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中国组织工程研究 2014年第24期18卷 3785-3790页

作者：杨振村王增亮党木仁林令超赛力克.对山拜新疆医科大学第一附属医院神经外科新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市830054

背景:有研究表明脑血管畸形中存在管壁结构基质蛋白的表达差异,但血管畸形间结构基质蛋白的差异及结构蛋白差异与畸形血管管壁异形关系少有报道。目的:观察基质结构蛋白在脑血管畸形中的差异性表达。方法:对50例脑血管畸形手术标本和34... 详细信息

背景:有研究表明脑血管畸形中存在管壁结构基质蛋白的表达差异,但血管畸形间结构基质蛋白的差异及结构蛋白差异与畸形血管管壁异形关系少有报道。目的:观察基质结构蛋白在脑血管畸形中的差异性表达。方法:对50例脑血管畸形手术标本和34例正常颞浅动脉标本进行苏木精-伊红染色,并应用美国Santa Cruz公司生产单/多克隆抗体对4种基质结构蛋白-Ⅳ型胶原蛋白、a-血管平滑肌蛋白、层粘连蛋白和纤维连接蛋白免疫组织化学染色。结果与结论:苏木精-伊红染色显示,脑血管畸形壁结构与正常血管相比呈现明显紊乱和构成异形性;且脑血管畸形中,脑动静脉畸形与海绵状血管瘤结构存在明显差异。免疫组织化学染色显示:正常颞浅动脉和畸形血管中Ⅳ型胶原和a-血管平滑肌蛋白全部呈阳性表达且无显著性差异,但结构排列差异明显;正常颞浅动脉与畸形血管层粘连蛋白和纤维连接蛋白表达阳性率差异有显著性意义(P<0.05),正常血管表达更多层粘连蛋白,畸形血管表达更多纤维连接蛋白;畸形血管中脑动静脉畸形和海绵状血管瘤间层粘连蛋白和纤维连接蛋白的阳性率表达差异有显著性意义(P<0.05),脑动静脉畸形血管表达更多层粘连蛋白,海绵状血管瘤血管表达更多纤维连接蛋白。结果证实:与正常血管相比,脑血管畸形者管壁结构存在明显异形性,结构蛋白Ⅳ型胶原和a-血管平滑肌蛋白结构明显紊乱,且低表达层粘连蛋白而高表达纤维连接蛋白,这种差异可能是导致脑血管壁结构异常的原因。

关键词：组织构建组织工程组织构建细胞学实验脑血管畸形基质结构蛋白免疫组织化学 Ⅳ型胶原蛋白 a-血管平滑肌蛋白层粘连蛋白纤维连接蛋白

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尿酸钠结晶影响肾小管上皮细胞的紧密连接

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中国组织工程研究 2013年第2期17卷 286-290页

作者：李慧娟陈敢傅君舟周姗姗广州医学院附属广州市第一人民医院广东省广州市510182

背景:目前研究来看,尿酸性结石与紧密连接蛋白及肾间质纤维化的关系仍未明确。目的:观察尿酸钠结晶对肾小管上皮细胞紧密连接的影响。方法:配制单钠尿酸钠晶体。将正常大鼠肾小管上皮细胞随机分为对照组和尿酸钠结晶组,分别用无血清培... 详细信息

背景:目前研究来看,尿酸性结石与紧密连接蛋白及肾间质纤维化的关系仍未明确。目的:观察尿酸钠结晶对肾小管上皮细胞紧密连接的影响。方法:配制单钠尿酸钠晶体。将正常大鼠肾小管上皮细胞随机分为对照组和尿酸钠结晶组,分别用无血清培养基和尿酸钠结晶进行培养。免疫荧光和RT-PCR方法检测24,48,72h紧密连接蛋白的表达。结果与结论:与对照组比较,尿酸钠结晶于不同时相刺激NRK-52E细胞后,紧密连接蛋白和mRNA表达下降(P<0.05),72h时下降显著(P<0.01),蛋白表达出现重新分布现象。说明尿酸钠结晶可破坏肾小管上皮细胞紧密连接蛋白的结构、功能及导致分布异常。

关键词：组织构建组织构建细胞学实验尿酸钠结晶紧密连接紧密连接蛋白肾小管上皮细胞 NRK-52E细胞肾间质纤维化高尿酸血症跨膜蛋白膜周蛋白大鼠组织构建图片文章

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鱼藤素可影响斑马鱼胚胎Wnt信号通路相关基因的表达

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中国组织工程研究 2013年第15期17卷 2776-2779页

