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67 篇 期刊文献
24 篇 学位论文
14 篇 会议

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4 篇 医学
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主题

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16 篇 克隆
16 篇 生物信息学分析
12 篇 生物信息学
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5 篇 原核表达
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4 篇 race
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2 篇 辣椒
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2 篇 番茄(solanum lyc...
2 篇 化学感受蛋白
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2 篇 二化螟

机构

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5 篇 常熟理工学院
5 篇 华中农业大学
4 篇 华南农业大学
4 篇 广西大学
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3 篇 吉林农业大学
3 篇 苏州大学
3 篇 西南科技大学
3 篇 扬州大学
3 篇 石河子大学
2 篇 西南大学
2 篇 中山市农产品质量...
2 篇 中国农业科学院兰...
2 篇 甘肃农业大学
2 篇 华中师范大学
2 篇 西北农林科技大学
2 篇 中国水产科学研究...

作者

5 篇 顾志良
4 篇 邵芳
3 篇 张燕萍
3 篇 zhao dan
3 篇 cao ying
3 篇 郁建锋
3 篇 胡尚连
3 篇 shao fang
3 篇 赵丹
3 篇 梁春年
3 篇 gu zhi-liang
3 篇 曹颖
3 篇 杨秀荣
2 篇 路建卫
2 篇 陈昆平
2 篇 徐建荣
2 篇 gao qian
2 篇 熊显荣
2 篇 秦艳杰
2 篇 闫喜武

语言

105 篇 中文

检索条件"主题词=组织表达分析"

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详细简洁

排序：

人部分组织中neuritin表达检测及其过表达对细胞凋亡的影响

人部分组织中neuritin表达检测及其过表达对细胞凋亡的影响

引用

作者：巴鹏飞石河子大学

学位级别：硕士

目的:(1)检测部分肿瘤及相应正常组织中neuritin的表达情况;(2)观察neuritin过表达对细胞生物学特性的影响,探讨neuritin与肿瘤发生发展的相关性。方法:(1)运用免疫组织化学技术分别检测5例肺癌、食管癌、子宫内膜癌、宫颈癌及相应正常... 详细信息

目的:(1)检测部分肿瘤及相应正常组织中neuritin的表达情况;(2)观察neuritin过表达对细胞生物学特性的影响,探讨neuritin与肿瘤发生发展的相关性。方法:(1)运用免疫组织化学技术分别检测5例肺癌、食管癌、子宫内膜癌、宫颈癌及相应正常组织中neuritin蛋白的表达情况。初步筛选出neuritin蛋白表达有差异的组织后,扩大其样本量利用免疫组化技术核实neuritin在肿瘤组织与正常组织的表达差异,并通过RT-PCR在新鲜组织中进一步验证免疫组织化学检测的结果。(2)利用稳定表达neuritin的BMSCs细胞,通过β-半乳糖苷酶检测观察neuritin对细胞衰老的影响; Annexin V-PI染色后,经通过流式细胞仪观察neuritin对细胞凋亡的影响。结果:(1)在上述组织中,免疫组化初步筛选结果显示,与相应正常组织相比,neuritin蛋白在子宫内膜癌、宫颈癌、食管癌组织中高表达;尤以肺癌与正常肺组织neuritin蛋白表达差异明显;进一步扩大肺癌及正常肺组织样本量,免疫组织化学结果显示,肺癌组织中neuritin蛋白表达高于正常肺组织,差异有统计学意义(p<0.01)。RT-PCR结果显示,neuritin基因在肺癌组织有较高表达,而在正常肺组织中未检测到neuritin基因的表达。(2)β-半乳糖苷酶检测结果显示,neuritin稳定过表达的骨髓间充质干细胞(BMSc-neu)阳性染色率(19.33±1.53%)低于阴性对照组(BMSc-3.1)阳性染色率(47.67±3.05%),差异有统计学意义(t=12.14,p<0.05);(3)Annexin V-PI染色结果显示;neuritin稳定过表达的骨髓间充质干细胞(BMSc-neu)早期凋亡率(25.11±1.17%)低于阴性对照组(BMSc-3.1)早期凋亡率(38.10±1.28%),差异有统计学意义(t =9.22,p<0.05)。结论:(1)neuritin在部分肿瘤组织的表达高于其相应的正常组织;(2)neuritin过表达能够延缓BMSCs细胞的衰老;(3)neuritin过表达能抑制BMSCs细胞凋亡。以上研究结果提示:neuritin作为抑制细胞凋亡的蛋白因子,可能与肿瘤的发生发展相关。

关键词： neuritin 基因过表达细胞凋亡组织表达分析

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桑天牛交配行为特点及其外生殖器上的关键嗅觉蛋白基因鉴定与筛选

桑天牛交配行为特点及其外生殖器上的关键嗅觉蛋白基因鉴定与筛选

引用

作者：罗鹏江西农业大学

学位级别：硕士

桑天牛Apriona germari(Hope)是我国农林重要蛀干害虫之一,对多种林果植物造成严重经济损失。为减少传统防治技术对化学药剂的大量使用,探索桑天牛无公害控制技术至关重要。化学通讯是昆虫寄主选择、配偶识别、交配及寻找产卵场所等行... 详细信息

