馆

中国组织工程研究 2015年第24期19卷 3773-3777页

作者：贾英民李瑞玉武密山霍瑞楼李彬解放军北京军区总医院肾脏病科北京市100700 平乡县中西医结合医院内科河北省邢台市054500 邢台医学高等专科学校第二附属医院中西医结合研究所河北省邢台市054000 河北中医学院方剂教研室河北省石家庄市050090 河北医科大学生化教研室河北省石家庄市050051

背景:补肾方药的动物及细胞实验研究提示具有防治骨质疏松及改善骨代谢作用,但补肾方药研究具有相当的复杂性,目前复方中药研究多采用的血清药物代谢动力学的方法却具有局限性,使有效作用成分及药物物质基础尚不确定。目的:通过采用补... 详细信息

背景:补肾方药的动物及细胞实验研究提示具有防治骨质疏松及改善骨代谢作用,但补肾方药研究具有相当的复杂性,目前复方中药研究多采用的血清药物代谢动力学的方法却具有局限性,使有效作用成分及药物物质基础尚不确定。目的:通过采用补肾方药有效成分配伍,在不同浓度和时间下,对新生SD大鼠成骨细胞进行干预性培养,并对其增殖与分化情况进行测定,从而确定补肾方药对成骨细胞时效和量效关系,为补肾方药防治骨质疏松症提供实验依据。方法:体外培养原代新生24 h的SD大鼠成骨细胞,采用补肾方药的"补药"和"泻药"有效化学成分不同比例配伍,实验分3组,即补>泻组、补<泻组和对照组,补>泻组、补<泻组分别加入质量浓度10,20,30μg/L的补肾方药无血清培养基干预成骨细胞培养,在培养24,48,72 h分别检测细胞的增殖,在培养48,72 h测定成骨细胞的碱性磷酸酶分泌。结果与结论:质量浓度为10μg/L,在培养48 h,补>泻组具有明显促增殖作用(P<0.05);质量浓度为20μg/L时,各时间点补>泻组、补<泻组无明显差别,但与对照组比较具有明显增殖作用;质量浓度为30μg/L,在培养48 h,补>泻组具有明显促增殖作用最强(P<0.05),72 h时增殖作用减弱;质量浓度为10μg/L,在培养72 h测得补>泻组具有促碱性磷酸酶分泌作用,质量浓度为20μg/L,在培养24 h以补<泻组最明显(P<0.05);质量浓度为30μg/L,在培养72 h补>泻组促明显的促碱性磷酸酶分泌作用最佳(P<0.05)。结果证实,补肾方药有效成分按补>泻组配伍比例对成骨细胞增殖、分化作用最强,且存在时-效及量-效关系。

关键词：组织构建骨细胞骨质疏松症补肾方药复方中药配伍有效成分增殖分化碱性磷酸酶组织构建细胞学实验

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胰蛋白酶与糖皮质激素影响肺成纤维细胞增殖与骨架蛋白的表达

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中国组织工程研究 2013年第11期17卷 2020-2025页

作者：方秋红税朝祥王尧尧王瑞芹王晶马迎民首都医科大学附属北京世纪坛医院呼吸与危重医学科北京市100038 清华大学第一附属医院北京市100016

背景:肺成纤维细胞不但是肺组织的结构支持细胞,还能够通过增殖、收缩、趋化及分泌细胞外基质等多种功能在肺组织的炎症损伤-修复过程中发挥关键作用。目的:观察原代培养的人肺成纤维细胞在胰蛋白酶或糖皮质激素作用下增殖特性与骨架蛋... 详细信息