作者：刘瑞瑾吴新荣解放军广州军区广州总医院广东省广州市510010

背景:前期研究发现,在斑马鱼早期发育的不同时期,经过一定浓度鱼藤素处理的胚胎表现出不同程度的发育延缓和表型异常。目的:观察斑马鱼早期胚胎发育过程中鱼藤素对wnt信号通路相关基因表达的影响。方法:收集孵育至shield期的斑马鱼胚胎... 详细信息

背景:前期研究发现,在斑马鱼早期发育的不同时期,经过一定浓度鱼藤素处理的胚胎表现出不同程度的发育延缓和表型异常。目的:观察斑马鱼早期胚胎发育过程中鱼藤素对wnt信号通路相关基因表达的影响。方法:收集孵育至shield期的斑马鱼胚胎于6孔板中,加入0.6μmol/L浓度的鱼藤素溶液,避光处理,28℃培养箱中孵养。用0.1%二甲基亚砜溶液作为对照组,相同条件培养。在受精后6,8,10,12,14,24h时用正置荧光显微镜拍照观察鱼藤素处理后斑马鱼胚胎发育表型。实时荧光定量核酸扩增检测鱼藤素作用前后目的基因表达水平的变化。结果与结论:shield期处理的斑马鱼胚胎在bud期停止生长;wnt信号通路上的wnt9a,wnt10b和axin2以及与wnt信号具有密切联系的snail1b,Jnk2表达发生显著变化,其中wnt9a,wnt10b,axin2,snail1b表达下调,Jnk2表达上调。结果提示鱼藤素对斑马鱼体内wnt信号具有负调节作用。

关键词：组织构建组织构建细胞学实验鱼藤素实时荧光定量PCR wnt信号通路省级基金

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人角质形成细胞Notch信号通路与转化生长因子β调控受体蛋白的作用

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中国组织工程研究 2013年第2期17卷 296-300页

作者：薛斯亮王晓珊李东川张珏四川大学华西医院皮肤科四川省成都市610041 四川省医学科学院四川省人民医院肿瘤科四川省成都市610041 成都市363医院妇产科四川省成都市610041 遵义医药高等专科学校贵州省遵义市563000 四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室干细胞与组织工程研究室四川省成都市610041

背景:在皮肤中受体蛋白酪氨酸磷酸酶kappa的调控至关重要,而转化生长因子β似乎是其调控的上游因子,既然Notch信号和转化生长因子β信号通道如此相关,那么Notch是不是也参加了转化生长因子β信号对受体蛋白酪氨酸磷酸酶kappa的调控呢?目... 详细信息

背景:在皮肤中受体蛋白酪氨酸磷酸酶kappa的调控至关重要,而转化生长因子β似乎是其调控的上游因子,既然Notch信号和转化生长因子β信号通道如此相关,那么Notch是不是也参加了转化生长因子β信号对受体蛋白酪氨酸磷酸酶kappa的调控呢?目的:探讨Notch信号通道在人角质形成细胞中对转化生长因子β调控受体蛋白酪氨酸磷酸酶kappa的作用的影响。方法:在分别用Jagged-1激活和用Γ-分泌酶抑制剂抑制Notch信号通道后,加入转化生长因子β,同时设立对照组,用Real-timePCR测试人角质形成细胞中受体蛋白酪氨酸磷酸酶kappamRNA表达量。结果与结论:覆盖率为40%的角质形成细胞在加入了转化生长因子β后,受体蛋白酪氨酸磷酸酶kappamRNA量在各时间点均高于对照组。在用Jagged-1激活Notch通道的角质形成细胞中,单独加入Jagged-1、转化生长因子β及两者都加入时均高于对照组(P<0.05,P<0.01)。在用γ-分泌酶抑制剂抑制Notch通道的角质形成细胞中,只加入转化生长因子β显著高于对照组(P<0.01),只加入γ-分泌酶抑制剂和两者均加入时与对照组比较,差异无显著性意义(P>0.05)。说明加入转化生长因子β导致角质形成细胞中受体蛋白酪氨酸磷酸酶kappa表达增加,而分别对Notch信号进行激活和抑制后发现,受体蛋白酪氨酸磷酸酶kappa信号分别显著增加和显著被抑制。所以在转化生长因子β升高受体蛋白酪氨酸磷酸酶kappa表达过程中Notch信号通道是非常重要且不可或缺的。

