检索结果-内蒙古大学图书馆

农业生物技术学报 2014年第2期22卷 158-167页

作者：邵芳张燕萍王星果唐瑞璟龚道清顾志良常熟理工学院生物与食品工程学院扬州大学动物科技学院

myf6基因属于MyoD家族成员之一,为成肌细胞分化成肌管的重要调控因子。本研究旨在克隆鹅(Anser anser)myf6基因,并进一步探讨该基因的结构与功能,揭示其在胚胎期和填饲后的表达特征。以鹅肌肉总RNA为模板,采用RACE的方法,克隆该基因全长... 详细信息

myf6基因属于MyoD家族成员之一,为成肌细胞分化成肌管的重要调控因子。本研究旨在克隆鹅(Anser anser)myf6基因,并进一步探讨该基因的结构与功能,揭示其在胚胎期和填饲后的表达特征。以鹅肌肉总RNA为模板,采用RACE的方法,克隆该基因全长cDNA序列,并进行生物信息学分析。运用实时荧光定量PCR检测myf6基因在鹅不同胚胎期mRNA的表达规律,以及填饲对其表达的影响。鹅myf6全长cDNA为1 196 bp,包括90 bp的5’UTR,383 bp的3’UTR和723 bp的开放阅读框(ORF),共编码240个氨基酸(GenBank登录号:JQ905627)。经预测鹅myf6编码蛋白的分子量为26 214.4,等电点为5.68,平均亲水性为-0.595,为不稳定亲水蛋白。预测鹅myf6蛋白具有Basic和HLH这两个明显的结构域,bHLH蛋白结构域形成剪刀状α-螺旋二聚体,且不同物种间HLH氨基酸序列高度同源。鹅myf6基因CDS区序列与鸭(Anas platyrhynchos)同源性最高,为98.62%,与哺乳类同源性在81%左右,与鱼类同源性较低,仅62%～66%。构建的系统进化树显示,所有哺乳类、鸟类、硬骨鱼各形成一个大的分支,两栖类形成独立分支,鹅首先与绿头鸭(Anas platyrhynchos)聚成一支,分子进化地位上关系最近,其次聚类顺序较近的物种为红原鸡(Gallus gallus),该结果与这些物种在生物学上的分类是较一致的。荧光定量PCR结果显示,鹅myf6 mRNA在胚胎早期第7天就有少量的表达,7天以后表达量逐渐上升,随后在胚胎中期表达量明显升高;其在E18肌肉组织中表达量达到高峰后下降,胚胎发育后期E21 myf6 mRNA的表达量是E25的近4倍,E25后逐渐趋于平稳;E18与E14、E15、E25和E28的表达差异极显著(P<0.01),E21与E25、E28的表达也差异极显著(P<0.01),与E14、E15的表达差异显著(P<0.05)。在鹅的胸肌和腿肌组织中,填饲组myf6 mRNA表达量高于对照组中该基因的表达量,且胸肌组织达到显著水平(P<0.05)。鹅myf6基因的表达具有组织特异性,该结果为进一步研究生肌调节因子myf6基因结构及其在鹅胚胎期肌肉发育中的作用提供了理论基础。

关键词：鹅 myf6 胚胎期填饲组织表达分析

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大豆phyA下游基因预测和表达分析及敲除载体构建

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大豆科学 2021年第3期40卷 309-318页

作者：张婷马丽欣刘俊林晓雅刘宝辉广州大学分子遗传与进化研究中心/广州市重点实验室广东广州510006

为了进一步研究大豆光周期调控通路中E3和E4的下游基因,为获得其突变体植株奠定基础,以拟南芥远红光响应受体phyA下游的重要信号传递因子PIF3、LAF1、FHY1和FHL的序列作为参考序列,在Phytozome 12数据库中查找其相似序列,进行序列比对... 详细信息

