检索结果-内蒙古大学图书馆

中国组织工程研究 2013年第2期17卷 315-319页

作者：李立石小云张登文张传汉姚文龙华中科技大学同济医学院附属同济医院麻醉学教研室湖北省武汉市430030

背景:细胞周期末期促进复合物调节亚基Cdh1的活性受到磷酸化调节,磷酸化的Cdh1不能与细胞周期末期促进复合物结合,从而抑制细胞周期末期促进复合物的活性。目的:构建突变型Cdh1基因真核表达质粒及鉴定。方法:采用RT-PCR方法,从大鼠海马... 详细信息

背景:细胞周期末期促进复合物调节亚基Cdh1的活性受到磷酸化调节,磷酸化的Cdh1不能与细胞周期末期促进复合物结合,从而抑制细胞周期末期促进复合物的活性。目的:构建突变型Cdh1基因真核表达质粒及鉴定。方法:采用RT-PCR方法,从大鼠海马组织扩增出Cdh1基因编码序列。通过限制性内切酶EcoRⅠ和XbaⅠ双酶切PCR回收产物和pBluescript质粒将Cdh1基因克隆到pBluescript质粒上。根据定点突变技术原理,以含Cdh1编码序列的pBluescript-Cdh1质粒为模版,针对Cdh1第40、151、163位丝氨酸(S)和第121位苏氨酸(T)设计4对突变引物,将4个氨基酸位点全部突变为丙氨酸(A)。最后通过测序鉴定。结果与结论:经电泳鉴定PCR扩增产物大小约为1500bp,包括Cdh1基因完整的编码序列、编码序列两端引入的酶切位点以及KOZAK序列,与预期相符。重组质粒pBluescript-Cdh1经EcoRⅠ和XbaⅠ双酶切鉴定与预期结果符合。DNA测序比对发现Cdh1(BC162059.1)编码序列第930位碱基A在重组质粒pBluescript-Cdh1上突变为G,但氨基酸无变化,为同义突变,其他DNA序列无突变。经测序鉴定pBluescript-Cdh1-4A40、121、151、163突变质粒第40、121、151、163位氨基酸全部突变为丙氨酸。提示实验成功构建磷酸化位点突变型Cdh1基因真核表达质粒。

关键词：组织构建组织构建细胞学实验细胞周期末期促进复合物 Cdh1 定点突变聚合酶联反应真核表达质粒神经系统发育神经损伤修复基因治疗国家自然科学基金

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核磁共振氢谱代谢组学方法确定X射线对小鼠辐射的损伤

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中国组织工程研究 2013年第46期17卷 8049-8055页

作者：王敏潘晓婧刘斌张红兰州大学甘肃省兰州市730000 中国科学院近代物理研究所甘肃省兰州市730000

背景:单一的血液学分析仅能针对辐射损伤后某个时间点机体的损伤情况,并不能反映机体辐射损伤后的较长期的累积状况。目的:采用基于核磁共振氢谱的代谢组学研究方法确定X射线对小鼠的辐射损伤后尿液和血液中辐射损伤标志物。方法:取小... 详细信息

背景:单一的血液学分析仅能针对辐射损伤后某个时间点机体的损伤情况,并不能反映机体辐射损伤后的较长期的累积状况。目的:采用基于核磁共振氢谱的代谢组学研究方法确定X射线对小鼠的辐射损伤后尿液和血液中辐射损伤标志物。方法:取小鼠48只随机分为4组,分别接受0(假辐射),3,9,27 Gy X射线头部辐射,分别于辐射后24 h和5 d后采血检测。另取小鼠36只随机分为3组,分别接受0(假辐射),9,27 Gy X射线头部辐射,分别于辐射前2 d和辐射后第5天收集24 h尿液检测。采集的血液及尿液进行1H-NMR分析。结果与结论:接受不同剂量X射线辐射后,血清中天冬氨氨基转移酶和丙氨酸氨基转移酶含量没有显著变化,碱性磷酸酶在9 Gy X射线辐射后有显著性升高,表明低剂量头部辐射可能引起肝脏或者骨骼中辐射损伤修复增加;血清中总超氧化物歧化酶在辐射后第5天出现显著降低,表明小鼠经头部辐射后引起了全身氧化应激效应。尿液中N-乙酰甘氨酸和-胸苷在接受各剂量X射线辐射后均显著升高,可以作为头部辐射后尿液中的辐射损伤标志物。尿液中3-羟基-2-甲基苯甲酸-3-氧硫酸盐在接受9 Gy X射线辐射后升高了2.5倍,可以作为中低剂量辐射损伤的特异标志物;尿液牛磺酸在27 Gy X射线辐射后升高20%,可以作为高剂量辐射损伤的特异标志物。