关键词：组织构建组织构建细胞学实验转化生长因子β 受体蛋白酪氨酸磷酸酶kappa 人角质形成细胞 Notch NICD

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创伤性深静脉血栓形成与血液中Hmox-1基因的表达

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中国组织工程研究 2013年第2期17卷 291-295页

作者：郑燕科李宏坤汤善华赵敏吕仁发陈荣剑解放军第184医院骨科江西省鹰潭市335000 昆明医学院第一附属医院骨科云南省昆明市650032

背景:目前深静脉血栓的诊断主要依赖于影像学和实验室检查,其最致命的不足是血栓已经形成方能明确诊断。因此有必要采用先进的分子技术对其进行研究,探索其发生发展的内在规律。目的:观察Hmox-1在大鼠创伤性深静脉血栓形成过程中的变化... 详细信息

背景:目前深静脉血栓的诊断主要依赖于影像学和实验室检查,其最致命的不足是血栓已经形成方能明确诊断。因此有必要采用先进的分子技术对其进行研究,探索其发生发展的内在规律。目的:观察Hmox-1在大鼠创伤性深静脉血栓形成过程中的变化,探讨其作为预测诊断深静脉血栓分子标记物的可行性。方法:采用钳夹大鼠双侧股静脉和双后肢人字石膏固定的方法建立创伤性深静脉血栓形成模型。依据造模时间和血栓形成状态,将100只实验大鼠随机分为5组:正常对照组、创伤即刻组、血栓形成前期组、血栓形成高峰期血栓形成组、血栓形成高峰期血栓不形成组。Realtime-PCR检测血液中Hmox-1基因表达,并切取双侧股静脉血管进行组织学观察血栓形成程度。结果与结论:建立大鼠创伤性深静脉血栓形成模型后25h,血栓形成率58%(38/65);血栓形成前期组、血栓形成高峰期血栓形成组Hmox-1表达高于正常对照组(P<0.05),而血栓形成高峰期血栓不形成组与正常对照组比较差异无显著性意义。Hmox-1在血液中的表达变化趋势与血栓形成生物学过程相符,有可能作为预测大鼠深静脉血栓形成的标志物。

关键词：组织构建组织构建细胞学实验深静脉血栓 Hmox-1 预测诊断大鼠血栓形成动物模型组织构建图片文章

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人KLF4基因克隆及重组KLF4慢病毒表达载体的构建

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中国组织工程研究 2013年第7期17卷 1238-1242页

作者：王博涵余虓余淦李恒肖巍徐华叶章群华中科技大学同济医学院附属同济医院泌尿外科湖北省武汉市430030

背景:KLF4基因在细胞分化过程中有重要作用。目的:构建KLF4基因慢病毒过表达载体。方法:聚合酶链反应扩增(PCR)目的基因KLF4后插入慢病毒表达载体pCDH中,构建重组载体pCDH-KLF4。通过PCR、双酶切和DNA测序方法对其鉴定,共同转染293NT细... 详细信息

背景:KLF4基因在细胞分化过程中有重要作用。目的:构建KLF4基因慢病毒过表达载体。方法:聚合酶链反应扩增(PCR)目的基因KLF4后插入慢病毒表达载体pCDH中,构建重组载体pCDH-KLF4。通过PCR、双酶切和DNA测序方法对其鉴定,共同转染293NT细胞包装病毒,荧光显微镜观察报告基因的表达情况,收集病毒上清,测定病毒的滴度。将重组的慢病毒感染5637细胞,RT-PCR检测KLF4mRNA的表达。结果与结论:重组慢病毒表达载体质粒经限制性酶切和DNA测序分析证实重组慢病毒载体pCDH-KLF4的插入序列完全正确,重组慢病毒载体感染5637细胞后,细胞内KLF4mRNA高表达。结果证实,实验成功构建KLF4基因慢病毒过表达载体。

关键词：组织构建组织构建细胞学实验慢病毒载体 KLF4基因基因重组 5637细胞载体质粒 DNA测序组织工程泌尿系肿瘤大肠杆菌 DH5a感受态细胞国家自然科学基金组织构建图片文章

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突变型Cdh1基因真核表达质粒的构建及鉴定

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中国组织工程研究 2013年第2期17卷 315-319页

作者：李立石小云张登文张传汉姚文龙华中科技大学同济医学院附属同济医院麻醉学教研室湖北省武汉市430030

背景:细胞周期末期促进复合物调节亚基Cdh1的活性受到磷酸化调节,磷酸化的Cdh1不能与细胞周期末期促进复合物结合,从而抑制细胞周期末期促进复合物的活性。目的:构建突变型Cdh1基因真核表达质粒及鉴定。方法:采用RT-PCR方法,从大鼠海马... 详细信息

