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微管蛋白β-Tubulin在二、三倍体虹鳟(Oncorhynchus mykiss)表达与定位分析

海洋与湖沼 2021年第5期52卷 1244-1254页

作者：黄天晴史秀兰王炳谦邹作宇谷伟刘恩慧程琳刘洋董福霖潘赞宇徐革锋中国水产科学研究院黑龙江水产研究所农业农村部淡水水产生物技术与遗传育种重点实验室哈尔滨150070 哈尔滨市农业科学院哈尔滨150029

微管构成纺锤体主要架构,在染色体配对与分离过程起重要作用。通过β-tubulin基因克隆,实时荧光定量,Western blot及免疫组织化学技术对三倍体虹鳟卵巢败育根本原因进行探究。结果表明β-tubulin基因开放阅读框1533 bp,编码424个氨基酸... 详细信息

微管构成纺锤体主要架构,在染色体配对与分离过程起重要作用。通过β-tubulin基因克隆,实时荧光定量,Western blot及免疫组织化学技术对三倍体虹鳟卵巢败育根本原因进行探究。结果表明β-tubulin基因开放阅读框1533 bp,编码424个氨基酸。β-Tubulin蛋白质的相对分子量为47.5 kDa。虹鳟(Oncorhynchus mykiss)与银大马哈鱼(***)同源性高达99.59%。系统发育进化树显示,虹鳟与大鳞大马哈鱼(***)和红点鲑(Salvelinus alpinus)聚为一支。实时定量检测发现β-tubulin基因在二倍体雌性虹鳟卵巢表达量极显著高于其他组织。在240-330 dpf同一发育阶段中,β-tubulin基因在二倍体雌性虹鳟卵巢中的表达量较三倍体雌性虹鳟相对较高,且均存在极显著差异。免疫组化结果显示,240-330 dpf,β-Tubulin蛋白主要在二倍体虹鳟卵母细胞核内表达,在三倍体虹鳟卵原细胞核内表达量较少。推测三倍体虹鳟性腺败育可能与β-tubulin基因的低表达与组织异常定位有关,结果为进一步揭示三倍体虹鳟卵母细胞减数分裂受阻提供基础理论。

关键词：虹鳟 β-tubulin 基因克隆组织表达分布

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金茅黑鸡miR-206表达及靶基因预测分析

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中国畜牧兽医 2020年第2期47卷 506-513页

作者：黄金星陈兰张涛陈福祥吴鹏飞冒静巩用双谢恺舟王金玉戴国俊扬州大学动物科学与技术学院扬州225009 教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室扬州225009 江苏三德利牧业发展有限公司常州213200

为了研究miR-206的组织表达分布及其在鸡骨骼肌生长发育中的表达规律,预测其可能的作用机制,本研究采集4周龄金茅黑鸡的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胸肌、腿肌和腹脂8种组织及2、6、10、14、16周龄胸肌和腿肌组织,利用实时荧光定量... 详细信息

为了研究miR-206的组织表达分布及其在鸡骨骼肌生长发育中的表达规律,预测其可能的作用机制,本研究采集4周龄金茅黑鸡的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胸肌、腿肌和腹脂8种组织及2、6、10、14、16周龄胸肌和腿肌组织,利用实时荧光定量PCR技术检测miR-206在8种组织及不同周龄胸肌和腿肌中的表达,利用生物信息学方法预测其靶基因并进行功能注释。结果显示,miR-206在公、母鸡胸肌和腿肌中表达量均极显著高于其他组织(P<0.01),在腹脂、心脏、肝脏、脾脏、肺脏和肾脏中低表达,为鸡骨骼肌特异性表达miRNA;miR-206均在公、母鸡腿肌和胸肌组织生长早期(2周龄)表达最高,之后表达量逐渐下降。靶基因预测和功能分析发现,miR-206共有356个靶基因,其中21个与肌肉生成相关,多个靶基因已知参与调控肌肉生成,包括配对框7(paired box 7,Pax7)、胰岛素样生长因子1(insulin-like growth factor 1,IGF1)、脑衍生神经营养因子1(brain-derived neurotrophic factor 1,BDNF1)、视黄酸受体(retinoic acid receptor beta,RARB)和卷曲类受体7(frizzled class receptor 7,FZD7)基因。此外,发现miR-206靶基因富集到多条已知参与调控骨骼肌生成的信号通路,包括MAPK、Wnt、肌动蛋白骨架调控和黏着斑激酶信号通路。结合表达数据推测,miR-206可能通过靶向调控Pax7、IGF1、BDNF1、RARB、FZD 7基因和MAPK、Wnt等信号通路参与调控鸡肌肉生成。本研究揭示了金茅黑鸡miR-206的组织表达分布及其在鸡骨骼肌生长过程中的表达规律,并预测了其调控骨骼肌生成的可能作用机理,为进一步研究miR-206在鸡肌肉生长发育中的作用机理和表达调控奠定了基础。

关键词： miR-206 金茅黑鸡组织表达分布表达规律靶基因

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Spindlin和β-tubulin基因在雌性虹鳟二、三倍体性腺发育中的表达与定位研究

Spindlin和β-tubulin基因在雌性虹鳟二、三倍体性腺发育中的表达...