背景:肺成纤维细胞不但是肺组织的结构支持细胞,还能够通过增殖、收缩、趋化及分泌细胞外基质等多种功能在肺组织的炎症损伤-修复过程中发挥关键作用。目的:观察原代培养的人肺成纤维细胞在胰蛋白酶或糖皮质激素作用下增殖特性与骨架蛋白表达的变化。方法:采用人肺成纤维细胞体外培养,胰酶处理24h,终浓度分别为0,0.5,1.0,5,10mg/L胰酶;地塞米松处理72h,在有血清培养条件下进行,浓度范围10-9-10-6mol/L。MTT法测定成纤维细胞增殖情况;免疫印迹方法测定细胞波形蛋白和肌动蛋白的表达。结果与结论:胰蛋白酶在低浓度(0.1-0.5mg/L)时刺激肺成纤维细胞增殖;而较高浓度(1-10mg/L)明显抑制细胞生长。地塞米松对肺成纤维细胞增殖作用的影响不明显。胰蛋白酶显著上调肺成纤维细胞α平滑肌肌动蛋白的表达,但对波形蛋白的表达无明显影响;地塞米松(10-9-10-6mol/L)显著抑制波形蛋白的表达。结果表明在慢性阻塞性肺病等支气管肺慢炎症性疾病的发病过程中,胰蛋白酶和糖皮质激素可以通过参与成纤维细胞增殖和骨架蛋白的表达发挥作用。

关键词：组织构建组织构建细胞学实验胰蛋白酶糖皮质激素肺成纤维细胞波形蛋白肌动蛋白免疫印迹地塞米松骨架蛋白成纤维细胞增殖慢性阻塞性肺病国家自然科学基金组织构建图片文章

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过氧化氢对金属硫蛋白Ⅰ/Ⅰ敲除小鼠脾细胞的氧化应激

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中国组织工程研究 2013年第7期17卷 1243-1250页

作者：和静韦思宇刘凤勇叶静沈炳玲姚小梅天津医科大学基础医学院病理生理教研室天津市300070

背景:脑缺血再灌注早期,由于脾脏中有大量炎症因子浸润引发氧化应激损伤,导致脑缺血再灌注后脾细胞出现大量凋亡。目的:观察外源性过氧化氢对金属硫蛋白Ⅰ/Ⅰ敲除小鼠脾细胞活力的影响及N-乙酰-L-半胱氨酸对过氧化氢诱导的脾细胞氧化应... 详细信息

背景:脑缺血再灌注早期,由于脾脏中有大量炎症因子浸润引发氧化应激损伤,导致脑缺血再灌注后脾细胞出现大量凋亡。目的:观察外源性过氧化氢对金属硫蛋白Ⅰ/Ⅰ敲除小鼠脾细胞活力的影响及N-乙酰-L-半胱氨酸对过氧化氢诱导的脾细胞氧化应激损伤的保护作用。方法:制备金属硫蛋白Ⅰ/Ⅰ敲除小鼠脾细胞悬液,分别用不同浓度(0.1,0.2,0.5,1,2mmol/L)过氧化氢处理2h后,MTT比色法检测细胞活力。根据MTT结果选择不同浓度过氧化氢(0.5,1mmol/L)诱导脾细胞凋亡,实验分为6组:对照组、N-乙酰-L-半胱氨酸组、0.5mmol/L过氧化氢组、1mmol/L过氧化氢组、N-乙酰-L-半胱氨酸+0.5mmol/L过氧化氢组、N-乙酰-L-半胱氨酸+1mmol/L过氧化氢组,2h后MTT比色法检测细胞活力,酶标仪法检测乳酸脱氢酶活力及紫外分光光度仪检测线粒体通透性转换孔的开放情况。结果与结论:随过氧化氢浓度增加脾细胞活力呈明显下降趋势(P<0.01),且0.2,0.5,1,2mmol/L过氧化氢组脾细胞活力下降幅度最大。与对照组相比,N-乙酰-L-半胱氨酸组脾细胞活力明显提高(P<0.01),且乳酸脱氢酶活力降低(P<0.01),线粒体通透性转换孔开放减少(P<0.01);分别于0.5,1mmol/L过氧化氢组相比,N-乙酰-L-半胱氨酸+0.5mmol/L过氧化氢组、N-乙酰-L-半胱氨酸+1mmol/L过氧化氢组脾细胞活力也明显提高(P<0.01),乳酸脱氢酶活力降低(P<0.01),线粒体通透性转换孔开放减少(P<0.01)。结果表明,金属硫蛋白Ⅰ/Ⅰ敲除小鼠随着过氧化氢浓度的升高,脾细胞活力逐渐下降,呈浓度依赖性,尤其对0.2,0.5,1,2mmol/L过氧化氢刺激最为敏感。N-乙酰-L-半胱氨酸使乳酸脱氢酶释放和线粒体通透性转换孔的开放减少,脾细胞活力增强,以此减轻过氧化氢诱导的金属硫蛋白Ⅰ/Ⅰ敲除鼠脾细胞的氧化应激损伤。