背景:细胞周期末期促进复合物调节亚基Cdh1的活性受到磷酸化调节,磷酸化的Cdh1不能与细胞周期末期促进复合物结合,从而抑制细胞周期末期促进复合物的活性。目的:构建突变型Cdh1基因真核表达质粒及鉴定。方法:采用RT-PCR方法,从大鼠海马组织扩增出Cdh1基因编码序列。通过限制性内切酶EcoRⅠ和XbaⅠ双酶切PCR回收产物和pBluescript质粒将Cdh1基因克隆到pBluescript质粒上。根据定点突变技术原理,以含Cdh1编码序列的pBluescript-Cdh1质粒为模版,针对Cdh1第40、151、163位丝氨酸(S)和第121位苏氨酸(T)设计4对突变引物,将4个氨基酸位点全部突变为丙氨酸(A)。最后通过测序鉴定。结果与结论:经电泳鉴定PCR扩增产物大小约为1500bp,包括Cdh1基因完整的编码序列、编码序列两端引入的酶切位点以及KOZAK序列,与预期相符。重组质粒pBluescript-Cdh1经EcoRⅠ和XbaⅠ双酶切鉴定与预期结果符合。DNA测序比对发现Cdh1(BC162059.1)编码序列第930位碱基A在重组质粒pBluescript-Cdh1上突变为G,但氨基酸无变化,为同义突变,其他DNA序列无突变。经测序鉴定pBluescript-Cdh1-4A40、121、151、163突变质粒第40、121、151、163位氨基酸全部突变为丙氨酸。提示实验成功构建磷酸化位点突变型Cdh1基因真核表达质粒。

关键词：组织构建组织构建细胞学实验细胞周期末期促进复合物 Cdh1 定点突变聚合酶联反应真核表达质粒神经系统发育神经损伤修复基因治疗国家自然科学基金

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核磁共振氢谱代谢组学方法确定X射线对小鼠辐射的损伤

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中国组织工程研究 2013年第46期17卷 8049-8055页

作者：王敏潘晓婧刘斌张红兰州大学甘肃省兰州市730000 中国科学院近代物理研究所甘肃省兰州市730000

背景:单一的血液学分析仅能针对辐射损伤后某个时间点机体的损伤情况,并不能反映机体辐射损伤后的较长期的累积状况。目的:采用基于核磁共振氢谱的代谢组学研究方法确定X射线对小鼠的辐射损伤后尿液和血液中辐射损伤标志物。方法:取小... 详细信息

背景:单一的血液学分析仅能针对辐射损伤后某个时间点机体的损伤情况,并不能反映机体辐射损伤后的较长期的累积状况。目的:采用基于核磁共振氢谱的代谢组学研究方法确定X射线对小鼠的辐射损伤后尿液和血液中辐射损伤标志物。方法:取小鼠48只随机分为4组,分别接受0(假辐射),3,9,27 Gy X射线头部辐射,分别于辐射后24 h和5 d后采血检测。另取小鼠36只随机分为3组,分别接受0(假辐射),9,27 Gy X射线头部辐射,分别于辐射前2 d和辐射后第5天收集24 h尿液检测。采集的血液及尿液进行1H-NMR分析。结果与结论:接受不同剂量X射线辐射后,血清中天冬氨氨基转移酶和丙氨酸氨基转移酶含量没有显著变化,碱性磷酸酶在9 Gy X射线辐射后有显著性升高,表明低剂量头部辐射可能引起肝脏或者骨骼中辐射损伤修复增加;血清中总超氧化物歧化酶在辐射后第5天出现显著降低,表明小鼠经头部辐射后引起了全身氧化应激效应。尿液中N-乙酰甘氨酸和-胸苷在接受各剂量X射线辐射后均显著升高,可以作为头部辐射后尿液中的辐射损伤标志物。尿液中3-羟基-2-甲基苯甲酸-3-氧硫酸盐在接受9 Gy X射线辐射后升高了2.5倍,可以作为中低剂量辐射损伤的特异标志物;尿液牛磺酸在27 Gy X射线辐射后升高20%,可以作为高剂量辐射损伤的特异标志物。