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作者：史秀兰上海海洋大学

学位级别：硕士

虹鳟(Oncorhynchus mykiss),是隶属于鲑形目(Salmoniformes)、鲑科(Salmonidae)、大麻哈鱼属(Oncorhychus)的一种典型的冷水性养殖鱼类。虹鳟性成熟时,能量多用于满足性腺发育和维持第二性征以及生殖行为,导致二倍体虹鳟肉质和外观品质... 详细信息

虹鳟(Oncorhynchus mykiss),是隶属于鲑形目(Salmoniformes)、鲑科(Salmonidae)、大麻哈鱼属(Oncorhychus)的一种典型的冷水性养殖鱼类。虹鳟性成熟时,能量多用于满足性腺发育和维持第二性征以及生殖行为,导致二倍体虹鳟肉质和外观品质下降。三倍体雌性虹鳟的卵母细胞发育受到完全抑制,性腺发育异常恰消除了由性成熟引起的不良结果。然而目前三倍体雌性虹鳟性腺败育的深层机理方面的研究并不详尽。在本实验室前期工作的基础上,本研究继续就三倍体虹鳟卵母细胞发育阻滞进行分子调控机制探究。由于三倍体雌性虹鳟有三套染色体,在减数分裂偶线期,即同源染色体联会发生紊乱,使得减数分裂不能正常进行,无法排出成熟配子,导致不具备受精能力。Spindlin(Spin)基因在前期的研究中被证明是减数分裂纺锤体相关的母体效应因子,且从卵母细胞到早期胚胎发育的过渡期间,在细胞周期调节中发挥作用。而β-Tubulin属于细胞骨架结构物质,在性腺发育中,有保持卵细胞形态、协调细胞内物质交换以及辅助细胞增殖等功能。两种基因在性成熟阶段皆发挥重要作用。因此,本研究以减数分裂相关调控机制为切入点,选取二、三倍体雌性虹鳟240-330 dpf(days post fertilization,dpf)发育时期,对Spindlin与β-Tubulin基因进行克隆,采用实时荧光定量(RT-PCR)、组织切片、蛋白质印迹法和免疫组织化学方法鉴定了二、三倍体雌性虹鳟卵母细胞不同发育阶段减数分裂进程中的表达差异情况及不同时期两种蛋白的亚细胞定位情况,从而探明三倍体雌性虹鳟在性细胞增殖分化异常的调控关键。具体研究结果如下:1、通过cDNA末端快速扩增(RACE)技术,获得Spindlin基因cDNA 4,529 bp(Gen Bank登录号:MN378564),命名为Os Spindlin。其中3’非编码区(UTR)和5’非编码区(UTR)分别长3,662 bp、141 bp,开放阅读框(ORF)长726 bp,编码241个氨基酸,该蛋白质序列的相对分子量为28.3 KD,理论等电点值为5.94,无跨膜结构。同源性分析表明,虹鳟(Oncorhynchus mykiss)与银大马哈鱼(Oncorhynchus kisutch)同源最高,高达99.59%。系统发育进化树显示,虹鳟与大鳞大马哈鱼(Oncorhynchus tshawytscha)和红点鲑(Salvelinus alpinus),聚为一支。Os Spindlin基因在二倍体与三倍体雌性虹鳟在胚胎发育各时期均有少量表达,呈现下降的趋势,其中在受精卵时期表达量最高。同一发育时期,二倍体虹鳟的Os Spindlin基因相对表达量都高于三倍体虹鳟,二倍体与三倍体虹鳟的受精卵时期、8细胞期和尾芽期之间有显著性差异(P<0.05),然而其他时期并未有显著性差异(P>0.05)。Os Spindlin基因在虹鳟成鱼卵巢、肾、肝、脾、肌、鳃、心、眼、肠、鳍组织中均有表达,其中,在卵巢中的表达量极显著高于其他组织(P<0.01)。对于雌性虹鳟二倍体,在受精后240-300 dpf发育阶段,Os Spindlin基因在卵巢组织中的相对表达量显著下降。对于雌性虹鳟三倍体,该基因在240-330 dpf阶段的表达量显著上升。同一发育阶段中,Os Spindlin基因在雌性虹鳟二倍体卵巢中的表达量较雌性虹鳟三倍体相对较高,且均存在极显著差异(P<0.01)。Western blot结果显示Spin蛋白在240-330 dpf发育阶段均有表达,对于二倍体雌性虹鳟,Spin蛋白在240 dpf表达量最高,在270 dfp降低,270-330 dpf呈现上升趋势,与二倍体虹鳟相比,三倍体虹鳟有相同的变化趋势,在相同时期,二倍体与三倍体虹鳟Spin蛋白的表达量之间有显著性差异(P<0.05)。免疫组化结果发现,雌性虹鳟二倍体在240 dpf阶段,Spin蛋白在初级卵母细胞核内信号最强,在270-330 dpf阶段逐渐减弱;三倍体虹鳟卵巢在240-330 dpf发育阶段,在卵原细胞中信号逐渐增强。上述研究表明,三倍体雌性虹鳟在减数分裂过程中出现异常与Os Spindlin基因的低表达有关。2、通过克隆得到虹鳟β-tubulin基因开放阅读框1,533 bp,获得Gen Bank登录号:MN931398,编码424个氨基酸。通过对其编码的蛋白质进行分析,虹鳟β-Tubulin蛋白质的相对分子量为47.5KD,理论等电点值为4.73,不稳定指数为38.85,此蛋白为不稳定蛋白。该基因无信号肽,无跨膜螺旋区。β-Tubulin氨基酸同源性比对,在硬骨鱼类中,虹鳟与银大马哈鱼(Oncorhynchus kisutch)同源最高,为