关键词：组织构建组织构建细胞学实验代谢组学 X射线核磁共振氢谱辐射损伤碱性磷酸酶超氧化物歧化酶生物标志物国家自然科学基金

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小干扰RNA对人类风湿关节炎患者滑膜细胞基因表达的影响

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中国组织工程研究 2013年第46期17卷 8062-8068页

作者：侯春凤孙闵李树杰赵建宏王吉波济宁市第一人民医院风湿免疫科山东省济宁市272002 济宁医学院临床学院山东省济宁市272013 青岛大学附属医院风湿免疫科山东省青岛市266071

背景:类风湿关节炎的病因尚不十分明确,但核转录因子κB在类风湿性关节炎发病中的作用,己逐渐引起风湿病学者的关注。目的:通过RNA干扰技术阻断人类风湿关节炎滑膜细胞核转录因子κB信号通路,探索其在类风湿关节炎治疗中的应用前景。方... 详细信息

背景:类风湿关节炎的病因尚不十分明确,但核转录因子κB在类风湿性关节炎发病中的作用,己逐渐引起风湿病学者的关注。目的:通过RNA干扰技术阻断人类风湿关节炎滑膜细胞核转录因子κB信号通路,探索其在类风湿关节炎治疗中的应用前景。方法:分离、消化、培养滑膜细胞备用。根据小分子干扰RNA设计原则,确定核转录因子κB的小分子干扰RNA四条目标基因序列,合成并构建核转录因子κB小分子干扰RNA表达载体。将构建好的4条pGenesil-1/核转录因子κB小分子干扰RNA表达载体转染入生长状态良好的一代滑膜细胞,并设立空白和阴性对照组。收集转染后12 h、24 h、48 h、72 h、5 d、7 d不同时间段的细胞,并提取RNA。测定细胞内核转录因子κB mRNA相对表达水平,筛选出有效抑制核转录因子κB mRNA表达的小分子干扰RNA质粒载体。结果与结论:核转录因子κB在人类风湿关节炎滑膜细胞高表达,3#pGenesil-1/核转录因子κB能显著抑制人类风湿关节炎滑膜细胞核转录因子κB mRNA表达。RNA干扰技术可阻断核转录因子κB mRNA的表达,因此,可将阻断核转录因子κB信号通路作为基因治疗类风湿关节炎的靶点。

关键词：组织构建组织构建细胞学实验关节炎类风湿核转录因子κB pGenesil-1表达载体 RNA干扰实时荧光定量聚合酶链反应

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急性脊髓损伤后差异蛋白的表达

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中国组织工程研究 2013年第41期17卷 7248-7254页

作者：徐磊磊周义军宋兴华丁俐文陈江涛王翀甘雨灵朱晓萌新疆医科大学第一附属医院新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市830054 新疆医科大学新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市830000

背景:在质谱分析中,任何一种同位素标记相对和绝对定量试剂标记的不同样本中的同一蛋白质表现为相同的质荷比,而在串联质谱中,信号离子表现为不同质荷比(114-121)的峰,因此可以分析得到相关蛋白质的定量信息。目的:建立大鼠急性脊髓损... 详细信息