为了进一步研究大豆光周期调控通路中E3和E4的下游基因,为获得其突变体植株奠定基础,以拟南芥远红光响应受体phyA下游的重要信号传递因子PIF3、LAF1、FHY1和FHL的序列作为参考序列,在Phytozome 12数据库中查找其相似序列,进行序列比对和进化树分析,确定它们在大豆中的同源基因并采用qRT-PCR方法进行组织表达分析,使用CRISPR/Cas 9系统设计同源基因的敲除靶点并通过发根系统验证靶点的有效性。结果显示:AtPIF3在大豆中有6个同源基因,AtLAF1在大豆中有4个同源基因,AtFHL在大豆中有2个同源基因,而AtFHY1在大豆中没有同源基因。4个LAF1基因主要在顶端生长点表达,6个PIF3和2个FHL基因主要在荚中表达。共鉴定出12个有效靶点,能够分别将大豆中6个PIF3、4个LAF1和2个FHL基因成功敲除。研究结果为进一步获得稳定的大豆突变体材料和大豆phyA下游基因的功能研究提供了理论基础。

关键词：大豆 PIF3 LAF1 FHL 组织表达分析 CRISPR/Cas9 基因敲除载体

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蜡梅谷氧还蛋白基因CpGRX1的克隆与表达分析

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西南大学学报（自然科学版） 2014年第2期36卷 41-47页

作者：汤玲赵敏张军赵玉飞李名扬眭顺照西南大学园艺园林学院南方山地园艺学教育部重点实验室重庆市花卉工程技术研究中心重庆400716

通过随机挑取克隆测序的方法从蜡梅花cDNA文库中获得了蜡梅谷氧还蛋白基因,命名为CpGRX1(GenBank登录号:JQ990126).该基因cDNA全长为491bp,其中包含的开放阅读框长为321bp,编码蛋白分子量约为11.18kD.生物信息学分析表明:CpGRX1蛋白属... 详细信息

通过随机挑取克隆测序的方法从蜡梅花cDNA文库中获得了蜡梅谷氧还蛋白基因,命名为CpGRX1(GenBank登录号:JQ990126).该基因cDNA全长为491bp,其中包含的开放阅读框长为321bp,编码蛋白分子量约为11.18kD.生物信息学分析表明:CpGRX1蛋白属于典型的亚类I(即CPYC型)谷氧还蛋白.实时荧光定量PCR分析表明:CpGRX1基因在蜡梅的根、茎、叶、花等组织中均有表达,其在茎中的表达量显著高于其它组织;在开花过程中,CpGRX1基因在蕾期、盛开期和衰败期表达量较高,表明该基因可能与花的衰老过程相关.

关键词：蜡梅谷氧还蛋白基因克隆组织表达分析

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滇龙胆GrHDR基因的克隆与表达分析

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广西植物 2021年第6期41卷 1004-1013页

作者：杜波蔡传涛张霁中国科学院西双版纳热带植物园昆明650221 中国科学院大学北京100049 云南省农业科学院药用植物研究所昆明650200

龙胆苦苷(gentiopicroside)是中药龙胆中的主要药效成分,属于萜类化合物的衍生物。1-羟基-2-甲基-2-(E)-丁烯基-4-二磷酸还原酶[1-hydroxy-2-methyl-2-(E)-butenyl-4-diphosphate reductase,HDR]是萜类物质合成途径中的关键酶。为探讨不同光照条件下滇龙胆HDR(GrHDR)基因的表达与龙胆苦苷含量之间的关系,该文以滇龙胆叶片cDNA为模板,采用PCR和TA克隆技术获得GrHDR基因序列,对该序列进行生物信息学分析和表达分析,并采用高效液相色谱法测定龙胆苦苷含量,对该基因表达与龙胆苦苷含量进行比较。结果表明:(1)GrHDR基因(GenBank登录号:KJ917165.1)全长1398 bp,编码465个氨基酸,推定GrHDR蛋白是亲水且稳定的,相对分子质量是52281.25 Da,理论等电点是5.32;(2)该蛋白属于LYTB蛋白家族,可能定位于叶绿体上,无信号肽,二级结构主要由α-螺旋(45.16%)、β-转角(6.24%)、无规卷曲(33.98%)、延伸链(14.62%)构成;(3)GrHDR蛋白序列与同属植物秦艽的HDR蛋白相似性最高(95.71%);(4)实时荧光定量PCR结果显示GrHDR基因在滇龙胆中的表达量为根>叶>茎,而在10%、30%、100%全光光照条件下各组织的表达量有很大差异;(5)高效液相色谱法结果显示,不同光照条件下龙胆苦苷含量一致,均为根>叶>茎,其中100%全光光照下,药用部位根中龙胆苦苷含量达到7.141%,约是30%、10%全光光照条件的两倍,但该结果与同一光照条件下GrHDR基因表达规律不完全一致。该研究为阐述HDR基因功能及其与龙胆苦苷含量的关系提供参考。