关键词：组织构建组织构建细胞学实验金属硫蛋白金属硫蛋白Ⅰ/Ⅰ基因敲除小鼠脾凋亡 N-乙酰-L-半胱氨酸过氧化氢氧化应激线粒体通透性转换孔脑缺血再灌注乳酸脱氢酶国家自然科学基金

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干燥脱水保存鸵鸟脱细胞角膜基质载体材料的细胞毒性

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中国组织工程研究 2013年第33期17卷 5995-6000页

作者：刘先宁朱秀萍吴洁王莉芳银勇陕西省眼科研究所陕西省西安市710002 陕西省食品药品检验所陕西省西安市710002

背景:陕西省眼科研究所通过前期研究发现鸵鸟角膜具有开发成为人角膜材料替代品的优势。目的:判断鸵鸟角膜基质支架材料对细胞的潜在毒性作用。方法:采用细胞培养方法,将干燥脱水法保存的鸵鸟脱细胞角膜基质载体支架制备成浸提液与 L-9... 详细信息

背景:陕西省眼科研究所通过前期研究发现鸵鸟角膜具有开发成为人角膜材料替代品的优势。目的:判断鸵鸟角膜基质支架材料对细胞的潜在毒性作用。方法:采用细胞培养方法,将干燥脱水法保存的鸵鸟脱细胞角膜基质载体支架制备成浸提液与 L-929 细胞共同培养,采用 MTT 比色法评价其作用 1,2,3 d,对细胞生长和增殖的影响。结果与结论:干燥脱水法保存的鸵鸟脱细胞角膜基质载体支架浸提液组培养 1,3,5 d,对实验细胞毒性反应级别均为 1 级。参照《中华人民共和国国家标准 GB/T16886.5-2003》进行细胞毒性试验,供试品组见少量细胞呈圆形,疏松贴壁,无胞浆内颗粒,偶见细胞溶解。结合 MTT 法分析结果表明,采用干燥脱水法保存鸵鸟脱细胞角膜基质载体材料,细胞毒性为 1 级,为合格材料。

关键词：组织构建组织构建细胞学实验组织工程角膜角膜鸵鸟脱细胞角膜基质支架干燥脱水保存细胞毒性试验省级基金

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人端粒酶反转录酶对人胚胎皮质神经元损伤的保护

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中国组织工程研究 2013年第28期17卷 5229-5235页

作者：魏桂芬刘妍李艳玲张惠爱孔令平广州医学院从化学院病原生物学教研室广东省从化市510925 广州医学院从化学院解剖学与组织胚胎学教研室广东省从化市510925

背景:端粒酶可维持端粒长度,避免细胞复制性衰老和凋亡,其催化亚基端粒酶反转录酶还具有抗凋亡和调节细胞生存的作用。目的:观察人端粒酶反转录酶对β淀粉样蛋白1-40引起的人胚胎皮质神经元损伤的影响。方法:分离和培养12-16周龄人胚胎... 详细信息

背景:端粒酶可维持端粒长度,避免细胞复制性衰老和凋亡,其催化亚基端粒酶反转录酶还具有抗凋亡和调节细胞生存的作用。目的:观察人端粒酶反转录酶对β淀粉样蛋白1-40引起的人胚胎皮质神经元损伤的影响。方法:分离和培养12-16周龄人胚胎皮质神经元,将人端粒酶反转录酶基因重组腺病毒转染至神经元。免疫细胞化学法检测人端粒酶反转录酶基的表达,端粒重复序列扩增酶联免疫吸附法检测端粒酶活性。转染后第3天,给予10μmol/Lβ淀粉样蛋白1-40作用24h后,应用MTT检测细胞活力。荧光探针2’7’-二乙酰二氯荧光素标记检测细胞内活性氧水平,比色法测定细胞匀浆中谷胱甘肽含量。结果与结论:转染后第3天,人端粒酶反转录酶的表达最高,并重建了其端粒酶活性;10μmol/Lβ淀粉样蛋白1-40显著降低神经元的细胞活力和谷胱甘肽的含量(P<0.05和P<0.01),升高活性氧水平(P<0.05)。转染了人端粒酶反转录酶基因的神经元能显著对抗β淀粉样蛋白1-40的毒性作用,增加细胞的活力和谷胱甘肽含量(P<0.05和P<0.01),降低活性氧水平(P<0.05)。结果表明,人端粒酶反转录酶对β淀粉样蛋白1-40引起的人胚胎皮质神经元的损伤有明显保护作用。