桑天牛Apriona germari(Hope)是我国农林重要蛀干害虫之一,对多种林果植物造成严重经济损失。为减少传统防治技术对化学药剂的大量使用,探索桑天牛无公害控制技术至关重要。化学通讯是昆虫寄主选择、配偶识别、交配及寻找产卵场所等行为的重要方式,深入了解其生殖行为特点及两性通讯的嗅觉机理,是开发桑天牛行为调控策略的重要途径。本研究应用行为学和电生理学技术探明桑天牛交配行为特点及其配偶识别器官,通过分子生物学及生物信息学技术鉴定并分析桑天牛外生殖器上的嗅觉相关蛋白基因及其组织表达差异,筛选交配行为中关键嗅觉基因,为进一步揭示桑天牛生殖行为机制奠定基础。本研究取得成果如下:(1)观察发现桑天牛日活动行为具有一定规律:全天活动以取食和休息为主,爬行、飞行、抱握及交尾行为发生较少,且取食行为白天高于晚上,爬行和飞行行为晚上高于白天;不同时间段内,桑天牛雌成虫静息主要发生在凌晨3:30-6:30,爬行和飞行主要发生在晚上19:30-3:30,取食主要发生在傍晚16:30-19:30;雄成虫静息主要发生在白天10:30-16:30,爬行、飞行及取食主要发生时间与雌虫一致;抱握及交尾行为主要发生在白天6:30-16:30。(2)桑天牛交配行为观察结果显示,下颚须、下唇须及外生殖器在桑天牛配偶识别中发挥主要作用,尤其是雌雄成虫外生殖器的接触是桑天牛交配行为成功的关键,表明桑天牛外生殖器中存在感器及虫体性信息素组分。(3)桑天牛对5种虫体气味物质的EAG反应结果显示,雌虫主要对Z-9-二十三烯、二十七烷和二十九烷的EAG反应强烈,最佳反应浓度均为0.01mg/ml;雄虫则主要对二十九烷、Z-9-二十三烯反应强烈,最佳反应浓度分别为0.1 mg/ml和0.001 mg/ml。其中二十七烷仅对雌虫具有强烈EAG反应。雌虫对二十七烷、1-二十二烯和Z-9-二十三烯的灵敏度要远高于雄虫,对二十九烷的灵敏度低于雄虫。(4)通过扫描电镜观察,在桑天牛雌雄成虫外生殖器上共发现感器5类10种,分别为毛形感器、刺形感器、锥形感器、芽形感器、鳞形感器和钟形感器。其中,毛形感器存在2种亚型,刺形感器存在4种亚型,且刺形感器Ⅲ型和钟形感器为雄成虫特有,刺形感器Ⅳ型、锥形感器和芽形感器为雌成虫特有。(5)对桑天牛成虫雌雄外生殖器转录组数据进行分析,共获得69406个Unigenes基因,平均长度1813 bp,分别有41983、30963、30099、29678、9480、5341个Unigenes基因在Nr,KEGG,Swiss-prot,GO,COG,Pfam六大数据库中被成功注释。(6)利用生物信息学软件分析桑天牛外生殖器转录组数据,共鉴定气味结合蛋白基因20个,含性信息素结合蛋白基因6个;化学感受蛋白基因4个;气味受体基因8个。(7)桑天牛性信息素结合蛋白基因的RT-qPCR结果显示,Ager PBP1和Ager PBP6在桑天牛雌雄成虫触角中高表达,Ager PBP2在雄虫触角、雌雄虫下唇须及下颚须中均较高表达,Ager PBP5主要高表达于雌虫触角,Ager PBP3、Ager PBP4在雄性下颚须和外生殖器中特异性表达。这一结果成功筛选出了桑天牛交配行为中可能发挥作用的关键嗅觉蛋白基因,为后期基因功能研究奠定了重要基础。

关键词：桑天牛交配行为外生殖器转录组气味结合蛋白性信息素结合蛋白组织表达分析

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番茄萜类化合物生物合成途径相关酶基因的克隆与分析

番茄萜类化合物生物合成途径相关酶基因的克隆与分析

引用

作者：孙晋华中农业大学

学位级别：硕士

植物通过类异戊二烯生物合成途径产生的萜类化合物（terpenoid）,对植物的正常生长发育以及植物与生态环境之间的联系起着重要的作用。萜类化合物具有重要的商业价值以及生态意义,萜类代谢工程成为目前次生代谢工程的研究热点,尤其随着... 详细信息