关键词：滇龙胆 GrHDR 基因序列分析组织表达分析龙胆苦苷

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辣椒八氢番茄红素合成酶鉴定、进化与表达分析

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江苏农业科学 2022年第21期50卷 62-68页

作者：郑佳秋梅燚吴永成王薇薇张丽娜张永吉陈以博祖艳侠万红建江苏沿海地区农业科学研究所江苏盐城224002 浙江省农业科学院浙江杭州310021 江苏里下河地区农业科学研究所江苏扬州225007

基于辣椒全基因组序列,对辣椒八氢番茄红素合成酶(PSY)基因家族进行鉴定、系统分析,并对其在果实不同发育阶段和不同组织的表达特性进行研究。结果表明,在辣椒基因组中鉴定出6个CaPSY基因,分布在4条染色体上,编码358~432个氨基酸。系统... 详细信息

基于辣椒全基因组序列,对辣椒八氢番茄红素合成酶(PSY)基因家族进行鉴定、系统分析,并对其在果实不同发育阶段和不同组织的表达特性进行研究。结果表明,在辣椒基因组中鉴定出6个CaPSY基因,分布在4条染色体上,编码358~432个氨基酸。系统进化树分析结果表明,辣椒PSY基因与其他相关物种PSY基因分为2大类。通过MEME工具鉴定出辣椒PSY基因共有8个保守基序(motif1~motif8)。辣椒PSY实时定量检测结果表明,6个CaPSY基因在辣椒根、茎、叶、花和果实中均有表达,但表达量不同,呈现出组织特异性,推测这些基因在辣椒组织中有不同的功能。该研究结果可以为辣椒PSY基因进化关系、功能差异等进一步研究提供参考。

关键词：辣椒八氢番茄红素合成酶基因结构进化关系组织表达分析

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京海黄鸡中HOXC10基因表达规律及其生物信息学分析

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中国畜牧兽医 2016年第7期43卷 1702-1708页

作者：张向前董新龙凌姣姣韩昆鹏张涛王金玉王永娟扬州大学动物科学与技术学院扬州225009 江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室扬州225009 江苏京海集团南通226103

同源异型盒基因（homeobox genes,HOX）是在酵母乃至人类等几乎所有的真核细胞中均表达的一类基因。为了探究HOXC10基因表达规律及其生物信息学,采用qRT-PCR方法研究HOXC10基因在8周龄京海黄鸡心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胸肌、腿... 详细信息

同源异型盒基因（homeobox genes,HOX）是在酵母乃至人类等几乎所有的真核细胞中均表达的一类基因。为了探究HOXC10基因表达规律及其生物信息学,采用qRT-PCR方法研究HOXC10基因在8周龄京海黄鸡心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胸肌、腿肌、下丘脑和卵巢组织中的表达规律,检测其在300日龄高、低产组卵巢组织的表达差异,并通过多种在线软件对原鸡HOXC10基因进行生物信息学分析。结果显示,HOXC10基因在京海黄鸡腿肌中表达丰度极显著高于其他组织（P〈0.01）,且300日龄高产组中HOXC10基因表达丰度显著低于低产组（P〈0.05）。原鸡HOXC10基因序列与火鸡、野鸽、绿头鸭、人、小鼠、牛、猪、山羊及非洲爪蟾的同源性分别为77.4%、94.8%、98.6%、68.3%、67.9%、66.0%、59.0%、68.1%和79.4%;HOXC10基因共编码354个氨基酸,其中丝氨酸的含量最高,潜在的磷酸化位点有24个,在280~342的氨基酸序列内存在一个同源结构域,蛋白质亚细胞主要定位在细胞核中,且不包含跨膜结构。HOXC10基因在京海黄鸡生长和繁殖的基因调控网络中发挥了重要作用。

关键词： HOXC10基因京海黄鸡组织表达分析生物信息学

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山羊MGAT5基因克隆及其在不同组织和成肌分化过程中的表达研究