关键词：组织构建组织构建细胞学实验代谢组学 X射线核磁共振氢谱辐射损伤碱性磷酸酶超氧化物歧化酶生物标志物国家自然科学基金

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小干扰RNA对人类风湿关节炎患者滑膜细胞基因表达的影响

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中国组织工程研究 2013年第46期17卷 8062-8068页

作者：侯春凤孙闵李树杰赵建宏王吉波济宁市第一人民医院风湿免疫科山东省济宁市272002 济宁医学院临床学院山东省济宁市272013 青岛大学附属医院风湿免疫科山东省青岛市266071

背景:类风湿关节炎的病因尚不十分明确,但核转录因子κB在类风湿性关节炎发病中的作用,己逐渐引起风湿病学者的关注。目的:通过RNA干扰技术阻断人类风湿关节炎滑膜细胞核转录因子κB信号通路,探索其在类风湿关节炎治疗中的应用前景。方... 详细信息

背景:类风湿关节炎的病因尚不十分明确,但核转录因子κB在类风湿性关节炎发病中的作用,己逐渐引起风湿病学者的关注。目的:通过RNA干扰技术阻断人类风湿关节炎滑膜细胞核转录因子κB信号通路,探索其在类风湿关节炎治疗中的应用前景。方法:分离、消化、培养滑膜细胞备用。根据小分子干扰RNA设计原则,确定核转录因子κB的小分子干扰RNA四条目标基因序列,合成并构建核转录因子κB小分子干扰RNA表达载体。将构建好的4条pGenesil-1/核转录因子κB小分子干扰RNA表达载体转染入生长状态良好的一代滑膜细胞,并设立空白和阴性对照组。收集转染后12 h、24 h、48 h、72 h、5 d、7 d不同时间段的细胞,并提取RNA。测定细胞内核转录因子κB mRNA相对表达水平,筛选出有效抑制核转录因子κB mRNA表达的小分子干扰RNA质粒载体。结果与结论:核转录因子κB在人类风湿关节炎滑膜细胞高表达,3#pGenesil-1/核转录因子κB能显著抑制人类风湿关节炎滑膜细胞核转录因子κB mRNA表达。RNA干扰技术可阻断核转录因子κB mRNA的表达,因此,可将阻断核转录因子κB信号通路作为基因治疗类风湿关节炎的靶点。

关键词：组织构建组织构建细胞学实验关节炎类风湿核转录因子κB pGenesil-1表达载体 RNA干扰实时荧光定量聚合酶链反应

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急性脊髓损伤后差异蛋白的表达

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中国组织工程研究 2013年第41期17卷 7248-7254页

作者：徐磊磊周义军宋兴华丁俐文陈江涛王翀甘雨灵朱晓萌新疆医科大学第一附属医院新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市830054 新疆医科大学新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市830000

背景:在质谱分析中,任何一种同位素标记相对和绝对定量试剂标记的不同样本中的同一蛋白质表现为相同的质荷比,而在串联质谱中,信号离子表现为不同质荷比(114-121)的峰,因此可以分析得到相关蛋白质的定量信息。目的:建立大鼠急性脊髓损... 详细信息

背景:在质谱分析中,任何一种同位素标记相对和绝对定量试剂标记的不同样本中的同一蛋白质表现为相同的质荷比,而在串联质谱中,信号离子表现为不同质荷比(114-121)的峰,因此可以分析得到相关蛋白质的定量信息。目的:建立大鼠急性脊髓损伤后脊髓组织差异蛋白质谱,应用同位素标记相对和绝对定量技术联合LC-MS/MS质谱技术从分子水平来探索脊髓差异蛋白的表达情况。方法:取8只SD大鼠,参照Allen’s等方法建立大鼠急性脊髓损伤模型,随机分为脊髓损伤后0 h组和8 h组,每组各4只。损伤后取脊髓组织,用同位素标记相对和绝对定量技术分析大鼠急性脊髓损伤后脊髓组织的差异蛋白质。结果与结论:共鉴定到了220个差异表达的蛋白,上调的差异蛋白数是116个,下调的差异蛋白有104个。其中相关神经再生的差异蛋白12个,其中上调的有7个,下调的有5个。提示实验中检测到的多种差异蛋白及表达明显的神经生长因子可能作为急性脊髓损伤的生物标记物或可能作为临床管理监测急性脊髓损伤的损伤进程、靶向治疗及评估疗效的有力证据。

关键词：组织构建组织构建细胞学实验急性脊髓损伤神经再生蛋白质组学同位素标记相对和绝对定量质谱分析神经生长因子国家自然科学基金

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