关键词：虹鳟 spindlin β-tubulin 基因表达组织表达分布

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家畜防御素体内组织表达及体外表达研究进展

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畜牧与饲料科学 2019年第4期40卷 52-57页

作者：魏薇李海军王鑫张齐政曹贵方内蒙古农业大学兽医学院内蒙古呼和浩特010018

防御素是广泛分布于动物、植物、昆虫体内的一类富含半胱氨酸的阳离子内源性抗菌肽,在动物免疫调节及植物自身防御方面扮演着重要的角色。对防御素的概念、类型、结构特征、作用机理进行了综述,总结了防御素在牛、马、羊、猪、鹿、骆驼... 详细信息

防御素是广泛分布于动物、植物、昆虫体内的一类富含半胱氨酸的阳离子内源性抗菌肽,在动物免疫调节及植物自身防御方面扮演着重要的角色。对防御素的概念、类型、结构特征、作用机理进行了综述,总结了防御素在牛、马、羊、猪、鹿、骆驼等家畜体内组织表达及体外表达研究进展,并对防御素在未来生物制药和畜牧饲料生产方面的应用前景进行了展望。

关键词：家畜防御素组织表达分布体外表达

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缩骨鲫MSTN基因的克隆与组织表达分析

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淡水渔业 2017年第2期47卷 23-29页

作者：杨扬许炎坤舒琥李强蓝召军刘丽广州大学生命科学学院广州510006 韶关市水产研究所广东韶关512006 华南农业大学海洋学院广州510642

采用同源克隆、生物信息学方法及荧光定量PCR(Real-time PCR)对缩骨鲫(Carassius auratus sogu var.)肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)基因进行克隆,分析和组织表达状况研究。结果显示:缩骨鲫基因组MSTN基因全长4 737 bp,含有两个内含子... 详细信息

采用同源克隆、生物信息学方法及荧光定量PCR(Real-time PCR)对缩骨鲫(Carassius auratus sogu var.)肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)基因进行克隆,分析和组织表达状况研究。结果显示:缩骨鲫基因组MSTN基因全长4 737 bp,含有两个内含子和三个外显子;编码区长度为1 128 bp,编码375个氨基酸,包括信号肽(1aa^23aa),TGF-β前肽保守区域(34aa^256aa),TGF-β功能区(281aa^375aa),保守的RXXR蛋白酶酶切位点以及C-端活性区域9个保守的半胱氨酸残基,这与其他物种MSTN相似。此外,缩骨鲫与鲫鱼(Carassius auratus)的MSTN氨基酸序列同源性最高,达到96.1%。以β-actin为内参基因,荧光定量PCR分析表明,MSTN在肌肉中表达量最高;脑、眼、心脏中次之;在肝胰脏、卵巢、肠和肾脏中微量表达。