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黑龙江畜牧兽医 2024年第8期 54-59页

作者：王旭然李英豪李红艳高树新内蒙古民族大学动物科技学院内蒙古通辽028000 通辽市畜牧业发展中心内蒙古通辽028001 通辽京缘种牛繁育有限责任公司内蒙古通辽028036

为了探究山羊糖基化酶N-乙酰氨基葡萄糖转移酶(N-acetylglucosaminyl transferase, MGAT) 5基因序列信息及其在不同组织和成肌细胞分化过程中的表达变化,试验以罕山白绒山羊为研究对象,利用PCR技术克隆了山羊MGAT5基因编码序列(coding s... 详细信息

为了探究山羊糖基化酶N-乙酰氨基葡萄糖转移酶(N-acetylglucosaminyl transferase, MGAT) 5基因序列信息及其在不同组织和成肌细胞分化过程中的表达变化,试验以罕山白绒山羊为研究对象,利用PCR技术克隆了山羊MGAT5基因编码序列(coding sequence, CDS),并对其进行了生物信息学分析,同时利用反转录荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)与Western-blot技术检测MGAT5基因在山羊不同组织(心脏、肺脏、脾脏、肺脏、肾脏、背最长肌)及成肌细胞分化过程中的表达情况。结果表明:山羊MGAT5基因CDS全长为2 220 bp,编码739个氨基酸,与绵羊MGAT5基因亲缘性较高,与小鼠亲缘性较远;MGAT5蛋白的等电点为8.49,为稳定蛋白;MGAT5基因在罕山白绒山羊在心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、背最长肌均有表达,在肾脏中表达量最高,其次为脾脏、肺脏、心脏、肝脏,在背最长肌中表达量最低;MGAT5基因的mRNA和蛋白表达量在山羊成肌细胞分化过程中均呈逐渐降低趋势。说明MGAT5基因的表达可能与成肌细胞分化程度存在负相关关系。

关键词：山羊 MGAT5基因克隆生物信息学分析组织表达分析成肌细胞分化

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二化螟气味结合蛋白和化感蛋白基因的组织表达谱及功能研究

二化螟气味结合蛋白和化感蛋白基因的组织表达谱及功能研究

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作者： Sajjad Ali Khuhro 南京农业大学

学位级别：博士

昆虫具有高度发达的嗅觉系统,以此来感受外界环境中复杂的化学信号,从而做出相应的生理及行为反应,如寻找配偶、食物和产卵场所等。以嗅觉系统为靶标,昆虫性信息素和植物气味物质已被广泛用于害虫的防治。深入了解昆虫嗅觉感受的分子机... 详细信息