植物通过类异戊二烯生物合成途径产生的萜类化合物（terpenoid）,对植物的正常生长发育以及植物与生态环境之间的联系起着重要的作用。萜类化合物具有重要的商业价值以及生态意义,萜类代谢工程成为目前次生代谢工程的研究热点,尤其随着萜类代谢途径以及调控机理的深入研究,以基因工程技术为基础的代谢工程成为提高目标萜类产物的最有潜力的手段之一。然而,萜类代谢途径关键酶基因的克隆与鉴定工作是利用相关酶进行基因操作进而提高植物目标萜类化合物产量的基础。番茄（Solanum lycopersicum）为世界性重要蔬菜作物,进行番茄萜类代谢工程研究具有重要意义,可以通过萜类代谢工程对番茄的品质、风味、抗病、抗虫等性状进行遗传改良。目前,番茄萜类代谢工程已取得一定的研究进展,番茄萜类生物合成途径的一些相关酶基因已被克隆并进行了转基因研究,但还有部分关键基因还未被克隆。因此,本研究以番茄为材料,克隆分析了3个萜类化合物生物合成相关酶基因,丰富并进一步完善了番茄萜类化合物生物合成途径相关酶研究,为利用番茄萜类化合物生物合成途径相关酶进行萜类代谢工程研究奠定基础。本研究主要结果如下: 1.以在GenBank搜寻到的烟草（Nicotiana tabacum）异戊烯基焦磷酸异构酶2（IPI2）基因（AB049816）的cDNA为信息探针,在TIGR番茄数据库里BLAST到一条电子拼接序列TC183769,根据该TC克隆出番茄异戊烯基焦磷酸异构酶基因（SlIPI）的cDNA序列,其GenBank登录号为EU253957,测序结果表明,该cDNA全长708bp,编码235个氨基酸,与TC183769的核酸同源性为99%,氨基酸同源性为100%。氨基酸序列比对结果显示番茄IPI与其他植物IPI的同源性非常高。经预测分析该SlIPI不含有叶绿体信号肽,定位于细胞质与过氧化物体;SlIPI含有IPI蛋白质的重要的功能区域—NUDIX domain及活性位点Cys88和Glu149。三维结构模型分析表明,SlIPI与人类（Homo sapines）IPI结构非常相似。通过半定量RT-PCR进行IPI组织表达分析表明SlIPI在植物不同组织中表达水平有差异,在根中表达量最高。原核表达的重组SlIPI蛋白的分子量大小与通过软件预测的分子量大小相同,为27.1KD。在大肠杆菌中超量表达SlIPI,可以推动萜类生物合成代谢流,促进β-胡萝卜素的生物合成,从而验证了SlIPI的功能。 2.以在GenBank搜寻到的拟南芥（Arabidopsis thaliana）3-羟基-3-甲基戊二酰CoA合成酶（HMGS）基因（NM117251）的全长cDNA为信息探针,在TIGR番茄数据库里BLAST到一条电子拼接序列TC176556,根据该TC克隆出番茄3-羟基-3-甲基戊二酰CoA合成酶基因（SlHMGS）的cDNA序列,其GenBank登录号为EU253956,测序结果表明,该cDNA全长1389bp,编码462个氨基酸,与TC176556的核酸同源性为99%,氨基酸同源性为99%。氨基酸序列比对结果显示番茄HMGS与其他植物HMGS的同源性较高。SlHMGS系统进化树分析表明,SlHMGS与其他物HMGS具有共同的祖先。MotifScan分析表明SlHMGS含有3-羟基-3-甲基戊二酰CoA合成酶的活性位点。三维结构模型分析表明,SlHMGS与芥菜（Brassica juncea）HMGS结构相似。原核表达的重组SlHMGS蛋白的分子量大小与通过软件预测的分子量大小相同,为51.08KD。 3.以在GenBank搜寻到的橡胶树（Hevea brasiliensis）甲羟戊酸-5-焦磷酸脱羧酶（MDC）基因（AF429368）的全长cDNA为信息探针,在TIGR番茄数据库里BLAST到一条电子拼接序列TC172759,根据该TC序列克隆出番茄甲瓦龙酸-5-焦磷酸脱羧酶（SlMDC）基因的cDNA序列,其GenBank登录号为EU216564,测序结果表明该cDNA全长1269bp,编码422个氨基酸,与TC172759的核酸同源性为99%,氨基酸同源性为99%。氨基酸序列比对结果显示SlMDC与其他植物MDC的同源性较高。SlMDC系统进化树分析表明,SlMDC与其他物种的MDC具有共同的祖先。三维结构模型分析表明,SlMDC与酵母MDC相似的P环结构。通过半定量RT-PCR进行MDC组织表达分析表明SlMDC在整个植物表达水平较低,茎、花果实中表达量相对较高。原核表达的重组SlMDC蛋白的分子量大小与通过软件预测的分子量大小相同,都为46.7KD。

关键词：番茄(Solanum lycopersicum) 萜类生物合成异戊烯基焦磷酸异构酶甲羟戊酸-5-焦磷酸脱羧酶 3-羟基-3-甲基戊二酰CoA合成酶基因cDNA克隆生物信息学原核表达组织表达分析

来源：评论

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牛脂肪细胞分泌因子五个基因遗传特征分析

牛脂肪细胞分泌因子五个基因遗传特征分析

引用

作者：付玮玮信阳师范学院

学位级别：硕士

在黄牛育种中,一个重要的目标就是生长和肉质性状的提高。脂肪细胞分泌因子（Adipocytokines）是一类与脂类、糖类和能量代谢密切相关的活性因子,参与动物生长发育和脂肪沉积。因此,本研究选择其中5个关键成员Leptin, Adiponectin, Resi... 详细信息