关键词：缩骨鲫(Carassius auratus sogu var.) 克隆肌肉生长抑制素基因组织表达分布

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大刺鳅IGF-1基因克隆与组织表达分析

大刺鳅IGF-1基因克隆与组织表达分析

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2018年中国水产学会学术年会

作者：钟东明周惠强张明清舒琥广州大学生命科学学院

胰岛素样生长因子激素(insulin like growth factor,IGF)对脊椎动物的生长发育及代谢具有重要作用。本实验采用RACE技术,克隆了大刺鳅(Mastacembelus armatus)IGF-1c DNA序列,应用qRT-PCR对不同组织中IGF-1 mRNA的表达量进行检测。结果... 详细信息

胰岛素样生长因子激素(insulin like growth factor,IGF)对脊椎动物的生长发育及代谢具有重要作用。本实验采用RACE技术,克隆了大刺鳅(Mastacembelus armatus)IGF-1c DNA序列,应用qRT-PCR对不同组织中IGF-1 mRNA的表达量进行检测。结果表明,大刺鳅IGF-1 cDNA开放阅读框(open reading frame, ORF)为558bp,由此推导IGF-1前体蛋白由185个氨基酸组成;前43个氨基酸残基为信号肽。系统发育分析结果表明,大刺鳅与鲈形目鱼类的IGF-1氨基酸序列同源性较高,与爬行类、哺乳类和鸟类的同源性较低。qRT-PCR结果显示, IGF-1 mRNA在肝脏中的表达量最高,肌肉、脑、心脏次之,其他组织表达量较低。本研究有助于物种间IGF-1进化关系的研究,并为未来大刺鳅的生长相关研究提供了必要的基础资料。

关键词：大刺鳅克隆胰岛素样生长因子激素1 系统发育分析组织表达分布

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黄花蒿转录因子AaW D40的克隆

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基因组学与应用生物学 2017年第3期36卷 1001-1008页

作者：王聪慧王秋军王剑文苏州大学药学院苏州215123

黄花蒿(Artemisia annua L.)是菊科(Asteraceae)蒿属(Artemisia)一年生草本植物。WD40转录因子基因与植物叶片表面腺毛发育、次生代谢相关。本研究利用RACE技术从黄花蒿中克隆出Aa WD40基因(GenBank登录号:KY411922),并对其进行了生物... 详细信息

黄花蒿(Artemisia annua L.)是菊科(Asteraceae)蒿属(Artemisia)一年生草本植物。WD40转录因子基因与植物叶片表面腺毛发育、次生代谢相关。本研究利用RACE技术从黄花蒿中克隆出Aa WD40基因(GenBank登录号:KY411922),并对其进行了生物信息学分析。AaW D40基因的cDNA全长1 498 bp,其中5'末端非翻译区为209 bp,3'末端非翻译区为183 bp。开放阅读框(ORF)的长度为1 106 bp,编码368个氨基酸残基,DNAMAN分析预测其等电点为4.64,分子量为41.29 kD。对AaW D40氨基酸序列进行同源性分析,发现其与多种植物具有较高的同源性。生物信息学分析发现AaW D40氨基酸序列含有4个典型的WD40重复区域,符合WD40基因的特征,所以命名为AaW D40。利用Swiss-Model对AaW D40蛋白进行三级结构分析,AaW D40蛋白空间结构错综复杂,与多种植物WD40空间结构域非常相似。系统发育树分析AaW D40与其他WD40均源于同一祖先,并且AaW D40与DpWDR、GhTTG4的亲缘关系最为接近。荧光实时定量PCR分析显示,AaW D40在根、茎、叶中都可以检测到表达,其中根的表达量最高,其次为叶,再次为茎。本研究为进一步研究AaW D40与黄花蒿次生代谢的关系提供了理论基础。

关键词：黄花蒿 AαWD40 生物信息学分析组织表达分布

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缩骨鲫MSTN基因的克隆与组织表达分析

缩骨鲫MSTN基因的克隆与组织表达分析

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2016年中国水产学会学术年会

作者：杨扬许炎坤舒琥李强蓝召军刘丽广州大学生命科学学院韶关市水产研究所华南农业大学海洋学院

采用同源克隆,生物信息学方法及荧光定量PCR（Real-time PCR）对缩骨鲫（Carassius auratus sogu var.）肌肉生长抑制素（myostatin,MSTN）基因进行克隆,分析和组织表达状况研究。结果表明:缩骨鲫基因组MSTN基因全长4 737 bp,含有两个... 详细信息