昆虫具有高度发达的嗅觉系统,以此来感受外界环境中复杂的化学信号,从而做出相应的生理及行为反应,如寻找配偶、食物和产卵场所等。以嗅觉系统为靶标,昆虫性信息素和植物气味物质已被广泛用于害虫的防治。深入了解昆虫嗅觉感受的分子机制,对发展更为高效的基于昆虫嗅觉系统的害虫防治技术极为重要。昆虫嗅觉涉及到多种蛋白的参与,主要包括气味结合蛋白(Odorant binding protein,OBP)、化学感受蛋白(Chemosensory protein,CSP)、气味受体蛋白(Odorant receptor,OR)离子受体(Ionotropic receptor,IR),嗅觉神经元膜蛋白(Sensory neuron membrane protein,SNMP)以及气味降解酶(Odorant degradation enzyme,ODE)等。在嗅觉过程中,OBP和CSP起到结合并运送疏水性的气味分子穿过水溶性的感器液到达感受神经树突表面的OR的重要作用,因此从众多的OBP和CSP中,鉴定嗅觉相关的OBP和CSP并研究其对不同气味物质的结合能力,对于深入了解昆虫的嗅觉机制具有重要意义。OBP和CSP均为小分子水溶性蛋白,前者通常具有6个保守的半胱氨酸,后者则具有4个保守的半胱氨酸。在鳞翅目昆虫中,OBP依据氨基酸序列的相似性和运输的气味类型,可分为信息素结合蛋白(Pheromone binding protein,PBP)、普通气味结合蛋白(General odorant binding protein,GOBP)和其他OBP。二化螟Chilo suppressalis Walker是危害水稻等农作物的重要害虫,利用基因组及转录组数据已经从二化螟获得了大量的嗅觉相关基因,但这些基因是否都具有嗅觉功能,相关研究很少。本研究首先通过触角电位(EAG)技术测定了二化螟雌雄成虫对性信息素及水稻气味物质的电生理反应,明确了具有生理活性的植物气味;然后针对二化螟OBP及CSP两类基因,通过组织表达谱分析,以触角高表达或特异表达为依据筛选嗅觉候选基因;针对嗅觉候选基因,进一步利用原核表达及体外荧光竞争结合实验,测定重组OBP和CSP蛋白对不同性信息素及植物气味的结合特性,进行基因的功能鉴定;最后还就二化螟表皮碳氢化合物(Cuticular hydrocarbon component,CHC)对雄蛾的引诱活性及对性信息素的增效作用进行了探讨。主要结果如下:1.二化螟雌、雄成虫对其性信息素及植物挥发物的EAG反应二化螟主要利用性信息素或植物气味物质来寻找配偶或产卵场所。为鉴定出对二化螟有电生理活性的植物气味物质,利用已知的30种水稻气味物质以及3种性信息素化合物对二化螟雌雄成虫进行了 EAG电生理反应测定。结果显示,雌雄成虫对(+)-雪松醇、法尼醇、2-十五烷酮、2-十三烷酮以及橙花叔醇等5种气味都有较强的EAG反应;雄成虫还对3种性信息素(Z11-16:Ald,Z9-16:Ald and Z13-18:Ald)及另2种植物挥发物(水杨酸甲酯和亚油酸)能够产生较强的EAG反应;雌成虫对另5种植物气味物质(2-庚醇、法尼烯、β-紫罗兰酮、苯甲醛以及月桂醛)可产生较强的EAG反应。植物气味的EAG反应活性往往能反映其行为反应活性,因此,我们推测这些具有较强EAG反应活性的植物气味物质在二化螟的寄主植物定位中起重要作用。2.二化螟2个GOBP的组织表达谱及配体结合能力分析昆虫对气味物质的敏感性和选择性在昆虫嗅觉感受过程中起着重要的作用。GOBP通常被认为在植物气味物质的感受中起作用,然而最近的研究表明,GOBP在性信息素的识别中也起到一定的作用。本研究利用实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR,qPCR)技术发现二化螟的 2 个 GOBP(CsupGOBP1 和 CsupGOBP2)在雌雄成虫触角中特异表达,暗示其在嗅觉感受作用中的特殊作用。利用体外配体结合实验测定了 2个GOBP对3种性信息素以及35种植物气味物质的荧光竞争结合能力,显示2个GOBP对3种性信息素都具有很强的结合能力(Ki=0.33-1.50 μM);同时,CsupGOBP1对法尼醇和油酸有较强的结合能力,CsupGOBP2对法尼醇、(+)-雪松醇、月桂烯、β-紫罗兰酮以及亚油酸的结合能力较强(Ki<10.00 μM),CsupGOBP1和CsupGOBP2还分别对2种和1种气味物质有中等结合能力(Ki=10.00-20.00 μM)。综上所述,二化螟的2个GOBP除了能够感受特定的植物气味物质,可能还参与性信息素的感受。研究首次揭示了蛾类昆虫GOBP1与性信息素的高结合能力。3.二化螟OBP的组织表达谱分析及配体结合能力分析在目前已报道的40个二化螟OBP基

关键词：二化螟触角电位反应气味结合蛋白化学感受蛋白组织表达分析荧光竞争结合试验气味特异性植物气味性信息素表皮化合物行为测定增效作用

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三疣梭子蟹Δ6脂肪酸去饱和酶基因全长cDNA克隆与组织表达

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生物技术通报 2015年第9期31卷 138-145页

作者：施秋燕杨志刚王伟姚琴琴王瑶成永旭上海海洋大学水产与生命学院上海201306

旨在探讨三疣梭子蟹高度不饱和脂肪酸自身合成能力,探究三疣梭子蟹HUFA生物合成途径。采用cDNA末端快速扩增(RACE)技术克隆得到三疣梭子蟹△6去饱和酶cDNA全长序列,并利用荧光定量PCR技术进行肝胰腺、肠道、鳃等8种组织的表达分析。通... 详细信息