在黄牛育种中,一个重要的目标就是生长和肉质性状的提高。脂肪细胞分泌因子（Adipocytokines）是一类与脂类、糖类和能量代谢密切相关的活性因子,参与动物生长发育和脂肪沉积。因此,本研究选择其中5个关键成员Leptin, Adiponectin, Resistin, TNF-a和Angptl8作为候选基因,通过DNA池测序结合forced-PCR-RFLP技术,检测5个基因在6个牛种共计537个个体中的SNPs,分析其与牛生长性状的相关性；同时运用qRT-PCR方法检测发生遗传变异的三个基因Leptin、TNF-a和Angptl8在枣北黄牛10种组织中的mRNA表达情况。以上研究旨在为我国黄牛生产性状改良提供理论依据。主要结果如下：1.牛Leptin基因SNPs检测及其与黄牛生长性状的关联分析本研究共检测到牛Leptin基因（AC000161.1）2个SNPs,分别为g.12254（T/C）和g.14177（C/T）。g.12254（T/C）导致Leptin蛋白第25位Cys突变为Arg，g.14177（C/T）导致第80位Ala突变为Val。关联分析结果显示：在郏县红牛群体中,g.14177（C/T）位点CT基因型个体的坐骨端宽、十字部高显著高于CC基因型个体（P<0.05）。在南阳牛群体中,g.12254（T/C）位点CT基因型个体的初生重显著高于TT基因型个体,体重（12月龄）显著高于CC基因型个体（P<0.05）；TT基因型个体的胸围（24月龄）显著高于CC基因型个体（P<0.05）。在整个黄牛群体中,g.14177（C/T）位点CT基因型个体的胸围、腰角宽、坐骨端宽、体重显著高于CC基因型个体（P<0.05）,腹围、重高比极显著高于CC基因型个体（P<0.01）。2.牛TNF-α基因SNPs检测及其与黄牛生长性状的关联分析本研究检测到牛TNF-α基因（AC 000180.1）1个SNP, g.2130（A/G）,该位点位于第2外显子区,属于同义突变。关联分析结果显示：在郏县红牛和整个黄牛群体中,g.2130（A/G）位点三种基因型个体在各生长性状指标间差异不显著。在南阳牛群体中,g.2130（A/G）位点GA基因型个体的胸围（6、18、24月龄）、坐骨端宽（12月龄）、平均日增重（18月龄）和体重（24月龄）显著高于GG基因型个体（P<0.05）;GA基因型个体的体重（6、18月龄）和平均日增重（6月龄）极显著高于GG基因型个体（P<0.01）。3.牛Angptl8基因SNPs检测及其与黄牛生长性状的关联分析本研究共检测到牛Angptl8基因（AC 000164.1）2个SNPs,分别为g.629（G/A）和g.884（T/C）,位于基因的5'UTR。关联分析结果显示：在郏县红牛群体中,g.629（G/A）位点GG基因型个体的体高、腹围显著高于AA基因型个体（P<0.05）。g.884（T/C）位点TT基因型个体的胸围、腰角宽、十字部高显著高于TC基因型个体（P<0.05）,腹围极显著高于TC基因型个体（P<0.01）。在南阳牛群体中,g.884（T/C）位点TT基因型个体的体斜长（18、24月龄）显著高于TC基因型个体（P<0.05）。在整个黄牛群体中,g.629（G/A）位点GG基因型个体的腹围显著高于AA基因型个体（P<0.05）,GA基因型个体的腹围极显著高于AA基因型个体（P<0.01）。g.884（T/C）位点TT基因型个体的胸围、体重显著高于TC基因型个体（P<0.05）,腹围、重高比极显著高于TC基因型个体（P<0.01）。4.牛Leptin、TNF-α和Angptl8基因5个位点组合效应与黄牛生长性状的关联分析本研究对Leptin, TNF-α和Angptl8基因组合多态位点（组合基因型个数大于10,共发现8种组合型）与黄牛生长性状的关联分析结果显示：5个位点组合基因型CCCCGAAATC个体的腹围极显著高于CCCCGAGATC基因型个体（P<0.01）；基因型CCCCGAGATC个体的腹围显著高于CTCCGAAATC和CTCCGGAATC基因型个体（P<0.05）。5.牛Leptin、TNF-α和4ngptl8基因的实时定量表达分析本研究以牛Leptin、TNF-α和Angptl8基因为研究对象,以24月龄成年枣北黄牛的10种不同组织样为材料,采用qRT-PCR方法检测三个候选基因在10种组织中的表达规律。研究结果表明：（1）Leptin基因在成年枣北牛的背部脂肪和内脏脂肪中表达量较高,在背最长肌中表达量次之,在心脏、瘤胃、肾脏中表达量较少,在肝脏、脾脏、肺脏和小肠中几乎不表达；（2）TNF-α基因在成年枣北牛的脾脏、肺脏、小肠、肝脏中表达量较高,在肾脏、心脏、瘤胃、背最长肌中表达量较低,在背