关键词：组织构建组织构建细胞学实验端粒酶人端粒酶反转录酶皮质神经元 13淀粉样蛋白阿尔茨海默病省级基金

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RNA干扰抑制内皮细胞韦伯潘力氏小体的释放

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中国组织工程研究 2013年第2期17卷 301-308页

作者：杨水祥魏晓菲崔淯夏周勇北京世纪坛医院心内科北京市100038

背景:利用RNA干扰和沉默基因达到临床治疗效果,已经越来越受到重视。目的:探讨利用小干扰RNA方法抑制内皮细胞韦伯潘力氏小体释放的效果和意义。方法:设计腺病毒介导的针对调节韦伯潘力氏小体释放的关键蛋白N-己基顺丁烯二酰亚胺敏感因... 详细信息

背景:利用RNA干扰和沉默基因达到临床治疗效果,已经越来越受到重视。目的:探讨利用小干扰RNA方法抑制内皮细胞韦伯潘力氏小体释放的效果和意义。方法:设计腺病毒介导的针对调节韦伯潘力氏小体释放的关键蛋白N-己基顺丁烯二酰亚胺敏感因子N端功能区shRNA,筛选鉴定收获病毒,转染人主动脉内皮细胞,携带N-己基顺丁烯二酰亚胺敏感因子shRNA的腺病毒感染设为实验组、单纯病毒表达载体转染设为阴性对照组,空白对照组未加任何东西。结果与结论:用携带N-己基顺丁烯二酰亚胺敏感因子shRNA的腺病毒感染内皮细胞后,3组N-己基顺丁烯二酰亚胺敏感因子mRNA表达比较,差异有显著性意义(P<0.05);实验组的表达随时间变化持续下降,24,48,72h组间比较差异有显著性意义(P=0.048)。N-己基顺丁烯二酰亚胺敏感因子蛋白表达实验组低于两对照组,差异有显著性意义(P<0.05);而两对照组之间比较差异无显著性意义(P=0.249)。免疫荧光染色显示,N-己基顺丁烯二酰亚胺敏感因子shRNA腺病毒感染,明显抑制凝血酶诱导的韦伯潘力氏小体的释放。说明携带N-己基顺丁烯二酰亚胺敏感因子shRNA的腺病毒感染人主动脉内皮细胞,能明显抑制N-己基顺丁烯二酰亚胺敏感因子mRNA及蛋白表达,抑制凝血酶诱导的韦伯潘力氏小体释放。

关键词：组织构建组织构建细胞学实验韦伯潘力氏小体 RNA干扰 N-己基顺丁烯二酰亚胺敏感因子内皮细胞腺病毒省级基金组织构建图片文章

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α-硫辛酸抑制慢性低氧大鼠骨骼肌线粒体的氧化应激

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中国组织工程研究 2013年第28期17卷 5216-5222页

作者：肖频庞奕辉彭朋薄海武警后勤学院军事训练医学教研室天津市300162 武警江西总队医院药剂科江西省南昌市330001 武警后勤学院远程继续教育处天津市300162

背景:α-硫辛酸被誉为"全能抗氧化剂"和"线粒体营养剂",但其是否可用于慢性低氧骨骼肌的防护,及其相关机制尚不清楚。目的:观察α-硫辛酸对慢性低氧大鼠骨骼肌线粒体活性氧生成及抗氧化酶系的作用,并探讨α-硫辛酸... 详细信息