背景:在质谱分析中,任何一种同位素标记相对和绝对定量试剂标记的不同样本中的同一蛋白质表现为相同的质荷比,而在串联质谱中,信号离子表现为不同质荷比(114-121)的峰,因此可以分析得到相关蛋白质的定量信息。目的:建立大鼠急性脊髓损伤后脊髓组织差异蛋白质谱,应用同位素标记相对和绝对定量技术联合LC-MS/MS质谱技术从分子水平来探索脊髓差异蛋白的表达情况。方法:取8只SD大鼠,参照Allen’s等方法建立大鼠急性脊髓损伤模型,随机分为脊髓损伤后0 h组和8 h组,每组各4只。损伤后取脊髓组织,用同位素标记相对和绝对定量技术分析大鼠急性脊髓损伤后脊髓组织的差异蛋白质。结果与结论:共鉴定到了220个差异表达的蛋白,上调的差异蛋白数是116个,下调的差异蛋白有104个。其中相关神经再生的差异蛋白12个,其中上调的有7个,下调的有5个。提示实验中检测到的多种差异蛋白及表达明显的神经生长因子可能作为急性脊髓损伤的生物标记物或可能作为临床管理监测急性脊髓损伤的损伤进程、靶向治疗及评估疗效的有力证据。

关键词：组织构建组织构建细胞学实验急性脊髓损伤神经再生蛋白质组学同位素标记相对和绝对定量质谱分析神经生长因子国家自然科学基金

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阳离子脂质体介导增强型绿色荧光蛋白质粒转染骨骼肌卫星细胞

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中国组织工程研究 2013年第46期17卷 8056-8061页

作者：许志锋李敬来韩振冯钢任明明北京大学深圳医院心血管外科广东省深圳市518036

背景:骨骼肌卫星细胞是一种具有多向分化能力的全能干细胞,存在于骨骼肌间质中,对缺血、缺氧有一定的耐受力,是干细胞工程中重要来源细胞。目的:为联合基因工程细胞心肌成形治疗初步探讨较为简便、经济的骨骼肌卫星细胞体外培养方法,建... 详细信息

背景:骨骼肌卫星细胞是一种具有多向分化能力的全能干细胞,存在于骨骼肌间质中,对缺血、缺氧有一定的耐受力,是干细胞工程中重要来源细胞。目的:为联合基因工程细胞心肌成形治疗初步探讨较为简便、经济的骨骼肌卫星细胞体外培养方法,建立一种简单、高效的转染骨骼肌卫星细胞的方法及探讨转染后基因表达的特点。方法:分离、培养兔大腿骨骼肌卫星细胞,用CKK-8法测定其生长曲线。根据质粒和脂质体不同比例分组,用脂质体介导增强型绿色荧光蛋白质粒(plasmid enhanced green fluorescent protein,pEGFP)转染骨骼肌卫星细胞。测定各组转染效率及目标基因表达特点。结果与结论:成功分离培养骨骼肌卫星细胞及转染pEFGF。在合适的质粒和脂质体比例下,转染效率可达35%以上。目标蛋白在转染12 h内开始表达,48-72 h表达最强,1周后逐渐减弱,2周后仍可观察到其表达。阳离子脂质体可介导pEGFP高效转染骨骼肌卫星细胞,转染效率与质粒、脂质体比例密切相关,目标基因表达随时间改变。

关键词：组织构建组织构建细胞学实验骨骼肌卫星细胞骨骼肌干细胞绿色荧光蛋白质粒阳离子脂质体转染

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灵芝多糖抗氧化、抗皮肤衰老

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中国组织工程研究 2013年第41期17卷 7272-7277页

作者：李响梁杰广东医学院附属医院整形外科广东省湛江市524000

背景:研究结果表明,灵芝多糖具有抗病毒、抗肿瘤、提高免疫力、抗氧自由基、抗衰老等生物活性。目的:观察灵芝多糖对D-半乳糖致衰老小鼠皮肤组织抗氧化能力的生物学效应和延缓皮肤衰老作用。方法:将44只2月龄昆明种小鼠随机分为4组,即... 详细信息