关键词：牛脂肪细胞分泌因子 SNPs 关联分析组织表达分析

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大豆水杨酸结合蛋白基因GmSABP2的克隆及功能分析

大豆水杨酸结合蛋白基因GmSABP2的克隆及功能分析

引用

作者：贾亚军南京农业大学

学位级别：硕士

在自然界中,植株经常受到各种不同的胁迫,如寒冷、干旱或者病原体侵染。为了应对这些胁迫,植物通过不同的信号转导通路来激活自身的各种防卫反应机制。SA在植物防卫反应的激活中是一个关键的信号。在许多植物(尤其是烟草和拟南芥)中,SA... 详细信息

在自然界中,植株经常受到各种不同的胁迫,如寒冷、干旱或者病原体侵染。为了应对这些胁迫,植物通过不同的信号转导通路来激活自身的各种防卫反应机制。SA在植物防卫反应的激活中是一个关键的信号。在许多植物(尤其是烟草和拟南芥)中,SA的重要作用都已经被证实。本研究利用电子克隆的方法从豫豆25中克隆得到GmSABP2基因,利用生物信息学软件对其进行序列分析;通过荧光定量PCR检测大豆幼苗在非生物胁迫时该基因的表达特性;通过农杆菌介导法将GmSABP2基因转入拟南芥,并利用转基因拟南芥对GmS4BP2基因进行功能分析。主要研究结果如下:1.以拟南芥SABP2序列为探针,从豫豆25中克隆得到GmSABP2基因。序列分析表明GmS4BP2基因的cDNA序列全长1235 bp,包含一个长为786 bp的开放阅读框,编码261个氨基酸,蛋白分子量为29.15 KDa,等电点为5.58。2.多序列比对表明大豆SABP2和毛白杨SABP2、可可SABP2以及烟草SABP2相似度较高。系统进化分析表明大豆SABP2和毛白杨SABP2、可可SABP2以及烟草SABP2亲缘关系较近。***-PCR结果表明,在盐胁迫和模拟干旱胁迫条件下,GmS4BP2基因的相对表达量均比正常生长条件下要高。4.在正常培养条件下,野生型植株和转基因株系均能正常萌发、生长。在高盐(150mmol·L-1 NaCl)处理条件下,野生型植株的种子萌发率为38%,12 d大小幼苗主根长为0.4 cm,成熟植株的存活率为49%;转基因株系的种子萌发率为67%,12 d大小幼苗主根长为1.1cm,成熟植株的存活率为78%。在模拟干旱(20%PEG6000)处理条件下,野生型植株的种子萌发率为31%,12 d大小幼苗主根长为0.5 cm,成熟植株的存活率为36%;转基因株系的种子萌发率为57%,12 d大小幼苗主根长为1.0 cm,成熟植株的存活率为66%。

关键词：大豆 GmS4BP2 组织表达分析转基因拟南芥功能分析

来源：评论

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玉米氨基酸转运蛋白ZmAAP基因的克隆、表达及功能解析

玉米氨基酸转运蛋白ZmAAP基因的克隆、表达及功能解析

引用

作者：单冬冬吉林农业大学

学位级别：硕士

氨基酸转运蛋白AAPs基因在拟南芥中被首次发现,经大量实验结果证明拟南芥中AAPs基因对植株体内氨基酸的种类和数量起到调控作用。越来越多的科学家证明了AAPs基因主动参与一些植物体内营养物质的吸收及代谢产物的转运。但在玉米中关于AA... 详细信息