旨在探讨三疣梭子蟹高度不饱和脂肪酸自身合成能力,探究三疣梭子蟹HUFA生物合成途径。采用cDNA末端快速扩增(RACE)技术克隆得到三疣梭子蟹△6去饱和酶cDNA全长序列,并利用荧光定量PCR技术进行肝胰腺、肠道、鳃等8种组织的表达分析。通过分析序列表明,基因序列全长2875bp,其中5'非编码区长465bp,3'非编码区长1078bp,开放阅读框(ORF)长1332bp,编码443个氨基酸;并且编码的蛋白序列具有典型的去饱和酶特性:3个组氨酸保守区,一个N端细胞色素b5结构域以及一个血红素结合的HPGG结构域。荧光定量PCR结果显示,Δ6脂肪酸去饱和酶基因在三疣梭子蟹多个组织中均有表达,在肝胰腺中表达量最高,其次是肠道和肌肉,心脏中表达最少。结果表明三疣梭子蟹具有△6去饱和酶。

关键词：三疣梭子蟹脂肪酸去饱和酶组织表达分析

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甘蓝型油菜BnPHL12基因克隆及功能分析

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西南农业学报 2022年第7期35卷 1477-1490页

作者：李兵刘志全王璐琳胡建军唐铭霞戴成王克秀马朝芝四川省农业科学院作物研究所成都610066 华中农业大学作物遗传育种国家重点实验室武汉430070 湖南省农业科学院蔬菜研究所长沙410125

【目的】在甘蓝型油菜中克隆拟南芥MYB-CC家族转录因子AtPHL12的同源基因BnPHL12并进行生物信息学、组织表达模式、亚细胞定位及转录活性研究,为BnPHL12的基因功能研究奠定基础。【方法】利用序列比对方法(BLAST)在甘蓝型油菜泛基因组... 详细信息

【目的】在甘蓝型油菜中克隆拟南芥MYB-CC家族转录因子AtPHL12的同源基因BnPHL12并进行生物信息学、组织表达模式、亚细胞定位及转录活性研究,为BnPHL12的基因功能研究奠定基础。【方法】利用序列比对方法(BLAST)在甘蓝型油菜泛基因组数据库BnIR中鉴定AtPHL12的同源基因BnPHL12,在“Westar”品系中克隆AtPHL12的同源基因,进行生物信息学及进化分析。利用qRT-PCR及GUS染色方法检测AtPHL12同源基因在不同组织中的表达水平,利用原生质体转化的方法检测BnPHL12的亚细胞定位及转录活性。利用农杆菌侵染介导的转化方法,创建BnA01PHL12过量表达转化植株,并进行BnA01PHL12功能分析。【结果】在“Weatar”材料中克隆到4个AtPHL12的同源基因,命名为BnA01PHL12(705 bp),BnC01PHL12(705 bp),BnA05PHL12(705 bp)和BnC05PHL12(696 bp),分别编码234、234、234、231个氨基酸,与AtPHL12的序列相似性大于70%,均含有保守的MYB DNA结合结构域和Coiled-Coiled结构域。BnA01PHL12与BnC01PHL12分别来源于白菜的BraA01t04110Z、甘蓝的BolC01g050170.2J。BnPHL12的同源基因在根、茎、叶、花蕾中均有表达,在根和叶的表达水平更高;BnA01PHL12与BnC01PHL12在花药发育的早期和晚期均有较高的表达水平。BnA01PHL12定位在细胞核中并具有转录激活活性。在甘蓝型油菜和拟南芥中,利用绒毡层特异表达基因BnA9启动子驱动BnA01PHL12表达,导致转基因材料雄性不育。【结论】在甘蓝型油菜中,AtPHL12的4个同源基因具有保守的MYB和CC结构域,在营养器官和生殖器官中均有表达。通过在绒毡层细胞中过量表达BnA01PHL12,创制了新的雄性不育材料,为研究花药发育提供良好基础。

关键词：甘蓝型油菜 AtPHL12 进化分析亚细胞定位组织表达分析雄性不育

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