背景:α-硫辛酸被誉为"全能抗氧化剂"和"线粒体营养剂",但其是否可用于慢性低氧骨骼肌的防护,及其相关机制尚不清楚。目的:观察α-硫辛酸对慢性低氧大鼠骨骼肌线粒体活性氧生成及抗氧化酶系的作用,并探讨α-硫辛酸作用的相关信号通路。方法:将36只SD大鼠随机分为常氧对照组、单纯低氧组和单纯低氧+α-硫辛酸组。低氧干预为常压低氧帐篷,氧体积分数设定为11.3%;α-硫辛酸干预为标准饲料中添加α-硫辛酸(0.25%)。各种干预均持续4周。结果与结论:α-硫辛酸显著上调Sirtuin-3表达,提高线粒体ATP合成活力和膜电位,上调线粒体态3呼吸速率、呼吸控制比和磷氧比,下调态4呼吸速率,促进并上调锰超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、过氧化氢酶等线粒体抗氧化酶系活性,从而抑制线粒体H2O2产生速率,降低线粒体丙二醛含量。表明α-硫辛酸可提高慢性低氧骨骼肌线粒体能量代谢效率,抑制活性氧生成。并通过提高线粒体抗氧化酶系活性,抑制低氧诱导的氧化应激。α-硫辛酸对低氧骨骼肌线粒体的保护效应可能与其上调态3呼吸速率有关。

关键词：组织构建组织构建细胞学实验肌肉肌腱韧带慢性低氧 α-硫辛酸线粒体 Sirtuin-3 氧化应激骨骼肌省级基金

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小胶质细胞介导帕金森病小鼠的氧化应激损伤

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中国组织工程研究 2013年第11期17卷 2001-2006页

作者：陆明佳王珊珊朱沂新疆维吾尔自治区人民医院神经内科新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市830001

背景:研究证实,小胶质细胞诱导型一氧化氮合酶可增加多巴胺能神经元对百草枯的摄取,造成百草枯对多巴胺能神经元的特异性杀伤作用。帕金森病的黑质纹状体存在小胶质细胞的激活,但其产生氧化应激作用机制尚不明确。目的:建立帕金森病小... 详细信息

背景:研究证实,小胶质细胞诱导型一氧化氮合酶可增加多巴胺能神经元对百草枯的摄取,造成百草枯对多巴胺能神经元的特异性杀伤作用。帕金森病的黑质纹状体存在小胶质细胞的激活,但其产生氧化应激作用机制尚不明确。目的:建立帕金森病小鼠模型,观察小胶质细胞介导的氧化应激损伤在帕金森病中的作用。方法:36只C57BL/6小鼠随机分为帕金森病模型组和对照组,每组18只。以腹腔注射百草枯10mg/kg为模型组,等体积生理盐水为对照组,分别观察小鼠行为活动改变。采用高效液相法测定两组小鼠黑质纹状体多巴胺的含量及免疫组织化学方法检测两组小鼠黑质部位酪氨酸羟化酶、mac-1蛋白表达,同时应用化学比色法测定两组小鼠黑质部位超氧化物歧化酶、还原性谷胱甘肽、谷胱甘肽过氧化物酶活性和丙二醛水平的变化。结果与结论:模型组小鼠自发行为活动较对照组减少(P<0.05)。高效液相法检测模型组小鼠黑质纹状体多巴胺含量及酪氨酸羟化酶蛋白的表达均显著低于对照组(P<0.05),mac-1蛋白表达高于对照组(P<0.05)。模型组超氧化物歧化酶、还原性谷胱甘肽、谷胱甘肽过氧化物酶活性较对照组均显著下降(P<0.05),丙二醛水平较对照组显著升高(P<0.05)。提示中脑黑质部位小胶质细胞的激活致使氧化应激反应增强及抗氧化保护作用减弱可能是引起帕金森病发病的重要机制。

关键词：组织构建组织构建细胞学实验帕金森病百草枯小胶质细胞酪氨酸羟化酶超氧化物歧化酶还原性谷胱甘肽谷胱甘肽过氧化物酶丙二醛氧化应激反应动物模型省级基金组织构建图片文章

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提高SAF基因启动子区DNA模板聚合酶链式反应的扩增效率

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中国组织工程研究 2013年第7期17卷 1251-1258页