氨基酸转运蛋白AAPs基因在拟南芥中被首次发现,经大量实验结果证明拟南芥中AAPs基因对植株体内氨基酸的种类和数量起到调控作用。越来越多的科学家证明了AAPs基因主动参与一些植物体内营养物质的吸收及代谢产物的转运。但在玉米中关于AAP基因的研究鲜见报道,因此,本研究旨在从玉米中克隆出AAP基因并探究其功能,从而明确玉米中AAP基因的表达与氨基酸吸收的关系,为玉米吸收氨基酸分子机制的研究提供理论基础,并为今后创造氨基酸吸收含量高的新玉米材料提供理论依据和候选基因。本研究克隆了玉米ZmAAP基因,并通过本底表达和真核表达对该基因的功能进行了初步分析,主要结果如下:1.采用同源克隆技术得到玉米中一段未知功能基因片段1396bp。运用生物信息学对该基因序列进行分析,采用RT-PCR技术克隆得到该玉米未知功能基因片段1396bp。运用生物信息学对该序列进行分析,可知该未知功能基因编码区核苷酸序列与大麦AAP1基因的相似性最高,相似度为87%,初步证明从玉米中克隆的基因可能为AAP基因的核酸序列,命名为ZmAAP。ZmAAP基因全长cDNA序列包括1212bp的开放阅读框,ZmAAP基因编码的氨基酸序列氨基酸数403个,相对分子质量42.88KDa,理论等电点9.24,正、负电荷残基总数分别是18和30,在组成ZmAAP蛋白编码的20种氨基酸中丝氨酸所占比例最高,达到13.4%,而组氨酸所占比例最低,仅为1.0%,总平均亲水性为0.220。ZmAAP蛋白包含信号肽,剪切位点位于38,39残基处;有5个跨膜区。2.通过荧光定量PCR测定不同生育期(出苗期、拔节期、大喇叭口期、抽雄期、吐丝期、乳熟期、完熟期)玉米植株和不同成熟度(10天、20天、30天、40天、50天、60天)玉米种子中ZmAAP基因的组织表达情况。同时测定了不同生育期玉米植株和不同成熟度种子中总游离氨基酸含量、可溶性蛋白含量、20种氨基酸组分这三个生理生化指标,发现在玉米根、叶、种子中总游离氨基酸含量与ZmAAP基因表达量的变化趋势相一致。在玉米叶、种子中可溶性蛋白含量与ZmAAP基因表达量的变化趋势相一致。ZmAAP基因在玉米根、叶、种子中表达量最高的时期相应部位碱性氨基酸含量均增速加快。后经生理生化指标与ZmAAP基因表达量之间的相关性分析表明玉米根、叶、种子中ZmAAP基因的表达量与总游离氨基酸含量呈显著正相关性,玉米叶和种子中ZmAAP基因的表达量与可溶性蛋白含量呈显著正相关性,因此初步确定ZmAAP基因的表达能够影响氨基酸和蛋白质的含量。3.通过构建植物表达载体pCAMBIA3301-ZmAAP后经农杆菌介导的方法将ZmAAP基因导入拟南芥,再经除草剂筛选从而获得转ZmAAP基因拟南芥,获得T2代转基因拟南芥25株。以T2代转基因型拟南芥为实验材料,在拟南芥不同生育期对其进行表型分析,发现转基因型拟南芥的根系长度,侧根的数量,叶片表面积,分枝茎数量明显高于野生型拟南芥。4.通过测定转基因型和野生型拟南芥中总游离氨基酸含量和可溶性蛋白含量,明确转基因型拟南芥中总游离氨基酸含量和可溶性蛋白质含量明显高于野生型拟南芥,符合表型分析结果。通过测定不同生育期(出苗期,抽薹期,开花期)转基因型拟南芥植株ZmAAP基因的组织表达情况,发现ZmAAP基因在叶片中的表达量最高。将ZmAAP基因的表达量与总游离氨基酸含量和可溶性蛋白质含量进行了相关性分析,结果表明ZmAAP基因表达量的变化与总游离氨基酸含量呈现显著正相关性。因此,明确ZmAAP基因在拟南芥中的表达能够提高拟南芥中氨基酸的含量。

关键词：玉米氨基酸转运蛋白(AAP) 生物信息学分析组织表达分析 ZmAAP基因功能研究

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天府肉羊Pax3/7基因cDNA序列克隆及表达特性的研究

天府肉羊Pax3/7基因cDNA序列克隆及表达特性的研究

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作者：俎国四川农业大学

学位级别：硕士

随着人们经济收入的增加和生活水平的提高,对蛋白质含量高、胆固醇含量低、鲜嫩多汁、营养丰富、味道鲜美、容易消化的羊肉需求量不断升高。肌肉的生长是肉羊生长过程中非常重要的一个环节。Pax3和Pax7像其他Pax家族的成员一样,在许多... 详细信息

随着人们经济收入的增加和生活水平的提高,对蛋白质含量高、胆固醇含量低、鲜嫩多汁、营养丰富、味道鲜美、容易消化的羊肉需求量不断升高。肌肉的生长是肉羊生长过程中非常重要的一个环节。Pax3和Pax7像其他Pax家族的成员一样,在许多不同组织的发育过程中起着非常重要的作用。在骨骼肌发育过程中,Pax3和Pax7是调节肌肉发育的关键基因,Pax3主要作用于骨骼肌的早期胚胎形成过程,而Pax7主要调节出生后肌肉的生长以及受损肌肉的再生。本研究根据牛的Pax3序列以及小鼠的Pax7序列为模板设计上下游引物。运用RT-PCR结合克隆测序方法获得了天府肉羊Pax3基因和Pax7基因的部分编码区序列,长度分别为1358bp和1557bp。使用DNAMAN分别将Pax3和Pax7序列与已知物种序列构建进化树,结果显示Pax3与牛的Pax3同源性最高,与斑马鱼Pax3同源性最低。Pax7与马的基因同源性最高,与安大略鲑的基因同源性最低。运用RT-qPCR技术分析Pax3基因和Pax7基因在90日龄、180日龄和270日龄天府肉羊背最长肌、三角肌、臂三头肌、臀中肌、股二头肌、股四头肌、腓肠肌、半膜肌和半腱肌9个肌肉组织中的表达。结果显示Pax3和Pax7基因在90日龄、180日龄和270日龄天府肉羊9个肌肉组织中均有表达。Pax3基因具有显著的组织特异性,在90日龄和270日龄的臂三头肌、背最长肌和三角肌这些前肢与躯干肌肉中检测到的Pax3基因的表达水平显著高于半膜肌、半腱肌等后肢肌肉(P<0.05);在180日龄的后肢肌肉中检测到的Pax3基因表达水平显著高于前肢与躯干肌肉(P<0.05)。三个时期中Pax3的表达规律也明显不同,臂三头肌、三角肌等前肢肌肉Pax3表达量先降低后增加,而半腱肌、半膜肌等后肢肌肉中Pax3表达量先上升后下降。Pax7基因在三个时期的三角肌中相对表达水平较高,大部分肌肉组织在这三个时期中的表达量为先上升后下降,在180日龄达到最高值。同时,运用RT-qPCR技术在90日龄、180日龄和270日龄天府肉羊上述9个肌肉组织中检测了Myo 和Myf5基因的表达情况,并将Pax3、Pax7、Myf5、MyoD基因在九个肌肉组织中的表达量进行相关性分析,结果表明Pax7基因相对表达量与Pax3、MyoD、Myf5基因的相对表达量呈正相关;Pax3基因相对表达量与Pax7、Myf5基因的相对表达量呈正相关。蛋白免疫印迹杂交结果显示,Pax3蛋白在90、270日龄的9个肌肉组织中均有表达。背最长肌、三角肌、臂三头肌的蛋白表达量要高于股二头肌、股四头肌、腓肠肌、半膜肌和半腱肌等后肢肌肉中的蛋白表达量;而180日龄肌肉的蛋白表达量却与之相反;Pax7蛋白在90、180日龄的9个肌肉组织中均有表达,在90日龄三头肌中的蛋白表达量最高;在180日龄背最长肌和半腱肌的表达量偏低;在270日龄臀中肌、三头肌、股二头肌、股四头肌中的蛋白表达量比其他肌肉组织中的蛋白表达量高。本研究结果表明,Pax3基因和Pax7基因在骨骼肌生长发育中起到重要作用。