背景:研究结果表明,灵芝多糖具有抗病毒、抗肿瘤、提高免疫力、抗氧自由基、抗衰老等生物活性。目的:观察灵芝多糖对D-半乳糖致衰老小鼠皮肤组织抗氧化能力的生物学效应和延缓皮肤衰老作用。方法:将44只2月龄昆明种小鼠随机分为4组,即正常组、衰老模型组、维生素E组、灵芝多糖组,后3组颈背皮下注射D-半乳糖建立小鼠衰老模型,同时灌胃给予相应药物或生理盐水,42 d后取小鼠背部皮肤作病理切片,观察皮肤组织形态变化,检测表皮、真皮厚度,测定超氧化物歧化酶含量及CuZn-SODmRNA在皮肤中的表达水平。结果与结论:维生素E组和灵芝多糖组小鼠表皮、真皮厚度均较衰老模型增加。灵芝多糖组小鼠皮肤超氧化物歧化酶活力明显高于其他组。灵芝多糖组小鼠皮肤Ct值降低显著低于其他组。说明灵芝多糖能增加表皮和真皮厚度,改善皮肤组织结构;提高皮肤组织超氧化物歧化酶水平及CuZn-SOD mRNA的表达。

关键词：组织构建组织构建细胞学实验皮肤衰老灵芝多糖超氧化物歧化酶 CuZn—SODmRNA 维生素E D-半乳糖表皮真皮

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Cdx2反转录病毒载体的构建及转染膀胱上皮细胞的研究

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中国组织工程研究 2013年第46期17卷 8024-8029页

作者：林明恩邓毕华吕夷松荣禄姚友生汕头大学医学院第一附属医院泌尿外科广东省汕头市515041 中山大学附属第二医院泌尿外科广东省广州市510120

背景:尾侧型同源转录因子2在消化道尤其是小肠与结肠上皮的发育中起到关键作用。目的:构建尾侧型同源转录因子2反转录病毒表达载体pLNCX2-Cdx2,观察pLNCX2-Cdx2体外转染对人膀胱上皮细胞发生肠上皮化生的作用。方法:应用基因重组技术将... 详细信息

背景:尾侧型同源转录因子2在消化道尤其是小肠与结肠上皮的发育中起到关键作用。目的:构建尾侧型同源转录因子2反转录病毒表达载体pLNCX2-Cdx2,观察pLNCX2-Cdx2体外转染对人膀胱上皮细胞发生肠上皮化生的作用。方法:应用基因重组技术将人尾侧型同源转录因子2cDNA克隆到反转录病毒载体pLXSN2,酶切鉴定,包装到PA317细胞中。转染人膀胱尿路上皮细胞,应用荧光PCR及Western blot检测尾侧型同源转录因子2以及绒毛蛋白、LI-cadherin的表达情况。结果与结论:pLNCX2-Cdx2成功构建;细胞转染后尾侧型同源转录因子2的mRNA及蛋白水平表达明显增加;尾侧型同源转录因子2的过表达明显激活了绒毛蛋白与LI-cadherin的表达;转染后细胞可出现肠细胞样特征改变。结果提示体外尾侧型同源转录因子2过表达可使膀胱上皮细胞发生尾侧型同源转录因子2激活并产生肠上皮分化,从而诱导腺性膀胱炎发生。

关键词：组织构建组织构建细胞学实验尾侧型同源转录因子2 绒毛蛋白,肝肠钙粘连蛋白肠上皮化生膀胱上皮细胞 LI-cadherin 尿路上皮腺性膀胱炎省级基金

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外源性心脏营养素1:保护PC12细胞和许旺细胞的可能性

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中国组织工程研究 2013年第41期17卷 7265-7271页