采用同源克隆,生物信息学方法及荧光定量PCR（Real-time PCR）对缩骨鲫（Carassius auratus sogu var.）肌肉生长抑制素（myostatin,MSTN）基因进行克隆,分析和组织表达状况研究。结果表明:缩骨鲫基因组MSTN基因全长4 737 bp,含有两个内含子和三个外显子;编码区长度为1 128 bp,编码375个氨基酸,包括信号肽（1aa3aa）,TGF-β前肽保守区域（34aa56aa）,TGF-β功能区（281aa75aa）,保守的RXXR蛋白酶酶切位点以及C-端活性区域9个保守的半胱氨酸残基,这与其他物种MSTN相似。此外,缩骨鲫与鲫鱼（Carassius auratus）的MSTN氨基酸序列同源性最高,达到96.1%。以β-actin为内参基因,荧光定量PCR分析表明,MSTN在肌肉中表达量最高;脑、眼、心脏中次之;在肝胰脏、卵巢、肠和肾脏中微量表达。结果为缩骨鲫肌肉生长和发育的分子机制研究提供基础资料。

关键词：缩骨鲫(Carassius auratus sogu var.) 克隆肌肉生长抑制素基因组织表达分布

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麦洼牦牛TLR1～10基因克隆及分子生物学特征分析

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畜牧兽医学报 2015年第5期46卷 728-737页

作者：林宝山兰道亮陈亚冰黄偲符梅李解李键西南民族大学生命科学与技术学院西南民族大学青藏高原研究院成都610041

本研究克隆了麦洼牦牛天然免疫受体1~10基因的编码区,利用生物信息学工具分析基因特点,荧光定量PCR测定TLRs基因在不同组织中的表达量。序列比较分析结果表明,麦洼牦牛TLR基因与其他物种在核苷酸水平及氨基酸水平上均表现出很高的保守... 详细信息

本研究克隆了麦洼牦牛天然免疫受体1~10基因的编码区,利用生物信息学工具分析基因特点,荧光定量PCR测定TLRs基因在不同组织中的表达量。序列比较分析结果表明,麦洼牦牛TLR基因与其他物种在核苷酸水平及氨基酸水平上均表现出很高的保守性。遗传进化方面,麦洼牦牛TLRs与牛和绵羊TLRs遗传进化距离最近,并与人、马、鼠TLRs等形成哺乳动物的一个分支,与鸡则形成遗传距离较远的一个分支。同时我们在进行系统发育分析时发现,TLR1、TLR6先聚为一小支,再与TLR10又聚为更紧密的一支,然后TLR1、2、6、10和TLR7、8、9分别聚集在两个单个的分支上,TLR其他成员各自成为一支。荧光定量结果表明,TLRs在麦洼牦牛各组织均有表达,但不同成员在不同组织的表达存在较大的差异。其中TLR2、TLR4和TLR6在脾表达量最高,在卵巢、小肠、肾、肝中有高表达,TLR1、TLR5、TLR7、TLR8、TLR9和TLR10在肾表达量最高,在肝、肾、脾等组织中高表达。综上所述,本研究的开展能为以后揭示TLRs在牦牛等高原模式动物分子免疫机制以及牦牛抗病育种奠定基础。

关键词：麦洼牦牛 TLR1-10 克隆荧光定量PCR 组织表达分布

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猪Abcb1基因克隆、生物信息学分析及在主要组织分布

猪Abcb1基因克隆、生物信息学分析及在主要组织分布

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：郭停停陈丽王丽平南京农业大学动物医学院

【目的】本研究克隆了猪Abcb1基因的编码区,利用生物信息学工具分析基因特点,Westernblot检测了P-gp在健康仔猪不同组织中的表达差异。【结果】序列比较分析结果表明,猪Abcbl基因与其他物种在核苷酸水平及氨基酸水平上均表现出较高的保... 详细信息

【目的】本研究克隆了猪Abcb1基因的编码区,利用生物信息学工具分析基因特点,Westernblot检测了P-gp在健康仔猪不同组织中的表达差异。【结果】序列比较分析结果表明,猪Abcbl基因与其他物种在核苷酸水平及氨基酸水平上均表现出较高的保守性。遗传进化方面,猪Abcb1与牛、羊Abcb1遗传进化距离最近。蛋白跨膜结构分析发现猪P-gp与人P-gp具有相似的跨膜结构,暗示其与人P-gp具有相似的生物学功能。Western blot分析结果表明P-gp在健康仔猪肠道、肝脏中有表达,但不同组织的表达存在较大差异。其中P-gp在猪空肠中表达量最高,在肾脏中几乎检测不到。【结论】本研究结果提示P-gp在健康仔猪吸收、和代谢器官中均有高量表达和分布,提示其可能对一些口服药物或毒物的体内过程产生影响。

关键词：猪 Abcb1 克隆生物信息学组织表达分布

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