关键词： Pax3 Pax7 天府肉羊克隆组织表达分析

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小麦WRKY基因的克隆及其在逆境胁迫反应下的表达变化

小麦WRKY基因的克隆及其在逆境胁迫反应下的表达变化

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作者：喻门华中科技大学

学位级别：硕士

WRKY转录因子最初是从白薯中分离到的一类DNA结合蛋白,含有约60个高度保守的氨基酸序列,能与(T)TGAC(C/T)序列(又称W-box)特异性结合,从而通过调控启动子中含W-box元件的抗病、损伤、衰老相关基因的表达,广泛参与植物的生长发育、激素... 详细信息

WRKY转录因子最初是从白薯中分离到的一类DNA结合蛋白,含有约60个高度保守的氨基酸序列,能与(T)TGAC(C/T)序列(又称W-box)特异性结合,从而通过调控启动子中含W-box元件的抗病、损伤、衰老相关基因的表达,广泛参与植物的生长发育、激素反应、代谢调节、逆境胁迫反应以及防御反应等生理生化过程。然而,目前有关在小麦中WRKY转录因子基因克隆和功能分析的研究少见报道。我们利用WRKY的高度保守结构域,对小麦的EST数据库进行搜索,并通过电子拼接的方法得到23条WRKY Unigenes,分别命名为TaWRKY1～TaWRKY23。应用RT-PCR技术,克隆得到TaWRKY1的ORF序列,该序列编码的多肽含一个WRKY结构域和锌指结构,经过系统发育分析应属于WRKY家族第II类第c亚类。我们根据TaWRKY1基因3’端非翻译区序列设计了一对特异引物,利用半定量RT-PCR技术,对TaWRKY1组织特异性以及在低温、盐和PEG胁迫下的表达变化进行了分析。结果发现,TaWRKY1在叶中表达量最多,茎中次之,根中表达量最低,经4℃1 h低温处理,TaWRKY1表达量即迅速上调,随后又恢复到正常水平,而在盐和PEG胁迫下,TaWRKY1的表达无明显变化变化。这一结果表明,TaWRKY1可能是小麦对低温这一逆境胁迫因子反应信号途径中的一个特异因子。本文的研究结果有助于阐明植物WRKY蛋白家族表达调控机制及其生物学功能,同时也为克隆小麦这种拥有复杂基因组生物中的新基因提供了一种有价值的参考,并且为小麦抗性育种提供了可能的候选基因。

关键词：小麦 WRKY转录因子基因克隆基因表达组织表达分析逆境胁迫

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GalNAc-T14多抗的制备、组织表达及与IG FBP-3共定位研究

GalNAc-T14多抗的制备、组织表达及与IG FBP-3共定位研究

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作者：郭晓丹河北大学

学位级别：硕士

N-乙酰氨基半乳糖转移酶家族是粘蛋白O-糖基化的起始酶,负责将供体UDP-GalNAc上的GalNAc基团转移至受体蛋白多肽链特定序列中的Ser或Thr羟基上,从而合成O-聚糖。近年来有人指出,O-糖基化可能与肿瘤的发生发展具有密切关系,因此对该酶家... 详细信息