作者：曹锡梅梁俊红张潮万东方蒙晓平郭大玮山西医科大学组织学与胚胎学教研室山西省太原市030001 山西医科大学法医学院山西省太原市030001

背景:血清淀粉样蛋白A转录激活因子基因启动子区鸟嘌呤和胞嘧啶的含量偏高,常规聚合酶链式反应扩增不易成功。目的:探索提高血清淀粉样蛋白A转录激活因子基因启动子区富含鸟嘌呤和胞嘧啶的DNA模板聚合酶链式反应扩增方案及优化的扩增体... 详细信息

背景:血清淀粉样蛋白A转录激活因子基因启动子区鸟嘌呤和胞嘧啶的含量偏高,常规聚合酶链式反应扩增不易成功。目的:探索提高血清淀粉样蛋白A转录激活因子基因启动子区富含鸟嘌呤和胞嘧啶的DNA模板聚合酶链式反应扩增方案及优化的扩增体系。方法:提取THP-1细胞基因组DNA作为模板,通过97℃高温预变性及最佳退火温度的探索优化聚合酶链式反应的反应条件,在聚合酶链式反应扩增体系中添加不同浓度的增强剂二甲基亚砜改善反应体系。建立提高血清淀粉样蛋白A转录激活因子基因富含鸟嘌呤和胞嘧啶的启动子区聚合酶链式反应扩增效率的方法,同时评估不同浓度二甲基亚砜对聚合酶链式反应扩增结果的影响。结果与结论:97℃高温预变性使模板DNA充分解链,同时提高退火温度至60℃,有利于提高聚合酶链式反应扩增产率;反应体系中添加2%二甲基亚砜可以提高血清淀粉样蛋白A转录激活因子基因启动子区聚合酶链式反应产物的特异性和产率,但是鸟嘌呤和胞嘧啶含量不同对增强剂的依赖不一样。结果证实,高温预变性和较高的退火温度可以保证充分解链的模板DNA与引物特异性结合,但是DNA模板鸟嘌呤和胞嘧啶含量的不同对增强剂二甲基亚砜的依赖有差异。

关键词：组织构建组织构建细胞学实验组织工程基础实验血清淀粉样蛋白A转录激活因子 DNA 启动子区鸟嘌呤胞嘧啶二甲基亚砜高温预变性退火温度聚合酶链式反应扩增效率国家自然科学基金组织构建图片文章

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一种高效实用的人卵巢表面上皮细胞培养方法

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中国组织工程研究 2013年第28期17卷 5223-5228页

作者：周聪康佳丽王小霞杨文娟蒋文燕广州医科大学附属广州市第一人民医院妇产科广东省广州市510180

背景:体外分离培养纯度高、活力强且生物学特性稳定的卵巢表面上皮难度很大,目前原代培养主要采用组织块贴壁法和酶消化法,但这两种方法在取材、细胞活力及细胞纯度上都存在一定的问题。目的:建立一种高效实用的人卵巢表面上皮分离、培... 详细信息

背景:体外分离培养纯度高、活力强且生物学特性稳定的卵巢表面上皮难度很大,目前原代培养主要采用组织块贴壁法和酶消化法,但这两种方法在取材、细胞活力及细胞纯度上都存在一定的问题。目的:建立一种高效实用的人卵巢表面上皮分离、培养和鉴定方法。方法:创新性地运用细胞刷刷取人卵巢表面上皮,以红细胞裂解法、差速贴壁法对细胞进行分离纯化,并向无血清DMEM-F12培养基中添加人表皮生长因子进行细胞培养。在倒置显微镜下观察细胞形态,应用苏木精-伊红染色和免疫细胞化学染色法对细胞进行鉴定,并绘制生长曲线。结果与结论:卵巢表面上皮培养24h开始贴壁生长,7-12d后基本达到融合,细胞呈多角形或扁平型,透光性及折光性强。细胞形态符合正常上皮细胞特性,所分离的细胞几乎完全表达上皮细胞表面标志物CK19。细胞生长良好,可以传6-8代,细胞生长曲线呈"S"形,纯度达95%以上。结果提示细胞刷取培养法操作简单,能够快速分离获得大量卵巢表面上皮,所获得的细胞经红细胞裂解法和差速贴壁法处理后纯度达95%以上,且细胞生长稳定。

关键词：组织构建组织构建细胞学实验人卵巢表面上皮原代培养人表皮细胞生长因子苏木精-伊红染色免疫细胞化学生长曲线省级基金

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