作者：辛泽团刘湘泽张明进李伟陈伯华马学晓青岛市城阳区人民医院骨科山东省青岛市266100 青岛大学医学院附属医院脊柱外科山东省青岛市266003

背景:外周神经损伤后的很短时间内,神经和肌肉已经开始发生不可逆的退变。如何延缓外周神经损伤后的退变过程,并创造一定的微环境作为其恢复的基础。目的:探讨外源性心脏营养素1保护PC12细胞和许旺细胞的作用。方法:获得并培养许旺细胞... 详细信息

背景:外周神经损伤后的很短时间内,神经和肌肉已经开始发生不可逆的退变。如何延缓外周神经损伤后的退变过程,并创造一定的微环境作为其恢复的基础。目的:探讨外源性心脏营养素1保护PC12细胞和许旺细胞的作用。方法:获得并培养许旺细胞和PC12细胞,分别进行完全培养基培养、无血清培养基培养和50℃高温培养,心脏营养素1组中加入一定量的外源性心脏营养素1溶液,对照组中加入等量无菌DMEM溶液培养24 h。应用CCK-8比色法测定PC12细胞和许旺细胞的存活率,乳酸脱氢酶试剂盒测定上清液中乳酸脱氢酶活性,硫代巴比妥酸法测定丙二醛浓度,黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶活性。结果与结论:加入心脏营养素1后PC12细胞和许旺细胞存活率明显增高,乳酸脱氢酶释放量、丙二醛浓度明显减少,超氧化物歧化酶活性显著增加。证实外源性心脏营养素1能够明显减轻缺血和热应激刺激对PC12细胞和许旺细胞的损伤从而起到保护作用,其作用机制可能与心脏营养素1与细胞表面受体结合激活了抗凋亡蛋白的表达有关。

关键词：组织构建组织构建细胞学实验生物活性因子心脏营养素1 PC12细胞许旺细胞 CCK-8 乳酸脱氢酶试剂盒硫代巴比妥酸法黄嘌呤氧化酶法保护作用省级基金

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静水压对人椎间盘髓核细胞形态及基质表达的影响

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中国组织工程研究 2012年第13期16卷 2281-2286页

作者：陈江柳根哲徐林李春根孙旗乔卫平朱志强北京中医药大学东直门医院骨科北京市100700

背景:加载在椎间盘上的重力引起的静态压力刺激是椎间盘细胞代谢的重要调节因素。目的:观察静水压对体外单层培养人椎间盘髓核细胞形态学及基质代谢的影响。方法:在静水压加载系统中对体外单层培养的传4代人髓核细胞施以0.3,0.7,3MPa的... 详细信息

背景:加载在椎间盘上的重力引起的静态压力刺激是椎间盘细胞代谢的重要调节因素。目的:观察静水压对体外单层培养人椎间盘髓核细胞形态学及基质代谢的影响。方法:在静水压加载系统中对体外单层培养的传4代人髓核细胞施以0.3,0.7,3MPa的静压,分别加压30,60,90,120min,以常压0.1MPa为对照。结果与结论:①髓核细胞形态:在静水压干预下细胞体积均变小。0.3,0.7MPa静水压下轻微缩小,细胞形态相对完整;3MPa静水压下缩小最明显,且细胞形态不完整。②髓核细胞存活率:在持续静水压刺激下开始的30min,不论压力大小存活率都偏低,在0.3,0.7MPa时随作用时间延长而增加或维持稳定,细胞增殖逐渐增强,在3MPa时随时间趋于下降,最终细胞总体数量减少。③髓核细胞蛋白多糖:各组表达量随时间增加逐渐增加,当持续加压120min时,在0.3,0.7MPa静水压下合成量呈高表达状态,在0.1,3MPa静压表达相对较少。表明静水压会对髓核细胞形态学、存活率及基质表达产生影响。

关键词：静水压髓核细胞形态学蛋白多糖组织构建细胞学实验

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