N-乙酰氨基半乳糖转移酶家族是粘蛋白O-糖基化的起始酶,负责将供体UDP-GalNAc上的GalNAc基团转移至受体蛋白多肽链特定序列中的Ser或Thr羟基上,从而合成O-聚糖。近年来有人指出,O-糖基化可能与肿瘤的发生发展具有密切关系,因此对该酶家族的研究也受到越来越多重视。N-乙酰氨基半乳糖转移酶-14(GalNAc-T14)是该家族中截止至目前最新发现的成员,由于其发现相对较晚,且对其研究尚未得以广泛重视,因此对GalNAc-T14在癌组织和癌细胞中的表达、生物学特征及功能之间的关系都需要深入研究。本论文对GalNAc-T14基因进行了以下三方面的研究: 1.利用生物信息学方法分析GalNAc-T14蛋白序列,钓取了其cDNA序列,将该序列亚克隆入pET-DsbA与His-tag融合表达;并且对诱导及纯化条件进行了优化。通过免疫新西兰大耳白兔,获得多抗血清。利用双向免疫扩散检测所制备的多抗效价,通过免疫印迹方法鉴定多抗特异性,并检测GalNAc-T14在不同组织的表达情况。结果表明:制备的GalNAc-T14多克隆抗血清是高特异性的,GalNAc-T14蛋白在乳腺癌细胞和肾癌细胞中均有表达,并推测如果在肿瘤组织中发现低表达GalNAc-T14则可能显示肿瘤恶性程度较高,与肿瘤易发生转移,预后差密切相关。 2.将GalNAc-T14和IGFBP-3共转染MCF-7细胞,利用confocal显微镜观察两者的共定位情况。结果表明:GalNAc-T14和IGFBP-3在细胞内存在共定位现象。 3.成功构建了GalNAc-T14昆虫细胞重组表达载体。将GalNAc-T14 cDNA序列亚克隆入pMT/BIP/V5-HIS C载体,转染果蝇S2细胞系,为将来利用昆虫表达系统获得GalNAc-T14蛋白,为深入研究GalNAc-T14的功能奠定基础。总之,本论文对于GalNAc-T14功能进行了初步的研究和探讨,将GalNAc-T14与IGFBP-3进行亚细胞定位,并欲利用昆虫表达系统获得有活性的GalNAc-T14蛋白,为下一步开展工作提供了材料和依据。

关键词： GalNAc-T14 多克隆抗体组织表达分析 IGFBP-3 共定位

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黄瓜赤霉素氧化酶基因GA20ox、GA2ox、GA3ox的生物信息学及GA20ox1功能分析

黄瓜赤霉素氧化酶基因GA20ox、GA2ox、GA3ox的生物信息学及GA20ox...

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作者：王增辉山东农业大学

学位级别：硕士

黄瓜(Cucumis sativus L.)是世界范围内广泛栽培的重要瓜类蔬菜,赤霉素是植物体中广泛存在植物激素,生物活性的赤霉素可以促进植株多方面的生长,并由一系列酶类催化合成,其中有3种关键的赤霉素氧化酶类,分别是GA20oxidases、GA3oxidases... 详细信息

黄瓜(Cucumis sativus L.)是世界范围内广泛栽培的重要瓜类蔬菜,赤霉素是植物体中广泛存在植物激素,生物活性的赤霉素可以促进植株多方面的生长,并由一系列酶类催化合成,其中有3种关键的赤霉素氧化酶类,分别是GA20oxidases、GA3oxidases、 GA2oxidases,其中GA20oxidases是降解酶,负责降解C20类赤霉素；GA3oxidases合成有生物活性的赤霉素,GA2oxidases起到钝化赤霉素的作用。果实刺瘤是黄瓜重要的外观品质之一,黄瓜无毛突变体(gabrousl, gll)的果实表面均没有果刺和果瘤。而前人研究表明,赤霉素促进拟南芥叶片毛状体的发育,为了验证赤霉素在黄瓜果实刺瘤生长发育过程中的功能,我们对黄瓜GA20ox、GA2ox、GA3ox进行了较全面的生物信息学分析,检测其在黄瓜不同组织中的表达特异性,并利用农杆菌介导法进行GA20ox1、 GA20ox5在黄瓜中的遗传转化试验,以确定赤霉素对黄瓜果刺生长发育的影响。主要结果如下： 1.通过BLASTP程序,得到了19个GA20ox、GA2ox、GA3ox家族基因。物种进化分析表明,黄瓜GA20ox、GA2ox、GA3ox基因在保守结构域和基因结构方面,与拟南芥存在较高的相似性。 2.组织表达特异性分析结果表明：GA20ox、GA2ox、GA3ox基因在黄瓜根、茎、叶、雄花、’果、卷须中表达模式不同,其中CsGA20ox1主要在黄瓜叶和子房中表达。 3.构建了黄瓜GA20ox1、GA20ox5过表达载体和GA20ox1沉默载体,并进行黄瓜的遗传转化试验,得到了13株T1代黄瓜35S:GA20ox1转基因植株,其中,在T1代发现4株CsGA20ox1过表达的黄瓜转基因株系,其果刺相对于野生型显著变短。总之,我们利用生物信息学、组织特异性和反向遗传学的方法对黄瓜GA20ox、 GA2ox、GA3ox做了一个较全面的分析,并且通过遗传转化试验得到CsGA20ox1过表达的转基因株系,发现赤霉素影响黄瓜果刺的形成,以上研究为我们进一步探索赤霉素在黄瓜果实刺瘤形成过程中的功能奠定基础。

关键词：黄瓜赤霉素氧化酶基因生物信息学分析组织表达分析转基因

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